Fabricarea membranelor artificiale

O compatibilitatea bun a sngelui (n special proprietate de anticoagulare

i proprietatea de protejare mpotriva depunerilor) este foarte de dorit pentru
materialele i dispozitivele artificiale care vin n contact direct cu snge. Pe
parcursul ultimelor decenii, grupare carboxil (-COOH) i hidroxil grup (OH) au
fost utilizate pe scar larg pentru proiectarea i pregtirea materialelor cu o
bun compatibilitate a sngele. S-a raportat c gruprile carboxil din materiale
ar putea lega ionii de calciu n snge, care ajuta la mbuntirea propriet ilor
anticoagulante; n timp ce materiale bogate in grupri hidroxil arat proprietate
de hidrofilicitate i de protejare mpotriva depunerilor, care ar putea ajuta la
inhibarea formarii cheagurilor de snge. Printre materialele ce constituie o
membran, polietersulfon (PES) este renumit pentru proprietatea oxidativ,
pentru stabilitate termic i hidrolitic, precum i pentru proprietile mecanice
de formare a filmelor iar membranele PES au fost larg utilizate n ramuri
biomedicale, cum ar fi organele artificiale i dispozitive medicale folosite pentru
purificarea sngelui (hemodializ, hemofiltrare, plasmafereza i colectare
plasma) .
n aceast lucrare, noi oferim o eficien extrem, un protocol convenabil i
universal pentru sngele compatibil modificrii membranei de polietersulfon
(PES) reticulat prin copolimerizarea de 2-hidroxietil metacrilat (HEMA) i acid
acrilic (AA) n soluii PES. Unghiul de contact cu apa, adsorb ia de proteine,
aderarea plachetelor, precum i timpul de coagulare a modificarii membranelor
PES sunt studiate sistematic, iar rezultatele

indic faptul c membranele

modificate prezint o hidrofilicitate mbuntit, o buna anticoagulare a

sngelui i unele proprieti antivegetative dup introducerea HEMA i AA.
ntre timp, membranele modifcate realizeaz o activare de contact sczut atunci
cnd acestea vin n contact cu sngele. Efectul raporturilor HEMA / AA cu

privire la compatibilitatea sngelui este, de asemenea, investigat pentru a

identifica diversele roluri jucate de HEMA i AA n timpul modificrilor ce au
loc; HEMA ar putea spori mai eficient proprietatea membranei mpotriva
depunerilor, n timp ce AA ar putea mbunti mai eficient proprietatea de
anticoagulare. Rezultatele au indicat c sngele comptabil cu membranele PES
au avut potenialul pentru a fi utilizate n domenii de purificare a sngelui. [1]
Un alt studiu arat c sistemul biohibrid constituit din hepatocite de porc
primare i membrane sintetice microporoase a fost utilizat pentru a investiga
biotransformarea diclofenacului i efectele pe termen lung asupra funciilor
specifice

hepatocitelor.

Meninerea

funciilor

de

biotransformare

medicamentelor, efectul de administrare continu a diclofenacului i funciile

metabolice ale hepatocitelor au fost explorate. Hepatocitele de porc au fost
izolate din abatoare i au fost cultivate pe membrane de polietersulfon (PES) i
pe colagen. Capacitatea celulelor de a elimina diclofenac i de a sintetiza
metabolii a fost evaluat prin analiza HPLC. Producia de albumin i uree a
fost stabilt ca indicatori ai funciilor difereniate ale hepatocitelor. Hepatocitele
de porc elimin diclofenac i produc doi metabolii principali: 4hidroxidiclofenac (4-OHdic) i N, 5-dihidroxidiclofenac (N, 5-(OH) 2dic).
Celulele expuse permanent la concentraii de medicament subtoxic men in
funciile lor de biotransformare pn la 10 zile de cultur. Rata de eliminare a
diclofenacului a crescut n conformitate cu cinetica de saturaie. Diclofenacul
are un efect citotoxic la o concentraie mai mare de 100 M, cum a fost
confirmat prin analiza fragmentrii ADN-ului. Ureea i sinteza albuminei,
precum i producia de proteine totale a fost, de asemenea, afectate de
concentraiile diclofenacului. A fost observat un efect important al dependenei
de concentraie a diclofenacului la sinteza proteinelor. Rezultatele ofer
informaii cu privire la efectul diclofenacului asupra funciilor specifice ale
hepatocitelor de porc expuse continuu la medicamente i asupra capacitii pe
termen lung a celulelor de a metaboliza diclofenacul

ntr-un sistem de

membrane biohibride. Pe baza evalurii funciilor de biotransformare i a

funciilor specifice ale ficatului fiind exprimate de hepatocite de porc,
membrana PES s-a dovedit a fi un substrat bun pentru cultura n vitro de celule
hepatice. [2]
Cu toate c att pacienii cu insuficien hepatic acut, ct i cu suficien
hepatic cronic pot fi tratai efectiv prin transplantul ntregului organ, sunt
anual doar aproximativ 4000 de donatori de ficat disponibili n Statele Unite.
Din aceast cauz, aproximativ 30000 de pacieni mor din cauza insuficienei
hepatice i aproape 20000 de pacieni sunt pe lista de ateptare pentru acest
transplant. Lsnd la o parte recentele avantaje obinute din terapii, pacienii cu
o insuficien hepatic sever, care evolueaz rapid, au o rat a mortalitii de
aproximativ 90%.
Dac funciile eseniale ale ficatului pot fi restabilite nc din faza critic a
insuficienei hepatice, fie prin metode artificiale sau auxiliare, ar fi foarte posibil
s mbuntim rata de supravieuire a acestor pacieni.
Din cauza faptului c ficatul este un organ multifuncional i vital pentru
supravieuire, managementul de insuficien hepatic acut necesit suportul
unui numr imens de funcii metabolice ndeplinite de organ. Multe dintre
tehnicile artificiale iniiale bazate pe detoxifierea ficatului au euat n tratarea
pacienilor care au avut suportul adecvat de funcii hepatice eseniale. Din acest
motiv, un ficat bioartificial ce cuprinde celule hepatice viabile i un suport
mecanic este considerat a fi mult mai adecvat pentru furnizarea funciilor
eseniale dect un dispozitiv pur mecanic.
n ficat hepatocitele au o polaritate epitelial distinctiv i structuri de
comunicare celul-celul care includ canaliculi biliari, o jonciune strns i o
jonciune gap i de asemenea arat regenerarea eficient i funciile difereniate,
ns, n vitro ele pierd foarte repede aceste caracteristici. Cu toate acestea au fost
foarte multe dificulti n formarea culturilor de hepatocite.
Cercetrile efectuate pn n prezent pot fi clasificate n dou strategii:
optimizarea mediului extracelular a matricei i controlul interaciunilor celul-

celul. Componentele celulare ale celor mai multe sisteme de ficat bioartificial
n studiile clinice i preclinice se bazeaz pe hepatocitele primare porcine n
locul hepatocitelor umane primare, care sunt ideale pentru aceste sisteme. Acest
lucru se datoreaz faptului c cererea ridicat pentru donatorii de organe face
imposibil ca esuturile n exces disponibile s fie suficiente pentru aplicarea
nontransplantului. Datorit faptului c sunt uor de gsit i au activiti
funcionale ridicate, celulele porcine sunt a doua alegere pn cnd hepatocitele
umane vor fi disponibile.
Celulele sunt surse promitoare de hepatocite umane pentru sistemul de ficat
artificial n viitor, sunt clasificate n dou tipuri n funcie de originea lor: celule
stem intrahepatice i celule stem extrahepatice. Celulele stem intrahepatice
includ hepatocite mature, celule ovale, hepatocite mici, hepatoblast i colonii de
hepatocite n formare, n timp ce, celulele stem extrahepatice includ celule stem
mezenchimale. Dei celulele stem hepatice menionate mai sus pot avea un
potenial diferit, de la un punct de vedere tiinific, ele trebuie s ndeplineasc
trei condiii pentru aplicaii. n primul rnd, trebuie s aib o capacitate
proliferativ de cel puin 10 miliarde de celule (numrul minim de celule pentru
un sistem de ficat bioartificial), fr o pierdere a potenialului de difereniere. n
al doilea rnd ele trebuie s diferenieze hepatocitele mature funcionale cu un
randament mare, bazate pe un protocol precis de difereniere. n cele din urm,
costurile ridicate care rezult din utilizarea mediilor scumpe de cultur a
factorilor de cretere trebuie s fie rezolvate. [3]
Dispozitivele hepatice au fost dezvoltate n ultimele decenii pentru a ajuta
pacienii cu insuficien hepatic s se recupereze sau s fac transplant.
Succesul fibrelor Hollow bazat pe ficatul bioartificial depinde mai ales de
alegerea membranei n funcie de penetrabilitate i biocompatibilitate.
Obiectivul acestui studiu a fost de fapt investigarea impactului diferitelor tipuri
de fibre (microfiltrare, fracionarea plasmei i ultrafiltrare) i al transferului n
mas de funcii ale celulelor cultivate n mediul exterior.

Membranele din fibre Hollow sunt adesea folosite n hemodializ ca rinichi

artificiali pentru a trata bolile renale.
Sistemele de ficat bioartificial necesit utilizarea celulelor hepatice ntr-un
cadru adecvat. Celulele trebuie izolate de mediul extern i cultivate pe
biomateriale favorabile. Utilizarea unei structuri tridimensionale are ca scop
imitarea pe ct posibil a celulelor n condiii vivo, fapt ce duce la creterea
viabilitii att a celulei ct i a funciilor acesteia. Aceste sisteme au fost
dezvoltate la scar mare cu scopul de a gsi o aplicaie direct n practic.
Fibrele Hollow pentru ficatul bioartificial sunt compuse dintr-o ncpere
transparent din policarbonat fapt ce a condus la observarea mai uoar a
colonizrii celulelor. Membranele fcute din acelai material cu diferite grade de
permeabilitate (de la ultrafiltrare la microfiltrare) au fost investigate n vitro fr
minimodule care s reprezinte un tip particular de fibre Hollow. Membranele ar
putea fi difereniate n funcie de transferul de mas i proprieti, n special
pentru proteinele sintetizate de celulele hepatice.
Dup evaluarea rezistenei hidraulice i a porozitii membranei, studiile
transferului de mas au fost iniiate prima dat cu vitamina B12 i completat de
un model matematic cu scopul de a determina efectul transferului preponderent
pentru fiecare tip de model (difuzie vs. convecie). Transferurile de mas au fost
influenate semnificativ att de tipul de celule Hollow ct i de condiiile de
operare.[4]
ntr-o alt lucrare se studiaz fibrele tubulare (HF) din acid polilactic(PLLA)
ce sunt biodegradabile si foarte permeabile, care,atunci cnd sunt integrate n
ingineria de contrucie a esuturilor in vitro, pot mbunti aproviozonarea de
nutrienti n celule. De fapt, se studiaz diferii parametrii ai fibrelor de filare
pentru a dezvolta structura fibrei optime. Prin utilizarea 1,4 dioxan ca solvent i
etanol ca non-solvent la temperatur foarte sczut (-6 C), se va dezvolta fibre
cu strat superior dens i subire i un substrat spongios. Tratarea ulterioar cu
hipoclorit de sodiu produce fibrelor suprafete deschise i o interconectivitate
crescut a porilor. Transportul de albumin seric bovin (BSA) i a mediului de

cultur de celule a fost suplimentat cu 10% ser fetal bovin (FBS) prin fibra
produsa din acidul polilactic (PLLA), este mare (permeana 1963 L / (m2 h bar))
cu retenie sczut de proteine. n vitro cultivarea de celule statice i dinamice,
timp ntre 3 i 7 zile, folosind celule de oarece sugereaz c fibrele goale
fabricate din PLLA sunt potrivite pentru livrarea nutrienilor la celule printr-un
schelet de inginerie tisular. Porogeni ca polivinilpirolidon (PVP) i
polietilenglicol (PEG) sunt adugate la soluia pentru droguri. [5]

[1] Hui Qin, Chuangchao Sun, Chao He, Dongsheng Wang, Chong Cheng,
Shengqiang Nie, Shudong Sunn, Changsheng Zhao High efcient protocol for
the modication of polyethersulfone membranes with anticoagulant and
antifouling properties via in situ cross-linked copolymerizationJournal of
Memebrane Sciences 468(2014) 172-183
[2] DOO-HOON LEE , JUNG-KEUG PARK Bioartificial Liver Systems:
Current Status and Future Perspective JOURNAL OF BIOSCIENCE AND
BIOENGINEERING, Vol. 99, No. 4, 311319. 2005
[3] Murielle Dufresne, Aude Gautier, Bodo Von Harten, Cecile Legallais,
Horst-Dieter Lemke, Aissa Ould-Dris, Patrick Paullier Hollow fiber
bioartificial liver: Physdical and biological characterization with C3A clls,
Journal of Membrane Sciences 341(2009) 203-213
[4] L. De Bartolo, C. Campana, E. Drioli, L. Giorno, S. Morelli, M. Rende, S.
Salerno Polyethersulfone membrane biohybrid system using pig hepatocytes:
Effect of diclofenac on cell biotransformation and synthetic fucntions, Journal
of Membrane Sciences 278(2006) 133-143
[5] N.M.S. Bettahalli, D. Stamatialis, H. Steg, M. Wessling Development of
poly(L-lactic acid) hollow fiber membranes for artificial vasculature in tissue
engineering scaffolods, Journal of Membrane Sciences 371(2011) 117-126