Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Lucrri de laborator
I.1.
DETERMINAREA SPECTROFOTOMETRIC A
AMONIACULUI UTILIZND METODA ALBASTRULUI
DE
INDOFENOL
Aceast metod este aplicat pentru determinarea coninutului de amoniac din
ape (de exemplu ap de precipitaii) pentru domeniul de concentraii 0,04
2,0 mg NH4/L.
Principiul metodei
ntr-o soluie alcalin (pH 10,4-11,5) ionii de amoniu reacioneaz cu
hipocloritul formnd monocloramin. n prezena fenolului i a unui exces de
hipoclorit, monocloramina va forma un compus albastru, indofenol, reacia fiind
catalizat de nitroprusiatul de sodiu. Concentraia de amoniac este determinat
spectrofotometric la 630 nm.
Reactivi i aparatur
Toate substanele chimice trebuie s fie de puritate analitic. Apa utilizat
pentru diluare i splare trebuie s fie dublu-distilat sau deionizat i apoi
distilat.
Fenol (C6H5OH);
Nitroprusiat de sodiu (Na2Fe(NO) (CN)5x2H2O);
Hidroxid de sodiu (NaOH);
Soluie de hipoclorit de sodiu (NaOCl) 1M - se prepar o soluie ce conine
aproximativ 3,5% clor activ (35 g/L) n NaOH 0,1M;
Clorur de amoniu (NH4Cl);
Tiosulfat de sodiu (Na2S2O3);
Reactiv A: se dizolv 3,5 g fenol i 0,040 g nitroprusiat de sodiu n 100 mL ap.
Soluia se pstreaz n frigider, la ntuneric. n cazul n care culoarea soluiei
devine verde, trebuie preparat o alt soluie;
Reactiv B: se dizolv 1,8 g hidroxid de sodiu ntr-un volum mic de ap ntr-un
balon cotat de 100 mL. Se adaug 4,0 mL soluie de hipoclorit de sodiu 1 M i se
aduce la semn cu ap. Soluia se pstreaz n frigider, la ntuneric. Dac soluia
este pstrat un timp mai ndelungat (cteva sptmni) concentraia acesteia
trebuie verificat prin titrare cu o soluie de tiosulfat de sodiu;
Soluie standard de amoniu I, 100 mg NH 4/L: clorura de amoniu trebuie uscat
timp de o ora la 100 C. Se dizolv apoi 0,2965 g sare n ap ntr-un balon cotat
de 1000 mL. Se dilueaz pn la semn cu ap. Aceast soluie este stabil pentru
ase luni atunci cnd este pstrat n frigider;
1.
2.
3.
4.
5.
Mod de lucru
Se transfer 5,0 mL de prob i 5,0 mL de ap ntr-o eprubet de 30 mL. Se
procedeaz conform instruciunilor prezentate la punctele 2 i 3 de mai sus. Se
transform citirile spectrofotometrice ale probei n mg NH 4/L folosind curba de
calibrare. Concentraia poate fi exprimat n mg N/L prin multiplicarea rezultatului
obinut cu 0,778. Probele ce conin mai mult de 2,0 mg NH 4/L trebuiesc diluate. Cu
ajutorul unui echipament corespunztor, metoda indofenolului poate fi automatizat.
Interfereni
Fierul (III) poate interfera dac concentraia sa este mai mare de 2 mg/L.
Dac pH-ul probei este mai mic de 3, proba trebuie neutralizat. Dac proba
3
I.2.
Reactivi i aparatur
n vederea efecturii analizelor, se vor utiliza numai substane chimice de
puritate analitic i ap dublu distilat sau deionizat i apoi distilat.
Acid percloric (HClO4) 72%
Suflocianur de mercur (II) (Hg(SCN) 2)
Azotat de fier (III) nano-hidratat (Fe(NO 3)3x9H2O)
Clorur de sodiu (NaCl)
Etanol (C2H5OH)
1. Acid percloric, 1:1. Se amestec 1 volum acid percloric 72% cu 1 volum ap;
2. Soluie saturat de sulfocianur de mercur (II). Se amestec 1 g Hg(SCN) 2 cu
1000 mL etanol. Se filtreaz dup 24 de ore. Soluia poate fi pstrat ntr-un
recipient de sticl la temperatura camerei.
3. Soluie de azotat de fier (III), 6%. Se dizolv 6 g Fe(NO 3)3x9H2O n 100 mL 1:1
acid percloric. Se filtreaz soluia dup 24 de ore.
4. Soluie standard de clorur I, 1000 mg/L. Se dizolv 412,5 mg NaCl, uscat n
prealabil la 140-200C, n 250 mL ap.
5. Soluie standard de clorur II, 10 mg/L. Se dizolv 10,0 mL soluie standard de
clorur I n 100 mL ap.
1.
2.
Mod de lucru
Se transfer 25 mL de prob de analizat (ap de precipitaii) ntr-un pahar
Erlenmeyer i apoi se procedeaz n acelai mod ca mai sus. Se determin coninutul
de clorur din prob din curba de calibrare.
Interfereni
Bromurile i iodurile vor da acelai semnal de absorban ca i cantitatea
echivalent de clorur.
1.
2.
BIBLIOGRAFIE
Iwasaki, I., Utsumi, S., and Ozawa, T. (1952) New colorimetric determination of
chloride using mercuric thiocyanate and ferric ion. Bull. Chem. Soc. Japan, 25,
226.
Zall, M., Fisher, D., and Gamer, Q. (1956) Photometric determination of
chlorides in water. Anal. Chem., 28, 1665-1668.
H2SO4
Formarea culorii
Ba2+ + TORIN
Scopul lucrrii:
Determinarea zilnic a concentraiei medii de SO 2 din probe de aer atmosferic.
Operarea corect a unei staii manuale de control pentru calitatea aerului.
Folosirea corect a materialelor i proceselor cu posibile riscuri chimice.
Staie manual de control
O staie manual de control conine urmtoarele elemente:
Intrarea aerului: plnie conic pentru probe de 3-5 cm, confecionat din clorur
de polivinil i plasat vertical cu gura nclinat. Ar trebui plasat ct mai departe
de perei i de alte elemente care deranjeaz.
Dispozitiv de msurare a volumului de prob i de control a debitului.
7
Partea experimental
Aparatur
Dispozitiv de prelevare a probelor
(staie manual de control)
Spectrofotometru
Celule de sticl de drumul optic de10 mm
O micropipet, 250 L
10 baloane cotate de100 mL
2 pipete de 5 mL
2 pipete de 10 mL
Reactivi
Ap de calitate Milli-Q
H2O2
HClO4 72%
H2SO4 98%
Ba(ClO4)2 anhidru
Torin
Dioxan
Prepararea soluiilor
Toate soluiile au fost preparate cu ap de calitate Milli-Q.
Precauii: Urmtorii reactivi trebuie manevrai cu atenie: acidul percloric,
perclorat de bariu, dioxanul i torinul.
1) H2O2 de concentraie 27-30 % (w/w) ;
2) Acid percloric de concentraie 0,1 mol L -1; se iau 4,3 mL de acid percloric de
concentraie 72% i se aduce la semn pn la 500 mL cu ap pur.
3) Acid percloric de concentraie 0,01 mol L -1: 25 mL de acid percloric de
concentraie 0,1 mol L-1 se aduc la semn la 250 mL.
4) Soluia de captare. Se dilueaz 10 mL de soluie 1, de H 2O2 27-30 % pn la 1000
mL cu ap pur mili-Q. Se regleaz pH-ul (cu un pH-metru) n domeniul 4,0 - 4,5
prin adugarea unei soluii de acid percloric de concentraie 0,1 mol L -1. Soluia
poate fi conservat timp de o lun la frigider.
5) Soluia de Ba(ClO4)2. Se dizolv 0,525 g perclorat de bariu anhidru ntr-un volum
mic de soluie 3 (acid percloric 0,01 mol L-1). Aceast soluie se transfer ntr-un
balon cotat de 250 mL i se aduce la semn cu acelai acid.
6) Soluia de Ba(ClO4)2 /dioxan. Se dilueaz 1 mL soluie 5 (Ba(ClO4)2) cu 40 mL de
ap milli-Q i se transfer ntr-un balon cotat de 1000 mL; apoi se completeaz cu
dioxan.
7) Soluia standard de sulfat de concentraie 0,500 mol L -1. Se dilueaz 28 mL de
H2SO4 de concentraie 98% pn la 1000 mL i se titreaz cu o soluie de NaOH
8
2)
3)
4)
Mod de lucru
Prelevarea i pre-tratarea probelor. Se pun 100 mL de soluie de captare (soluia
4) ntr-un balon de barbotare i se pornete echipamentul de prelevare, un volum
de aer msurat exact este forat s intre n dispozitivul de barbotare, astfel nct
concentraia de dioxid de sulf s se nscrie n domeniul liniar al curbei de
calibrare. Dac se impune se efectuez diluia necesar. Se descriu mai jos
condiiile de prelevare a probelor.
Graficul de calibrare
2.1) Soluiile standard de sulfat. O serie de soluii standard de sulfat sunt
preparate prin diluarea unor volume de 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0 i
10,0 mL din soluia standard (soluia 9) de concentraie 0,00125 mol L -1 ntr-un
balon cotat de 100 mL i se aduce la semn cu ap. Concentraiile rezultate sunt:
0,8; 1,6; 2,4; 3,2; 4,0; 4,8; 5,6; 6,4; 7,2 respectiv 8,0 g mL-1.
2.2) Soluia martor. Se prepar o soluie prin amestecarea a 4,0 mL soluie de
captare (soluia 4) cu 10 mL soluie de perclorat de bariu/dioxan (soluia 6) i cu
0,25 mL soluie de torin (soluia 10). Aceasta soluie martor prezint absorban
maxim. Soluia de torin trebuie adugat imediat nainte de nregistrarea
absorbanei. Aceast soluie rmne neschimbat timp de 30 de minute dac este
protejat mpotriva luminii camerei.
Obinerea soluiilor standard colorate cu ajutorul soluiilor standard de sulfat. Se
folosesc 4,0 mL din fiecare soluie standard de sulfat (punctul 2.2) i se aplic
procedura descris pentru analiza martorului (punctul 2.2). Absorbana rezultat
trebuie nregistrat nainte de 10 minute.
Realizarea reaciei de culoare cu soluia de captare a aerului de analizat. Se
introduce un volum de aer ntr-un balon de barbotare de 100 mL. Se ia o prob
alicota de 4,0 mL pentru a fi amestecat cu 10 mL soluie de perclorat de
bariu/dioxan (soluia 6) i cu 0,25 mL soluie de torin (soluia 10) aa cum s-a
descris la punctul 2.2.
9
5)
10
Intrebri
Justificai valoarea negativ a pantei dreptei de calibrare reprezentat n acest
exerciiu de laborator.
Care tehnic ar putea fi potrivit pentru a obine informaia n timp real; i anume
concentraia de SO2 din aer?
Mecanismele de oxidare pe care le sufer SO 2 din atmosfer.
Descriei efectele SO2 pe diferii receptori.
Explicai problemele provenite de la poluarea datorat ploilor acide sursele
acestora, efectele i soluiile posibile pentru rezolvarea acestora.
Comentai concentraia particulelor n suspensie i concentraia SO2, n
comparaie cu regulile legislaiei europene.
I.4.
12
13
14
Partea experimental
Sticlria de laborator trebuie splat mai nti cu acid azotic 0,01 mol L -1
pentru a elimina orice reziduu posibil de plumb.
Sticlrie i aparatur
Baloane din polietilen de 100 mL (2) i
mnui din latex
Cilindru gradat de 50 mL (1)
Reactivi
Soluie standard de concentraie 1000
mg/L Pb(II)
Ditizon
HNO3
Diclorometan
NH3, soluie apoas de concentraie 25
%
Na2SO3
KCN
Na2SO4
1.
2.
3.
4.
16
Mod de lucru
a) Prelevarea i pre-tratamentul probelor de plumb de pe frunzele plantelor (proba
A). Se aleg cu atenie 8 frunze medii de lng marginea oselei sau dintr-o zon
cu trafic intens, care nu prezint particule de pmnt vizibile sau ali ageni
poluatori vizibili. Se pun frunzele ntr-o sticl de polietilen splat mai nti cu
acid azotic (a nu se spla sau a nu se terge frunzele) i se conserv ntr-un loc
uscat pn la momentul analizei. Se adaug n recipientul de prob 20 mL de
HNO3 0,1 mol L-1 i se agit puternic timp de dou minute. Se transfer apoi
coninutul ntr-un pahar Berzelius de sticl de 100 mL i se spala sticla pentru
prob (de trei ori) cu 4 mL de HNO 3 0,1 mol L-1, adugnd de fiecare dat acidul
azotic de splare n paharul gradat ce conine plumbul dizolvat.
Not: nu se aruc frunzele.
b) Prelevarea i tratamentul probelor pentru analiza plumbului atmosferic prins pe
suprafaa unui filtru de particule (proba B). Cu ajutorul dispozitivului de
prelevare a probelor, un volum suficient de aer se trece prin filtru pentru a obine
pe filtru o cantitate de plumb care s se nscrie n domeniul de calibrare. O dat
terminat colectarea probelor, filtrul este aezat uor pe o plac Petri (cu ajutorul
a dou cleme). Apoi, placa este adus n laborator iar filtrul este introdus ntr-o
sticl n care se adaug i 20 mL de HNO 3 0,1 mol L-1. Se procedeaz la fel ca n
seciunea anterioar.
Msurarea suprafeei frunzelor. Pentru a determina suprafaa total a frunzelor pe
care este depus plumbul, se spal frunzele cu ap distilat i se usuc prin presare
ntre hrtii de filtru. Se deseneaz conturul pe o hrtie de msurare, se taie hrtia
i se cntrete. O bucat ptrat de hrtie, de 10 cm, este de asemenea cntrit
pentru a calcula aria n cm2 a suprafeei totale a probelor de frunze.
Extracia i determinarea plumbului. Fiecare soluie de prob A i B se trateaz
dup cum urmeaz: se amestec ntr-o plnie de extracie coninutul paharului
gradat, 5 mL soluie alcalin de complexare i 5 mL soluie de ditizon.
Amestecul se agit puternic timp de 5 minute. Se oprete agitarea 5 minute pentru
a permite separarea fazelor (apoas i organic). Se deschide plnia i faza
organic se trece ntr-o eprubet. Se adaug un vrf de spatul de Na 2SO4 anhidru
n eprubet, se agit i apoi faza organic se filtreaz pe o hartie de filtru,
recoltndu-se filtratul ntr-o alt eprubet uscat care este imediat nchis pentru a
evita evaporarea solventului.
Precauii: tuburile de testare i celula fotometric trebuie uscate complet: se poate
folosi un curent de aer fierbinte. Se ajusteaz lungimea de und la 520 nm i se
face absorbana zero cu diclormetan.
Graficul de calibrare. n urmtorul tabel sunt trecui reactivii (n ordinea adugrii
lor) ce urmeaz a fi amestecai pentru prepararea setului de soluii standard.
Precauii: A se evita n orice moment contactul cu soluia de cianur i soluiile
1
0
20
5
5
0
2
0,5
20
5
5
0,5
3
1,0
20
5
5
1,0
4
1,5
20
5
5
1,5
5
2,0
20
5
5
2,0
6
2,5
20
5
5
2,5
ntrebri
Propunei alte tehnici de analiz pentru determinarea plumbului din atmosfer.
Indicai avantajele i dezavantajele acesteia.
Dai exemple de alte metale grele care pot fi determinate prin tehnicile
propuse.
Listai datele experimentale ale metodei de analiz, indicnd posibile surse de
erori.
17
I.6.
Principiul metodei
Metoda de separare i determinare a mercurului propus se bazeaz pe
precipitarea selectiv a mercurului cu reactivul Cadion A (4-nitrofenildiazo
aminoazobenzen) i extracia complexului format n toluen. Prin msurarea
absorbanei extractului n toluen i folosind o curb de etalonare se poate determina
cantitatea de mercur din proba de analizat. Formarea compexului mercurului are loc la
un pH al fazei apoase de 5,5 11. Mercurul (II) formeaz cu Cadionul un complex cu
urmtoarea structur:
N
NO2
N N
NO2
Hg
N N
18
19
20
I.7.
Introducere
Plumbul metalic i compuii si sunt toxici; ei pot ptrunde n organism prin
ingerare, inhalare, sau resorbie prin piele (otrvirea acut cu plumb este rar datorat
slabei resorbii). Asimilarea continu de cantiti mici de plumb este de departe mai
periculoas. Iniial, plumbul este slab legat de eritrocite i doar o mic parte este
eliminat prin urin, majoritatea fiind acumulat n oase.
Dintre toi compuii organici ai plumbului, formele trialchilate prezint cel
mai puternic efect neurotoxic pentru mamifere. Dup asimilare, formele tetraalchilate
sunt rapid metabolizate la forme trialchilate.
n mediu, principala surs de compui organici ai plumbului o reprezint
folosirea lor ca ageni antioxidani pentru benzin. Ca rezultat al legislaiei, n multe
ri aceast surs de poluare este n scdere. Odat ptruni n atmosfer, compuii
tetraalchilici ai plumbului se descompun fotocatalitic, proces ce poate fi foarte rapid n
condiiile date. Produii de descompunere sunt compui ai plumbului tri-, di-,
monoalchilai. Plumbul este un element poluant omniprezent n toate zonele biosferei.
Rareori, apele naturale conin o concentraie mai mare de 5 g/L Pb, dar au
fost totui raportate i concentraii mai mari de plumb. O alt surs de plumb n apa de
la robinet o poate reprezenta i conductele de plumb prin care aceasta circul.
Pentru determinarea plumbului se poate aplica o metod colorimetric i
anume metoda cu ditizon, spectrometria de absorbie atomic cu flacr respectiv cu
atomizare electrotermic (cuptor de grafit), precum i spectrometria de emisie atomic
cu plasm cuplat inductiv. Spectrometria de absorbie atomic cu flacr prezint o
limit de detecie relativ ridicat, necesitnd aplicarea unui procedeu de extracie n
cazul analizei apei potabile n care se gsesc concentraii sczute de plumb.
Spectrometria de absorbie atomic cu atomizare electrotermic este mult mai
sensibil pentru concentraii sczute de plumb i nu necesit extracie. Spectrometria
de emisie atomic cu plasm cuplat inductiv prezint o sensibilitate similar cu cea a
spectrometriei de absorbie atomic cu flacr.
n aceast lucrare se prezint un procedeu de determinare a plumbului din
aerul unui loc de munc expus la aceast nox chimic prin metoda spectrometriei de
absorbie atomice cu atomizare electrotermic.
Reactivi i aparatur
Acid azotic 65 % suprapur (Aldrich), amonium dihidrogen fosfat (Merck), ap
distilat (conductivitate 4 Siemens/cm).
21
Mod de lucru
Se pornete compresorul de aer folosit pentru acionarea pneumatic a
spectrometrului. Se deschide butelia de argon i apoi se deschide circuitul apei de
rcire a cuptorului de grafit. Se cupleaz la reea spectrofotometrul cu absorbie
atomic i calculatorul. Se ncarc softul specific acestui instrument AA Win Lab.
Dup efectuarea unui test automat de verificare a aparatului, din biblioteca cu metode,
se alege metoda de determinare a plumbului bazat pe utilizarea cuptorului folosind
modificator de matrice (NH 4H2PO4). Se aprind lampa cu catod cavitar de plumb i
lampa de deuteriu (pentru corecia fondului) - se las s se nclzeasc o jumtate de
or.
n editorul metodei, se stabilesc: cantitatea de prob/standard injectat (25
L), cantitatea de modificator de matrice adugat (5 L) precum i poziia acestuia
pe tvia autosamplerului, poziia diluantului (HNO 3 0,2 %), numrul de replicate,
tipul dreptei de calibrare (linear/nonlinear), concentraiile standardelor folosite
pentru calibrare i poziia standardului cel mai concentrat din care prin diluare
automat se prepar celelalte standarde i programul cuptorului de grafit.
Programul de temperatur al cuptorului de grafit
25 L de blank/standard/prob sunt introduse n unitatea de atomizare i
temperatura este crescut treptat pentru a putea fi ndeprtat solventul i interferenii
ct mai complet posibil naintea atomizrii. n tabelul de mai jos este prezentat
programul de temperatur al cuptorului de grafit optimizat pentru determinarea
plumbului.
Cele cinci etape n programul de temperatur al cuptorului de grafit au
urmtorul rol:
1.2. - uscarea are loc dup introducerea probei n cuptor. Proba trebuie uscat la
o temperatur suficient de mic pentru a evita descompunerea ei. Pentru soluiile
apoase, pentru uscarea probelor, se aplic temperaturi de 100 140 C. Utilizarea
unei rampe de temperatur asigur creterea temperaturii ntr-un interval de timp
bine determinat. n cazul tuburilor de grafit cu platform integrat (cazul
prezentei lucrri), timpul corespunztor rampei de temperatur este mai scurt, un
23
timp mai lung se aplic n cazul atomizrii probei de pe pereii tubului. Dup
rampa de temperatur, cuptorul este meninut la temperatura de uscare selectat,
pn cnd uscarea este complet. Deoarece sunt utilizai doar civa microlitrii de
prob, timpul de meninere la temperatur constant este de sub 1 minut. n
timpul procesului de uscare, debitul de gaz intern este meninut la valoarea sa
maxim (250-300 mL/min) pentru purjarea din tub a solventului vaporizat
3. piroliza are ca scop volatilizarea componenilor organici i anorganici ai
matricei n mod selectiv fa de prob, lsnd elementul de analizat ntr-o matrice
mai puin complex pentru a fi analizat. n tipul acestei etape, temperatura este
crescut ct de mult posibil pentru a putea volatiliza componentele matricei, dar
pn la temperatura la care ar apare pierderea analitului. Debitul de gaz intern
este meninut la 250-300 mL/min pentru a indeprta componentele volatilizate ale
matricei.
4. atomizarea are ca scop producerea populaiei de atomi corespunztoare
elementului de analizat, care s permit msurarea absorbiei atomice. n aceast
etap, temperatura este crescut pn la punctul la care s aib loc disocierea
speciilor moleculare volatilizate. Temperatura de atomizare este o caracteristic a
elementului analizat.Pentru atomizare este de dorit ca temperatura s fie crescut
ct de repede posibil. De aceea, timpul corespunztor rampei de temperatur va fi
setat la valori minime care s asigure cea mai mare vitez de cretere a
temperaturI. La nceputul acestei etape, este activat operaia de citire a
spectrometrului, ncepndu-se msurarea absorbiei radiaiei luminoase.
5. curirea dup atomizare, cuptorul de grafit poate fi nclzit la temperaturi
mai mari, pentru a fi ars orice reziduu al probei care poate rmne n cuptor
Etapa
#
Temperatura
( C)
Rampa
(timp-s)
1
2
3
4
5
6
100
140
700
1800
2600
5
15
10
0
1
Meninere
temp.
constant
(s)
20
15
20
5
3
Debit gaz
intern
(mL/min)
Tipul gazului
(norm/spl.)
Citire
250
250
250
0
250
250
N
N
N
N
N
N
Nu
Nu
Nu
Da
Nu
Nu
(1)
c Pb (mg / m 3 )
Vdil * c
Vaer ( L) * 1000
(2)
c Pb (mg / m 3 )
Vdil * c
D * t *1000
(3)
26
I.8.
Introducere
Metalele toxice nu sunt biodegradabile, avnd tendina de a se acumula n
organele vitale ale omului unde acioneaz o perioad lung de timp. Poluarea
mediului cu metale toxice apare datorit efluenilor industriali, precum i a
deversrilor de ape reziduale provenind de la diferite surse.
Mercurul este un element n urme, care n cantiti mici poate produce efecte
toxice severe. n cazul oamenilor care nu sunt expui la mercur prin intermediul
meseriilor lor, cea mai probabil surs de acest element o reprezint dieta. Cantitatea
raportat de mercur coninut de alimente este relativ sczut, aproximativ 0,02 g/g,
dar exist o variabilitate mare a acesteia funcie de tipul de produs, de originea sa
geografic, precum i de tehnicile industriale i agricole din zona respectiv. Mercurul
se acumuleaz prin intermediul lanului trofic, n special n mediul acvatic. Compuii
organici i anorganici ai mercurului pot fi prezeni n apa natural i se pot concentra
n diferite organisme, cum sunt petii. De aceea, petii pot avea un coninut mai mare
de mercur comparativ cu alte alimente, dar este dificil de raportat o concentraie medie
a acestui element, deoarece aceasta depinde de specie, vrst, mrime i calitatea apei
n care triesc.
Dintre toate metodele pentru determinarea mercurului, absorbia atomic cu
vapori reci (CVAAS) a devenit probabil cea mai utilizat tehnic de analiz fiind
caracterizat prin sensibilitate i selectivitate deosebite.
n aceast lucrare este descris o metod de analiz bazat pe spectrometria de
absorbie atomic cu vapori reci (CVAAS) utilizat pentru determinarea mercurului
din mediul unui loc de munc expus la aceast nox chimic, precum i dintr-o prob
de pete.
Reactivi i aparatur
Clorur stanoas (Fluka), acid clorhidric (Baker), permanganat de potasiu
(Spolek/Cehia), acid sulfuric (Fluka), clorhidrat de hidroxilamin (Reactivul); ap
distilat (conductivitatea 4 S/cm).
Acid azotic 65% fr Hg (Fluka), Acid sulfuric 98% fr Hg (Fluka).
Amestec acid: acid azotic fr Hg 1,5 % i acid sulfuric fr Hg 1,5 %.
Soluie absorbant pentru vaporii de mercur: 2,4 x 10 -2 % KMnO4 n H2SO4 4 %.
[15]
SnCl2 5 % n HCl 10 % .
Soluie de permanganat de potasiu 6%.
27
(1)
c Hg ( mg / m 3 )
Vsol.abs * c
Vaer (L) * 1000
(2)
c Hg (mg / m 3 )
Vsol.abs * c
D * t * 1000
(3)
c Hg (mg / kg )
Vsol.finala (mL) * c
m proba (g) * 1000
(4)
Conc. determ.
* 100
Conc. calc.
(5)
I.9.
35
36
I.10.
Introducere
Aceast lucrare de laborator prezint o nou metod de determinare a
pesticidelor organo-fosforice i carbamice din ap utiliznd electrozi serigrafiai
modificai cu Prussian Blue.
Pesticidele se numr printre cei mai importani poluani ai mediului datorit
toxicitii mari i prezenei lor extinse n mediul nconjurtor. De la cel de al Doilea
Rzboi Mondial, a crescut mult utilizarea pesticidelor n agricultur odat cu creterea
produciei mondiale de alimente. n acest context, emisiile de pesticide din timpul
producerii lor, i mai important prezena reziduurilor acestor substane i a
metaboliilor lor n alimente, ap i sol a devenit o problem social de larg interes [1].
Printre numeroasele metode utilizate pentru determinarea pesticidelor, metodele
cromatografice cum ar fi Cromatografia de Lichide de nalta Performan (HPLC) sau
Cromatografia de gaze (GC) sunt utilizate ca metode de referin [2,3]. Metodele
enzmatice au fost adoptate ca alternative la metodele clasice pentru determinarea mai
simpl i mai rapid a unor poluani ai mediului [4,5].
Utilizarea enzimelor colinesterazice pentru determinarea bazat pe inhibiie a
poluanilor au demonstrat un mare potenial pentru analiza de screening a mediului [68]. Colinesteraza exist n sistemul nervos i n celulele roii ale sngelui i joac un
rol fiziologic important, fiind responsabil de hidroliza acetiltiocolinei, un
neurotransmitor ce opereaz la nivelul sinapselor nervoase. Reacia de hidroliz
enzimatic a acetiltiocolinei n prezena acetilcolinesterazei (AChE) este urmtoarea:
AChE
CH3COO(CH2)2N+(CH3)3Cl- + H2O
HO(CH2)2N+(CH3)3Cl- + O2
CH3COS(CH2)2N+(CH3)3Cl- + H2O
CH3COOH + HS(CH2)2N+(CH3)3Cl-
Prepararea electrozilor
Electrozii serigrafiai utilizai sunt preparai cu o main de serigrafiat 245
DEK (Weymouth, Anglia), utiliznd pentru imprimarea electrodului de lucru o
cerneal pe baz de grafit (Electrodag 421) produs de Acheson Italiana (Milano,
Italia). Serigrafierea se realizeaz pe un suport flexibil format dintr-un film de
poliester (Autostat HT5) obinut de la Autotype Italia (Milano, Italia). Electrozii sunt
produi n folii de cte 20. Diametrul electrodului de lucru este de 0,3 cm, ceea ce
determin o arie geometric aparent de 0,07 cm 2, contra-electrodul este pe baz de
cerneal grafitic, iar electrodul de referin este de clorura de argint.
Modificarea electrozilor cu Prussian Blue
Electrozii serigrafiai sunt modificai prin plasarea unei picturi (10 L) de
soluie precursor pe suprafaa electrodului de lucru. Aceast soluie este obinut prin
amestecarea a 5 L de FeCl3 0,1 M preparat n HCl 10 mM cu 5 L de K3[Fe (CN) 6]
0,1 M preparat n HCl 10 mM. Pictura trebuie plasat cu atenie numai pe suprafaa
electrodului de lucru astfel nct s se evite formarea PB pe electrodul de referin sau
pe contra-electrod, fapt care ar duce la creterea apreciabil a rezistenei interne a
sistemului. Dup 10 minute, electrozii sunt cltii cu 3 mL HCl 10 mM. Electrozii sunt
apoi lsai 90 min n etuv la 100 C pentru a obine un strat activ i stabil de PB.
Electrozii modificai cu PB se pstreaz uscai, la temperatura camerei i la ntuneric.
Imobilizarea acetilcolinesterazei
Acetilcolinesteraza a fost imobilizat pe suprafaa electrozilor modificai cu
PB utiliznd metoda legrii ncruciate. Astfel, 4 L de amestec glutaraldehid 1 % n
ap, Nafion 5 % n alcool, BSA 3 % n ap i AChE 0,01 U au fost lsai s se usuce
aproximativ 30 min pe suprafaa electrodului de lucru. Dup preparare biosenzorii au
fost pstrai n tampon la 4 C.
Procedura de determinare a pesticidelor
Determinarea pesticidelor se bazeaz pe msurarea activitii enzimatice
nainte i dup punerea n contact a biosenzorului cu proba. Msurarea activitii
enzimatice nainte de punerea n contact cu proba se realizeaz dup cum urmeaz:
1) 50 L de tampon sunt plasai pe electrod, dup care se aplic un potenial de +
200 mV vs. Ag/AgCl i se nregistraz curentul (aprox. 5 nA). Dup efectuarea
msurtorii soluia tampon este ndeprtat de pe suprafaa biosenzorului.
2) 50 L de tampon de lucru ce conine tiocolin 3 mM sunt adugai pe electrod i
se nregistreaz curentul (aproximativ 80 nA). Curentul obinut ce se datoreaz
oxidrii ticolinei se obine fcnd diferena dintre curentul nregistrat n etapa 2
minus cel nregistrat n etapa 1. Valoarea obinut corespunde enzimei neinhibate
(I0).
3) Biosenzorul este splat cu soluie tampon i se incubeaz timp de 30 min n 5 mL
prob, sub agitare. n timpul incubrii AChE este inhibat dac n prob exist
pesticide.
4) Dup aceasta, biosensorul este splat cu tampon i se repet a doua etap,
nregistndu-se activitatea enzimatic rezidual.
39
Curentul datorat oxidrii ticolinei, produs dup inhibarea enzimei, este dat de
diferena dintre curentul nregistrat n etapa 4 minus cel nregistrat n etapa 1 (I1).
Inhibiia procentual se calculeaz pe baza urmtoarei formule:
I%= [(I0-I1)/I0]100
Reactivarea biosensorului
Acest tip de senzori sunt de unic folosin, dar este posibil msurarea
pesticidelor de mai multe ori utiliznd acelai electrod. Practic, este posibil utilizarea
aceluiai biosensor reactivnd enzima cu piridin-2-aldoxim methocolur (2-PAM).
Dup fiecare prob analizat, biosensorul se spal cu ap distilat i se relizeaz
regenerarea lui prin plasarea pe acesta a unei picturi de soluie 2-PAM 5 mM timp de
30 sec. Apoi, biosensorul este splat i o alt pictura de soluie tampon ce conine
substratul enzimatic este adguat pe suprafaa senzorului pentru msurarea activitii
enzimei regenerate. Acest procedeu permite utilizarea unui biosenzor de mai multe ori.
Pentru msurarea unei concentraii necunoscute de pesticid prezent n ap este
necesar parcurgerea tuturor celor patru etape i respectiv, calcularea inhibitiei
procentuale. Concentraia pesticidului se calculeaz folosind curba de calibrare ce ar
trebui obinut nainte de analizarea propriu-zis a probelor.
40
1.
2.
Modul de lucru
Curba de calibrare este necesar pentru msurarea i calcularea inhibiiei pentru
urmtoarele concentraii de paraoxon: 0, 10, 20, 30, 40 i 50 ppb. Soluiile de
paraoxon se prepar n ap distilat i se urmeaz etapele 1-4 ale procedurii
prezentate anterior. Gradul de inhibiie ale biosenzorului n funcie de
concentraia paraoxonului se reprezint grafic i se calculeaz parametrii
dependenei lineare rezultate.
Analiza probei i calcularea concentraiei pesticidului. Dou probe de ap
potabil n care a fost adugat paraoxon vor fi analizate pentru determinarea
concentraiei pesticidului. Inhibiia enzimatic calculat pentru fiecare prob va fi
introdus n ecuaia calculat anterior i se calculeaz concentraia paraoxonului
din fiecare prob.
Bibliografie
1. FAO, Agriculture towards 2010, in: C 93/94 Document of 27th Session of the FAO
Conference, Rome, 1993.
2. Standard methods for examination of water and wastewater 20th ed.; American
Public Health Association; Washington,1998; pp 6/85-6/90.
3. Liska I.; Slobodnik J. J.Cromatogr.A, 1996, 733, 235-258.
4. Preininger C.; Wolfbeis O.S. Biosens. Bioelectron, 1996, 11, 981-990.
5. Bagirova, N.A.; Shekhovtsova, T. N.; van Huystee, R. B., Talanta, 2001.
6. Bernabei M.; Chiavarini S.; Cremisini C.; Palleschi G., Biosens. Bioelectron, 1993,
8, 265-271.
7. Cremisini, C.; Di Sario, S.; Mela, J.; Pilloton, R.; Palleschi, G., Anal. Chim. Acta,
1995, 311, 273-280.
8. Hart A.L.; Collier W.A.; Janssen D., Biosens. Bioelectron, 1997, 12, 645-654.
9. Sol S.; Merkoci A.; Alegret S., Crit. Rev. in Anal. Chem., 7, 2003, 33(2), 9-126.
10. Dne A.F.; Badea M.; Aboul-Enein H.Y., Biopolymers (Biospectr.) 2000, 57, 3742.
11. Poganik L.; Franko M., Biosens. Bioelectron, 1999, 14, 569-578.
12. Ellman, G.L.; Courtney K.D.; Andres V; Featherstone R.M., Biochem. Pharmacol,
1961, 7, 88-95.
13. Ricci, F.; Arduini, F.; Amine, A.; Moscone, D.; Palleschi, G., J. Electroanal. Chem.
2004, 563, 229-237.
14. Ricci, F.; Amine, A.; Tuta C.; Ciucu A., Lucarelli F.; Palleschi, G., Anal. Chim.
Acta 2003, 485, 111-120.
41
I.11.
Introducere
Aceast metod este folosit pentru determinarea acizilor tari n apele de
precipitaii pentru un domeniu de concentraii cuprins ntre de 10 -5i10-3 M. Limita de
concentraie inferioar este apropiat de concentraiile din apele de adncime ce nu
conin minerale alcaline.
Principiul metodei
n cazul metodei de titrare coulometric (Liberti i colab., 1972), acidul este
titrat la curent constant cu ioni hidroxil eliberai de un electrod de platin, iar
electrodul auxiliar este un electrod de argint/bromur de argint. Reacia total este:
Br- + Ag + H2O AgBr + OH- + H2
Tensiunea electromotoare (EMF) a perechii de electrod de sticl electrod de
calomel este citit la anumite intervale de timp i rezultatele sunt folosite pentru
construirea unei diagrame Gran (Gran, 1952; Rosotti and Rosotti, 1965), din care se
determin punctul final al titrarii prin extrapolarea prii lineare a curbei.
Singura modificare ce se impune este adugarea la prob a unui volum
cunoscut i constant de acid nainte de titrare, pentru a facilita titrarea probelor slab
acide sau bazice fr interferene din partea dioxidului de carbon.
Reactivi i aparatur
n vederea realizrii analizelor sunt folosii numai reactivi de puritate
analitic. Apa utilizat pentru diluare i spare trebuie s fie dublu-distilat sau
deionizat i apoi distilat.
Azot gazos (N2) de concentraie 99,9%;
Bromura de potasiu (KBr);
Acid sulfuric (H2SO4) de concentraie 0,05 M;
Soluie tampon de pH = 4,00;
Soluie I: soluie de KBr de concentraie 1 M i soluie de H 2SO4 de concentraie
2,5x10-3 M. Se transfer 120 g KBr i exact 50 mL de soluie de H 2SO4 0,05M
ntr-un balon cotat de 1000 mL. Se aduce la semn cu ap.
pH-metru cu scala extins (Radiometer PHM 26 sau un instrument cu specificaii
similare);
o surs de curent constant (2-10 mA, ajustabil);
42
Mod de lucru
Se pornesc toate aparatele i se las o jumatate de or astfel nct acestea s
intre n regim optim de lucru. Se regleaz pH-metrul la pH 4,00, utiliznd soluia
tampon. Se transfer 50 mL de proba n instalaia de titrare termostatat i se adaug 1
mL de soluie I. Se pornete barbotarea cu azot i se ajusteaz fluxul astfel nct
soluia s fie agitat n mod continuu. Nu trebuie s existe bule care s perturbe soluia
dintre electrodul sensibil i electrodul de lucru. Se msoar pH-ul soluiei. Dac pH-ul
probei este mai mare de 5.6, este necesar adugarea unui volum mai mare de 1 mL de
soluie I.
Se ateapt pn cnd pH-ul rmne constant. Se comut pH-metrul pentru a
citi n milivoli (scala 0240 mV cu electrodul de sticl pozitiv) i se pornete curentul
de electroliz.
Se citete potenialul electrodului de sticl fa de electrodul de calomel la
fiecare 20 de secunde i se continu pn cnd potenialul i modific semnul (n jurul
valorii de pH 8). Se oprete electroliza.
Se traseaz diagrama Gran, Y, la 25C (vezi tabelul de mai jos) fa de timpul
de electroliz (n secunde). Diagrama intersecteaz abscisa n punctul de echivalen,
te (F-constanta Faraday, R-constanta universal a gazelor, T-temperatura absolut).
43
Funcia Gran.
EmV
EmV
EmV
EmV
1,04
41
4,93
81
23,4
121
111
1,08
42
5,13
82
24,4
122
115
1,14
43
5,33
83
25,3
123
120
1,17
44
5,55
84
26,3
124
125
1,22
45
5,77
85
27,4
125
130
1,26
46
5,98
86
28,4
126
135
1,31
47
6,22
87
29,6
127
140
1,36
48
6,47
88
30,7
128
146
1,42
49
6,75
89
32,0
129
152
10
1,48
50
7,00
90
33,3
130
158
11
1,54
51
7,28
91
34,6
131
164
12
1,60
52
7,57
92
36,0
132
171
13
1,66
53
7,87
93
37,4
133
177
14
1,73
54
8,19
94
38,8
134
185
15
1,80
55
8,51
95
40,4
135
192
16
1,90
56
8,85
96
42,0
136
199
17
1,94
57
9,20
97
43,6
137
207
18
2,02
58
9,57
98
45,3
138
216
19
2,10
59
9,94
99
47,2
139
224
20
2,18
60
10,3
100
49,1
140
233
21
2,26
61
10,7
101
51,0
141
242
22
2,36
62
11,1
102
53,1
142
252
23
2,45
63
11,6
103
55,2
143
262
24
2,54
64
12,1
104
57,4
144
272
25
2,65
65
12.5
105
59,7
145
283
44
EmV
EmV
EmV
EmV
26
2,75
66
13,0
106
61,9
146
294
27
2,86
67
13,5
107
64,4
147
306
28
2,97
68
14,1
108
67,0
148
318
29
3,09
69
14,6
109
69,7
149
331
30
3,21
70
15,2
110
72,4
150
344
31
3,34
71
15,8
111
75,3
151
351
32
3,48
72
16,5
112
78,3
152
371
34
3,61
74
17,1
113
81,5
153
386
34
3,75
74
17,8
114
84,7
154
402
35
3,90
75
18,5
115
88,1
155
418
36
4,06
76
19,3
116
91,6
156
434
37
4,23
77
20,0
117
95,1
157
452
38
4,39
78
20,8
118
98,9
158
470
39
4,56
79
21,7
119
103
159
489
40
4,74
80
22,5
120
106
160
507
Exprimarea rezultatelor
Concentraia acizilor tari din prob este calculat prin formula:
sau
Bibliografie
1. Gran, G. (1952) Determination of the equivalence point in potentiometric titrations.
Part I. Analyst, 77, 661-671.
2. Liberti, A., Possanzini, M. and Vicedomini, M. (1972) The determination of the
non-volatile acidity of rain water by a coulometric procedure. Analyst, 97, 352-356.
3. Rosotti, F.J.C. and Rosotti, H.J. (1965) Potentiometric titrations using Grans plots.
Chem. Educ., 42, 375-378.
46
47
I.12.
Introducere
Hidrocarburile aromatice sunt de o importan industrial deosebit; ele
reprezint materia prim pentru mai mult de 60% din cantitatea de mase plastice,
elastomeri i fibre sintetice, i de asemenea pentru vopseluri, insecticide, medicamente
etc. n plus, acestea se gsesc n combustibilii obinui din petrol. Datorit acestora, i
putem gsi ca ageni de poluare atmosferic n concentraii foarte diferite. Cele mai
importante hidrocarburi aromatice sunt benzenul, toluenul i diferii xileni (izomeri
micti), urmai de naftalin i antracen.
Principalele surse de benzen sunt fraciile uoare de gudron de crbune i
fraciile aromatice extrase din benzin. Toluenul se obine din aceleai surse ca i
benzenul i poate fi separat de acesta i de xilen prin distilri succesive. Mai mult de
50% din toluenul produs se transform n benzen prin hidro-dealchilare. O parte din
fraciile cu coninut mare de toluen se adaug benzinei pentru a crete cifra octanic.
Aceste motive fac ca benzenul, toluenul i xilenul s se gseasc n atmosfer drept
ageni de poluare. n general, acetia sunt analizai prin cromatografia de gaze i
cantitatea total este exprimat ca BTX (g de benzen, toluen sau xilen/m3).
Cromatografia de gaze (GC) este o tehnic de separare foarte folosit pentru a
rezolva problemele din diverse domenii, printre care i analizele de mediu. La un
moment dat, ea a fost folosit ca o tehnic de control, prezentnd rezoluie foarte bun
pentru compuii organici volatili.
Principiile teoretice de separare n cromatografia de gaze nu difer foarte mult
de cele ale cromatografiei n general. n GC, faza mobil este un gaz, n timp ce faza
staionar poate fi un adsorbant solid sau un lichid reinut pe un suport solid (coloane
mpachetate) sau impregnat pe pereii unei coloane capilare (coloana deschis).
Pentru a obine o separare bun i cromatograme cu rezoluie nalt, este
necesar un control strict al temperaturii n cuptor, al debitului fazei mobile i o alegere
potrivit a fazei mobile i a celei staionare, precum i un sistem de detecie adecvat.
Scopul lucrrii
Pentru a nva folosirea corect a standardelor i a tehnicilor instrumentale de
nalt performan.
Pentru familiarizarea cu cromatografia de gaze i performanele acesteia.
Pentru a identifica i a determina benzenul, toluenul i xilenul din probe de
aer.
48
Partea experimental
A) Reactivi i aparatur
Sticlrie i aparatur
Set de prelevare a probelor
Cartue adsorbante
Cromatograf de gaze
Coloan capilar nepolar
Detector FID
Software pentru procesarea datelor
Balan analitic
Tuburi de 19 mL prevzute cu dop
Baloane cotate de 25 mL
Pipete de 1, 2, i 4 mL
Microsering, 10 L
Reactivi
Pentan
Standarde pentru GC:
Benzen (standard)
Toluen (standard)
Xilen (standard)
B) Prepararea soluiilor
Soluia stoc A. ntr-un balon cotat de 25 mL se introduc 20 mL pentan, se
acoper etan i se cntrete. Apoi se adaug 500 L benzen, se acoper
imediat i se cntrete din nou. Se adaug rapid 500 L toluen. Se
ndeprteaz balonul de pe balan i se aduce la semn cu pentan.
Soluia standard B. ntr-un tub se introduc 9 mL pentan i apoi 1 mL
soluie stoc A.
Not: se acoper imediat balonul i se lucreaz la ni.
1)
2)
3)
4)
5)
C) Modul de lucru
Prelevarea i pre-tratamentul probelor. Cu ajutorul echipamentului de prelevare,
se introduce n cartuul adsorbant un volum de aer msurat exact (10 L), astfel
nct concentraia de benzen, toluen i xilen s se ncadreze n domeniul liniar de
calibrare. Dac este necesar se fac ajustrile de rigoare.
Extracia. n laboratorul analitic coninutul din tubul de prelevare se trateaz cu
100 mL pentan pentru a extrage compuii organici.
Filtrarea. Extractul este filtrat pe un filtru de Naylon de 0,45 m pentru a elimina
particulele i pentru a se evita introducerea acestora n coloana cromatografic.
Calibrarea. Soluii standard de benzen, toluen i xilen. Folosind tuburi acoperite,
o serie de soluii standard de benzen, toluen i xilen se prepar prin diluarea unor
volume de 1,0; 2,0; 3,0 i 4,0 mL soluie B n pentan pn la 10 mL.
Not: se acoper imediat balonul i se lucreaz la ni.
Analiza. Analiza cromatografic se realizeaz innd cont de urmtoarele condiii:
Volumul de injectare: 1L;
Coloana: HP5 de tip fenilmetilsilicon (30m x 0,32 mm x 0,25 m);
Gazul purttor: heliu, debitul 1,5 mL min-1;
Temperatura injectorului 230 C;
49
Scriei:
500
Standard n
Volumul de soluie (n mL)
g L-1 benzen
g L-1 toluen
g L-1 xilen
500
500
Toluen g/L
50
ria
Xilen g/L
ria
ntrebri
Explicai problemele referitoare contaminrii datorate compuilor organici,
originile lor, efectele i soluiile posibile de combatere a acestora.
Dai exemple de diferite scheme de prelevare a probelor pentru compuii
organici.
Desenai schema unui cromatograf de gaze.
Ce efect are temperatura din cuptor asupra separrii acestor compui?
51
I.13.
Introducere
.
Monitorizarea compusilor organici volatili (VOC) n probe de mediu este
realizat fie prin prelevarea unor probe de aer i analiza ulterioar a acestora n
laborator, fie prin determinarea acestora chiar la punctul de recoltare folosind un gaz
cromatograf portabil (procedeu descris n aceast lucrare).
Analiza compuilor organici volatili din atmosfer se realizeaz uzual, fie prin
adsorbia acestora pe cartue cu umpluturi specifice, urmat de desorbie termic i
analiza lor cu ajutorul unui gaz cromatograf prevzut cu detector MS, FID, sau ECD,
fie prin prelevarea unor probe de aer n recipieni metalici urmat de presurizarea
acestora cu un gaz inert i analiza gaz cromatografic ulterioara a amestecului.
Ambele variante de analiz presupun o intervenie a operatorului uman,
crescnd astfel posibilitatea apariiei unor erori sistematice ce se reflect n exactitatea
analizei.
Folosirea unui gaz cromatograf portabil prevzut fie cu detector FID, PID sau
ECD nu necesit intervenia operatorului ntre etapele de prelevare i analiz,
simplificnd foarte mult procedeul de lucru i eliminnd erorile inerente interveniei
operatorului n faza de pregtire a probei.
52
Reactivi i aparatur
Gaz purttor (azot de puritate cromatografic, min 99,999%).
Butelie pentru calibrarea GC portabil: butelie SCOTTY de 48 L i 300 psi
(BTEX Gas Mix), constnd din ase analii cu concentraia n azot de 10 ppm
fiecare, dup cum urmeaz: benzen, etilbenzen, toluen, m-xilen, o-xilen, p-xilen.
Determinrile de compui organici volatili au fost efectuate folosind
gaz cromatograful portabil Photovac, model Voyager, ce are n
configuraie: dou sisteme termostatate de injecie (o valv automat de
injecie gaze, un port de injecie gaze folosind o sering de gaze), un
cuptor de coloane ce asigur termostatarea a patru coloane capilare
montate din fabric n interiorul acestuia (o coloan oarb pentru
analiza cantitii totale de compui organici volatili, o coloan pentru
compui organici volatili uori, o coloan pentru compui organici
volatili medii i o coloan pentru compui organici volatili grei), doi
detectori gaz cromatografici legai n paralel i cu achiziie simultan de
date (PID- detector de fotoionizare i ECD- detector cu captur de
electroni) i sistemul ncorporat de procesare/stocare date. Gaz
cromatograful portabil este prevzut cu control electronic de debit
Modul de lucru
nainte de a ncepe operarea cu gaz cromatograful portabil, este necesar ca
acumulatorul su s fie ncrcat.
Se ncarc cilindrul intern al cromatografului cu gaz purttor (azot de puritate
99,999%) prin conectarea portului de umplere al instrumentului prin intermediul unui
regulator de presiune, la o butelie de azot de 200 atm. Umplerea cu gaz purttor a
cilindrului intern al cromatografului asigur o autonomie a acestuia de 7 ore, timp n
care se pot efectua pe teren msurtori gaz cromatografice.
Dup alimentarea cu gaz purttor, se pornete cromatograful prin apsarea
tastei On/Off, fiind necesar un interval de timp de aproximativ o jumtate de or
pentru stabilizarea acestuia i intrarea n parametrii optimi de lucru, moment indicat de
53
vizualiza lista compuilor, iar la finalizarea analizei este necesar a se verifica dac toi
compuii de calibrare sunt prezeni n aceast list. Apsnd ENTER MENU
LIBRARY- CALL se accept ultima analiz efectuat ca fiind corespunztoare
calibrrii gaz cromatografului portabil .
I.14.
Introducere
Trihalometanii (CHCl3, CHCl2Br, CHClBr2, CHBr3) se formeaz n ap pe
parcursul procesului de clorinare. Sunt posibile mai multe mecanisme de formare,
dintre care menionm pe cel care se pornete de la produii polifenolici de degradare
ai acidului fulvic din compoziia substanelor humice naturale.
Concentraia trihalometanilor n ape este monitorizat datorit rolului ce li se
atribuie n procesele de carcinogenez, concentraia maxim admis fiind de 100 g/L
(respectiv 30 g/L CHCl3).
Mod de lucru
Prepararea umpluturii coloanei cromatografice
Faza staionar utilizat este squalanul (5,6,10,15,19,23-hexametilen
tetracosan), avnd punctul de fierbere la 375 C i densitatea 0,805 g/cm 3.
CH3
CH3
CH (CH2)3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH (CH2)3 CH (CH2)4 CH (CH2)3 CH (CH2)3 CH
CH3
56
H2O, H+
OH
OH
Si O Si
Cl
Cl
CH3 Si CH3 CH3 Si CH3
Si
O
Si
2 Cl
CH3
Si Cl
CH3
a)
57
b)
-
soluia stoc de lucru se obine prin diluare 1/25 a soluiei stoc cu alcool metilic.
Se obin n acest mod concentraii ale trihalometanilor de ordinul ctorva zeci de
g/L.
ntr-un recipient cu capacitatea de 10 mL, confecionat din polipropilen i al
crui capac este prevzut cu un septum din cauciuc siliconic, se introduc 4 mL
ap distilat, 5 L soluie etalon de lucru (cu ajutorul unei microseringi) i 1 mL
pentan de puritate cromatografic.
vasul se agit timp de 4 minute.
se ateapt separarea fazelor.
cu ajutorul unei microseringi, se preia din stratul organic i se injecteaz n
coloan.
Modul de separare al trihalometanilor din ape:
4 mL din prob se introduc n vasul de extracie prezentat anterior. Se adaug 1
mL pentan de puritate cromatografic i se face extracia; se preiau 3 L din
stratul organic i se injecteaz n coloan
dac proba de ap conine clor liber se adaug cteva granule de tiosulfat de
sodiu, apoi se procedeaz la extracia trihalometanilor n pentan.
Prelucrarea rezultatelor
Aspectul unei cromatograme este prezentat n figura urmtoare:
Aria unui pic se obine prin nmulirea nlimii picului cu limea acestuia la
0,607 din nlime.
Concentraiile necunoscute se afl din relaiile:
A eTHM ...................c eTHM
x
A THM
.................... x
x
unde:
x
A THM
c eTHM
A eTHM
THM trihalometan
c eTHM concentraia etalonului n trihalometanul respectiv.
59
60
I.15.
Introducere
Fenolul i fenolii substituii reprezint produse secundare comune multor
procese industriale. La concentraii de ordinul ppb-urilor, n condiiile din mediu n
funcie de temperatur i pH, aceti compui pot persista mai multe zile sau sptmni.
S-a demonstrat c fenolii sunt toxici pentru majoritatea organismelor acvatice i chiar
i la concentraii sczute au un efect advers asupra gustului i mirosului apei. De
aceea, n cazul n care diferite tipuri de ape urmeaz s fie folosite ca surse de ap
pentru consum uman, se impune verificarea contaminrii lor cu aceti poluani
organici. n Comunitatea European, concentraia maxim permis pentru diferiti fenoli
n apa potabil este deosebit de mic. n aceast situaie, se impune utilizarea unei
metode analitice care s asigure selectivitate i sensibilitate ridicate.
n aceast lucrare, este prezentat o metod de determinare a fenolilor din ape
folosind un procedeu de preconcentrare prin extracie selectiv a acestor compui din
ap pe cartue adsorbante i determinare apoi a fenolilor extrai de pe cartu prin
cromatografie de lichide de nalt performan cu detecie n UV.
Reactivi i aparatur
Acetonitril de puritate HPLC (Riedel de Haen); ap de puritate HPLC (Fluka),
metanol de puritate HPLC (Fluka), acid acetic (Aldrich).
Cartu SPE de preconcentrare: Supelclean ENVI-Chrom P(Supelco)- copolimer
stiren-divinil benzen ( dimensiunea particulelor: 80-160 m; dimensiunea porilor:
110-175 ).
Standard de fenoli: EPA 604-M Phenols Mix (Supelco)- format dintr-un amestec
preparat n metanol de 11 analii, aflai la diferite concentraii: fenol (500 g/mL);
4-nitrofenol (2500 g/mL); 2,4-dinitrofenol (1500 g/mL); 2-clorofenol (500
g/mL); 2-nitrofenol (500 g/mL); 2,4-dimetilfenol (500 g/mL); 4,6-dinitro-ocrezol(2500 g/mL); 2,4-diclorofenol (500 g/mL); 4-cloro-m-crezol (2500
g/mL); 2,4,6-triclorofenol (1500 g/mL); pentaclorofenol (2500 g/mL).
Standard de fenoli: EPA 604-S Phenols Mix (Supelco)- format din 11 soluii de
fenoli individuali, cu concentraia de 500 mg/L preparate n metanol, cu volum de
1 mL- fenol; 4-nitrofenol; 2,4-dinitrofenol; 2-clorofenol; 2-nitrofenol; 2,4dimetilfenol; 4,6-dinitro-o-crezol; 2,4-diclorofenol; 4-cloro-m-crezol; 2,4,661
Fenol
4-Nitrofenol
2,4-Dinitrofenol
2-Clorofenol
2-Nitrofenol
2,4-Dimetilfenol
4,6-Dinitro-ocrezol
2,4-Diclorofenol
4-Cloro-mcrezol
2,4,6Triclorofenol
Pentaclorofenol
64
Conc.
comp.
fenolici n
standard
EPA 604M
(Supelco)
500 mg/L
2500 mg/L
1500 mg/L
500 mg/L
500 mg/L
500 mg/L
2500 mg/L
Conc. comp.
fenolici n
standard
EPA 604-M
(Supelco)
diluat 1:25
cu metanol
20 mg/L
100 mg/L
60 mg/L
20 mg/L
20 mg/L
20 mg/L
100 mg/L
Conc. comp.
fenolici n
standard
EPA 604-M
(Supelco)
diluat 1:50
cu metanol
10 mg/L
50 mg/L
30 mg/L
10 mg/L
10 mg/L
10 mg/L
50 mg/L
Conc. comp.
fenolici n
standard
EPA 604-M
(Supelco)
diluat 1:100
cu metanol
5 mg/L
25 mg/L
15 mg/L
5 mg/L
5 mg/L
5 mg/L
25 mg/L
Conc. comp.
fenolici n
standard
EPA 604-M
(Supelco)
diluat 1:125
cu metanol
4 mg/L
20 mg/L
12 mg/L
4 mg/L
4 mg/L
4 mg/L
20 mg/L
500 mg/L
2500 mg/L
20 mg/L
100 mg/L
10 mg/L
50 mg/L
5 mg/L
25 mg/L
4 mg/L
20 mg/L
1500 mg/L
60 mg/L
30 mg/L
15 mg/L
12 mg/L
2500 mg/L
100 mg/L
50 mg/L
25 mg/L
20 mg/L
Fenol
4-Nitrofenol
2,4-Dinitrofenol
2-Clorofenol
2-Nitrofenol
2,4-Dimetilfenol
4,6-Dinitro-ocrezol
2,4-Diclorofenol
4-Cloro-mcrezol
2,4,6Triclorofenol
Pentaclorofenol
Conc.
comp.
fenolici n
standard
EPA 604M
(Supelco)
500 mg/L
2500 mg/L
1500 mg/L
500 mg/L
500 mg/L
500 mg/L
2500 mg/L
Conc. comp.
fenolici n
standard
EPA 604-M
(Supelco)
diluat 1:25
cu metanol
1,2 g
6,0 g
3,6 g
1,2 g
1,2 g
1,2 g
6,0 g
Conc. comp.
fenolici n
standard
EPA 604-M
(Supelco)
diluat 1:50
cu metanol
0,6 g
3,0 g
1,8 g
0,6 g
0,6 g
0,6 g
3,0 g
Conc. comp.
fenolici n
standard
EPA 604-M
(Supelco)
diluat 1:100
cu metanol
0,3 g
1,5 g
0,9 g
0,3 g
0,3 g
0,3 g
1,5 g
Conc. comp.
fenolici n
standard
EPA 604-M
(Supelco)
diluat 1:125
cu metanol
0,24 g
1,2 g
0,72 g
0,24 g
0,24 g
0,24 g
1,2 g
500 mg/L
2500 mg/L
1,2 g
6,0 g
0,6 g
3,0 g
0,3 g
1,5 g
0,24 g
1,2 g
1500 mg/L
3,6 g
1,8 g
0,9 g
0,72 g
2500 mg/L
6,0 g
3,0 g
1,5 g
1,2 g
65
Reactivi i aparatur
Acetonitril, calitate HPLC, Rathburn Chemicals Ltd., No. RH 1016;
Metanol, Merck;
Tetrahidrofuran, Merck;
Ap distilat i deionizat cu ajutorul unui sistem de purificare a apei Millipore
MilliQ;
Iodur de potasiu de puritate analitic, Fluka;
Acid sulfuric, Merck;
Etanol;
Compui carbonilici;
2,4-dinitrofenil hidrazin, Fluka;
Pot fi utilizate urmtoarele instrumente i ehipamente:
Un sistem modular Hewlett-Packard 1050, ce const dintr-un sistem de
alimentare cu 4 solveni tip 79852A, un detector de tip diode array i un
schimbtor automat de probe;
Nova-Pak C18, particule de 4 m (No. 86344, Waters Associates), 150 mm * 3,9
mm d.i.);
Filtru precoloan in-line pentru ap;
Sticlrie de laborator i seringi.
Mod de lucru
Se umple o sering de 5 mL cu acetonitril. Se colecteaz extractul de prob
ntr-un balon de 3 mL. Se elueaz derivaii prin trecerea lent (1,5 mL/min) a
acetonitrilului prin cartu. Se oprete eluarea dup colectarea a 3 mL. Se transfer
aproximativ 0,5 mL de soluie de prob ntr-o fiol de 2 mL a schimbtorului automat
de probe i se sigileaz fiola. Proba este astfel pregtit pentru analiza prin HPLC.
Un volum de 10 L de soluie de prob sau de soluie standard este separat
prin utilizarea unui amestec cuaternar de metanol/ap/acetonitril/tetrahidrofuran. n
tabelul de mai jos este prezentat profilul gradientului utilizat.
66
% Tetrahidrofuran
% Acetonitril
% Apa
% Metanol
0,0
18,0
22,0
60,0
0,0
0,5
18,0
22,0
60,0
0,0
20,0
8,4
37,4
54,2
0,0
24,0
0,0
0,0
34,0
66,0
40,0
0,0
0,0
15,0
85,0
41,0
0,0
0,0
15,0
85,0
45,0
0,0
100,0
0,0
0,0
48,0
18,0
22,0
60,0
0,0
2.
3.
Prepararea hidrazonelor
Se dizolv 400 mg 2,4-dinitrofenilhidrazin n 2 mL acid sulfuric concentrat,
96%. Aceast soluie este apoi adugat, sub agitare, la 13 mL etanol de
concentraie 75%. Orice solid nedizolvat este nlturat cu ajutorul unei pipete
Pasteur.
Un volum corespunztor a 500 mg de compus carbonilic este transferat n 20 mL
etanol.
Soluia carbonilic (de la punctul 2) este apoi transferat ntr-o soluie de DNPH
(de la punctul 1) sub agitare. Dup 15 minute reacia are loc complet.
67
4.
5.
Calibrarea
Se prepar cte o soluie stoc din fiecare carbonilhidrazon prin dizolvarea a
aproximativ 5 mg (+/- 1%) n 100 mL acetonitril. Soluiile de calibrare sunt preparate
prin diluarea soluiilor stoc (1-2 g/mL).
Determinarea
Concentraia compuilor carbonilici n probe de aer, exprimat n g/m 3, este
dat de relaia:
68
69
I.17.
Introducere
Aceast metod permite evaluarea cantitativ a alachlorului din ap utiliznd
tehnica ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). Alachlorul face parte din
Grupa I a compuilor ce determin efecte acute pentru sntate i la concentraii mici.
Determinarea este simpl i poate fi adaptat la utilizarea ca metod de screening n
punctele de prelevare a probelor.
Tehnica ELISA direct implic de obicei imobilizarea anticorpilor prin simpl
absorbie pe suprafaa godeurilor plcilor de analiz, urmat de adugarea analitului
(alachlor) i a antigenului (analitului) marcat (alachlorului derivatizat marcat cu
peroxidaz (HRP)) care va ncepe s competiioneze pentru zonelor active ale
anticorpului (anticorp specific pentru alachlor din oaie, purificat).
Utiliznd un substrat mixt specific pentru antigenul marcat (n cazul nostru
exp: 3,3', 5,5' tetrametil benzidina i H 2O2 n soluie tampon acetat 50 mM, pH-ul
5,2), concentraia analitului reacionat poate fi evaluat indirect prin determinarea
concentraiei fraciei legate de marker.
Detecia spectrometric la 450 mm permite determinarea cantitativ a
alachlorului prin tehnica direct ELISA. Metoda este aplicat pentru determinarea
alachlorului n probele de ap (de exemplu: apa potabil, apa de suprafa, amestecuri
de ape reziduale menajere i industriale, ape subterane, apele reactive.
Acidul 2-[(2,6-dietil-fenil)(metoximetil)amino]-2-oxo-etan-sulfonic (ESA)
interfer (cross reacts) cu alachlorul n tehnica ELISA. ESA nu este detectat ca
standard HPLC sau GC [2].
Acetanilide nrudite cu alachlorul, pot interfera de asemenea n determinarea
alachlorului. Pentru a preveni eventualele erori n analize, reactivitatea ncruciat (the
cross reactivity) a anticorpului utilizat va fi evaluat pentru posibile interferene.
Aparatur
Micro plci cu 96 godeuri (NUNC, Brand Products).
Cititor universal pentru micro plci (EL800, Bio-tek Instruments INC)
Pipet automat cu mai multe capete (8 poziii).
71
2. Dup ce este ndeprtat soluia rezidual, placa este splat cu tampon fosfat
salin (PBS) (aprox. 200 L/ godeu).
3. 100 L din diferite concentraii ale antigenului marcat (n intervalul 1/100 0
antigen marcat diluat n PBS) este adugat pe a doua dimensiune (rndul de la
A la H) prin diluii succesive i se las la incubat timp de 5 ore.
4. Soluia rezidual este ndeprtat, placa este splat i uscat dup cum a fost
descris la pct. 2.
1. 200 L din soluia substrat este adugat n fiecare godeu. Dup un timp de
reacie de 10 min aceasta se stopeaz prin adugarea a 50 l de soluie 4 M de
H2SO4 i se incubeaz din nou pentru 25 30 min.
5. Absorbana este citit la 450 nm. Concentraiile optime ale antigenului marcat
i ale anticorpului sunt alese ca fiind cele care determin o legare la anticorp
de 40 70 % .
Experiment 2. Calibrarea analitului i analiza probelor reale
1. Placa este acoperit cum a fost descris la pasul 1, experiment 1, exceptnd numai
concentraia optim a anticorpului utilizat. Incubarea se realizeaz peste noapte la
4oC.
72
2. Soluia rezidual se ndeprteaz i placa este splat dup cum a fost descris la
pct. 2, experiment 1.
3. Calibrarea analitului (de la 0 ppm la 1 ppm alachlor) se face de-a lungul plcii cu
diferite matrici de probe, dup cum urmeaz:
4. Antigenul marcat este adugat astfel nct s fie atins concentraia optim, iar
volumul final n fiecare godeu s fie 100 l. Se incubeaz timp de 5 ore.
5. Soluia rezidual se ndeprteaz i placa este splat dup cum a fost descris la
pct. 2, experiment 1.
6. 200 l din soluia substrat este adugat n fiecare godeu. Dup un timp de reacie
de 10 min, aceasta se stopeaz prin adugarea a 50 l de soluie 4 M de H 2SO4 i
se incubeaz din nou pentru 25 30 min.
7. Absorbana este citit la 450 nm.
Raport
1. Descriei principiul de lucru al metodei.
2. Explicai cum se alege cel mai bun anticorp i cum se efectueaz diluiile
antigenului marcat.
3. Estimai IC50 intervalul dinamic i limita de detecie la determinarea
alachlorului utiliznd curba de diluie n soluie tampon i n prob.
4. Aproximai influena matricei n fiecare caz (prin calcularea raportului ntre
IC50, semnalul calibrrii n soluie tampon i semnalul corespunztor n cazul
diluiei cu urin.)
5. Estimai concentraia alachlorului ntr-o prob necunoscut.
73
74