2.3.

ORGANIZAREA GENOMULUI LA EUCARIOTE

Cromozomii sunt structuri permanente n nucleul celulei i constituie materialul genetic de baz.
n cromozomi sunt localizate genele. La microscopul fotonic cromozomii devin vizibili numai n
timpul diviziunii celulare. Cu ajutorul unor tehnici perfecionate de investigaie s-a stabilit c ei
sunt prezeni tot timpul n celul, dar sufer unele schimbri n diferitele etape care se succed n
viaa celulei. Numrul i structura lor genetic r mn ns constante de-a lungul generaiilor.
2.3.1. Morfologia cromozomilor
Aspectul cromozomilor poate fi bine studiat n cursul diviziunii celulare mitotice, n metafaz, cnd
se coloreaz foarte intens. Ei sunt constituii din perechi identice, dar diferii ca mrime i form
de la pereche la pereche. La speciile dioice exist o pereche de cromozomi, care difer
morfologic de la un sex la altul, denumii heterozomi sau cromozomi ai sexului, avnd un rol
special n determinarea sexului. Celelalte perechi de cromozomi, care alctuiesc majoritatea
cromozomilor poart numele de autozomi. Segmentul cromozomic situat terminal fa de
constricia secundar a cptat denumirea de satelit. Satelitul servete la identificarea
cromozomilor cu organizator nucleolar. Deci, numrul nucleolilor dintr-un nucleu este egal cu
numrul cromozomilor cu satelit. Fiecare cromozom este format din dou cromatide unite printro formaie cu diametrul mai mic dect al cromozomului numit centromer. Deoarece n zona
centromerului cromozomul are diametrul mai mic, acestei zone i s-a dat denumirea de constricie
primar (spre deosebire de constricia secundar din regiunea organizatorului nucleolar).
Centromerul are un rol important n timpul diviziunii celulare deoarece servete la ataarea
cromozomilor de fibrele fusului nuclear, fiind considerat motorul neurochimic ce determin
deplasarea cromozomilor n mixoplasma celulei n diviziune, iar n meioz determin sinapsa
cromozomilor omologi i constituie locul ce marcheaz separarea cromatidelor la sfritul
metafazei i nceputul anafazei. Structura centromerului cuprinde trei zone: kinetocorul, situat pe
faa extern a fiecrei cromatide, o zon central cu o grosime mai mare i o zon intern
responsabil de interaciunea dintre cromatide n subfaza G2, profaz i metafaz. Kinetocorul
este un complex proteic sintetizat pe baza informaiei genetice a ADN din regiunea
centromerului. Poziia centromerului n cromozom determin formarea a dou brae egale sau
inegale, prin urmare existena mai multor tipuri morfologice de cromozomi: - metacentrici,
centromerul este plasat la jumtatea distanei dintre cele dou capete, braele fiind egale; submetacentrici, centromerul este localizat submedian, braele fiind inegale; - acrocentrici,
centromerul este localizat subterminal, braele fiind accentuat inegale (figura 2.3.). Cromozomii
telocentrici, cu centromerul situat strict terminal, nefiind stabili, s-a renunat la aceast grup
morfologic (Swanson i colab., 1981, citai de Crlan M.,1996).
Fig. 2.3. Tipuri de cromozomi: a-metacentric; b-submetacentric; c-acrocentric; d-cromozomi de
Lilium; P-constricie primar; S-constricie secundar, zona organizatorului nucleolar
Extremitile cromatidelor sunt delimitate de formaiuni denumite telomere. Telomerele
reprezint zone n care cromatina este puternic condensat, asigurnd stabilitatea i
individualitatea cromozomilor pe parcursul diviziunii celulare. Telomerele mpiedic fuzionarea
cromozomilor cap-la-cap n metafaz i anafaz.
Fragmentele de cromozom fr centromer sunt capabile de a se replica, dar incapabile de a se
orienta n mitoz spre polii celulelor. Unele cercetri efectuate la coccidii i scorpioni, dar i la
plante (Luzula) au pus n eviden prezena unor centromeri dispersai pe toat lungimea
cromozomului (centromeri difuzi). Aceti cromozomi policentromerici, n timpul diviziunii
mitotice se pot fixa prin oricare segment, de tubulii fusului de diviziune. Centromerul este o

formaiune capabil de autoreplicare. Diviziunea cromozomului este precedat de diviziunea

centromerului, care implic replicarea ADN centromeric, ce acioneaz ca un locus al formrii
kinetocorului. El se coloreaz foarte puin i adesea este acromatic i Feulgen negativ. Forma
cromozomilor. Este caracteristic fiecrei specii, dar poate varia, n funcie de specializarea
celulei n esut, de starea fiziologic a celulei i de influena diferiilor factori externi. O celul
somatic de la Drosophila melanogaster n cursul diviziunii mitotice (figura 2.4.) are patru
perechi de cromozomi i anume: dou perechi de forma literei V, o pereche de form sferic i o
pereche heteromorf: la masculi, alctuit dintr-un cromozom sub form de bastona i unul sub
form de crlig, n timp ce la femel ambii cromozomi ai perechii sunt identici. Aceti cromozomi
au rol n determinarea sexului.
Fig. 2.4. Cromozomii somatici la Drosophila melanogaster ()
n celulele somatice cromozomii sunt perechi. Cromozomii unei perechi au aceeai form,
mrime i aceleai gene alele i se numesc cromozomi omologi. n fiecare pereche de
cromozomi omologi, unul este de provenien matern, iar cellalt, patern, caracteristic
determinat de faptul c celula-ou (zigotul), rezultat al fecundrii, cumuleaz setul haploid de
cromozomi ai mamei i ai tatlui. n metafaz, cromozomii se prind de fibrele fusului de
diviziune la nivelul centromerului, lund forma de U, L, V, .a. Clivajul longitudinal ncepe
ntotdeauna n acelai loc. Toate acestea demonstreaz, n plus, individualitatea pronunat a
cromozomilor. Mrimea cromozomilor. Variaz n funcie de specie i, ntr-o msur foarte mic,
de unele condiii de mediu. Ca lungime, pot atinge valori cuprinse ntre 0,1-30 , iar ca grosime
valori de 0,1-2 . S-ar prea, n general, c mrimea lor este proporional cu mrimea celulei i
invers proporional cu numrul lor. De asemenea, cercetrile arat c lungimea cromozomului
este, n general, proporional cu numrul de gene pe care le conine. Anumii factori de mediu
pot influena mrimea cromozomilor. De exemplu, scderea temperaturii face ca n celulele
vegetale n plin diviziune s apar cromozomi mai contractai, mai scuri. Prezena alcaloidului
colchicin, n timpul diviziunii celulare, scurteaz, de asemenea, cromozomii. Numrul de
cromozomi. Este relativ constant pentru indivizii ce alctuiesc o specie de plante sau animale.
Acest numr variaz n limite mari la diferite specii, de la doi ci ntlnim n celulele somatice la
Ascaris megalocephala, pn la cteva sute (Amoeba proteus). n celulele somatice numrul lor
este dublu (diploid) i se noteaz cu 2n, iar n celulele sexuale este redus la jumtate (haploid) i
se noteaz cu n. n tabelul 2.1. se indic la cteva specii de plante i animale numrul n i 2n de
cromozomi. Tabelul 2.1. Numrul de cromozomi la diferite specii de plante i animale
Simbolul x indic numrul haploid de cromozomi ai speciilor diploide strmoeti denumit
numr de baz, numr monoploid sau genom.n celulele somatice cromozomii sunt perechi, iar
din punct de vedere morfologic apar, n general, ca nedifereniai. Dei numrul lor reprezint un
caracter de specie, se pot ntlni specii cu acelai numr de cromozomi, cu toate c aparin unor
grupe ndeprtate din punct de vedere sistematic. Acest numr nu este legat deci de poziia
sistematic a speciei n lanul filogenetic. Numrul i morfologia cromozomilor pentru diferite
forme apropiate pot ns s fie folosite ca indicaii pentru nrudirea filogenetic a formelor de
plante sau animale. Pe aceste constatri se bazeaz ramura sistematicii numit kariosistematica.
Constana numrului de cromozomi este totui relativ. Starea organismului i condiiile externe
pot produce modificri asupra numrului de cromozomi n celul. Numrul de cromozomi poate
varia n funcie de esutul n care se afl celula. Astfel, n ficatul animalelor numrul garniturilor de
cromozomi este un multiplu al numrului de cromozomi din celulele sexuale ale aceluiai
organism (4x, 8x etc.). La speciile de plante angiosperme, nucleii din celulele endospermului,
datorit fenomenului dublei fecundri, conin trei garnituri de cromozomi, fiind simbolizat 3n.
Numrul, forma i mrimea cromozomilor n metafaz, din celulele somatice ale unui organism,

sunt indicate prin noiunea de cariotip. n figura 2.5. sunt redate cariotipurile la diferite specii.
Nu de mult s-au elaborat diferite metode pentru o identificare mai precis a cromozomilor la
diferite specii de plante i animale. Una dintre acestea este i metoda de bandare. n anul 1940,
C. Darlington i La Cour au elaborat o metod de colorare a celulelor din esuturile
meristematice prin tratarea lor cu temperaturi sczute. Sub influena acestui factor pe cromozom
apar benzi mai intens i mai puin colorate. Principalele tehnici moderne de bandare se mpart n 2
categorii: - tehnici bazate pe folosirea unor fluorocromi (quinacrina) ce se leag de ADN. n
acest caz benzile caracteristice care apar se numesc benzi Q; - tehnici ce se bazeaz pe procesul
de denaturare i renaturare a ADN, urmate de colorare cu colorantul Giemsa. Benzile care apar
sunt notate cu G. n afar de benzile Q i G au mai fost descoperite i alte tipuri cum ar fi: C, R,
T, N. Procedeele de bandare conduc la identificarea cert a perechilor de cromozomi i a
modificrilor lor structurale (figura 2.6.) Structura cromozomului. Cromozomii sunt formai din
dou uniti alipite n lungul lor numite cromatide. Cu ajutorul microscopului electronic s-a
descoperit c aceste uniti se compun, la rndul lor, din cte dou subuniti numite cromoneme.
n fiecare cromozom, dou cromoneme alctuiesc cte o cromatid. n preajma diviziunii celulare,
cromonemele se spiralizeaz i se scurteaz. Spiralizarea este inegal, aa c exist zone cu spire
mai dense i mai puin dense. La microscopul optic aceste poriuni apar ca o succesiune de
granule, nirate ca mrgelele ntr-un irag, denumite cromomere. S-a crezut mult timp c aceste
cromomere ar reprezenta unitifuncionale - genele. n realitate, aceste ngrori vizibile sunt
poriuni de spirale mai dense ce dau aspectul de granule de culoare mai nchis. Cromomerele
includ un numr variabil de gene. Spiralizarea i scurtarea cromozomului este maxim n
metafaz, cnd cromozomii apar destul de compaci. n telofaz, ncepe procesul de despiralizare
al cromozomilor (figura 2.7.).
O structur important care joac un rol n evoluia cromozomului este heterocromatina. n
legtur cu particularitile ei s-au adunat multe date, unele contradictorii, aa nct, pn n prezent,
nu s-a cristalizat o concepie unitar asupra acestei formaiuni. Se tie ns precis c n toate
stadiile ciclului mitotic unele sectoare ale cromozomului se coloreaz intens. Acestea s-au
denumit sectoare heterocromatice, spre deosebire de altele eucromatice, care se coloreaz mai
slab. Colorarea mai intens se explic prin creterea densitii spirelor cromonemelor. Sectoarele
cu heterocromatin se gsesc, n general, n apropierea centromerului.
Ele ns, ca localizare, sufer variaii determinate de influena diferiilor factori externi. Se
consider c regiunile eucromatice conin, n general, marea majoritate a genelor, n timp ce
regiunile heterocromatice sunt practic lipsite de gene. Heterocromatina se poate prezenta sub trei
forme: - heterocromatina constitutiv este prezent n toi cromozomii nucleului i este localizat
de o parte i de alta a centromerului. Ea se aglomereaz ntr-o mas compact cromatic, care se
numete cromocentru. - heterocromatina facultativ, care inactiveaz genele pentru unul din
cromozomii X. Se tie c la Drosophila melanogaster, la femel, care are doi cromozomi X,
numai unul este activ. n felul acesta se realizeaz o egalitate n funcionarea genelor celor dou
sexe la mamifere, deoarece sexul mascul are numai un cromozom X activ. - heterocromatina
condensat este distribuit diferit la celulele din diferite esuturi i blocheaz aciunea genelor ce
se gsesc n regiunea ei.
La unii cromozomi de porumb, n poziii diverse, se observ prezena unor noduli, care se
coloreaz puternic, cunoscui sub denumirea de knobi. Numrul i poziia knobilor sunt
constante pentru anumii cromozomi. Nu se cunoate precis rolul acestor formaiuni, dac conin
sau nu gene. Se presupune c ar avea rol n procesul de gametogenez. O schem general
privind structura microscopic a cromozomului este prezentat n figura 2.8.

Compoziia chimic a cromozomilor. Analiza chimic a cromozomilor a relevat faptul c ei sunt

constituii din macromolecule de ADN i ARN, proteine cu nsuiri bazice (histone), proteine
acide (nehistone), alturi de alte substane n cantiti mai mici: lipide, magneziu, calciu, enzime.
Complexul ADN-histone constituie substana structural fundamental a cromozomului, n timp
ce ARN, care se formeaz la nivelul cromozomului, este transferat n citoplasm, avnd rol n
procesul de biosintez a proteinelor. Dintre toi componenii cromozomilor, ADN se gsete n
cantitate constant. n celulele somatice cantitatea lui este dubl fa de cantitatea din celulele
sexuale ale aceluiai organism, variind ns de la specie la specie. ARN se gsete n cromozomi n
cantiti foarte variabile, de la 3 la 35%. La fel devariabil este i cantitatea de proteine
nehistonice, aceasta fiind sub dependena activitii genelor. n tabelul 2.2. este prezentat
compoziia chimic a cromozomilor.
2.3.2. Structura molecular a cromozomului
S-au acumulat multe date n legtur cu compoziia chimic a cromozomilor. Nu acelai lucru se
poate afirma despre structura molecular a cromozomilor de la organismele eucariote, a
configuraiei structurale a elementelor ce alctuiesc aceast compoziie chimic. Microscopia
optic nu poate oferi detalii, iar microscopia electronic nu ne ofer nc imagini clare, deoarece
cromozomii sunt foarte neregulai i au o lungime prea mare pentru a putea fi observai n
ntregime. Din aceast cauz s-a ncercat a se crea diferite modele de structur, care s in seama
de prezena unui numr mare de molecule de ADN, de dispunerea unui numr mare de gene pe
cromozomi, de posibilitatea dublrii unei singure cromatide, de stabilirea structurii cromozomice
i de replicaia ADN. Pn n prezent s-au conturat mai multe ipoteze privind modelul de structur
molecular al cromozomului: Ipoteza polifibrilar presupune existena n fiecare cromatid a unui
mnunchi de fibre ce corespund macromoleculelor de ADN. Cromozomul ar avea, n acest caz,
diametrul de 4000 , fiind format din dou cromatide de cte 2000 . Acestea ar conine subuniti
de dimensiunea ADN de 20 . Ipoteza este criticat pentru mai multe motive. Numrul mare de
fibre identice ar constitui o risip de material genetic. Se tie c mutaia genetic afecteaz o
poriune din molecula de ADN, de asemenea afecteaz o poriune din lungimea cromozomului.
Din moment ce afecteaz numai o poriune de fibr nu mai poate fi prezent pe tot segmentul de
cromozom. Odat cu clivarea cromozomilor, n timpul diviziunii celulare, mutaia ar fi repartizat
numai la una din cele dou celule care se formeaz; ori aceasta contravine proprietii mutaiilor
de a fi ereditare. Ipoteza structurii monofibrilare a cromozomului este reprezentat de diferite
modele. Potrivit modelului lui J. A. Taylor (1957, 1960, 1963) i E. Freese (1958) fiecare
cromatid este constituit dintr-un numr mare de moleculede ADN, dispuse cap la cap, legate
ntre ele prin legturi de tipul 3, formate din resturi de fosfoserin asociate nucleotidelor
terminale de ADN i legturi de tipul 5 formate din puni difosforice. Al treilea tip de legturi
ntre moleculele de ADN ar fi de natur peptidic (legturi H), care au rolul de a asigura
stabilitatea structurii cromatidei (figura 2.9.). Un alt model presupus de J. A. Taylor (1958),
susine c n lungul cromatidei ar exista o coloan dubl la care de o parte i de alta se leag
moleculele de ADN. Replicarea cromatidei s-ar realiza prin clivarea coloanei centrale i
separarea catenelor de ADN, dup care fiecare jumtate i reface jumtatea complementar
(figura 2.10.).
Ipoteza fibrei cutate a lui E. J. Du Praw (1970) consider c fiecare cromatid este constituit
dintr-o molecul lung de ADN asociat cu proteine, cutat neuniform transversal i longitudinal.
n interfaz, fibrele elementare se cuteaz, constituind cromozomul, cu ajutorul unor proteine
contractate n metafaz (figura. 2.11.). Aceast ipotez a fost sugerat lui Du Praw de existena
inelului de translocaie la Oenothera, unde toi cromozomii sunt asociai. Ca urmare, ntregul set
de cromozomi haploizi ar fi format dintr-o singur molecul de ADN gigantic i circular.

Modelul nucleosomului a fost conceput pe baza cercetrilor de biochimie, de microscopie optic,

electronic i de difracie n raze X. n alctuirea cromozomului de tip eucariot ADN este n
cantitate de 13- 15%, ARN 12-13%, iar proteinele de 68-72%. Aceste procente difer de la
specie la specie. La aceeai specie ns, mrirea cantitii de ADN se poate realiza
prinmultiplicarea numrului de garnituri cromozomice, adugarea unui anumit numr de
cromozomi, duplicaia genelor i mrirea cantitii de ADN repetitiv.
ADN din cromozomii de tip eucariot este format din gene structurale (secvene unice de
nucleotide) i poriuni care nu dein informaie genetic i au rolul de a ocupa spaiul dintre gene.
A doua categorie sunt secvenele de nucleotide intermediar repetitive i care se gsesc n mai
multe copii. A treia categorie sunt secvenele de nucleotide nalt repetitive ce se repet ntr-un
numr mare de copii i sunt localizate n heterocromatin. Dintre aceste categorii variaia
cantitii de ADN din genom este datorat secvenelor de nucleotide repetitive, care n cea mai
mare msur sunt nefuncionale. n afar de aceste categorii de secvene mai exist formaiunile
denumite palindroame. Ele sunt formate din secvene inversate dnd natere la nite bucle. Privit
la microscopul electronic, cromatina apare format din granule cu diametrul de 70-100 , legate
ntre ele cu o fibr de 20 . O granul este de fapt un nucleosom, care cuprinde un cilindru turtit
de natur histonic n jurul cruia se nfoar un filament de ADN format din 100-140 nucleotide.
Fig. 2.12. Modelul nucleosomuluin nucleu, cromatina formeaz un filament de 100 , alctuit
din aranjarea liniar a nucleosomilor i un filament cu diametrul de 200-300 format din
rsucirea filamentului subire (figura 2.12.).n afara tipului obinuit al cromozomilor din celulele
somatice (autozomi i heterozomi), au fost descoperii n anumite celule i alte tipuri de
cromozomi: cromozomi uriai, cromozomi tip "perie de lamp" i cromozomi accesorii sau de
tip "B". Cromozomii uriai au fost pui n eviden de Balbiani (1881) n glandele salivare ale
larvelor de Chironomus. Ulterior, au fost evideniai i la Drosophila melanogaster, n glandele
salivare, n celulele intestinului i a tuburilor lui Malpighi. Aceti cromozomi s-au format prin
multiplicarea cromatidelor de peste 1000 de ori, care au rmas ns alipite, neseparate (sinaps
mitotic) i despiralizate, fr ca nucleul s se divid. Din cauza numrului mare de cromatide,
aceti cromozomi se mai numesc i polyteni. Structura cromozomilor polyteni este aceeai ca a
celorlali cromozomi somatici, deosebindu-se de acetia prin lungimea i grosimea lor mult mai
mari. Dimensiunile lor foarte mari permit cercetarea unor detalii de structur. Configuraia
cromozomilor uriai este alta comparativ cu aceea a cromozomilor somatici obinuii. De
exemplu, la Drosophila melanogaster formeaz cinci brae lungi i unul scurt, unite ntr-un singur
punct, numit cromocentru. Cromozomii sexului sunt n prelungire formnd un singur bra,
cromozomii perechii a doua i a treia formeaz alte patru brae, iar cromozomii perechii a patra
un singur bra, foarte scurt (figura 2.13.).
De-a lungul lor, aceste brae formeaz benzi (discuri) ntunecoase, care alterneaz cu alte benzi,
luminoase. Unii autori au presupus c aceste discuri ("discurile lui Balbiani") ar reprezenta locul
genelor. Sunt aproximativ 6000 asemenea discuri ntunecoase. n anumite locuri, structura dens
a lor se deslneaz formnd funde n jurul cromozomului, crora li s-a dat denumirea de "puff"-uri
sau "bulbi". Aici are loc sinteza ARN, sugernd activitatea intens a genelor ce se gsesc n aceste
segmente. Cromozomii lampbrush (perie de lamp) au fost pu i n eviden n ovocitele
vertebratelor n timpul profazei meiozei. Ating lungimea de peste 1000 i sunt considerai cei
mai lungi cromozomi care se cunosc pn n prezent. Spre deosebire de cromozomii uriai, ei sunt
foarte subiri, ajungnd uneori la limita vizibilitii microscopice. Cromozomii perie de lamp
posed un ax central, n lungul cruia sunt nirate cromomerele, din care ies lateral perechi de
bucle filiforme, dnd aspectul firelor de pr ale unei perii de lamp (figura 2.14.). Aceste bucle se
presupune c sunt spirale ale cromonemei, active din punct de vedere genetic. Ele cresc n

profaza I i descresc ctre metafaza I a meiozei. Nu se tie cum au aprut aceti cromozomi.
Noua configuraie corespunde unei activiti intense, care contribuie la formarea de rezerve
viteline n citoplasma ovocitelor.
Cromozomii accesorii se gsesc n plus fa de cromozomii autozomi i ai sexului. Spre deosebire
de cromozomii obinuii, notai cu "A", cromozomii accesorii se mai numesc i "cromozomii B".
Numrul lor difer de la un organism la altul i de la un esut la altul i nu sunt omologi nici ntre
ei i nici cu cromozomii obinuii pe lng care se gsesc. Sunt heterocromatici, mici i ineri din
punct de vedere genetic. n meioz i mitoz nu se distribuie n mod egal n celulele n care se
formeaz. Nu se cunoate nc originea lor, dar dup toate probabilitile s-au format din
poriunile mijlocii ale cromozomilor normali, alecror extremiti s-au ataat altor cromozomi.
Nici rolul lor nu este cunoscut. Ei pot lipsi fr a perturba viaa organismelor. Mai curnd s-ar
putea considera pgubitoare existena lor. Astfel, la secara tetraploid, atunci cnd cromozomii
"B" sunt prezeni, scade fertilitatea polenului i viabilitatea plantelor. Cromozomii suplimentari
au fost pui n eviden la insecte, psri, porumb, secar .a.