CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 1 / 2

Catedra Biochimie i Biochimie Clinic

Analizat i aprobat la edin a catedrei

din 29.08.2013, proces verbal nr.1
eful Catedrei Biochimie i Biochimie Clinic
conf. universitar, dr. hab. n medicin ,
O. Tagadiuc ____________________

Indica ia metodic nr. 1

Tema: Convorbire introductiv .
Importan a biochimiei pentru disciplina Farmacie.
Aminoacizii structura, clasificarea, rolul biomedical.
Reactiile de culoare ale aminoacizilor.
Experien a 1. Reac ia biuretic
Principiul metodei: Leg turile peptidice (-NH-CO-) ale proteinelor n mediu alcalin
reac ioneaz cu CuSO4 formnd compu i complec i colora i n ro u-violet.
Mod de lucru: La 5 pic turi de ovalbumin se adaug 5 pic turi solu ie de NaOH 10% i 2
pic turi solu ie de CuSO4 1%. Eprubeta se agit . Apare culoarea violet .
Rezultatul ob inut: ______________________________________________________________
_______________________________________________________________
Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________

Experien a 2. Reac ia cu ninhidrin

Principiul metodei: Ninhidrina reac ionez cu grup rile alfa-amino ale proteinelor i
aminoacizilor cu formarea unui compus colorat n albastru-violet.
Mod de lucru: La 5 pic turi de ovalbumin se adaug 5 pic turi solu ie de ninhidrin 0,5%.
Con inutul eprubetei se fierbe 1-2 minute. Apare o culoare roz-violet , care trece apoi n albastr .
Rezultatul ob inut: ______________________________________________________________
_______________________________________________________________
Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________

Experien a 3. Reac ia xantoproteic (Mulder)

Principiul metodei: Aminoacizii aromatici la fierbere cu HNO3 concentrat se supun nitr rii.
Ca rezultat solu ia cap o culoare galben care trece n oranj la ad ugarea bazei.
Mod de lucru: La 5 pic turi de ovalbumin se adaug 3 pic turi de HNO3 concentrat. n urma
fierberii con inutul eprubetei se coloreaz n galben. Dac dup r cire n eprubet ad ug m 10-15
pic turi solu ie de NaOH 20%, culoarea solu iei devine oranj ca rezultat al ob inerii s rii de sodiu a
dinitrotirozinei.
Rezultatul ob inut: ______________________________________________________________
_______________________________________________________________
Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 2 / 2

Experien a 4. Identificarea aminoacizilor ce con in sulf (reac ia Fol)

Principiul metodei: La degradarea proteinelor i peptidelor sub ac iunea hidroxidului de
sodiu din grup rile sulfhidril se elibereaz sulful sub form de sulfur de sodiu, care reac ionnd cu
plumbitul de sodiu, formeaz precipitatul de sulfur de plumb de culoare neagr sau brun .
Mod de lucru: La 5 pic turi de ovalbumin se adaug 5 pic turi de reactiv Fol. Amestecul se
pune la fiert. Dup 1-2 minute de fierbere apare un precipitat negru sau brun de sulfur de plumb
(PbS).
Rezultatul ob inut: ______________________________________________________________
_______________________________________________________________
Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________

ntreb ri pentru autopreg tire:

1. Obiectul biochimiei i importan a studiului biochimic pentru disciplina de
farmacie.
2. Rolul biologic al proteinelor.
3. Structura i clasificarea aminoacizilor.
4. Teoria polipeptidic a structurii proteinelor. Aminoacizii N i C terminali.
5. Antibioticele de natur proteic .

Catedra Biochimie i Biochimie Clinic

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

INDICA II METODICE
FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 1 / 5

Indica ia metodic nr. 2

Tema: Structura proteinelor. Clasificarea proteinelor.
Caracteristica general a proteinelor simple i conjugate.
Experien a 1. Identificarea aminoacizilor prin metoda cromatografiei pe hrtie.
Principiul metodei: Metoda se bazeaz pe diferen a coeficientului de reparti ie a
aminoacizilor n ap i solvent organic (butanol), care nu se amestec cu apa. Viteza migr rii
aminoacizilor pe hrtie este direct propor ional cu gradul de dizolvare n butanol.
Mod de lucru: Pe linia de start a benzii de hrtie cromatografic (aproximativ la 1 cm) cu
ajutorul capilarului se aplic o pic tur (nu mai mare de 5 mm) de amestec de aminoacizi. Dup
uscare la aer (fixare) banda se ntroduce ntr-un vas nchis cu amestec butanol-ap , astfel nct
lichidul s ajung numai pn la linia de start (5 mm). Cu ajutorul dopului banda se fixeaz vertical
s ating pere ii vasului. Dup 1,5 ore de expunere la temperatura camerei, banda se scoate din
vas, se noteaz cu creionul simplu hotarul solventului i se usuc n termostat (10 minute la
temperatura 70-100 C). Apoi banda se trece prin solu ia alcoolic de ninhidrin 0,2% i din nou se
usuc n termostat la temperatura de 100 C. Pe cromatogram apar unele pete galbene sau violete
localizate la diferite distan e de linia de start.
Cu ajutorul riglei se m soar urm toarele distan e:
1. de la linia de start pn la centrul fiec rei pete (a);
2. de la linia de start pn la hotarul solventului (b).
Raportul dintre distan ele parcurse de aminoacid (a) i de solvent (b) poart denumirea de
coeficient de reparti ie (R) specific pentru fiecare aminoacid n condi ii standard i se calculeaz
astfel: Rf=a/b. Dup tabelul cu Rf standard identific m aminoacidul.
Rezultat: ________________________________________________________________
Concluzii: ________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
Importan a clinico-diagnostic . Metoda permite determinarea att calitativ , ct i
cantitativ a aminoacizilor n obiectele biologice care are importan n studierea metabolismului
proteic. n diferite afec iuni ale ficatului, rinichilor i altor organe se constat modificarea
con inutului aminoacizilor n serul sanguin.

Valorile Rf standard
Aminoacidul
Rf
Aminoacidul
acidul aspartic
0.24 izoleucina
acidul glutamic
0.30 leucina
alanina
0.38 lizina
arginina
0.20 metionina
asparagina
0.50 prolina
cysteina
0.40 serina
fenilalanina
0.68 treonina
glutamina
0.13 triptofan
glicina
0.26 tirozina
histidina
0.11 valina

Rf
0.72
0.73
0.14
0.55
0.43
0.27
0.35
0.66
0.45
0.61

www.biochimie.usmf.md

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

INDICA II METODICE
FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 2 / 5

Catedra Biochimie i Biochimie Clinic

ntreb ri pentru autopreg tire:

1. Nivelurile de organizare a proteinelor: structura primar , secundar , ter iar i cuaternar ;
leg turile specifice ale acestor structuri. No iune de domen structural i func ional.
2. Principiul metodelor de descifrare a structurii primare, secundare, ter iare i cuaternare a
moleculei proteice (Sanger, Edman, enzimatice, peptidelor suprapuse, spectroscopia n
infraro u, metoda rentgenostructural , rezonan a magnetic nuclear ).
3. Clasificarea contemporan a proteinelor.
4. Proteinele simple, propriet ile lor i particularit ile structurale.
5. Colagenul: componen a aminoacidic

i structural .

6. Proteinele fixatoare de calciu.

7.

Proteinele conjugate: nucleoproteinele, fosfoproteinele, lipoproteinele i altele. Caracteristica

general .

Probleme de situa ie:

1. Care din aminoacizi particip la formarea leg turilor covalente n autostructurarea gradului trei
de organizare a moleculei proteice (structurii ter iare)?
2. Colagenul, calmodulina, factorii plasmatici ai coagul rii II, VII, IX i X sunt proteine fixatoare de
calciu. Ce particularitate structural comun posed aceste proteine. Care vitamin asigur
realizarea acestei propriet i? Scrie i reac ia respectiv . Care sunt sursele vitaminei? Rolul acestor
proteine n organism.
3. Ce modificare a structurii hemoglobinei este caracteristic pentru anemia cu celule falciforme?
Care sunt cauzele acestei modific ri? Ce repercusiuni are modificarea structurii primare asupra
nivelurilor superioare structurale, func iei proteinei i st rii eritrocitelor?
4. Diviza i urm toarele proteine n clase i subclase: albumina, mioglobina, ceruloplasmina, histona
H1, folitropina, transferina, succinat dehidrogenaza. Pe ce proprietate se bazeaz clasificarea lor?

Teste:
1. Pentru identificarea aminoacidului N-terminal peptidic sunt utiliza i:
A. hidrazina;
B. fluordinitrobenzenul;

C. fenilizotiocianatul;
D. tripsina, pepsina;

E. chimotripsina.

2. Pentru identificarea aminoacidului C-terminal peptidic sunt utiliza i:

A. ureia;
B. carboxipeptidazele A i B;
C. guanidinhidroclorida;
D. acidul performic;
E. p-dimetilaminobenzaldehida.
3. Referitor la structura primar a proteinelor sunt corecte afirma iile:
A. prezint o secven a de aminoacizi uni i prin leg turi peptidice;
B. este determinat genetic;
C. leg turile ce o stabilizeaz sunt leg turile chimice slabe, necovalente;
D. la hidroliza e afectat ;
F. este fundamentul altor nivele de organizare a moleculelor proteice

www.biochimie.usmf.md

Catedra Biochimie i Biochimie Clinic

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

INDICA II METODICE
FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 3 / 5

4. Afirma iile corecte n leg tura cu structura primar a proteinelor:

A. fiecare aminoacid se poate ncorpora n lan numai o singur dat ;
B. este consolidat de leg turile disulfidice;
C. este o nsu ire structural a tuturor proteinelor;
D. se distruge prin hidroliza acid sau enzimatic ;
E. este afectat de agen i denaturan i.
5. Referitor la -elice sunt corecte afirma iile:
A. predomin n moleculele proteinelor globulare;
B. predomin n moleculele proteinelor fibrilare;
C. posed simetrie elicoidal ;
D. leg tura de hidrogen se formeaz ntre -CO i -NH din lan urile polipeptidice diferite;
E. leg tura de hidrogen se formeaz ntre -CO i -NH din acela lan polipeptidic
6. Afirma iile corecte referitoare la structura ter iar a proteinelor:
A. e stabilizat numai de leg turi covalente;
B. apare gra ie interac iunii sterice a AA situa i n apropiere;
C. apare spontan gra ie for ei motrice a interac . radicalilor AA cu H2O;
D. este o structur absolut rigid ;
E. include n sine numai regiuni -elicoloidale.
7. Structura cuaternar :
A. se formeaz prin leg.necovalente dintre suprafe ele de contact ale protomenelor;
B. posed rigiditate i este stabil ;
C. se realizeaz prin leg turi covalente;
D. este o nsu ire structural a mioglobinei;
E. nu se distruge prin denaturare.

Indica ia metodic nr. 3

Tema: Propriet ile fizico-chimice ale proteinelor.
Metodele de separare i purificare ale proteinelor.
Experien a 1. Dializa proteinelor
Principiul metodei: Metoda se bazeaz pe separarea macromoleculelor, solu iilor coloidale
de substan ele micromoleculare, s ruri cu ajutorul membranelor semipermiabile.
Mod de lucru:
1. ntr-un balon se toarn 20 ml solu ie de ovalbumin la care se adaug 20 pic turi de solu ie
saturat de sulfat de amoniu.
2. Dintr-o foi de celofan umezit n prealabil cu ap distilat se confec ioneaz un s cule n care
se toarn con inutul balonului. S cule ul se ntroduce ntr-un pahar cu ap distilat i se cufund
astfel ca nivelul de lichid n s cule s fie mai jos de nivelul apei n pahar.
3. Peste o or de la nceputul dializei n dou eprubete se iau cte 1 ml de lichid din pahar i se
efectueaz urm toarele reac ii:
a) ntr-o eprubet identific m prezen a ionului de sulfat ad ugnd 3-4 pic turi solu ie de
BaCl2 5% (dac reac ia este pozitiv se observ apari ia precipitatului de BaSO4);
b) n a doua eprubet se controleaz prezen a proteinei prin reac ia biuretic (ad ug m 5
pic turi de NaOH 10% i 2 pic turi de CuSO4 1%).

www.biochimie.usmf.md

Catedra Biochimie i Biochimie Clinic

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

INDICA II METODICE
FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 4 / 5

4. Solu ia din s cule se toarn ntr-o eprubet i se verific con inutul ei prin rec ia biuretic . Ne
convingem c prin membranele semipermiabile trec substan e micromoleculare (NH4)2SO4 i nu
pot trece proteinele. Dovad servesc reac ia pozitiv cu BaCl2 n prima eprubet i reac ia
negativ biuretic .
Rezultat: ________________________________________________________________

Concluzii: ________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________

ntreb ri pentru autopreg tire:

1. Propriet ile fizico-chimice ale proteinelor: masa molecular , solubilitatea, propriet ile
amfotere i optice.
2. Propriet ile coloidale ale proteinelor: factorii de stabilizare. Starea solu iilor coloidale: sol, gel,
xerogel. Importan a st rii de xerogel pentru prepararea i p strarea preparatelor
medicamentoase.
3. Punctul i starea izoelectric , sarcina electric a proteinelor.
4. Salifierea, denaturarea i hidroliza proteinelor. Factorii care influen eaz aceste procese.
5. Metodele de separare i purificare a proteinelor: salifierea, electroforeza, gel-filtrarea,
cromatografia de afinitate i dializa.

Probleme de situa ie:

1. ntr-o solu ie sunt dizolvate histone i albumine. Alege i solu ia tampon care trebuie utilizat pentru
precipitarea fiec rui tip de protein : sol. 1 pH=4,0; sol. 2 pH=7,0; sol. 3 pH=11,0. Care este
mecanismul acestei metode de separare a proteinelor individuale din amestecuri?
2. O solu ie ce con ine un ameste de albumine i globuline este tratat cu solu ie de sulfat de
amoniu ([NH4]2SO4) pn la semisaturare, iar ulterior pn la saturare. Ce efecte va avea aceast
tratare asupra solubilit ii albuminelor i globulinelor? Care este mecanismul de ac iune a
(NH4)2SO4 asupra solu iei proteice?
3. Spre care electrod vor migra albuminele i histonele la pH=7,0, dac linia de start este la mijlocul
distan ei dintre anod i catod? Explica i.
4. Ce metod din cele enumerate mai jos poate fi utilizat pentru purificarea lichidelor biologice
(ser, plasm , limf ) de substan e nocive micromoleculare: denaturarea, hidroliza, electroforeza,
dializa, cromatografia de afinitate? Descrie i principiul metodei i utilitatea ei clinic .
5. Pentru fabricarea medicamentelor enzimatice este necesar de a separa i purifica din surse
biologice vegetale sau animale anumite enzime. Care din metodele enumerate mai jos este cea
mai rapid i eficient metod de separare i purificare a enzimelor: denaturarea, hidroliza,
electroforeza, dializa, cromatografia de afinitate? Descrie i principiul metodei.
6. Ce numim xerogel? Exemple de xerogel.
7. Principiul metodei de secare liofil a solu iilor coloidale; utilizarea acestei metode n industria
medical . Prioritatea acestei metode la prepararea medicamentelor de origine proteic .

www.biochimie.usmf.md

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

INDICA II METODICE
FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 5 / 5

Catedra Biochimie i Biochimie Clinic

Teste:
A.
B.
C.
D.
E.
A.
B.
C.
D.
E.
A.
B.
C.
D.
E.
A.
B.
C.
D.

E.

1. Sarcina net a proteinei depinde de:

componen a aminoacizilor;
pH-ul solu iei;
grup rile COOH i NH2 ale radicalilor de aminoacizi;
radicalii hidrofobi;
grup rile NH2 i COOH de la capetele terminale.
2. Stabilitatea proteinei n solu ie e determinat de:
teac apoas (TA) ca consecin a hidrat rii grupelor func ionale;
TA - rezultatul fixarii covalente a apei;
sarcina electric , dependent de aminoacizi i pH a solu iei;
sarcina electric , dependent de R - hidrofobi ai AA;
dimensiunile moleculelor proteice.
3. pH-izoelectric al tetrapeptidei Glu - Asp - Cys - Ser se afl n zona pH-lui:
4.0 4.5;
5.5 - 6.5;
6,5 - 7.5;
7.5 - 8.5;
8.5 - 9.5.
4. Care tetrapeptide la pH-fiziologic vor migra spre anod:
Ala - Glu - Asp Ser;
Gly - Arg - Lyz Pro;
Val - Leu - Ile Met;
Pro - Asn - Gln Thr;
Phe - Cys - Arg His.

www.biochimie.usmf.md

Catedra Biochimie i Biochimie Clinic

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 1 / 6

Indica ia metodic nr. 4

Tema: Natura chimic i structura enzimelor.
Vitaminele ca coenzime. Mecanismul de ac iune a enzimelor.
Experien a 1. Identificarea vitaminelor B1, B2, B6, PP.
Identificarea vitaminei B1 (tiaminei).
Principiul: Tiamina n mediu alcalin formeaz cu diazoreactivul un compus complex oranj.
Mod de lucru: La 5 pic turi de diazoreactiv (care const din volume egale de solu ie de acid
sulfanilic 1% i solu ie de nitrit de sodiu 5%), se adaug 1-2 pic turi solu ie de tiamin 5%.
nclinnd eprubeta se picur atent pe pere ii ei 5-7 pic turi de carbonat de sodiu (Na2CO3) 10%. La
hotarul dintre lichide apare un inel colorat n oranj.
Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
Identificarea vitaminei B2 (riboflavinei)
Principiul metodei: Vitamina B2 posed proprietatea de a se reduce. n form oxidat vitamina are
culoare galben , la nceputul reac iei de reducere are culoare roz , care n cele din urm se
decoloreaz , deoarece forma redus a vitaminei este incolor .
Mod de lucru: ntr-o eprubet se iau 10 pic turi de solu ie de vitamin B2, se adaug 5 pic turi de
acid clorhidric concentrat i o granul de zinc metalic. Se observ degajarea bulelor de hidrogen,
lichidul galben se coloreaz treptat n roz, dup care se decoloreaz .
Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
Identificarea vitaminei PP (B5)
Principiul metodei: La interac iunea vitaminei PP cu acetatul de cupru se formeaz un precipitat
albastru al s rii de cupru a acidului nicotinic.
Mod de lucru: ntr-o eprubet se iau 20 pic turi de solu ie de vitamin PP, se agit i se nc lze te
pn la fierbere. Se agit solu ia de acetat de cupru 5% i se adaug 20 pic turi la solu ia fierbinte
de vitamin PP. Eprubeta se nc lze te din nou pn la fierbere i dup aceea se r ce te ntr-un jet
de ap rece. La fundul eprubetei se depune un precipitat de culoare albastr de sare de cupru a
acidului nicotinic.
Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________

Identificarea vitaminei B6 (piridoxinei)

Principiul metodei: Vitamina B6 reac ionnd cu clorura de fier formeaz o sare complex de tipul
fenolatului de fier de culoare ro ie.
Mod de lucru: La 5 pic turi solu ie de vitamin B6 1% se adaug un volum egal solu ie de clorur
de fier 1%. Amestecul se agit . Apare o colora ie ro ie.
Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________

www.biochimie.usmf.md

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 2 / 6

ntreb ri pentru autopreg tire:

1. No iuni despre enzime, natura chimic i rolul biologic al enzimelor.
2. Dovezile naturii proteice a enzimelor. Structura enzimelor. Proenzimele
(zimogenii).
3. Centrul activ i centrul alosteric al enzimelor.
4. Izoenzimele i rolul lor.
5. Cofactorii enzimelor. Vitaminele n calitate de coenzime.
a) Structura chimic i rolul biologic al vitaminelor B1, B2, B6, PP i a biotinei.
b) Vitaminele ca preparate farmaceutice.
6. Mecanismul de ac iune a enzimelor. Energia de activare a reac iilor
enzimatice. Ipoteza broasca-cheie (Fisher) i coinciden a for at (Koshland).
7. Nomenclatura i clasificarea enzimelor. Clasele i subclasele. Codificarea enzimelor.
1.
2.
3.

4.
5.
6.

Probleme de situa ie:

E posibil de separat din enzime centrele active, p strndu-le integritatea structural
i
func ional ? Explica i.
Toate enzimele posed centre alosterice? Ce denumire mai poart acestea enzime? Care este
mecanismul lor de reglare?
Aceste enzime posed structur i propriet i fizico-chimice diferite, dar catalizeaz aceea i
reac ie. Frecvent ele sunt proteine oligomere formate din monomeri diferi i. Aceste enzime sunt:
alosterice, izoenzime, proenzime sau zimogeni? Da i exemple concrete de asemenea enzime i
explica i care este valoarea lor clinico-diagnostic .
Explica i de ce enzimele proteolitice gastrice i pancreatice se produc i secret n form de
proenzime neactive? Care este mecanismul activ rii lor?
Determina i clasa, subclasa i subsubclasa urm toarelor enzime: a) amilazei; b) pepsinei; c)
lipazei.
La ce clas de enzime se refer fermentul care catalizeaz reac ia:

Ce vitamin reprezint fragmentul activ al coenzimei?

Care este mecanismul ac iunii coenzimei?
Care sunt consecin ele metabolice i fiziologice ale caren ei acestei vitamine?
7. Care este rolul vitaminelor n metabolism i activitatea vital a organismului? Ce modific ri
metabolice ilustreaz st rile de hipo- i avitaminoz ?
Teste:
1. Enzimele, afirma ii corecte:
A. prezint catalizatori anorganici;
B. se pot forma numai n celulele vii;
C. exist numai n forma activ ;

D. exist i n forma neactiv n organism;

E. catalizeaz numai reac iile de sintez .

2. Propriet ile generale comune ale enzimelor i catalizatorilor anorganici:

A. catalizeaz reac iile n condi ii blnde;
D. activitatea lor nu se regleaz ;
B. catalizeaz reac iile n ambele direc ii;
E. accelereaz reac iile f formarea unor
C. nu se consum n decursul reac iei;
produse auxiliare.
www.biochimie.usmf.md

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 3 / 6

3. Enzimele se deosebesc de catalizatorii anorganici prin:

A. intervin n reac ii posibile din punct de vedere termodinamic;
B. posed specificitate;
C. au eficien catalitic mult mai mare;
D. catalizeaz reac iile n condi ii blnde;
E. scad energia de activare a procesului chimic.
4. Enzimele, natura chimic :
A. prezint numai proteine simple;
B. sunt glicolipide;
C. prezint compu i macromoleculari;

D. sunt numai nucleoproteide;

E. sunt heteropolizaharide.

5. Referitor la natura chimic a enzimelor afirma iile corecte:

D. sunt scindate de proteaze;
A. sunt compu i termostabili;
E. n ap nu formeaz solu ii micelare.
B. n ap formeaz solu ie coloidale;
C. sunt compu i micromoleculari;
6. Enzimele conjugate, afirma iile corecte:
A. posed specificitate, determinat de cofactor;
B. apoenzima determin specificitatea;
C. cofactorul e componenta termostabil ;
D. efectul enzimatic e dependent de ambele componente;
E. fermen ii prezint structur complicat .
7. Centrul activ al enzimelor reprezint :
A. linie frnt n molecula enzimei;
B. un plan n molecula;
C. un punct din structura ter iar ;
D. structur tridimensional ;
E. grupele func ionale apar in AA apropia i din secven a LPP.
8. Centrul alosteric, afirma iile corecte:
A. este locul fix rii substratului;
B. este caracteristic tuturor enzimelor;
C. este locul fix rii unor compu i cu structur asem toare substratului;
D. este centrul reglator al unor enzime;
E. este centrul reglator al tuturor enzimelor.
9. Referitor la mecanismul de ac iune al enzimelor sunt corecte afirma iile:
A. scad energia de activare a reac iei respective;
B. insert energie din exterior cu dep irea barierei energetice;
C. complexul ES e o structur rigid , stabil ;
D. nu dispunem de dovezi ce ar confirma existen a complexului ES;
E. formarea complexului ES nu modific propriet ile fizice ale enzimei.
10. Mecanismele activ rii enzimatice, afirma iile corecte:
A. la interac iunea S n CA se formeaz complexe stabile;
B. substratul nu se deformeaz n centru activ;
C. la interac iunea S i E se modific conforma ia numai a S;
D. la interac iunea S i E se modific conforma ia numai E;
E. la interac iunea S i E se modific conforma ia i a E i a S.

www.biochimie.usmf.md

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 4 / 6

Indica ia metodic nr. 5

Tema: Propriet ile generale ale enzimelor. Determinarea activit ii enzimatice.
Experien a 1. Determinarea activit ii -amilazei urinare (metoda Caraway).
Principiul metodei: -amilaza scindeaz amidonul cu ob inerea produ ilor finali care nu se
coloreaz cu solu ia de iod. Activitatea amilazei se apreciaz dup mic orarea cantit ii de amidon
scindat.
Mod de lucru: n 2 eprubete de 10 ml calibrate (control i experien ) se iau cte 1 ml de substrat
care con ine 0,0004 g de amidon. Eprubeta de experien este ntrodus pentru 5 minute n baia de
ap la temperatura de 370C, dup care se adaug 0,02 ml de urin ; con inutul se agit i eprubeta se
introduce din nou n baia de ap la 370C exact 7,5 minute (calculul timpului se face din momentul
ad ug rii urinei). Ulterior n ambele eprubete se adaug cte 1 ml solu ie de iod; iar n eprubeta de
control suplimentar se adaug 0,02 ml de urin . Volumul reactivilor n ambele eprubete se
completeaz pn la 10 ml cu ap distilat . Imediat se determin extinc ia solu iilor din eprubeta de
control (Ec) i de experien (Eexp) fa a de apa distilat la fotocolorimetru (filtrul ro u, =630-690
nm) n cuve de 10 mm.
Calculul: n unit i SI activitatea amilazei se exprim n grame de amidon hidrolizat de cantitatea
de enzim care se con ine ntr-un litru de urin timp de o or de incubare la temperatura de 370C i
se calculeaz conform formulei:
Activitatea amilazei = [(Ec Eexp) / Ec] x 160 g/or L,
unde: Ec extinc ia probei de control, Eexp extin ia probei de experien .

Valorile normale ale activit ii amilazei din urin 20-160 g/or L.

Rezultatul ob inut:

______________________________________________________________

Concluzie: ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
1.
2.
3.
4.

5.
6.
7.
8.
9.

ntreb ri pentru autopreg tire:

Propriet ile generale ale enzimelor (termolabilitatea, specificitatea), ac iunea pH-ului asupra
activit ii enzimatice.
Cinetica reac iilor enzimatice (influen a concentra iei substratului i a enzimei, influen a
inhibitorului).
Activarea enzimelor (proteoliza par ial , activarea alosteric , autostructurarea cuaternar ,
modificarea covalent , cofactorii ca modulatori).
Mecanismele de inhibi ie (specific i nespecific , reversibil i ireversibil , alosteric i
competitiv , prin exces de substrat). Utilizarea mecanismului de inhibi ie competitiv n terapie
i toxicologia clinic .
Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice, compartimentalizarea). Reglarea
activit ii enzimatice n celula retroinhibi ia.
Enzimele organospecifice. Modificarea activit ii enzimatice n diferite afec iuni
(enzimodiagnosticul)
Utilizarea enzimelor n terapie. ntrebuin area enzimelor imobilizate n medicin .
Metodele de ob inere i purificare a enzimelor. Cromatografia de afinitate.
Unit ile de activitate a enzimelor.

www.biochimie.usmf.md

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 5 / 6

Probleme de situa ie:

1. Oxidazele L-aminoacizilor catalizeaz transformarea diferitor L-aminoacizi, dar nu pot oxida Daminoacizii. Ce tip de specificitate posed aceste enzime? Ce este caracteristic pentru acest tip de
specificitate? Ce alte enzime umane posed acest tip de specificitate?
2. Lactat dehidrogenaza catalizeaz reac ia:

Care ar putea fi principiul general al determin rii activit ii enzimei?

Ce unit i de m sur a activit ii enzimelor cunoa te i? Ce relev ele?
3. Ce mecanism de ac iune posed sulfanilamidele, fluoruracilul i alopurinolul? De ce depinde
eficien a tratamentului cu aceste medicamente? Explica i.
4. n pancreas se sintetizeaz enzime care particip la procesul de digestie. Prin metoda de uscare
liofil i triturarea ulterioar se ob ine preparatul pancreatina. Cum vom proceda pentru identificarea
enzimelor care se con in n acest preparat?
Teste:
1. Activarea specific a enzimelor e posibil prin:
A. fierbere;
D. agitare;
B. denaturare;
E. modulatori alosterici.
C. proteoliza limitat ;
2. Inhibi ia specific enzimatic e posibil prin:
A. sc dere de temperatur ;
D. exces de substrat;
B. denaturare;
E. fierbere.
C. salifiere;
3. Inhibi ia competitiv , afirma ii corecte:
A. prezint o inhibi ie reversibil ;
B. prezint o inhibi ie ireversibil ;
C. inhibitorul se aseam
dup structur cu S;
D. inhibitorul difer mult dup structur de substrat;
E. e posibil simultan fixarea substratului i a inhibitorul.
4. Inhibi ia necompetitiv , afirma iile corecte:
A. inhibitorul se fixeaz n centrul activ catalitic;
B. inhibitorul se fixeaz n centre alosterice;
C. inhibitorul i substratul sunt lega i sumultan cu E;
D. inhibitia se nl tura prin exces de substrat;
E. se formeaz un complex triplu: ESI.

www.biochimie.usmf.md

CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC

FACULTATEA FARMACIE, ANUL III

RED.:

01

DATA:

24.01.11

Pag. 6 / 6

5. Inhibi ia alosteric , afirma iile corecte:

A. apare la enzimele oligomere;
B. inhibi ia e determinat la interac iunea subunit ilor;
C. interac iunea protomerilor modific conforma ia enzimei;
D. enzimele respective preponderent au structur ter iar ;
E. nu prezint mecanism de reglare al activit ii enzimatice.
6. Referitor la succinatdehidrogenaz (SDH) i reglarea activit ii ei sunt corecte afirma iile:
A. face parte din clasa oxidoreductazelor;
B. face parte din clasa transferazelor;
C. acid malic provoac o inhibi ie ireversibil ;
D. n inhibi ie se modific structura primar a S;
E. inhibi ia nu depinde de concentra ia acidului malonic.
7. Referitor la pepsin i reglarea activit ii ei sunt corecte afirma iile:
A. face parte din clasa hidrolazelor;
B. face parte din clasa liazelor;
C. apare la proteoliza limitat a pepsinogenului;
D. proteoliza par ial este reversibil ;
E. proteoliza par ial formeaz centrul activ.
8. Referitor la amilaz i reglarea activit ii ei sunt corecte afirma iile:
A. face parte din clasa hidrolazelor;
D. NaCl provoac denaturarea enzimei;
B. face parte din clasa liazelor;
E. la activare se modific structura primar a E.
C. procesul activant e ireversibil;
9. Efectul sulfanilamidelor asupra enzimelor:
A. provoac o inhibi ie competitiv ;
B. inhib ireversibil enzima bacterian ;
C. modific structura primar a enzimei;
D. inhib enzima prin produsele reac iei;
E. provoac o inhibi ie alosteric .
10. Katalul reprezint :
A. [S] necesar pentru transformarea 1 mol de S n 1 min la 250C;
B. [S] necesar pentru transformarea 1 mmol de S n 1 min la 250C;
C. [E] necesar pentru transformarea 1 mol de substrat n 1 sec la 250C;
D. num rul mol de S ce se transform n 1 min cu ajutorul 1 mol de E;
E. [E] ce trans. 1 mol de S n 1 min la 250C raportat la 1 mg protein .

Indica ia metodic nr. 6

Totalizare la capitolul
Chimia proteinelor i enzimelor

www.biochimie.usmf.md