Cromatografie de lichidelor

Istoric
nceputul cromatografiei de lichide este atribuit lui wet (1903), care a reuit pentru
prima dat separarea unor compui naturali colorai pe o coloan umplut cu carbonat de
calciu, utiliznd o faz mobil alctuit din solveni organici. Dezvoltarea cromatografiei de
lichide ca tehnic analitic are loc ceva mai trziu i este legat de necesitatea crescnd de
separare a compuilor organici din matrici complexe.
In iunie 1941, Societatea Britanic de Biochimie, i inea cea de-a 214-a edin de
comunicri, la Institutul Naional de Cercetri Medicale. La aceast ntlnire Martin i Synge,
doi tineri chimiti (Martin avea 31 de ani; Synge 26), au prezentat o lucrare despre
separarea i determinarea amino-acizilor N-acilai din probe de ln, printr-o nou metod
analitic. Acetia au separat acetil-prolina de acetil-leucina, utiliznd o coloan umplut cu
silicagel impregnat cu ap (un material foarte polar) i cloroform ca faz
mobil. Lua natere astfel cromatografia de partiie, recunoscut apoi ca separare prin
cromatografie de lichide n faz normal.[106,107] Exact 10 ani mai trziu, Martin i un alt
tnr cercettor (A.James 29 ani) trimiteau spre publicare o lucrare descriind un proces
cromatografic n care faza mobil este un gaz.[108,109] Se puneau bazele cromatografiei
de partiie gaz-lichid. In anul 1948 Martin i grupul su de cercetare ncep cercetri la
Institutul Naional din Londra cu privire la problema separrii cromatografice a acizilor grai,
cu caten hidrocarbonat mare. Aplicarea separrii cromatografice n faz normal nu a dat
rezultatele dorite, deoarece coeficienii de partiie ai acestor compui erau aproape total n
favoarea fazei mobile. Deci retenia i astfel separarea lor pe o coloan polar nu avea loc.
Ideea de a schimba rolurile celor dou faze a venit imediat. Astfel au realizat prima faz
staionar nepolar prin tratarea kiselgurului cu Si(CH3)2Cl2, care devine total neaderent de
ctre solveni polari i hidrofili. In anul urmtor au realizat pentru prima dat separarea
acidului lauric (C12) de acidul stearic (C18). Mai trziu, tehnica bazat pe acest principiu
avea s fie cunoscut ca separare prin cromatografie de lichide n faz invers, dei pn n
1970 chiar i IUPAC considera aceast tehnic analitic doar de interes istoric. Prin realizarea
fazelor staionare chimic legate aceast tehnic ia o mare dezvoltare, n prezent fiind cea mai
important tehnic analitic de separare.[110] Contribuiile eseniale ale lui Martin i Synge
la dezvoltarea cromatografiei au fost rspltite n anul 1952 prin acordarea Premiului Nobel
n Chimie.
Prima faz staionar sintetizat este atribuit autorilor Halasz i Sebastian (1969),
care au refluxat silicagelul cu 1-octanol, obinnd eterul avnd la baz o structur destul de
instabil n prezena apei, caraterizat de legturile Si-O-C:
Si OH + HO-(CH2)7CH3

Si O (CH2)7CH3 + HOH

In 1970 Kirkland i DeStefano au ataat lanuri hidrocarbonate la structura silicagelului prin

utilizarea reactivilor de derivatizare de tip silanic, obinnd structuri mult mai stabile
pe baz de legturi Si-O-Si, ca n exemplul urmtor:
OH +
Cl

CH3

CH3

Si

Si (CH2)7CH3

(CH2)7CH3 +
Si O Si HCl

CH3
CH3
Horvath, Knox, Soczewinski, Snyder, Scott, Kirkland, Guiochon sunt doar cteva
nume mari de oameni de tiin care au adus contribuii fundamentale, teoretice sau
experimentale, la dezvoltarea cromatografiei de lichide ca tehnic analitic de mare
performan.
Clasificarea separrilor prin cromatografia de lichide
Retenia n cromatografia de lichide este un proces complex, care implic interacii ale
speciilor din proba injectat att cu faza mobil, ct i cu faza staionar. Cunoaterea
mecanismului dup care se desfoar procesul de retenie are ca prim avantaj pentru analist
posibilitatea prediciei acestuia i mai ales alegerea acelor condiii experimentale pentru
atingerea unor selectiviti maxime ntre analii. Cea mai important clasificare a separrilor
LC este bazat pe mecanismul care st la baza separrii, care la rndul su depinde de natura
celor faze (staionar i mobil) participante n procesul de separare cromatografic. Cele mai
importante clase de separri LC sunt urmtoarele:
A)Cromatografia de lichide n faz normal (NP-LC normal-phase liquid
chromatography) n care faza staionar este polar, iar faza mobil este alctuit dintr- un
solvent nepolar cu un coninut mic de modificator polar.
B)Cromatografia de lichide n faz invers (RP-LC reversed-phase liquid
chromatography) n care faza staionar este nepolar i hidrofob, iar faza mobil este
alctuit dintr-un solvent polar.
C)Cromatografia de lichide prin mecanism de schimb ionic (IC ion
chromatography), n care faza staionar este un schimbtor de ioni, iar faza mobil este
apoas cu un pH controlat.
D)Cromatografie de lichide prin mecanism de excludere (sau cromatografie pe gel), n
care faza staionar este un gel cu porozitate controlat, iar componenii probei sunt separai
n funcie de forma i dimensiunea molecular.
E)Cromatografie de lichide bazat pe interacia diferit a compuilor asimetrici cu
anumite structuri din faza staionar (numite selectori de chiralitate).
Cele mai importante separri cromatografice se efectueaz n prezent pe o coloan
cromatografic, confecionat dintr-un metal. In interiorul coloanei se gsete faza staionar,
fixat la capete ntre dou frite. Diametrul i lungimea sunt parametri constructivi, funcie de
care coloanele se mpart n mai multe clase, descrise n tabelul urmtor.
Cromatografia de lichide planar este o tehnic cu aplicaii din ce n ce mai puin
utilizate n practic analitic. Cromatografia pe hrtie sau cromatografia n strat subire n
diverse variante (ascendent sau descendent) pot decurge prin unul din mecanismele de mai
sus, iar vizualizarea compuilor separai sub forma de spoturi se poate face utiliznd
proprietatea de absorbie sau de fluorescen a analiilor separai, cu sau fr reactiv de
derivatizare (aa-numita developare). Exist i posibilitatea ca spoturile rezultate s fie izolate
i apoi printr-o procedur de extracie cu un solvent adecvat, analitul coninut s fie
determinat printr-o tehnic spectrometric.
Tabel 11.1. Clasificarea coloanelor n LC n funcie de dimensiuni.[111]
Descriere

i.d. (mm)

d.p. (m)

Debit optim faz

mobil
Coloane deschise

< 0,025

< 25 nL/min

Coloane nanobore

0,025 0,1

25-4000 nL/min

Coloane capilare

0,1- 1

0,4 200 L/min

Coloane microbore

1-2

3-5

0,05 1 mL/min

Coloane narrow-bore

2-4

3-5

0,3 3 mL/min

Coloane normal-bore

4-5

3-7

1 10 mL/min

5 - 10

5 - 12

5 40 mL/min

> 10

5 - 20

> 20 mL/min

Coloane semi-preparative
Coloane preparative

Faze mobile n cromatografia de lichide

Faza mobil (nepolar) n cromatografia de lichide n faz normal (NP-LC)este
alctuit din dou componente principale:
a)solventul nepolar, care poate fi unul dintre solvenii: pentan, hexan, ciclohexan;
b)modificator polar (ntr-un procent foarte mic): tetrahidrofuran, 2-propanol, acetonitril, eteri,
esteri, cloroform, etc.
Acetia pot fi clasificai n solveni slabi (cu putere elutropic mic) i solveni tari
(putere elutropic mare, dup cum se poate observa din tabelul 11.2).
Faza mobil (polar) n RP-LC este n general alctuit din dou componente
principale: componenta apoas i componenta organic. Parametrii fazei mobile care
influeneaz retenia n RP-LC sunt urmtorii:
Natura
modificatorului
organic
(acetonitril,
metanol,
etanol, 1-propanol, 2propanol,tetrahidrofuran, dioxan, etc); puterea elutropic a modificatorului organic este o
msur a capacitii sale de a micora factorul de capacitate (timpul de retenie) al analiilor:
cu ct puterea elutropic este mai mare, cu att timpul de retenie va fi mai mic.
Coninutul modificatorului organic (% n volume): de regul, cu ct concentraia
modificatorului organic este mai mare, cu att timpul de retenie al analiilor este mai mic
(prin creterea solubilitii analiilor n faza mobil);
pH-ul i componentei apoase din faza mobil influeneaz retenia analiilor cu
proprieti acido-bazice;
Natura acidului (acizi formic, acetic, trifluoracetic, tricloracetic) sau a tamponului utilizat n
componenta apoas (se pot utiliza soluii tampon pe baz de fosfat, borat, acetat, etc, cu
amoniac, trietilamina, dar cu pH-ul cuprins ntre 2 i 8);
Tria ionic a componentei apoase (care depinde de concentraia unor sruri adugate, sau
de concentraia soluiei tampon);
Natura i concentraia agenilor de formare de perechi ionice (R4N+; R-SO3-;R-OSO3-, etc).
Solvenii folosii n LC trebuie s fie filtrai (pentru a nu conine particule n
suspensie), degazai i de puritate cromatografic. Folosirea unor solveni cu particule solide

n suspensie conduce la colmatarea coloanei cromatografice i a sistemului cromatografic.

Prezena unor gaze (N2 sau O2) dizolvate n faza mobil poate influena

detecia, deoarece dup ieirea din coloana cromatografic fluxul mobil are o presiune mai
mic dect n coloan i astfel se pot forma bule gazoase care pot perturba n procesul de
detecie.
Faze staionare n cromatografia de lichide
Faz normal
Cea mai important faz staionar n cromatografia de lichide n faz normal este
silicagelul (SiO2). Acesta este considerat un adsorbant foarte polar, datorit gruprilor silanol
reziduale din matricea sa. De asemenea, Al2O3, ZrO2, sau TiO2 sunt menionate des ca faze
staionare polare n NP-LC. Fazele staionare polare legate sunt derivate din silicagel; acestea
conin grupri funcionale polare X, precum hidroxil, nitro, cian, sau amino, legate printrun lan hidrocarbonat scurt R:
CH3
Si O Si R X
CH3
Dintre acestea, aminopropil-silicagelul sau dihidroxipropil-silicagelul sunt cele mai
utilizate faze staionare legate n separrile LC prin acest mecanism.

CH3

CH3

Si O
Si
CH2 CH2 CH2 NH2

Si O
Si
CH2 CH CH2

CH3

CH3

OH OH

Dihidroxipropilsilicagel

Aminopropil-silicagel

Utiliznd tehnica derivatizrii amino-silicagelului cu acidul dodecamolibdofosforicsau realizat noi faze staionare polare, utilizate n separarea compuilor aromatici. Retenia
puternic a compuilor aromatici pe astfel de faze staionare polare se explic prin interacia
puternic a orbitalilor din nucleele aromatice cu orbitalii d ai Mo.[112]
O
Si H
O
+
Si

(CH2)
O 3-NH3

O
+
S
i

3-

(CH2) PMo12O
O 3-NH3 40

O
+
Si

(CH2)
O 3-NH3

Faz invers
In cromatografia de lichide n faz invers (RP-LC) fazele staionare sunt hidrofobe.
Acestea se pot obine prin modificarea chimic a silicagelului (sau chiar
aluminei) sau pot fi de natur polimeric. De aceea, aceste faze staionare se mai numesc i
faze chimic legate (bonded phases). Principiul de sintez a fazelor chimic legate se bazeaz
pe reacia gruprilor silanol reziduale din matricea silicagelului tratat termic cu un agent de
silanizare. In figura urmtoare, prin reacia de derivatizare, n una
din cele dou modaliti menionate, s-a introdus radicalul hidrocarbonat octadecil legat de
matricea silicagelului.[113,114]

In funcie de natura radicalului R grefat prin intermediul reactivului de derivatizare de

tip silanic se disting urmtoarele faze staionare (redate n ordinea descresctoare a
hidrofobicitii lor):
-C18H37 (octadecil-silicagel, sau C18);
-C8H17 (octil-, sau C8);
C6, C4, C2
-C6H5 (fenil-);
-C6H4-NO2 (nitrofenil);
-(CH2)3-CN(cianopropil).
CH3
CH3
SiOH + X Si (CH2)17CH3 Si O Si (CH2)17CH3
CH3
CH3
pKa = 57

Si (CH2)17CH3
O
SiOH
Si O Si (CH2)17CH3
O
X
O O
SiOH + X Si (CH2)17CH3 Si O Si (CH2)17CH3
O
X
O
SiOH
Si O Si (CH2)17CH3
Silicagel
Densitate:
8 1 mol/m2

Densitate:
4,5 mol/m2

Fig. 11.1. Modaliti de obinere a fazelor staionare chimic modificate din silicagel, utiliznd
reactivi de derivatizare mono-funcionali sau tri-funcionali, i unele caracteristici ale
suprafeei silicagelului nainte i dup derivatizare.

Cu toate acestea, n materialul rezultat dup reacia de silanizare o parte nsemnat a

gruprilor silanol rmn intacte. Prezena acestora n compoziia fazei staionare poate
influena mecanismul de separare, datorit interaciunilor dipol-dipol sau

prin legturi de hidrogen cu grupri similare din moleculele de analit. Derivatizarea complet
a acestora conduce la faze staionare complet inertizate (cunoscute n literatura de specialitate
ca faze staionare de tip end-capped) i se poate efectua prin utilizare unui reactiv de
derivatizare trifuncional, plus aplicarea n final a unei silanizri cu trimetilclorsilan, care
datorit volumului su mai mic poate accesa restul de grupri silanol, ecranate steric de
gruprile chimic legate deja introduse anterior.
Fazele staionare chimic modificate de tip monolitic, coninnd radicali hidrocarbonai
R, se obin prin procese sol-gel. Aceste materiale au un aspect ceramic, caracterizate de o
porozitate nalt, iar radicalii R sunt orientai n afara matricei solide. Prepararea unor astfel
de materiale de tip ceramic pornete de la reactivul de baz
tetrametoxisilan, care prin hidroliz acid (n prezen de HCl) formeaz compui
intermediari cu legturi Si-OH, datorat reaciei:[115]
Si(OCH3)4 + n HOH Si(OCH3)4-n(OH)n + n CH3OH
In continuare au loc reacii de condensare ce conduc la formarea de legturi siloxanice, iar
structura devine tridimensional:
Si O Si + HOH
Si OH + HO Si

+
Si OCH HO Si
3

+ CH
Si O Si OH
3

Dac alturi de tetrametoxisilan se adaug ntr-un raport molar ales trimetoxialchilsilan;

structura tridimensional rezultat va conine radicali hidrocarbonai R legai de atomul de
siliciu. Ecuaia reaciei poate fi scris n mod simplificat astfel:
OCH3
x
CH3O S OCH3+ y

HOH
Si OCH3
(S O) (S O)y+ (4x + 3y)

CH3O

OCH

i
OCH

i
xO

CH3OH

O
3

La nclzire, molecule de ap i metanol sunt eliminate din porii materialului format. Acesta
poate lua forma unei bare care apoi se introduce n coloana cromatografic.
Fazele staionare modificate din silicagel au o mare aplicabilitate n cromatografia de
lichide, dar prezint i unele inconveniente. Dou dintre inconvenientele cele mai serioase ale
acestor faze staionare sunt:
-domeniul de pH al componentei apoase utilizate este relativ restrns (2-8); la pH-uri sub
2 are loc hidroliza gruprilor O-Si(CH3)2-R, iar la pH-uri mai mari de 8 are loc dizolvarea
silicagelului;
-acestea nu pot fi utilizate n separri cromatografice pentru concentraii ale componentei
apoase n faza mobil apropiate de 100%. In acest caz lanurile hidrocarbonate legate de
structura silicagelului colapseaz, ele neputnd a reveni la conformaia iniial dup utilizarea
de faze mobile total sau aproape total apoase (mai mari de 98%).
Colapsarea lanurilor hidrocarbonate este similar formrii micelelor, lanurile
hidrocarbonate avnd tendina de a micora suprafaa de contact cu mediul apos. In Fig. 11.2
sunt redate tendinele unei suprafee de silicagel chimic modificat cu lanuri
hidrocarbonate, n prezena unei faze mobile coninnd un procent semnificativ de
modificator organic, comparativ cu o faz mobil cu un coninut apropiat de 100% ap.

Mediu polar (solvent organic / ap)

CH3
O Si
CH3
Lanuri hidrocarbonate de tip C18

Mediu foarte polar

(100% ap)
O

CH3
Si
CH3
CH3

CH3
O Si
CH3
CH3
O Si
CH3

Si
CH3
CH3
Si
CH3

Conformaii ale lanurilor C18 n prezena unui mediu ap + modificator (solvent) organic
(partea stng) i n prezena unui mediu total apos (partea dreapt).
Acest ultim inconvenient s-a putut rezolva prin realizarea de faze staionare chimic
modificate, coninnd grupri polare intercalate ntre lanul hidrocarbonat i atomul de siliciu.
O astfel de structur este mai flexibil la faze mobile total sau aproape total apoase. Sinteza
lor presupune dou etape, una de introducere a gruprii polare, urmat de introducerea
radicalului hidrofob R. Dou dintre posibilitile aplicate n obinerea fazelor staionare
chimic legate cu grupri polare intercalate sunt prezentate n
continuare. Calea de sintez a fazelor staionare legate, cu grupare polar intercalat de tip
amidic este urmtoarea:[116]
CH3
OH

O Si
CH3

CH3
OH + CH3CH2O Si
OH
CH3

NH2

NH2

OH CH3
O Si

OH

NH2

OH CH3

(silicagel)
CH3
O Si
O CH3
H

Grupa
amidica
NH CO R
O
+RC
Cl

CH3
O Si

NH CO R

OH CH3
Procedeu de derivatizare a silicagelului pentru obinerea fazelor staionare chimic legate cu
grupare polar amidic intercalat.

Calea de sintez a fazelor staionare legate, cu grupare polar intercalat de tip

carbamic, este redat mai jos:[116]
CH3
OH

Si
O
O

OH

O
R
O N
H

CH3

CH3

OH
R
CH3

+ Cl Si
OH

O N- HCl
H

CH3
OH

O
Grupare
carbamica

Si

O NR
H

OH CH3

Procedeu de derivatizare a silicagelului pentru obinerea fazelor staionare chimic legate cu

grupare polar carbamic intercalat.
Introducerea gruprii polare influeneaz procesul de retenie cromatografic.
Gruparea polar poate interaciona cu grupri polare din moleculele de analit. In cazul
gruprilor polare intercalate de tip amidic sau carbamic, pot interveni interacii -ntre analit
i gruparea polar din faza staionar. Astfel, n exemplul redat n Fig. 11.5, ordinea de eluie
se poate modifica n cazul perechii de analii trans-stilben i dibenzil la eluia printr-o coloan
umplut cu faz staionar C18 cu grupare polar intercalat, comparativ cu una C18 clasic.
Spre deosebire de dibenzil, molecula detrans-stilben posed n plus o dubl legtur carboncarbon, care determin o interacie mai puternic cu legturile din gruprile polare ale fazei
staionare. In schimb, n cazul separrii pe o coloan clasic C18, ordinea de eluie este dat
de ordinea hidrofobicitii; trans-stilbenul este mai puin hidrofob dect dibenzilul, datorit
dublei legturi (vezi Tabelul 2.4), astfel c va elua primul din coloana cromatografic.
R detectorspuns

min
R detectorspuns

min
Fig. 11.5. Compararea separrii unui amestec de trans-stilben i dibenzil, pe o coloan cu faz
staionar C18 (sus) i faz staionar C18 cu grupare polar intercalat (jos).
Condiiile de separare identice pentru cele dou coloane: faza mobil compus din 70% CH3OH
i 30% H2O; debit 1 mL/min; 40C; detecie UV 254 nm.[117]

Mecanismul de separare LC n faz normal

Cromatografia de lichide n faz normal se aplic de obicei la separarea compuilor
organici foarte polari, cum sunt aminoacizii.
Cromatografia lichid-solid (LSC) este de obicei denumit ca o tehnic de separare n
faz normal, caracterizat de utilizarea unui adsorbant anorganic sau a unei faze staionare
chimic legate cu grupri funcionale polare, iar ca faz mobil neapoas unul sau mai muli
solveni organici apolari (n special hexanul) n amestec cu un solvent polar, pn la
realizarea unei valori optime a triei solventului din punct de vedere al polaritii. In cadrul
acestei separri, pe suprafaa fazei staionare se formeaz un strat de molecule adsorbite ale
fazei mobile, cu o compoziie ce depinde de alegerea fazei mobile, care de multe ori nu

reflect compoziia acesteia sau modificarea ei n timpul unui proces de separare n gradient
de solvent. Retenia unui solut este determinat de balana interaciunilor moleculei de solut
cu moleculele fazei mobile i a moleculelor adsorbite pe suprafaa fazei staionare. Pentru
acest proces s-au propus pn n prezent dou modele de retenie:[30] a) modelul
competiional dezvoltat de Snyder i Soczewinski; b) modelul interaciilor de solvent, propus
de Scott i Kucera.
In forma cea mai simplificat, modelul competiional presupune c suprafaa ntreag
a adsorbantului este acoperit de un monostrat de molecule ale fazei mobile. Retenia are loc
prin dislocuirea unui numr de molecule de faz mobil, adsorbite la nivelul centrilor activi ai
fazei staionare, echivalente ca volum cu molecula de solut. In urmtoarea etap are loc
dislocuirea moleculei de solut adsorbit de ctre molecule ale fazei mobile. O reprezentare
schematic a acestui model simplu de explicare a reteniei n NP-LC este redat n figura
urmtoare.
Analit
Modificator
polar

Reprezentarea schematic a modelului competiional de retenie n cromatografia de lichide

n faz normal.
Conform modelului competiional dat n Fig. 11.6, retenia se bazeaz pe urmtoarele
dou procese fizice care au loc la suprafaa fazei staionare:
Si-OH + nS Si-OH(S)n
Si-OH(S)n + A Si-OH(S)n-xA + xS
, n care Si-OH reprezint centrul de adsorbie de pe suprafaa adsorbantului (considerat ca
fiind gruparea silanol rezidual din structura silicagelului), la care se adsorb n molecule de
solvent polar S din faza mobil, iar molecula de analit A va dislocui x dintre moleculele de
solvent adsorbite.
Pentru ca analitul s elueze din coloana cromatografic este necesar ca acest proces s
fie reversibil. De aceea tria interaciei sale cu centrul activ nu trebuie s fie foarte puternic.
Dup cum se poate observa, modelul competiional neglijeaz orice interacie ntre molecula
de analit i moleculele fazei mobile. Predicia reteniei este redat de relaia simplificat:
k
1
log

=( )(11.1)
k 1
2
2
reprezint parametrul de trie al fazei mobile (putere elutropic), care semnific energia
liber de adsorbie a moleculelor de solut per unitate de suprafa de faz staionar, iar
parametrul este specific moleculei de solut (n dependen de volumul molar). In tabelul de

mai jos sunt redate valorile parametrului pentru cei mai importani solveni utilizai n
mecanismul de faz invers n HPLC.
Tabel 11.2. Valorile parametrului pentru solveni utilizai n NP-LC.[118]
pentru
Solvent
Silicagel

Alumina

n-hexan

0,01

0,01

1-clorbutan

0,20

0,26

cloroform

0,26

0,40

izopropileter

0,34

0,28

acetat de etil

0,38

0,58

tetrahidrofuran

0,44

0,57

acetonitril

0,50

0,65

Modelul bazat pe interacia moleculelor de solut, respectiv a modificatorului polar din

faza mobil, presupune formarea a dou straturi adsorbite, ca urmare a interaciilor dipoldipol. Atunci cnd concentraia modificatorului polar este mic, formarea celui de-al doilea
strat de molecule de modificator polar adsorbite, n interacie cu primul strat i cu centrul
activ, nu are loc, iar interacia moleculei de solut cu centrul activ devine mai puternic,
conducnd la timpi de retenie mari. Dimpotriv, atunci cnd concentraia modificatorului
polar crete, are loc formarea celui de-al doilea strat de molecule adsorbite, iar molecula de
solut va interaciona mult mai slab cu centrul activ, datorit ecranrii celor dou straturi
adsorbite. Ca urmare, timpul de retenie al solutului va fi de data aceasta mai scurt, fiind dat
de relaia simplificat:

1
=+Cmod ificator polar

Student(): Arsene Andreea

Grupa: I
Anul: I

Disciplina:Chimie

Universitatea Valahia din Targovisteste

Facultatea de Ingineria Mediului si StiintaAlimentelor

Specializarea: Ingineria Mediului