Rezultate bune n inducerea poliploidiei (mrirea setului complet de cromosomi) la plante, sau obinut prin tratarea seminelor sau

a plantelor aflate n diferite faze de vegetaie cu o gam

variat de substane chimice. Unii autori (M. Simonet i M. Guinochet, 1939), au mprit
substanele chimice, dup tipul lor de aciune, n dou mari grupe:
1. Substane care blocheaz cromosomii n metafaz, mpiedicnd migrarea lor spre poli
i

nchiderea

lor

ntr-un

nucleu:

colchicina,

-monobromonaftalen,

monocloronaftalen, -monoiodnaftalen, feniluretan;

2. Substane care nu blocheaz mitozele, ci numai formarea membranei nucleare, astfel c
apar celule cu doi, trei sau patru nuclee, din care pot apare celule poliploide prin fuzionare:
paradiclorbenzen (orto-, meta-diclorbenzen), monoclorbenzenul, monobrombenzenul, orto,
meta-clortoluen.
METODA COLCHICINIZRII
Cele mai bune rezultate n inducerea artificial a poliploidiei, au fost obinute cu
ajutorul colchicinei un alcaloid extras din brndua de toamn (Colchicum autumnale). ea
putnd induce mutaii genomice n urma crora se pot forma celule poliploide.

Studiul efectului acestor izomeri asupra plantelor de Allium cepa, a artat c

izocolchicina are o aciune de 100 de ori mai redus dect colchicina n inducerea C-mitozelor.
Prin nlocuirea grupului acetil amid cu un grup metil amino rezult un compus numit colcemid,
care este la fel de activ dar mai puin toxic pentru celulele animale.

Colchicina inhib formarea fusului de diviziune acionnd asupra legturilor

sulfhidrice din proteine ( i tubulinele din structura microtubulilor) i asupra
moleculelor de riboz din acidul ribonucleic.
Diviziunea mitotic modificat datorit colchicinei se numete C-mitoz,
colchimitoz sau statmochinez i cuprinde urmtoarele faze: C-profaza, C-metafaza, Canafaza i C-telofaza (fig. VII.3-1).

Fig. VII.3-1. Reprezentarea schematic a diviziunii celulare normale i sub influena colchicinei
(dup Raicu i colab., 1973)
La plante C-mitoza se desfoar astfel: sub influena colchicinei, fusul celular este
inactivat i are loc o ntrziere a diviziunii centromerului. n acelai timp, se constat c
replicarea cromosomilor i separarea lor n cromatide nu este afectat de colchicin.
Tabel 1. Deosebirea ntre mitoza normal i C- mitoza
MITOZA NORMAL
1. PROFAZA
nucleul prezint un aspect difuz, granulat;

C- MITOZA
1. C- PROFAZA
Nu sunt deosebiri fundamentale fa de

cromozomii ncep s se condenseze, profaza normal.

avnd forma unor filamente subiri, vizibile n Excepie : n jurul cromosomilor nu se

formeaz o zon clar caracteristic.

nucleu;
n timp ce profaza avanseaz, cromozomii
devin mai scuri i mai groi ca urmare a
spiralizrii lor.
n profaza trzie, au loc urmtoarele trei
fenomene:
dispar nucleolii;
membrana nuclear de dezintegreaz;
apare fusul de diviziune, n urma migrrii
spre poli a centriolilor i formrii fibrelor.
2. METAFAZA

2. C- METAFAZA

Cromozomii bicromatidici se ataeaz la

fibrele

Cromosomii apar rspndii n ntreaga

fusului de diviziune cu ajutorul celul ;

Cromatidele surori sunt rsucite numai n

centromerului;
ei

migreaz

spre

centrul

celulei, regiunea

centromerului,

formaiuni

distribuindu-se n planul ecuatorial al fusului caracteristice literei X ;

Sub

mitotic, formnd placa metafazic.;

influena

colchicinei,

activitatea

centromerului i a fusului este nhibat, fapt

pentru care diviziunea regiunii centromerice
este ntrziat mai multe ore ;
Ca urmare, are loc o prelungire a
perioadei dintre ruperea membranei nucleare i
clivarea centromerului, ceea ce determin
mrirea frecvenei celulelor aflate n metafaz.
Colchicina provoac astfel o aa-numit
acumulare de metafaze.
3. ANAFAZA
Separarea
clivarea

3. C- ANAFAZA
cromatidelor

longitudinal

surori

centromerilor

prin

Caracteristic pentru aceast faz este

i dispunerea paralel a cromosomilor fii i

deplasarea lor spre polii opui ai fusului de faptul c procesul de clivare nu are loc
diviziune.

simultan ci ntr-un timp mai ndelungat.

 Cromozomii devin monocromatidici.

Astfel

diviziunea

cromosomilor

este

ntrziat i desincronizat.
C-anafaza
fundamental

de

este

astfel

cea

normal

deosebit
(este

pseudoanafaz).
4. TELOFAZA

4. C- TELOFAZA

Cromozomii monocromatidici ajung la

polii opui ai fusului de diviziune.

Cromosomii sunt strni la un loc fiind

nchii ntr-un nucleu de restituie care conine

Membrana nuclear se reface n jurul o cantitate dubl de material nuclear (4 n).

fiecrui grup de cromozomi.

Dac influena colchicinei se menine,

Fusul de diviziune dispare, nucleolii se celulele devin 8 n, 16 n etc.

reorganizeaz i cromozomii se despiralizeaz.

Sub influena unui tratament prelungit are loc o mrire continu a gradului de ploidie a
celulelor. De exemplu la ceap (Allium cepa) (2n = 16), s-a constatat c, dup 72 de ore de
tratament, celulele aveau un numr de 256 cromosomi, adic de 16 ori mai mult dect cel normal
(Levan, 1938).
n esutul colchicinizat se gsesc att celule cu grad mare de ploidie ct i celule diploide
normale care au nceput doar s intre n diviziune.
Efectul colchicinei este reversibil, dup eliminarea colchicinei are loc un fenomen de
refacere a fusului celular revenindu-se la mitoze normale.
Colchicina afecteaz de asemenea diviziunea reducional. Datorit toxicitii reduse i a
efectului su puternic asupra diviziunii celulare, colchicina este folosit pentru inducerea
poliploidiei la plante i pentru blocarea celulelor n metafaz la animale.

Metode de inducere a autopoliploidiei la plante. Importana plantelor poliploide

Tehnica de tratament i concentraiile soluiilor de colchicin variaz n funcie de
genul / specia cu care se lucreaz.

 La graminee autopoliploidia este indus prin tratarea seminelor negerminate sau

germinate sau a plntuelor tinere cu colchicin n concentraii de 0,1-0,2% timp
de 2-3 ore. n urma tratamentului se obin plante mixoploide, unele sunt tetraploide iar altele sunt
diploide.
La pepenele verde (Citrullus vulgare) inducerea tetraploidiei const n tratarea vrfului
de cretere al plntuelor cu o pictur de soluie de colchicin 0,2-0,4% timp de patru
zile.
Plantele tetraploide se separ prin metoda diametrului grunciorilor de polen sau
examinarea stomatelor. n urma ncrucirii plantelor tetraploide cu plante diploide s-au
obinut plante triploide. Numrul de fructe legate i greutatea lor este cu mult mai mare la
acestea dect la plantele parentale i sunt lipsite de semine.
Inducerea poliploidiei la pepene i vi de vie prezint importan practic prin
faptul c plantele triploide rezultate din ncruciarea tetraploizilor cu diploizii sunt sterile,
deci se obin pepeni i struguri fr semine.

Pentru studiul cromozomilor n C-mitoz la plante se folosesc rdcini meristematice.

Metoda Feulgen de colorare a cromozomilor cu fuxin bazic descris anterior:
Pentru inducerea poliploidiei la ceap se folosete zona meristematic a rdcinilor.
Vrfurile rdcinilor se imerseaz ntr-o soluie de colchicin de 0,1 0,2 %, timp de 1 sau 2 zile.
Dup tratament se spal rdcinile tratate cu colchicin i se observ la microscop, prezena
fenomenului de poliploidie (dublarea numrului de cromosomi n comparaie cu cel normal).
Preparatele microscopice se fac prin etalarea materialului biologic ntr-un strat subire,
format dintr-un singur rnd de celule, dup metoda squash.
n mijlocul unei lame se pune o pictur de carmin acetic i poriunea colorat din vrful
rdcinii (1-2 ml);
peste aceasta se pune o lamel (uns cu albumin glicerinat i trecut repede prin flacr
pentru coagularea albuminei, care are rolul de-a mpiedica dispersarea cromosomilor n celul);
lamela se lovete cu un beior de lemn pentru etalarea materialului;
cu o hrtie de filtru se absoarbe excesul de carmin acetic.