INTRODUCERE

Micotoxinele sunt produse metabolice secundare foarte toxice ale mucegaiurilor, produse,
n special, de speciile Fusarium, Aspergillius i Penicillium.
Micotoxinele sunt considerate substane naturale, dar sunt denumite i produse secundare
de schimb, care apar n timpul dezvoltrii ciupercilor parazite la plantele de pe cmp sau la
materialul depozitat i utilizat apoi n hrana oamenilor i a animalelor.
Dintre micotoxine, aflatoxinele, ochratoxinele, tricotecenele, zearalenona i fumonizinele,
sunt cele mai studiate, datorit efectelor asupra organismului uman i animal, dar i datorit
importanei agro-economice deosebite.
Micotoxinele se pot ntlni n toate felurile de cereale i nutreuri produse pentru alimente i
furaje. Proprietile structurale, chimice, biologice i toxicologice ale micotoxinelor sunt diferite.
Nivelurile de toxicitate sunt extrem de variabile, depinznd de mai muli factori. Principalele efecte
toxice sunt carcinogenicitate, teratogenicitate, nefrotoxicitate, hepatotoxicitate, tulburri de
reproducere i imunosupresie.
Dei n timpul creterii, a recoltrii i a depozitrii sunt fcute eforturi importante i sunt
ntreprinse activiti de prevenie, riscul de contaminare cu micotoxine este real.
Distribuia micotoxinelor pe glob diferit de la o zon la alta, astfel, n sudul i centrul
Europei unde se cultiv porumb, domin fusariotoxinele, comparativ cu nordul Europei, unde, pe
primul loc se situeaz ochratoxina A. n regiunile calde i umede, mai rspndite sunt aflatoxinele,
pe care le gsim i n regiunile reci, excepie fcnd produsele provenite din zonele calde.
Cercetrile legate de prezena micotoxinelor n alimentele destinate omului, ct i n
furajele destinate hrnirii animalelor, nu au reuit nici pn n prezent s rspund tuturor
ntrebrilor, deoarece aceti compui, deseori, sunt n concentraii foarte mici, fiind foarte greu de
detectat. De asemenea, analizele efectuate pot s nu prezinte situaia real ntruct metodologia nu
este nc suficient de dezvoltat, sau se descoper micotoxine a cror prezen nu a fost nc
identificat.

Ca urmare, am ales subiectul acestei lucri de licen din dorina de a dobndi ct mai
multe cunotine legate de micotoxine, studiind prezena acestora n alimentele de baz din dieta
noastr i anume pinea, produsele de panificaie i pastele.
Cercetrile s-au efectuat n laboratorul disciplinei de Nutriie i Controlul Calitii Furajelor
Facultatea de Medicin Vetrinar Cluj-Napoca.
Materialele utilizate au provenit de la disciplina de Nutriie i Cotrolul Calitii Furajelor
FMV Cluj-Napoca.

PARTEA I
STUDIU BIBLIOGRAFIC

CAPITOLUL 1
MICEI I MICOTOXINE
1.1. MICOTOXINE PRODUSE DE SPECII DIN GENUL FUSARIUM
1.1.1. Micotoxine tricotecene
1)

Structura chimic i proprieti fizico chimice

Fig. 1.1. Toxina T2: (R1 = OAc), Toxina HT-2: (R1 = OH)

Fig.1.2. DEOXINIVALENOL:

(R1 = OH, R2 = H, R3 = OH, R4 = OH)

NIVALENOL: (R1 = OH, R2 = OH, R3 = OH, R4 = OH)

Grupul tricotecenelor cuprinde aproximativ 43 de micotoxine, dar numai 7 sunt produse n
cantiti semnificative i implicate mai frecvent n patologia veterinar. Acestea sunt: toxina T 2,
toxina HT-2, diacetoxiscirpenolul, neosolaniolul, fusarenona-X, nivalenolul i deoxinivalenolul.

n funcie de structura loc chimic, tricotecenele se mpart n patru clase:

Clasa I cuprinde 20 de micotoxine, 16 dintre acestea sunt metabolii ai diferitelor specii de
Fusarium.
Clasa a II-a cuprinde n mod natural 8 micotoxine, dintre care 7 sunt elaborate de specii din
genul Fusarium.
Clasa a III-a include derivaii dilactonici macrociclici ai verucarolului.
Clasa a IV-a are o grupare epoxid n poziia 7-8.
Tricotecenele sunt solubile n general n solveni organici cu polaritate medie i insolubile
n solveni nepolari.
Sunt stabile la variaiile medii de temperatur i pH. Oxigenul i lumina nu le influeneaz
toxicitatea. Datorit acestor proprieti, ele nu sunt distruse prin prelucrarea i stocarea furajelor i
alimentelor contaminate.
2) Cinetica
Dioxinivalenolul, toxina T2, diacetoxiscirpenolul, administrate oral sau parenteral, nu se
acumuleaz semnificativ n organismul animalelor, iar reziduurile se elimin n cteva zile (Beasley
i colab., 1986), (Coppok i colab., 1985).
La suine deoxinivalenolul, toxina T2 i diacetoxiscirpenolul sunt metabolizate n dou faze:
I - oxidare i hidroliz;
II - glucuronoconjugarea metaboliilor din faza I.
3) Efectele subcelulare i celulare
Proprietile toxice ale tricotecenelor sunt date de gruparea epoxi din structura acestora.
Efectul toxic se datoreaz inhibrii sintezei proteice.

Tricotecenele sunt considerate slab mutagene i carcinogene. n schimb, produc

imunosupresia i necroza esuturilor.
Cordul i pancreasul sunt unele dintre organele int ale tricotecenelor.

4) Efectele asupra imunitii

Expunerea acut a omului i animalelor la toxina T2 produce creterea incidenei bolilor
infecioase.
La suine s-a observat reducerea rspunsului imun, scderea n greutate, creterea
temperaturii rectale i modificri ale parametrilor sngelui, scderea numrului de leucocite (Pang i
colab., 1987).
Pang i colab. (1987) au observat la porcii supui inhalrii de toxin T2, reducerea
capacitii de fagocitoz a macrofagelor alveolare, rspuns blastogenic al limfocitelor pulmonare ca
urmare a inducerii mitogenezei. De asemenea, s-a observat scderea numrului de leucocite pe baza
scderii proporiei de limfocite T, diminuarea formrii de anticorpi i a transformrilor blastogenice
a limfocitelor.
La oareci, toxina T2 a determinat scderea semnificativ a limfocitelor B i T cu apariia
limfocitopeniei periferice i imunosupresie mediat de limfocitele T (Smith i colab. 1994).
Tabelul 1.1
Principalii micei din genul Fusarium i micotoxinele pe care le produc

Fusarium chlamydosporum
Fusarium equiseti, Fusarium flocciferum
Fusarium graminearum
Fusarium lateritium
Fusarium moniliforme, Fusarium oxysporum
Fusarium semitectum, Fusarium solani
Fusarium tricincum
Fusarium graminearum
Fusarium sporotrichioides
Fusarium semitectum
Fusarium solani
Fusarium equiseti
Fusarium heterosporum
Fusarium oxysporum
Fusarium acuminatum
Fusarium equiseti
Fusarium sporotrichioides
Fusarium heterosporum

Zearalenona

Deoxinivalenol,
3-Acetil-Deoxinivalenol, Neosolaniol,
Diacetoxiscirpenol, Toxina HT - 2
Zearalenon
Scirpentriol, Diacetoxiscirpenol,
Neosolaniol, Toxina HT-2, Toxina T-2,
T-2 tetraol, Deoxinivalenol
Toxina T-2

Fusarium graminearum
Fusarium moniliforme
Fusarium oxysporum
Fusarium solani
Fusarium subglutinans

Diacetoxiscirpenol, Toxina T-2

Toxina HT-2, Zearalenona
Dioxinivalenol, Diacetoxiscirpenol,

Fusarium subglutinans
Fusarium crookwellense
Fusarium poae
Fusarium graminearum

Toxina T-2, Zearalenona

Fuzarin C, Nivalenol,
Diacetoxiscirpenol
Diacetoxiscirpenol, Nivalenol
Diacetoxiscirpenol, Zearalenon
Deoxinivalenol, 15- Acetildeoxinivalenol

Fusarium solani
Fusarium trichotecium
Fusarium latirium
Fusarium culmorum
Fusarium avenaceum
Fusarium moniliforme
Fusarium roseum
Fusarium tricinctum
Fusarium nivale
Fusarium oxysporum
Fusarium poae

Zearalenona

Fumonisine

Zearalenona, Toxina T-2

(dup Coman, 1987; 2000)

1.2. MECANISME BIOCHIMICE DE ACIUNE A MICOTOXINELOR

Cei mai toxici metabolii ai ciupercilor i prezint toxicitatea prin asociere cu componente
celulare care joac roluri importante n reglarea i funcionarea celular.
Cunotinele referitoare la interaciunea dintre micotoxine i componentele celulare sunt
importante pentru o nelegere deplin a modului de aciune a micotoxinelor. Oricum, spre deosebire

de proteinele toxice care provin de la anumite bacterii, cele mai multe micotoxine aparin unui grup
de compui organici cu greutate molecular mic, asemntori multor aditivi alimentari, precum i
unor antibiotice. Chiar mai mult, multe micotoxine i etaleaz toxicitatea doar dup conversia n
forme active.
Aceasta nseamn c abordarea in vitro a elucidrii modului de aciune a micotoxinelor nu
poate dezvlui situaia in vivo. Cunotinele asupra activrii sau inactivrii micotoxinelor de ctre
aa-numitele sisteme metabolizante de medicamente este, din aceast cauz, de cea mai mare
importan pentru adevrata nelegere a toxicitii lor.
Progresele moderne din biochimie au artat c multe substane chimice biologic active i
prezint activitatea prin asociere selectiv cu receptorii".
n domeniul micotoxicologiei nici un fel de interaciuni specifice cu receptorii" nu au fost
elucidate, cu excepia cazului zearalenonei.
Biologia molecular datoreaz mult din dezvoltarea sa utilizrii inhibitorilor metabolici
specifici, cum sunt antibioticele. De exemplu, puromicina, un inhibitor al sintezei proteice, este un
excelent reactiv pentru elucidarea mecanismului molecular al ARNt de legare cu ribozomii.
Actinomicina, un puternic antibiotic anticancerigen, este ntrebuinat cu folos ca instrument de
selecie pentru analiza sintezei ARNm. Astfel, muli metabolii microbieni, mai ales antibioticele,
sunt ntrebuinai ca reactivi n domeniul biologiei moleculare moderne (Smith i colab., 1991).

1.2.1. Inhibarea sintezei proteice

Tricotecenele reprezint un grup de micotoxine cu structur chimic nrudit. De la
descoperirea ntr-o cultur de Trichothecium roseum a primei tricotecene - tricotecina, mai bine de
80 de derivai ai familiei tricotecenelor au fost identificai drept metabolii fungoi sau ca produi
biotransformai (Ueno i colab., 1985). Printre numeroasele tricotecene, doar un numr limitat, ca de
exemplu nivalenolul, deoxinivalenolul, toxina T2 i alte cteva, au fost detectate drept contaminani
naturali la cereale i furaje (Rotter i colab., 1996).

n cursul bioanalizei principalei toxine de Fusarium nivale, Fn 2B, o microciuperc care

cauzeaz intoxicarea grului cu rugin (Akabi n japonez), s-a utilizat un sistem de bioanaliz cu
reticulocite de iepure, lucru care a demonstrat c ncorporarea aminoacizilor marcai n protein a
fost profund inhibat att de extractele crude de culturi fungoase ct i de nivalenol, identificat de
Tatsuno i colab. (1968) ca principalul toxic.
Abordrile care au urmat au demonstrat c bioanaliza este eficient att pentru scanarea
microciupercilor productoare de tricotecene ct i a toxinelor lor.
Tricotecenele au drept int, sau receptor, ribozomii 80 S eucariotici. Ele au un situs sau
situsuri de legare pe ribozomi i inhib activitatea peptidiltransferazei (JI-X i colab., 1994). Pe baza
rezultatelor studiilor in vivo i in vitro asupra poliribozomilor, tricotecenele au fost divizate n patru
grupe generale (de la l la IV), fiecare grup fiind dependent de concentraia aleas (Carter i colab.,
1977).
Grupul l de compui stabilizeaz profilurile poliribozomice drept concentraii de toxine
ridicate prin inhibarea elongaiei. La concentraii mici de micotoxine apare o dezagregare limitat a
poliribozomilor, avnd compui toxici care afecteaz succesiv planul de iniiere sau care efectiv se
leag doar de acei ribozomi care poart polipeptide scurte n curs de apariie (Carter i colab., 1976).
Grupul II produce efecte ntre stabilizarea total i dezagregarea extensiv, iar grupul III
induce dezagregarea total.
Grupul IV induce dezagregarea total la toate concentraiile inhibitorii testate.

Se cunoate foarte bine c rezistena bacteriilor la cteva antibiotice care atac ribozomii
bacterieni este cauzat de mutaia proteinelor ribozomale. n ceea ce privete tricotecenele, nc nu
au fost efectuate experimente clare cu privire la proteina ribozomal. Experimentele cu celule de
drojdie (Saccharomyces) mutante rezistente la triclodermin (tcm) au artat c o singur gen
nuclear recesiv este rspunztoare pentru rezisten. Acest locus de rezisten tcm-1, a fost
descoperit ca avnd legtur strns cu locusul 17 de pe braul drept al cromozomului XV. Gena
pentru proteina ribozomal, L3, determin legarea trichoderminei de ribozomii drojdiei.
Pe lng inhibarea sintezei proteice, tricotecenele mai influeneaz i sinteza ADN-ului din
culturile celulare provenite de la mamifere, precum i din celulele prelevate chiar de la animale, ca
atare (Smith i colab., 1991).

Deoarece tricotecenele nu cauzeaz n mod direct inhibarea sintezelor de ADN, ARN, ARN
polimeraz dependent de ADN i a activitilor ribonucleazei H din nuclee izolate de la eucariote
Tetrahymena pyriformis, inhibarea sintezei acidului nucleic se presupune c este cauzat de efectele
secundare ale tricotecenelor (Tashiro i colab., 1983). La oarecii crora li s-a administrat toxina T 2,
inhibarea att a sintezei ADN-ului ct i a proteinei a putut fi observat pe timus, mduva osoas i
celulele splinei, care sunt toate susceptibile la tricotecene (Rosenstein i colab., 1983).
Mai multe articole de specialitate indic faptul c toxina T-2 genereaz radicali liberi la
animale, cauznd hemoliza eritrocitelor in vitro, precum i o scdere a glutation-S-transferazei
(GHS) in vivo (Segal i colab., 1983), (Ahmed i colab., 1986).
Dei inhibarea sintezei proteice apare ca fiind efectul biochimic major al tricotecenei, nc
nu s-a stabilit ce proteine sunt semnificativ inhibate.

1.2.2. Efectele asupra sistemului antioxidant

Pstrarea unui echilibru al balanei dintre antioxidani si pro-oxidani din organism i n
special n celule este responsabil pentru reglarea cilor metabolice variate care s conduc la
ntreinerea imuno-competenei, creterii i dezvoltrii, ct i a proteciei mpotriva condiiilor de
stres.
Acest echilibru poate fi meninut printr-o diet cu antioxidani care includ vitamina E,
carotenoizii i seleniu. Pe de alt parte, factorii de stres nutriionali au un impact negativ asupra
acestui echilibru ntre antioxidani si pro-oxidani. n acest sens, micotoxinele sunt considerate a fi
printre cei mai importani factori cauzatori de stres (Surai i Dvorska, 2001).
n prezent nu este clar dac micotoxinele stimuleaz peroxidarea lipidelor direct prin
stimularea produciei de radicali liberi sau dac susceptibilitatea creterii esutului la peroxidarea
lipidic este rezultatul unui sistem antioxidant compromis. Se pare c ambele procese sunt active. n
cele mai multe cazuri peroxidarea lipidic n esuturi cauzate de micotoxine a fost asociate cu
descreterea concentraiei antioxidanilor naturali (Surai i Dvorska, 2001).
n ceea ce privete malabsorbia, se consider c aceasta este datorat unei aciuni ale
micotoxicozelor. De exemplu aflatoxicozele, ochratoxicozele i toxicozele T2, au aprut n urma
administrrii de furaje ce conineau concentraii diferite de micotoxine la puii broiler de la ecloziune

pn la varsta de 3 sptmni. Toxina T2 produce de asemenea malabsorbie, dar la o concentraie

mai mare dect cea care produce inhibarea creterii (Osborne i colab., 1982).
Una dintre cele mai importante aciuni ale micotoxinelor este efectul lor asupra enzimelor
antioxidante. n funcie de condiiile experimentale (specie, doz, durat de administrare,
concentraia altor antioxidani), activitatea enzimelor antioxidante poate fi crescut ca rspuns a
factorilor de stres sau sczut de activitatea direct sau indirect a micotoxinelor.
Avnd n vedere efectele negative ale micotoxinelor asupra sistemului antioxidant este
necesar s fim contieni de faptul c efectul poate fi mult mai toxic n cazul combinrii dintre
micotoxine dect a toxinei individuale.

1.3 ACIUNILE BIOLOGICE ALE MICOTOXINELOR

1.3.1. Tricotecenele
n ciuda faptului c embriotoxicitatea tricotecenelor este ridicat, doar deoxinivalenolul
este implicat n teratogenie. Un regim alimentar ce coninea 20 ppm (g/g) deoxinivalenol purificat
(vomitoxin) a fost administrat obolanilor i masculilor Sprague - Dowley timp de 60 i respectiv
15 zile, nainte de mperechere (Morrisey i colab., 1985). Doar 50% din mperecherile ce au avut
loc n cadrul grupului ce a primit deoxinivalnol au rezultat n gestaii, comparativ cu 80% n cazul
martorilor. Nu au fost detectate diferene ntre grupuri n ceea ce privete proporia descendenilor
mascul - femel, a supravieuirii, sau a numrului de fetui nscui i greutii, de asemenea, nu au
fost identificate anomalii n cursul dezvoltrii postnatale.
Vomitoxina a manifestat un efect letal specific asupra embrionului de oarece, asociat sau
nu cu toxicitatea matern la doze de 2,5; 5; 10 i 15 mg/kg.
Efecte teratogene multiple au aprut la dozele de 2,5 i 5 mg/kg, ns o relaie doz rspuns a fost greu de dovedit. Nu au fost observate nici un fel de efecte adverse la doze de 0,5
mg/kg. Dup administrarea oral (48 de ore) a unei singure doze (3,0 mg/kg) de toxin T 2 femelelor
n zilele 7, 8, 10, 11 i 12 de gestaie, a aprut mortalitate matern ce a urmat unei hemoragii
vaginale. Necropsia femelelor moarte a dezvluit faptul c hemoragia masiv avnd ca origine
regiunile placentare a aprut n aparatul reproductor.

1.4. INFLUENA MICOTOXINELOR ASUPRA SISTEMULUI IMUN

Aflatoxina, ochratoxina, precum i tricotecenele fac parte din categoria micotoxinelor cu
importante influene asupra sistemului imun. Aciunea lor comparativ este prezentat n tabelul 1.2.
Tabelul 1.2

Aciuni comparative ale aflatoxinelor, ochratoxinei i a toxinelor tricotecene

asupra reaciei imune

Aciune
Sinteza proteic

Aflatoxina
Inhib: legturile ADN,

Ochartoxina
Inhib: blocheaz

Toxina T-2*
Inhib: receptorii

ARN Blocheaz

ARNt fenilalanin-

membranei celulare;

transcripia

sintetaza, inhib

reduce ARN, i ADN;

translaia

blocheaz iniierea
translaiei

Efecte celulare
esutul limfatic
Fagocitele

Efecte CMI

Efecte umorale

Atrofia timusului
Reduce: fagocitoza

Necroza GALT
Reduce: migrarea

Atrofia timusului
Reduce: leucopoeza,

macrofag i migraia

leucocitelor i

fagocitoza heterofil

leucocitelor

eliminarea fagocitic

i migrarea

Reduce:

Reduce:

macrofagelor
Reduce:

hipersensibilitatea cutanat limfoblastogeneza in

hipersensibilitatea

ntrziat, rspunsul

ntrziat ; gref vs.

vitro

intradermic PHA, gref vs.

gazd,

gazd i limfoblastogeneza

limfoblastogeneza;

(aflatoxineleBI, M1.O1,

interleukina 2 i alte

B2a)
Titrii-anticorp de obicei

Titrii-anticorp de

limfokine
Titrii anticorp deseori

normali; IgG i IgA

obicei micorai; IgG

micorai; IgM i IgA

micorat; complementul

i IgM micorai

micorat; complement

(C4) micorat

Complement normal

(C3) mic

*Reprezentant al T- 2, DAS i SAT

(dup Smith, 1991)

1.4.1. Toxinele tricotecene i rspunsul imun

Exist un numr de micotoxine care aparin familiei de compui chimici ai tricotecenelor.
Cele mai multe dintre acestea (toxina T2, deoxinivalenolul) sunt derivate din una sau mai multe
specii de Fusarium. O alt tricotecen important este stahibotriotoxina, produs de Stachybotrys
atra.
Una dintre cele mai studiate tricotecene, toxina T2, se leag aparent de receptorii de pe
membrana celular, micoreaz att producerea de ARN ct i pe cea de ADN i interfereaz cu
sinteza proteic blocnd iniierea translaiei. Efectele chimice ale acestei toxicoze sunt
epitelionecroza - att dermic ct i mucoas - enterit sever, vom la unele animale, coagulopatie,
depresiune hematopoetic i leucopenie cu stare septic secundar.

1.4.1.1. Efectele asupra esuturilor limfatice i leucopoezei

Efectele toxinei T2 i a altor tricotecene asupra esutului limfoid sunt destul de constante
atunci cnd toxina este administrat pe cale oral. Administrarea oral de toxin T 2 produce atrofie
timic att la speciile de psri ct i de mamifere. Adiional, unele necroze GALT reduc att
celulele T ct i pe cele B din rezervorul limfoid circulant. Suprimarea hematopoetic sever a fost
descris n cazuri de aleukie toxic alimentar la om, o boal suspectat ca fiind cauzat de mei
contaminat cu tricotecene. Intoxicaiile experimentale cu toxin T2 prezint, n general, dovada
reducerii leucocitelor, eritrocitelor i trombocitelor.
1.4.1.2. Efectele asupra formrii de anticorpi
Reducerea numrului de fagocite circulante prin suprimarea leucopoezei i reducerea
activitii fagocitelor la animalele tratate cu tricotecene sunt efecte ntlnite peste tot. ntr-o oarecare
msur sunt afectate att granulocitele ct i macrofagele. n plus, exist o depresie n formarea
complementului (C3) i o producere redus de IgA i IgM. Rezultatul final al acestor modificri este

reducerea produciei de antiocorpi dependeni ct i independeni de celulele T. n plus, pe lng

aceste efecte asupra anticorpilor, s-a demonstrat c toxina T2 provoac diminuarea mai multor
substane umorale nespecifice care particip la rspunsurile imune. Dup cum s-a menionat, i
producia de complement (C3) este diminuat.
1.4.1.3. Efectele asupra rspunsului imun mediat celular
Dup cum s-a mai artat, toxina T2 produce atrofie timic i un declin al circulaiei celulelor
T. n plus fa de aceste efecte directe asupra esutului limfocit, mediatorii rspunsului imun,
limfokinele sunt i ele reduse, fie n cantitate, fie ca eficien. Interleukina 2, una dintre limfokinele
majore care este rspunztoare de dezvoltarea celulelor T i n activitatea citotoxic i de distrugere
celular, se reduce prin consumul de toxin T2. Alte limfokine responsabile pentru rspunsul
limfoblastogen, sunt la fel de afectate de consumul de T2, DAS sau SAT. Aceste efecte sunt cuplate
cu numrul redus al fagocitelor i a activitii fagocitare.
Aciunile

specifice

asupra

rspunsului

imun

includ

suprimarea

in

vitro

limfoblastogenezei.
1.4.1.4. Rezistena redus fa de procesele infecioase specifice
Efectul toxinei T2 a fost studiat pe un numr de procese infecioase cuprinznd Salmonella,
Staphylococci, Listeria, Mycobacterium i pe virusul Herpes simplex. ntocmai ca i n cazul
hipersensibilitii cutanate ntrziate, cele mai multe date indic o rezisten afectat, adic
susceptibilitate sporit fa de aceti ageni. Totui, n cazuri izolate, unde toxina a fost administrat
i ntrerupt nainte ca infecia s fi fost iniiat, s-a dovedit o rezisten sporit. Nu este totui clar
dac acesta a fost rezultatul unui rspuns de tip inflamator precondiionat iniiat de toxin ori vreun
efect asupra fagocitelor sau a rspunsului imun.
S-a artat despre alte toxine tricotecene, mai ales DAS, c diminueaz rezistena la
Salmonella i Listeria. Informaiile indic faptul c tricotecenele sunt imunosupresive i reduc
rezistena la infecie.

1.5. MICOTOXICOZE SPONTANE

1.5.1.Fumonizina
Fumonizinele sunt un grup de micotoxine descoperite relativ mai recent i apar n mod
natural n porumb n ntrega lume, fiind produse de Fusarium moniliforme i Fusarium
proliferatum. Fumonizinele au fost descoperite peste tot n lume, att n zonele cu clim tropical,
subtropical ct i temperat.
n zonele unde porumbul este hran de baz, contaminarea cu fumonizin a fost asociat cu
cancerul esofagian. rile unde aceast legtur a fost serios investigat sunt Africa de Sud
(regiunea Transkei) (Chelule i colab., 2001), (Arasas M., W.F., 2001) i China (Qiu i colab.,
2001). Posibilul rol al porumbului infestat cu fumonizin n apariia cancerului esofagian a fost de
asemenea investigat i n alte regiuni cu o inciden crescut a acestei boli cum ar fi nordul Italiei
(Visconti A., i Doko M.B. 1994) sudul Braziliei (Van Der Westhuizen i colab., 2003) i Iran
(Shephard i colab., 2002).
n Italia, Visconti i Doko au gsit nivele relativ ridicate de fumonizin n unele produse
alimentare bazate pe porumb i au sugerat c fumonizina din mmlig (consumat n cantiti mari
n nordul Italiei) poate contribui la creterea ratei cancerului esofagian n aceast zon.
Sindromul ecvin leucoencefalomalacia (ELEM) este o boal fatal care aparent apare doar
la cai i speciile nrudite cu acetia i este caracterizat prin prezena leziunilor necrotice lichefiate
din materia alb a creierului, uneori fiind implicat i materia cenuie. Creterea proteinelor n
lichidul cerebrospinal i alte schimbri sugereaz c acest cauz a leziunilor cerebrale este edemul
cerebral vasogenic. Primele simptome sunt letargie, scderea consumului de hran, urmate de
convulsii i moarte dup cteva zile.
Fumonizina pare s fie raspndit n cerealele cultivate din zona subtropical i tropical,
datorat sezonului de cretere relativ lung i cald. Potrivit lui Placinta, fumonizina poate fi produs
de F. moniliforme n asociaie cu Moniliformin i Fusarin C. Creterea temperaturii optime i a

pH-ului pentru producia de furomizin de ctre o tulpina F. moniliforme ntr-o cultur de porumb
are loc n 7 sptmni la temperatura de 25 C, n intervalul de pH cuprins ntre 3- 9,5. Originea
furomizinului provine din condensarea aminoacidului alanin cu un intermediar derivat din acetat.
Tricotecenele includ mai mult de 100 de structuri chimice diferite care sunt mprite n
tipurile A i B. Tipul A tricotecene include T-2 toxin, HT-2 toxina, neosolaniol i diacetoxiscirpenol
(DAS), n timp ce tipul N tricotecene include deoxinivalenol (DON), nivalenol i fuzarenon-X.
Sinteza celor dou tipuri de tricotecene pare s fie caracteristic pentru anumite specii de Fusarium.

1.5.2. Zearalenona
Zearalenona este produs de o varietate de specii de Fusarium, iar structura acestei toxine
sugereaz biosinteza pe calea acetat-polynalonate rezultnd o condesare tip cap-coad a unitilor de
acetat ntr-o polichetid care necesit anumite modificri pentru a definitiva conversia n
zearalenon. Producia maxim din aceast toxin in vitro s-a produs dup 40 de zile de incubare
dintr-un izolat de F. graminearum, la Aw de 0,97 i temperatur de 28C pentru dou sptmni
urmate de incubarea la 12C.

1.5.3. Acidul fuzaric

Acidul fuzaric este probabil cea mai larg rspndit micotoxin produs de tulpini din
genul Fusarium. n plus acidul fuzaric este cunoscut ca avnd efecte sinergetice cu alte toxine
fuzarice. Este de asemenea important de tiut c, genetic, biosinteza micotoxinelor a fost
identificat, iar multe gene legate de producia de micotoxine care includ alflatoxina, fumonizina,
tricotecenele sunt acum caracterizate. Aceste descoperiri vor fi foarte importante pentru o bun
nelegere a cilor biosintetice a micotoxinelor i ajut n producia controlat a micotoxinelor.

1.5.4. Ochratoxina A

Ochratoxina A este toxina major, evideniat n numeroase zone din Australia, America de
Nord i Sud, Africa i Europa. Ochratoxinele elaborate de speciile aparinnd genului Aspergillius
depind n mare msur de nivelul ridicat al umiditii i temperaturii fa de ochratoxinele elaborate
de speciile Penicillium care pot fi secretate i la 5C. Ochratoxina A a fost frecvent decelat n
sngele porcilor sacrificai n Canada i Danemarca. Ea poate avea urmri nefrotoxice la toate
speciile de animale. Efectele teratogenice au fost observate cu precdere n urma experimentelor
desfurate pe oareci expui la o doz oral de 3 g/kg greutate vie.
Ochratoxina A este un inhibitor al sintezei proteice al sintezei de ARN t la
microorganisme, al sintezei celulelor hepatice i al sintezei ARN m la oarece. La oarce, o doz de
0,005 g/kg greutate vie poate induce imunosupresie. Ochratoxina A are i o aciune carcinogenic
asupra tubilor i epiteliului renal la diferite specii de animale (C. Savu i N. Georgescu, 2004).
Ochratoxina A este suspectat n etiologia nefropatiei umane i a tumorilor aparatului
urinar. Multe studii au artat implicarea ochratoxinei A n apariia maladiei Nefropatia Endemic
Balcanic care a fost depistat n anumite regiuni din Bosnia i Heregovina, Bulgaria, Croaia,
Serbia i Romnia (Petkova-Bocharova i colab., 2002). Boala se caracterizeaz printr-o delimitare
geografic strict, o afectare bilateral a rinichilor, o rat crescut a mortalitii datorit uremiei i
afecteaz n realitate populaia care lucreaz n domeniul agricol (Ceovic i colab., 1992).

1.5.5. Aflatoxicozele

Carcinomul hepatocelular la om este o boal malign, foarte rspndit, ocupnd al 4-lea

loc n lume din punct de vedere al ratei mortalitii. Se estimeaz c produce anual 500.000 de
victime (Diaz, D.E., 2005). Zonele n care se ntlnete cu preponderen sunt Asia, sudul Chinei,
Africa (zona sub-Sahara), iar n ultima vreme o cretere a incidenei carcinomului hepatocelular a
fost observat i n Statele Unite (el.-Serag H.B. i Mason A.C. 1999). Studii epidemiologice mai
vechi ntreprinse n zone cu inciden ridicat a carcinomului hepatocelular au artat posibila
corelaie dintre consumul de aflatoxin B1 (AFB1) i frecvena carcinomului hepatocelular. Aceste
studii furnizeaz date ce relev o relaie strns pentru un rol etiologic sau de contribuie a
aflatoxinelor n inducerea cancerului hepatic la om (Baba, A.I., 2002). Implicaia altor factori cum

ar fi infecia cu virusul hepatitei B au fost verificate numai n cercetrile ulterioare. Recent, s-a
observat posibilitatea unei interaciuni carcinogenice sinergice ntre infecia cu virusul hepatitei B i
consumul de AFB1, datorit coexistenei lor n ri cu inciden ridicat a carcinomului hepatocelular,
acest aspect fiind confirmat de asemenea i de studiile epidemiologice (Kew, M.C., 2003); (Diaz,
D.E., 2005). Toate aceste date duc la concluzia ca infecia cronic cu virusul hepatic B sau C,
consumul de produse infestate cu AFB1 i ciroza alcoolic sunt, n ordinea importanei, factori
majori de risc n etiologia multifactorial a carcinomului hepatocelular.
n aflatoxicoza bovin acut, semnele clasice cel mai des ntlnite cuprind anorexia,
letargia, ascita, icterul i diareea cu snge (Ray i colab., 1986).
Leziunile hepatice includ degenerescen gras i necroz celular difuz, proliferare biliar
i intensificarea leziunilor de ocluzie venoas, pe msur ce boala evolueaz (Colvin i colab.,
1984).
Alte semne ocazional asociate cu intoxicarea acut sunt avortul, hepatoencefalopatia i
fotosensibilitatea. Apar i alte efecte ale intoxicaiei naturale cum ar fi imunosupresia, infertilitatea,
precum i interaciuni nutriionale.
Performanele sczute (sporul n greutate, producia de lapte) reprezint unul dintre
indicatorii cei mai sensibili ai aflatoxicozei. Cauza acestui efect este probabil multifactorial,
implicnd nu numai interaciunile nutriionale, dar i influenele anorexiei, a metabolismului hepatic
proteic i lipidic deranjat, precum i tulburrile metabolismului hormonal. Interaciunea
aflatoxinelor cu nutriia animalelor este foarte complex.
Adameteanu, Baba i colab. (Adameteanu i colab., 1974) au descris cazuri succesive de
leziuni hepatice la vieii nou-nscui mori prin sindrom diareic. Leziunile au constat n fibroz i
hepatoz, macroscopic, iar microscopic infiltraie lipidic hepatocelular, fibroz centrolobular, din
jurul venei centrolobulare i din spaiile portobiliare, fibroz difuz n lobul. La unele cazuri s-a
constatat i o proliferare a canaliculilor biliari.
Leziunile macro i microscopice determinate de administrarea furajelor mucegite precum
i datele anamnetice au fcut s se confirme etiologia micotoxic, respectiv a aflatoxinei.
Primul caz de aflatoxicoz la cai a fost descris la un armsar din rasa Pur Snge Arab, n
vrst de 15 ani, de ctre Green i Oehme (1976). Icterul, anorexia i scderea n greutate rapid
naintea morii au fost principalele simptome.

Hiperplazia canaliculelor biliare, depozitele de hemosiderin n epiteliul celular al tubilor

renali, precum i congestia vaselor renale au fost observate la examenul histopatologic. Ficatul era
mult mrit, de culoare negricioas i de consisten ferm.
Un alt caz de aflatoxicoz a fost cel al unui cal mort n urma consumului de fn mucegit.
Subiectul se afla deja ntr-o stare de ntreinere proast i a decedat n urma colicilor, la dou zile
dup consumul fnului mucegit.
La necropsie s-a observat hiperplazia canaliculelor biliare, necroz hepatic, degenerarea
tubilor renali i degenerescena gras a miocardului (Smith i colab., 1991).
Recent, autorii unui studiu din Suedia au artat o posibil legtur ntre boala obstructiv
respiratorie cronic i micotoxinele inhalate (Larsson i colab., 2003). Boala obstructiv respiratorie
cronic este o boal a plmnului ecvinelor care se aseamn cu astmul la oameni, avnd o etiologie
polifactorial, sporii miceilor A. fumigatus i Micropolyspora faeni fiind printre cei mai importani
factori implicai n apariia acestei maladii (Halliwell i colab., 1993).

1.5.6. Tricotecenele
Conform FAO s-a stabilit o limit admis de de 1g/kg/greutate corporal i de 0,06
g/kg/greutate corporal pentru toxina T2 i HT2 toxina. Trebuie punctat faptul c aceste date sunt
valabile doar pentru regiunile europene, nct, pentru alte pri ale lumii sunt necesare mai multe
informaii i metode analitice.
n urma unui studiu efectuat n Olanda, s-a propus o concentraie limit de 129 g/kg
DON n produsele pe baz de gru la copii ca i doz limit maxim. Cercettorii au subliniat, de
asemenea, c n perioada Septembrie 1998 - Ianuarie 2000, datorit concentraiilor crescute de DON

n gru, aportul alimentar de DON a depit nivelul admis, n special la copii n urma crora efectele
negative ar putea afecta sntatea.
n ciuda unor date cu privire la lipsa consumului n unele ri i a puinelor informaii
privind hrana bebeluilor i copiilor, cercettorii au subliniat c, dintre cereale, porumbul deine cel
mai ridicat nivel de contaminare cu tricotecene, iar grul i produsele din gru (pinea i pastele)
reprezint sursa major de contaminare.

CAPITOLUL 2
Producia de gru i consumul de pine i paste

La nivel mondial, s-au introdus diferite regulamente cu privire la micotoxine.

Cerealierele au o importan unic, deoarce sunt consumate de ctre milioane de oameni i sunt
considerate, din punct de vedere nutritiv, cea mai important surs de carbohidrai pentru acetia.
Efectul acumulrii micotoxinelor n alimente a devenit o problem important la nivel
mondial. n general, omul resimte mai puin impactul n contact cu acestea, dect fa de alte
substane periculoase, cum ar fi pesticidele, aditivii, metalele grele i agenii microbieni. n marea
majoritate a cazurilor, efectele clinice nu se manifest acut, nu reprezint o urgen medical,
efectele fiind adesea amplificate de mass-media.
Chiar dac nu este prezent o cazuistic ampl a mbolnvirilor datorat acestora, nu
trebuie neglijate, deoarece reprezint un pericol mare pentru santate.
Micotoxinele sunt substane toxice i ar fi ideal s nu se regseasc n flora normal a
alimentelor, ns nici datorit evoluiei tehnologiilor agricole, a practicilor de depozitare i ambalare,
acestea nu pot fi ndeprtate complet. Astfel, cantiti mici de micotoxine se consider a nu fi prea
duntoare, n consecin sunt legal tolerate.

La nivel mondial s-au introdus diferite regulamente cu privire la micotoxine, 77 de ri

avnd regulamente specifice, 13 avnd regulamente dar fr specificitate asupra micotoxinelor i
alte 50 de ri fr regulamente n vigoare. Aceste regulamente depind de nivelul de civilizaie i
dezvoltare a fiecrei ri.
Micotoxinele pot intra n lanul alimentar direct prin intermediul cerealelor, seminelor,
condimentelor, fructelor, buturilor sau a altor alimente pe baz de plante. Indirect, intoxicarea se

realizeaz prin alimentele obinute de la animale care au consumat furaje contaminate cu

micotoxine: lapte, carne, ou, sau alte derivate.

2.1 Cerealele
Cerealierele au o importan unic, deoarece intr in alimentaia milioanelor de oameni
i sunt considerate din punct de vedere nutritiv cea mai important surs de carbohidrai.
Cerealele sunt uor colonizate de mucegaiuri fitopatogene, deoarece ele produc condiii
excelente de dezvoltare pentru fungi, att n locul de cretere, ct i dup recoltare i de-a lungul
depozitrii.
Cei mai importani micei prezeni n boabele de cereale aparin genurilor Fusarium,
Penicillium, Alternaria si Aspergillius, pe lng genurile Acremonium, Phomopsis i Pithomzces
care sunt considerat auxiliare.
O atenie sporit s-a acordat aflatoxinei produs de fungi ca A. parasiticus i A. flavus,
pentru c aflatoxina B1 este considerat a avea efectul cel mai carcinogen.
n urma studiilor s-a ajuns la concluzia c prezena aflatoxinelor n alimente este
favorizat de un climat umed i temperatur ridicat. Printre cereale, porumbul este cel mai frecvent
contaminat cu aflatoxin, iar celelalte cereale, precum sorgul, orzul, orezul, grul, sunt mai puin
susceptibile.

Toxinele produse de fungi din genul Fusarium i care contamineaz cerealele reprezint
o serioas preocupare. Climatul temperat este asociat cu dezvoltarea acestora n cereale, iar
temperaturile sczute influeneaz creterea i producerea de micotoxine n comparaie cu
Aspergillus. Cea mai important i larg familie de fusariotoxine sunt tricotecenele, care cuprind mai
multe componente divizate n 4 grupe, avnd tipurile A i B cele mai semnificative. Tipul A include
toxina T2, toxina HT-2, neosolaniolul (NEO), i diacetoxyscirpenol (DAS), n timp ce tipul B
include deoxinivalenolul (DON), nivalenolul (NIV), fusarenon-X. Structura chimic a tricotecenelor
este legat de speciile productoare de Fusarium i asta permite identificarea chemotaxonomic.

2.2. Seminele oleaginoase

ncepnd cu descoperirea micotoxinelor, se observ o apariie a acestora n oleaginoase,
pentru c aceste culturi sunt considerate a fi un substrat excelent pentru sintetizarea i acumularea
toxinelor produse de mucegaiuri. Aflatoxinele produse de A.flavus i A.parasiticus reprezint
principalul motiv de ngrijorare al oleaginoaselor, din cauz c acestea sunt folosite ca i nlocuitori
ai untului de cacao, iar alimentele procesate bazate pe acest nlocuitor intr n cele din urm n
alimentaia copiilor i a sugarilor (Hesseltine i colab., 1966).

2.3. Producia de gru i porumb la nivel mondial

Specialitii de la ICG au fcut o prim estimare pentru sezonul 2014-2015: o producie de
gru i cereale la 1.949 milioane de tone , n scdere fa de prducia record din acest sezon de 1.967
milioane de tone.
Estimrile privind o reducere cu 18 milioane de tone este bazat pe o producie n scdere
pentru majoritatea cerealelor, excepie fcnd porumbul. Mai mult dect att, IGC a crescut cu 4
milioane la 700 de milioane de tone estimrile privind producia de gru din sezonul urmtor,
producia estimat n urmtorul sezon va fi doar cu 9 milioane de tone sub recolta record din sezonul
2013-2014.

n ceea ce privete porumbul, IGC a crescut cu 7 milioane de tone la 961 milioane de tone
estimrile privind acest sezon, ceea ce nseamn o cretere cu 2 milioane de tone de la un an la
altul. Primele estimri arat o cretere a suprafeelor cultivate cu porumb, care, la un randament
asemntor cu cel din sezonul trecut, ar face ca recolta s creasc cu 0,3%. n schimb, analitii
estimeaz i o cretere a cererii, la 945 milioane de tone, nregistrnd un avans anual de 1,5%.
Productorii de gru estimeaz o cretere minim pentru sezonul urmtor de un milion de tone pn
la 190 milioane de tone (http://www.recolta.eu/piata-agricola/analize-de-piata/estimari-2014-2015productia-mondiala-de-cereale-in-scadere-in-ciuda-recordului-la-porumb-24788.html).

2.4. Consumul de pine n rile din Uniunea Europeana. Piaa de morrit i

panificaie n Romnia
2.4.1. Top 10 cei mai mari consumatori de pine din UE

Romnia 97 kg/cap de locuitor/an

Cipru 74 kg/cap de locuitor/an

Belgia 67 kg/cap de locuitor/an

Grecia 65 kg/cap de locuitor/an

Olanda 58 kg/cap de locuitor/an

Germania 57 kg/cap de locuitor/an

Frana 57 kg/cap de locuitor/an

Italia 48 kg/cap de locuitor/an

Danemarca 43 kg/cap de locuitor/an

Finalanda 42 kg/cap de locuitor/an

(http://www.clickromania.co.uk/index.php?option=com_content&task=view&id=1573&Itemid=44)

2.4.2. Consumul de pine n Romnia

n Romnia, consumul lunar de pine pe cap de locuitor este de 7,8 kg, iar consumul de
paste finoase pe cap de locuitor ajunge la 2,5 kg,. Numai n ultimii zece ani, consumul de pine s-a

redus cu zece kilograme pe cap de locuitor, ajungnd n anii 2008/2009 la 108 kg -110 kg pe an.
Potrivit estimrilor patronatelor din industria de morrit i panificaie, producia total de pine n
Romnia este cifrat la 2,16 milioane de tone anual, iar datele oficiale ale Institutului Naional de
Statistic (INS) arat un consum lunar de pine de numai 45.000 50.000 tone fa de 180.000 tone
ct sunt estimrile patronatelor din domeniu, conform produciei. Consumul de pine i menine
trendul descendent din ultimii zece ani, dei valoarea pieei crete de la an la an
(http://www.financiarul.ro/2011/10/20/rompan-consumul-anual-de-paine-a-scazut-la-98-de-kg-pelocuitor/).
Fiecare romn consum anual 97 de kilograme de pine, de dou ori mai mult dect
danezii i de aproape apte ori mai mult dect britanicii, potrivit datelor AIB International, o
asociaie cu peste 900 de membrii a productorilor din industria de panificaie. n topul celor mai
mari consumatori de pine din Europa, Romnia este urmat de Belgia i Cipru, cu un consum de 74
de kilograme/cap de locuitor, respectiv 67 de kilograme/cap de locuitor. Grecia i Olanda se claseaz
pe urmtoarele locuri cu un consum de 67 de kilograme/cap de locuitor, respectiv 58 de
kilograme/pe cap de locuitor.
La cellalt capt al clasamentului este Marea Britanie, cu un consum mediu anual de 14
kilograme/pe cap de locuitor. n medie fiecare cetean al Uniunii Europene consum 61,5
kilograme de pine anual. (http://www.clickromania.co.uk/index.php?
option=com_content&task=view&id=1573&Itemid=44)

2.4.3 Piaa de morrit i panificaie n Romnia

Piaa intern de morrit i panificaie valoreaz circa 2 miliarde de euro (n 2007).

Vnzrile de pine din Romnia s-au cifrat n anul 2006 la circa 1,5 miliarde de dolari (1,16
miliarde de euro), un nivel apropiat de cel din 2005, cand piaa a totalizat 1,45 miliarde dolari.
Consumul de pine oficial nregistrat n anul 2008 a fost de circa 25 kilograme/cap de
locuitor. Consumul real de pine se ridica ns la circa 105 kilograme pe cap de locuitor pe an. n
anul 2009, piaa real a pinii din Romnia se ridica la valoarea de un miliard de euro, n timp ce
piaa fiscalizat era de doar 250 milioane euro.

Producia de pine i paste finoase din Romnia se ridic la circa 2,2 milioane de tone
(estimare din anul 2007).
Consumul de produse de panificaie este de circa 110 kg pe cap de locuitor (anul 2007), fa
de media european de 82 kilograme, i fa de Germania cu 83 de kilograme, Austria cu 45 de
kilograme, i Anglia cu 44 de kilograme. n ce privete cerealele, n total, incluznd i pinea,

pastele finoase, produsele de patiserie i de confetrie, un romn mnnc, anual, n jur de 128 de
kilograme de cereale.
Consumul de paste finoase n Romnia este doar de 2,5 kilograme pe cap de locuitor, n
timp ce n Uniunea European ajunge la 10 kilograme, iar n Italia la 30 de kilograme de paste pe
cap de locuitor.
n anul 2010, piaa total de panificaie era estimat la aproximativ un miliard de euro, iar
evaziunea fiscal din aceast pia era estimat la circa 60% (75% dup alt estimare).
(http://ro.wikipedia.org/wiki/Industria_alimentar%C4%83_%C3%AEn_Rom
%C3%A2nia#Pia.C8.9Ba_de_mor.C4.83rit_.C8.99i_panifica.C8.9Bie).

2.5. Piaa de paste finoase la nivel mondial

Piaa de paste finoase este estimat la aproximativ 55 milioane euro. Un romn consum
doar 2,5 kilograme de paste finoase pe an, n timp ce n Ungaria i Bulgaria cantitatea ajunge la opt
kilograme, iar n Italia - la 30 de kilograme pe an.

MATERIAL I METODE
Partea experimental s-a desfurat n perioada 20.10.2013-10.05.2014 n cadrul
Universitii de tiine Agricole i Medicin Veterinar, n laboratorul de Nutriie, controlul
calitii furajelor, Cluj-Napoca.

3.1.Recoltarea pobelor
Pentru aceste determinri am recoltat un numr de 35 de probe, din care 10 probe de
pine, 10 probe de paste i 15 probe din gru. Probele de pine i paste au fost achiziionate din
supermarket-uri din judeul Cluj, iar n ceea ce privete grul, probele provin din judee precum
Bistria-Nsud, Alba, Timi i Cluj-Napoca.
Prelevarea i pregtirea probelor s-au realizat conform mtodologiei standardizate.
Pinea, fie ambalat, fie neambalat, iar pastele, n pungi precum celor care le gsim n
supermarket-uri. n ceea ce privete grul, acesta a fost depozitat fie n vrac, fie n saci. Pentru
recoltarea probelor de gru din vrac, s-a folosit urmtoarea metod: s-a fcut o diviziune imaginar a
lotului ntr-un numr de pri aproximativ egal. S-a selectat la ntmplare un anumit numr de pri,
corespunztor numrului de probe pariale sau elementare i s-a luat cel puin o prob din fiecare
parte. Urmtorul pas a fost amestecarea i omogenizarea probelor pariale (elementare), obinnd
astfel proba general, iar din aceasta, folosind reducia, prin metoda sferturilor, s-a obinut prob
medie, cu masa de cca 100 de grame destinat analizelor de laborator. Ambalarea probelor s-a

realizat n pungi de nylon noi, urmat de etichetare, respectiv livrare la laborator pentru nregistrate
i efectuarea examenelor propriu-zise.
Menionez faptul c pentru recoltarea probelor, nu s-au nclcat sub nici o form normele
de igien aflate n vigoare, utilizndu-se doar recipiente sterile pentru a nu fi influenate rezultatele.

3.2. Examene de laborator

3.2.1. Examene micotoxicologice

Pentru determinarea micotoxinelor,respectiv toxina T2 i DON au fost utilizate toate cele
35 de probe enunate anterior.
Pentru efectuarea analizelor de laborator am utilizat testul RIDASCREENFAST
Micotoxin, kit ELISA imunoenzimatic competitiv pentru determinarea cantitativ a
micotoxinelor din pine, paste i cereale.
La baza testului st reacia antigen-anticorp. Godeurile plcii au fost marcate cu
anticorpi anti-micotoxin. Au fost adugate standardele de micotoxin

sau soluia de prob,

conjugatul enzim-micoxin i anticorpii anti-micotoxin. Micotoxina liber i conjugatul enzimmicotoxin intr n competiie pentru situsurile de legare ale anticorpilor (test imunoenzimatic
competitiv). n acelai timp, anticorpii anti-micotoxin sunt de asemenea legai prin imobilizarea
anticorpilor de captur.
Conjugatul nelegat este eliminat prin etapa de splare. Se adaug n godeuri amestecul
substrat-cromogen iar conjugatul enzimatic legat convertete cromogenul ntr-un produs albastru.
Adugarea soluiei de stopare duce la schimbarea culorii din albastru n galben. Msurarea se face
prin stectrofotometrie la o lungime de und 450 nm. Absorbana este invers proporional cu
concentraia micotoxinei din prob.

3.2.1.1.RIDASCREEN TOXINA T2

Kit ELISA pentru determinarea cantitativ a toxinei T 2 din cereale i produse din cereale.
Kitul conine reactivii necesari i standardele pentru 96 de determinri. Pentru interpretarea
rezultatelor este necesar un fotometru ELISA.
Timp necesar: prepararea probei (10 probe) aproximativ 30min
test aproximativ 1.5h
Limita de detecie: cereale,furaje ..<5ppb
Principiul testului:
Testul se bazeaz pe reacia antigen-anticorp. Godeurile plcii au fost marcate cu anticorpi
pentru anticorpii anti-toxina T2. Se adaug standardele sau probele, conjugatul enzimatic i
anticorpii anti-toxina T2. Toxina T2 liber i conjugatul enzimatic intr n competiie pentru situsurile
de legare ale anticorpilor (test imunoenzimatic competititv). Conjugatul enzimatic nelegat este
eliminat prin pasul de splare. Se adaug n godeuri amestecul substrat-cromogen i se las la
incubat, conjugatul enzimatic legat va converti cromogenul incolor ntr-o substan de culoare
albastr. Adugarea reactivului de stopare va determina virarea culorii de la albastru la galben.
Msurarea se face spectrofotometric la 450 nm (lungime de und opional> 600 nm).
Absorbanta este invers proporional cu concentraia toxina T2 din prob.
Compoziia kitului:

1X Microplaca ELISA cu 96 de godeuri detaabile

6X Standarde de toxin T-2 (1,3ml fiecare)

0ppb, 0.1ppb, 0.2ppb, 0.4ppb, 0.8ppb, 1.6ppb

1X Conjugat (5ml) ..capac rou

1X Anticorpi anti-toxina T2 (5ml) ..capac negru

1X Substrat (7ml) ........................capac verde

1X Cromogen (7ml) ........................capac albastru

1X Soluie de stopare (14ml) ...........capac galben

1X Soluie tampon pentru diluarea probei (50ml)

Materiale necesare:

fotometru microELISA (450nm)

moar

agitator magnetic

plnie i hrtie de filtru

micropipete : 50l, 100l, 500l, 1000l

Reactivi:
metanol
PBS pH 7.2
Mod de lucru:
Probele au fost pstrate la loc rece, protejate de lumin. S-au cntrit cte 5 g prob
mcinat ntr-un vas i s-au dizolvat n 25 ml metanol/ap distilat (70/30), dup care s-au amestecat
folosind agitatorul magnetic timp de 10 minute. S-a filtrat extractul cu ajutorul unei hrtii de filtru.
S-a diluat 50l prob filtrat cu 300l soluie tampon pentru diluarea probei 1:7 (1+6), factor de
diluie 35. Din amestecul obinut s-a utilizat cte 50 l per godeu.
S-a inserat un numr necesar de godeuri pentru standarde i probe n suport dup care s-a
adugat 50l standard sau proba. S-a adugat 50l conjugat n fiecare godeu urmat de 50l anticorp
anti-toxina T2 pentru fiecare godeu. S-a amestecat rotind placa i s-a lsat la incubat 1h la
temperatura camerei, la intuneric. Dup expirarea timpului s-a aruncat lichidul, btnd cu putere
plcua cu faa n jos pe o hrtie absorbant pentru eliminarea urmelor de lichid i s-a adugat 250 l
ap distilat, aruncnd din nou lichidul. Aceast etap de splare s-a repetat de 2 ori, conform
cerinei protocolului.
S-a adugat apoi 50l substrat i 50l cromogen n fiecare godeu i s-a amestecat rotind
plcua, apoi s-a incubat 30min la temperatura camerei (20-25C), la intuneric.

S-a adugat 100l soluie de stopare n fiecare godeu, amenstecnd uor rotind plcua i
s-a msurat la 450nm fa de blank-ul de aer. Este necesar ca msurarea s nu depeasc 10 min
dup adaugarea soluiei de stopare.

Sensibilitate:
Limita minim de detecie este de 0.1 g/kg (ppb). Conform implementrii testului, limita
de detecie este 3.5 g/kg (ppb) toxina T2 n proba de cereale sau fne.

Specificitate:
Specificitatea a fost stabilit analiznd interferena.
Interferena: Toxina T2 .............100%
Acetil toxina T2.....aprox. 114%
Toxina HT-2...aprox. 7%
Iso toxina T2.aprox. 2%
Reproductibilitate:
Reproductibilitatea unei probe de cereale i furaj este aprox. 90% cu un coeficient mediu de
variaie de aprox. 10%.
3.2.1.2. RIDASCREEN DON
Pentru determinarea coninutului de DON, s-au folosit un numr de 35 de probe:
-

10 probe de pine

10 probe de diferite sortimente de paste

15 probe gru

S-a utilizat testul RIDASCREEN DON . Kitul RIDASCREEN conine standarde

pentru 96 de determinri. Pentru interpretarea rezultatelor este necesar un fotometru ELISA.
Principiul testului:
Testul se bazeaz pe reacia antigen-anticorp. Godeurile plcii au fost marcate cu anticorpi
anti-DON. S-au adaugat standardele sau probele, conjugatul DON-enzima i anticorpi anti-DON.
DON liber i conjugatul enzima-DON au intrat n competiie pentru situsurile de legare ale
anticorpilor (test imunoenzimatic competititv). n acelai timp, anticorpii de DON s-au legat de
anticorpii imobilizai. Conjugatul enzimatic nelegat a fost eliminat prin pasul de splare. S-a adaugat
n godeuri amestecul substrat-cromogen i s-a lsat la incubat;conjugatul enzimatic legat a convertit
cromogenul incolor ntr-o substan de culoare albastr. Adugarea reactivului de stopare a
determinat virarea culorii de la albastru la galben. Msurarea s-a fcut spectrofotometric la 450 nm
(lungime de und opional> 600 nm).
Absorbanta este invers proporional cu concentraia deoxinivalenolului din prob
Limita de detecie:
-

cereale, mal, furaje- 18.5ppb

Compoziia kitului:

1X Microplaca ELISA cu 96 de godeuri detaabile

5X Standarde de deoxinivalenol (1,3ml fiecare)

0ppb, 3.7ppb, 11.1ppb, 33.3ppb, 100ppb

1X Conjugat (6ml) capac rou

1X Anticorpi anti-DON(6ml) capac negru

1X Substrat/cromogen (12ml) ...capac alb

1X Soluie de stopare (12ml) .capac galben

1X Soluie tampon pentru splat (sare)

Materiale necesare:

fotometru microELISA (450nm)

moar

shaker

cilindru gradat: 100ml, 1l

plnie i hrtie de filtru Whatman numarul 1

pipete gradate

micropipete : 50l, 100l, 1000l

Reactivi:
ap distilat
Mod de lucru:
Probele au fost pstrate la loc rece, protejate de lumin, la o temperatur de 2-8C. S-au
cntrit cte 5 g prob mcinat ntr-un vas cu capac i s-a adugat peste fiecare 25 ml ap ditilat
dup care s-au amestecat cu putere timp de 3 minute. S-au filtrat extractul cu ajutorul unei hrtii de
filtru Whatman nr. 1. S-au diluat 100 l de filtrat. Din amestecul ob inut s-a utilizat cte 50 l per
godeu.
S-a nserat un numr necesar de godeuri pentru standarde i probe n suport dup care s-a
adugat 50l standard sau prob. S-a adugat 50l conjugat enzimatic n fiecare godeu urmat mai
apoi de 50l anticorp n fiecare godeu. S-a amestecat manual rotind uor placua i s-a lsat la
incubat 30min la temperatura camerei (20-25C) dup care s-a aruncat lichidul i s-a btut cu putere

plcuta cu faa n jos pe o hrtie absorbant pentru eliminarea urmelor de lichid. S-au adugat 250l
ap distilat i s-a aruncat din nou lichidul. S-a repetat etapa de splare de 2 ori.
S-a adugat 100l (2 picturi) substrat/cromogen n fiecare godeu. S-a amestecat rotind
plcua i s-a incubat 15min la temperatura camerei (20-25C).
S-a adugat 100l soluie de stopare n fiecare godeu. S-a amestecat uor rotind plcua i
s-a msurat la 450nm fa de blank-ul de aer. Msurarea s-a efectuat n primele 10 minute dup
adugarea soluiei de stopare. Valoarea medie a absorbantelor obinute pentru standarde i probe a
fost mprit la valoarea absorbantei primului standard i nmulit cu 100. Standardul zero este
egal cu 100% i valorile absorbantelor sunt n procente.
Absorbanta standard (sau proba) X 100 = % absorbanta
Sensibilitate:

Limita minim de detecie este de 3.7g/kg (ppb). Conform implementrii testului, limita
de detecie este 18.5g/kg (ppb) pentru cereale, mal i furaje, 3.7g/kg (ppb) pentru bere i must.
Specificitate:
Specificitatea a fost stabilit analiznd interferena.
Interferena: Deoxinivalenol 100%
3-Acetildeoxinivalenol > 100%
15-Acetildeoxinivalenol aproximativ 19%
Nivalenol aproximativ 4%
Fusarenon X <1%
Toxina T2 - <1%
Reproductibilitate :
n cereale, mal, furaje, bere i must este cuprins ntre 85-110%.

Rezultate i discuii
n urma examenului micotoxicologic s-a evideniat prezena DON n 32 probe din cele
35 analizate (91.43%). n probele de gru, DON a fost identificat n toate cele 15 probe analizate
(100%), cu valori cuprinse ntre 21-3395 g/kg, cu o valoare medie de 916,53 g/kg i cu o valoare
median de 631 g/kg. n ceea ce privete probele de pine, din totalul celor 10 probe analizate, s-a
constatat prezena DON n 9 probe (90%) cu valori cuprinse ntre 0-352 g/kg, media de 183,9
g/kg, mediana de 155,5 g/kg. Din totalul celor 10 probe de paste analizate, 8 probe au fost
pozitive (80%) cu valori ale DON cuprinse ntre 0-35 g/kg, cu o valoare medie de 16,7 g/kg i o
valoare median de 15 g/kg. (tab. 4.1.)
Din totalul celor 15 probe de gru, un numr de 4 probe au depit valorile impuse de
legislaia european de 1250 g/kg pentru DON, valorile nregistrate fiind de 1346 g/kg la o prob
de gru din judetul Timi, 1450 g/kg la o prob din judeul Bistria-Nsud , 2048 g/kg la o prob
din judeul Cluj i 3395 g/kg la o prob provenit din judeul Alba.

n ceea ce privete coninutul n toxina T2, aceasta a fost identificat n doar 2 din probele
analizate (5,71%), respectiv o prob de gru i o prob de pine, cu valori de 7 g/kg i respectiv de
5 g/kg, aceste valori nedepind standardele europene. (CE Reg. Nr. 1881/2006 i Nr. 1126/2007).
n tabelul ce urmeaz (tab. 4.1.), sunt prezentate rezultatele obinute n urma analizei DON.

Tabelul 4.1.

Analiza DON n probele de gru, pine i paste

Numrul

Toxina

Numrul

Interval

Media

Median

Tipurile

probelor

detectat

probelor

g/kg

g/kg

g/kg

Gru
Pine
Paste

analizate
15
10
10

DON
DON
DON

pozitive
15
9
8

21-3395
0-352
0-35

916.53
183.9
16.7

631.00
155.5
15

n urmtorul grafic, este evideniat cantitatea de DON exprimat n g/kg obinut n urma
analizelor pe probele de pine.

Fig.4.1. Valori DON pentru probele de pine

n ceea ce privete valorile obinute la paste, avem urmtorul grafic :

Fig.4.2. Valori DON pentru probele de paste

Comparativ cu alte ri, n urma unui studiu efectuat pe pine i paste, n Spania, n anul
2010, apariia micotoxinelor n pine a fost de 28.0% i 2.6% pentru deoxynivalenol i toxina T2,
ntruct n paste, apariia pentru ambele toxine a fost mai mare, variind de la 9.3% la 62.7%.
Coninutul mediu de DON (42.5 g/kg) n pine a fost mai sczut dect coninutul micotoxinei T2
(68.37%g/kg), n timp ce n paste coninutul DON (137.1%g/kg) a fost a fost mai ridicat. Doza
zilnic estimat la consumul acestor produse reprezint 8.4% i respectiv 0.2% din doza zilnic
tolerat (Gonzles-Osnaya, 2011).
Dac valorile obinute la pine i paste nu arat nivele ridicate i peste maxima admis de
legislaia European, la gru situaia se schimb i este evideniat n figura 4.3.

Fig.4.3. Valori DON pentru probele de gru

Studiile cu privire la DON-ul din gru efectuate n mai multe ri, arat nivele diferite de
micotoxin. Un studiu din anul 2004, aduce n prim plan anul 1998 i 1999 artnd coninutul ridicat
de DON n gru, de aceast dat n Olanda. Optzeci la sut din copiii n vrst de 1 an au depit

doza zilnic tolerat, iar 20% au depit de dou ori doza zilnic tolerat. Presupunnd un aport de
lung durat, efectele negative asupra greutii corporale ar fi posibile. S-a efectuat o probabilitate
de expunere i o evaluare a efectelor , comparndu-se expunerea anterioar i cea curent, precum i
potenialele efecte asupra sntii copiilor mici. Copiii de 1 an au artat cel mai mare aport de DON
cu o medie de 0.46g/kg greutate corporal/zi. O evaluare probabilistic a efectelor a artat c la
95% din aportul de DON o scdere n greutate era puin probabil s depeasc 9% (Moniek, 2004)
Un studiu mai recent din 2012 arat prezena DON n grul din Parana, Brazilia. Apariia
acestei micotoxine a fost evaluat ntr-un studiu realizat pe 113 probe gru provenite din nordul i
centrul/sud-vestul regiunilor statului Parana, n timpul sezoanelor de cretere din anii 2008-2009.
DON a fost detectat n 66.4% probe la nivele variind de la 206.3 la 4732.3g/kg, multe dintre pobe
depind doza zilnic estimat de 1.250g/kg. Doza zilnic estimat de DON din pine i paste a

fost evaluat la locuitorii din oraul Londrina n nordul Paranei, Brazilia. Aportul mediu a acestor
locuitori a fost de 0.79g/kg greutate corporal pentru pine i 0.35 g/kg greutate corporal pentru
paste. Doza zilnic estimat a fost de 1.13g/kg, fiind mai ridicat fa de PTDMI (Doza provizorie
maxim tolerat zilnic) de 1g/kg greutate corporal (Sifuentes dos Santos, 2013).
Influena proceselor de mcinare a grului (pre-splare, splare) asupra coninutului de
DON sunt prezentate ntr-un articol publicat n

iulie 2013, stabilind nivelul de distribuie al

contaminrii n diferite produse i subproduse (tre, fin, gri i paste). Rezultatele obinute au
artat o scdere a nivelului de contaminare cu DON de 30%, 66% i 63% n grul curat, grul
decojit i fina griat. Pe de alt parte, s-a remarcat o cretere a nivelului de contaminare la
subproduse, n special la trele de gru, destinate fiind hrnirii animalelor. n ceea ce privete a
doua etap a prelucrrii, s-a observat o scdere a DON n pastele uscate de 8%, respectiv 41% n
pastele gtite. Ansamblul proceselor, care decurg de la boabele de gru la obinerea pastelor duc la o
scdere a contaminrii de pna la 78%. (Brera, 2013).
Prezena a 7 micotoxine principale n fina de gru, cumprat din supermarket-urile din
Novi Sad, ora din Serbia, capital a provinciei Voivodina, a fost determinat ntr-un studiu din luna
mai a anului 2012. DON a fost toxina predominant din toate probele analizate, urmat de
zearalenon (ZON), i toxina T2, cu o frecven de apariie de 33.3%, repectiv 26.7%. Toate probele
respectau legislaia European/Srb, cu excepia unei singure probe care a depit nivelul maxim

admis de DON de 750g/kg. n plus, aportul de micotoxine prin consumul de produse pe baz de
gru a fost estimat n medie pentru consumatorii aduli bazat pe piaa i apoi comparat cu doza
zilnic tolerat de ctre Comitetul tiinific pentru alimente al Uniunii Europen. Aportul de ZON i
T2 calculat a fost mai sczut dect respectiva doz zilnic tolerat. Cu toate acestea, dozele de DON
au fost evaluate a fi apropiate de nivelul dozei zilnice tolerate pentru aduli (Biljana, 2012).

Concluzii generale
1. n urma examenului micotoxicologic s-a evideniat prezena DON n 32 probe din cele
35 analizate (91.43%).
2. La probele de gru, DON a fost identificat n toate cele 15 probe analizate (100%), cu
valori cuprinse ntre 21-3395 g/kg, cu o valoare medie de 916,53 g/kg i cu o valoare median de
631 g/kg. Dintre acestea, 4 probe au depit limita maxim impus de legislaia european de 1250
g/kg pt DON. Valoarea maxim nregistrat de noi de 3395 g/kg, a fost la o prob de gru din
judeul Alba.
3. n ceea ce privete probele de pine, din totalul celor 10 probe analizate, s-a constatat
prezena DON n 9 probe (90%) cu valori cuprinse ntre 0-352 g/kg, valori ce nu depesc valoarea
maxim impus de legislaia european de 500 g/kg.
4. Din totalul celor 10 probe de paste analizate, 8 probe au fost pozitive (80%) cu valori ale
DON cuprinse ntre 0-35 g/kg, valori mici raportate la limita maxim de 750 g/kg.
5. n ceea ce privete coninutul n toxina T 2, aceasta a fost identificat n doar 2 din
probele analizate (5,71%), respectiv o prob de gru i o prob de pine, cu valori de 7 g/kg i
respectiv de 5 g/kg, aceste valori nedepind standardele europene.

6. Rezultatele obinute de noi evideniaz o contaminare cu DON ridicat la nivelul

boabelor de gru recoltate din diferite judee ale Transilvaniei, cu unele valori ce depesc
standardele europene, dar cu valori mici nregistrate n probele de pine i paste. Aceasta datorit
faptului c o dat cu eliminarea nveliurilor exterioare ale bobului i mcinarea boabelor, se pierde
o mare parte din micotoxin, aceasta depozitndu-se n special la nivelul trei. Aceasta este i
explicaia nivelului sczut de DON n pine i paste, precum i procesele termice la care sunt
suspuse, ansamblul proceselor, care decurg de la boabele de gru i pn la obinerea pastelor
ducnd la o scdere a contaminrii de pn 80%.
7. Chiar dac valorile nregistrate de noi se ncadreaz n limitele normale stabilite de
legislaia european pentru DON i toxina T2, rmne o problem real prezena DON n tare,
binecunoscut fiind faptul c acestrea sunt suproduse din industria morritului ce intr n structura
nutreurilor concentrate administrate animalelor.

BIBLIOGRAFIE
1.

Adameteanu, I., Constana Adameteanu, Baba, I., Danielescu, N., Moldovanu, N. A.,
Rotaru, O., 1974 Leberzirrhose bei neugeborenen Klbern durch plazentare bertragung
von Aflatoxin, Dtsch. Tierrztl. Wschr. 81, 129-132.

2.

Ahmed, N., Rom G.C., 1986 Nuclear lipid peroxidation in rat liver by T 2 mycotoxin,
Toxicol., 24, 947.

3. Baba, A. I., 2002 Oncologie Comparat, Ed. Acad. Rom., Bucureti.

4.

Beasley, V.R., Swanson, S.P., Corley, R.A., Buck, W.B., Koritz, G.D., Burmeister, H.R.,
1986 Pharmacokinetics of the tricothecene mycotoxin, T-2 toxin in swine and cattle,
Toxicol., 24: 13-23.

5.

Bilijana krbi, Jelena ivanev, Nataa Durii-Mladenovi, Godula M., 2012Principal mycotoxin in wheat flour from the Serbian-market: Levels and assessment of the
exposure by wheat-based products, Food Control, vol. 25, pag. 389-396.

6.

Brera C, Peduto A., Debegnach F., Pannunzi E., Prantera A., Gregori G., M. De
Giacomo, B. De Santis, 2013- Study of the influence of the milling process on the
distribution of deoxynivalenol content from the caryopsis to cooked pasta, Food Control,
vol. 32, pag. 309-312.

7.

Carter, C.J., Cannon, M., 1977 Structural requirements for the inhibitory action of 12, 13
- epoxytrichotecenes on protein synthesis in eukaryotes, Biochem. J., 166, 399.

8.

Carter, C.J., Cannon, M., Smith, K.E., 1976 Inhibition of protein synthesis in
reticulocytes by trichodermin, Biochem.J., 154,171.

9.

Ceovic, S., Hrabar A. and aric M., 1992 Epidemiology of Balkan endemic nephropathy.
Food Chem. Toxicol. 30:183 -188.

10.

Chelule, P. K., Gqaleni N., Dutton M.F. and Chuturgoon A.A., 2001 Exposure of rural
and urban population in KwaZulu Natal, South Africa, to fumonisin B(1) in maize. Environ.,
Health Perspect. 109:253-256.

11.

Colvin, B.M., Harrison, L.R., Grosser, H.S., and Hall R.F., 1984 Aflatoxycosis in
feeder cattle, J.Am.Vet.Med.Assoc.,184, 956-958.

12. Constantin Savu i Narcisa Georgescu, 2004 - Sigurana alimentelor, Editura Semne, pag. 149-150.
13.

Coppok, R.W., Gelberg, H.B., Hoffmann, W.E., Buck, W.B., 1985 The acute toxicopaty
of intravenous diacetoxyscirpenol (anguidine) administration in swine. Fundam.
Appl.Toxicol., 5: 1034 49.

14. Diaz, D.E., 2005 The Mycotoxin Blue Book, Ed. Nottingham University
15.

Press.

DMello, J.P.F., Porter J.K., Macdonald A.M.C. and Placinta, 1997- Handbook of Plant
and Fungal Toxicants.

16.

El-Serag H. B. and Mason A. C., 1999 Rising incidence of hepatocellular carcinoma in

the United States. N. Engl. J. Med. 340:745-750.

17.

Gonzles-Osnaya L., Corts C., Soriano J.M., Molt J.C., Maes J., 2011- Occurrence
of deoxynivalenol and T-2 toxin in bread and pasta commercialised in Spain, Food
Chemistry, vol. 124, pag. 156-161.

18.

Greene, H. J. and Oehme, F. W., 1976 A possible case of equine aflatoxicosis, Clin
Toxicol., 9(2), 251-4.

19.

Halliwell, R.E.W., McGorum B. C., Irving, P. and Dixon, P.M., 1993 Local and
systemic antibody production in horses affected with chronic obstructive pulmonary disease,
Vet. Immunol. Immunopath. 38:201-215.

20.

Hesseltine, C.W., Shotwell O., Ellis J.J. and Stubblefield R.D., 1996- Aflatoxin formation
by Aspergillus flavus. Bacteriol. 30:235-251.

21.

Ji-X, KI-Y, Ning-T, Liong-Y, Wong D, Shi-G., 1994 Effects of sterigmatocystin and T-2
toxin on the introduction of unscheduled DNA synthesis in primary cultures of human
gastric epithelial cells, Nat. - Toxins, 2 (3), 115-9.

22.

Joice Sifuentes dos Santos, Montagner Souza T., Elisabete Yurie Sataque Ono,
Elisabete Hiromi Hashimoto,

Bassoi M.C., Martha Zavariz de Miranda, Eiko

Nakagawa Itano, Kawamura O., Elisa Yoko Hirooka, 2013- Natural occuarence of
deoxynivalenol in wheat from Paran State, Brazil and estimated daily intake by wheat
products, Food Chemistry, vol. 138, pag. 90-95.
23.

Kew, M. C., 2003 Synergistic interaction between aflatoxin B1 and hepatitis B virus in
hepatocarcinogenesis, Liver Int. 23:405-409.

24.

Larsson, P., Persson E., Tyden, E., and Tjalve H., 2003 Cell specific activation of
aflatoxin B1 correlates with presence of some cytochrome P 450 enzymes in olfactory and
respiratory tissues in horse. Res. Vet. Sci. 74:227-233.

25.

Marasas, W.F., 2001 Discovery and occurence of the fumonisins: a historical perspective,
Environ Health Perspect, 109:239-243.

26.

Moniek N. Pieters, Bakker M., Slob W, 2004- Reduced intake in The Netherlands: a risk
assessment update, Toxicology Letters, vol.153, pag. 145-153.

27.

Morrisey, R.E., Vesonder, R.F., 1985 Efect of deoxynivalenol (vomitoxin) on fertility,

pregnancy, and postnatal development of Sprague - Dowley rats, Appl. Environ.Microbiol.,
49, 1062.

28.

Osborne, D.J., Huff W.E., Hamilton P.B. and Burmeister H.R., 1982-Comparison of
ochratoxin, aflatoxin, and T-2 toxin for their effects on selected parameters related to
digestion and evidence for specific metabolism of carotenoids in chickens. Poult. Sci.
61:1646-1652.

29.

Pang, V.R, Swanson, S.P., Beasley, V.R., Buck, W.B., Haschek, W.M., 1987 The toxicity
of T-2 toxin in swine following topical application. I. Clinical signs, pathology and residue
concentrations. Fundam., Appl.Toxicol, 9: 41 - 9.

30.

Petkova-Bocharova, T., Chernozemsky I.N. and Castegnaro M., 2002 Balkan endemic
nephropathy and associated urinary tract tumours: a review on aetiological causes and the
potential role of mycotoxins, Food Addit. Contam. 19:282-302.

31.

Qiu, M., Liu X., Wang Y. and Zhang C., 2001 Survey on the fumonisins intake and the
urinary Sa/So ratio of people suffering from a high incidence of oesophageal cancer, Wei
Sheng Yan Jiu. 30:365-367.

32.

Ray, A. C., Abbitt, B., Cotter, S. R., Murphy M. J., Reagor, J. C., Robinson R. M., West
J. E., and Whitford H. W., 1986 Bovine abortion and death associated with consumption
of aflatoxin contaminated peanuts, J. Am. Vet. Med. Assoc., 188(10), 187-8.

33.

Rosenstein, Y., and Lafarge - Frayssinet, C., 1983 Inhibitory effects of Fusarium T - 2
toxin on lymphoid DNA and protein synthesis, Toxicol. Appl. Pharmacol., 70(2), 283-288.

34.

Rotter, BA, Prelusky, D.B., Pestka J.J., 1996 Toxicology of deoxynivalenol (vomitoxin),
J.Toxicol.Environ. - Health, 31 (6), 1279 88.

35.

Segal, R., Milo - Goldzwig, L, Joffe, A.Z., Yagen, B., 1983 Trichothecene induced
hemolysis, l. The hemolytic activity of T - 2 toxin, in ToxicoLAppI.Pharmacol, 70, 283.

36.

Shephard, G.S., Marasas W.F., Yazdanpanah H., Rahimian H., Safavi N., Zarghi A.,
Shafaati A. and Rasekh H.R., 2002 Fumonisin B(1) in maize harvested in Iran during
1999, Food Addit. Contam. 19:676-679.

37.

Smith, B.J., Holladay, S.D., Blaylock, B.L., 1994 Hematopoietic alterations after
exposure to T-2 mycotoxin. Toxicon, 32 (9), 1115-23.

38. Smith, J.E., Henderson, R.S., 1991 Micotoxyns and animal food. CRC Press, INC., USA.
39.

Surai, P.F., Dvorska E., 2001- Is organic selenium better for animals than inorganic
sources? Two different scenarios in stress conditions. Feed Mix 9:8-10.

40.

Tashiro, F., Hirai, K, Ueno, Y., 1983 Inhibitory effects of carcinogenic mycotoxins on
deoxyribonucleic acid - dependent acid ribonucleic acid polymerase and ribonuclease H,
Appl. Environ. Microbiol., 38, 191.

41.

Tatsuno, T., Saito, M., Enomoto, M., Tsunoda, H., 1968 Nivalenol, a toxic principle of
Fusarium nivale, Chem.Pharm.Bull., 16, 2519.

42.

Ueno, Y. and Ishi K., 1985 Chemical and biological properties of trichothecenes from
Fusarium sporotrichioides in Trichothecenes and Other Mycotoxins, Lacey J., Ed., John
Wiley & Sons, New York, 307.

43.

Van der Westhuizen, L., Shephard G.S., Scussel V.M., Costa L.L., Vismer H.F., Rheeder
J.P. and Marasas W.F., 2003 Fumonisin contamination and Fusarium incidence in corn
from Santa Catarina, Brazil. J. Agric. Food. Chem. 51:5574-5578.

44.

Van der Westhuizen, L., Shephard G.S., Scussel V.M., Costa L.L., Vismer H.F., Rheeder
and H.P. van Egmond, 2002- Worldwide regulations for mycotoxins. Adv. Exp. Med. Biol.
504:257-269.

45.

Visconti A., and Doko M.B., 1994 Survey of fumonisin production by Fusarium isolated
from cereals in Europe, J.AOAC Int. 77:546-550.

***http://www.clickromania.co.uk/index.php?
option=com_content&task=view&id=1573&Itemid=44
***http://www.financiarul.ro/2011/10/20/rompan-consumul-anual-de-paine-a-scazut-la-98-de-kg-pelocuitor

***http://www.recolta.eu/piata-agricola/analize-de-piata/estimari-2014-2015-productiamondiala-de-cereale-in-scadere-in-ciuda-recordului-la-porumb-24788.html.
***http://ro.wikipedia.org/wiki/Industria_alimentar%C4%83_%C3%AEn_Rom
%C3%A2nia#Pia.C8.9Ba_de_mor.C4.83rit_.C8.99i_panifica.C8.9Bie