Seminar 5

Spectrofotometrul de absorbtie moleculara in domeniul ultraviolet visibil

DESCRIERE
Spectrofotometrele de absorbtie moleculara in domeniul UV-vizibil-infrarosu apropriat (UVVis-NIR) produse de firma VARIAN si grupate in familia CARY au ca principiu de functionare
absorbtia unei radiatii monocromatice, emisa de catre sursa de radiatii (lampa/lampile) a aparatului, de
catre o proba formata din specii moleculare, radiatia incidenta facand parte din radiatiile
electromagnetice cu spectrul caracteristic in domeniul energetic caracteristic UV-Vis-NIR si au
constructii similare.
Astfel, sursele de radiatii ale aparatelor, constand in lampi cu halogen, xenon sau deuteriu emit
un fascicul luminos, care este incident pe fanta de intrare a monocromatorului format dintr-o retea
holografica de difractie, care il transforma in fascicule monocromatice. Fasciculul selectat strabate
apoi compartimentul in care se gaseste proba si, eventual, cuva de referinta, si este incident pe
suprafata unui fotodetector, ce transforma semnalul luminos in fotocurent, care este prelucrat
electronic si afisat sub forma unui spectru.
Concentratia substantei analizate se determina pe baza legii Lambert-Beer, conform careia
exista o relatie liniara intre absorbanta unei solutii si concentratia ei.
Lungimile de unda corespunzatoare varfurilor de absorbtie (Peak-uri), identifica un anumit element
molecular, iar inaltimea varfului este proportionala cu concentratia speciei respective. La tehnica
spectroscopica calitativa lungimea de unda a Peak-ului dintr-un spectru a unei substante necunoscute
se suprapune manual sau electronic cu peak-uri din atlase si se identifica corespunzator specia
moleculara. La tehnica spectroscopica cantitativa, ce are la baza legea Lambert Beer, se extrapoleaza
pe o curba de etalonare intensitatea maxima a absorbtiei unei specii cunoscute, dar de concentratie
necunoscuta, si se citeste manual sau electronic concentratia acelei specii dintr-un amestec molecular.
Suportul pentru cuva
Este furnizat, ca standard, cu instrumentul Cary 50 un suport pentru micro-cuva.

Fig. 1 Imagine instrument Cary 50

Fig. 2

Cary 50 arata 10Abs si este afisata scanarea ca in figura 2.

1. Capacul compartimentului probei
2. Panoul frontal al compartimentului probei
3. Capacul suruburilor de ajustare a oglinzii lampii
4. Placa cu porturi pentru cablu accesoriu (in spatele instrumentului) lampa xenon
Analiza cantitativ a spectrelor de absorbie ale moleculelor
n multe cazuri din practica de laborator este important s se poat determina concentraia unui
component dintr-un amestec, de exemplu a unui lichid sau solid dizolvat ntr-un solvent adecvat
studiilor n UV-VIS. Aici se aplic metode care se bazeaz pe legile absorbiei.
Dac pe suprafaa unui corp cade o radiaie, atunci o parte din aceasta este absorbit de corp, iar restul
se regsete ca radiaie transmis dup strbaterea corpului. Se noteaz cu 0 fluxul radiaiei
incidente, cu a fluxul radiaiei absorbite i cu fluxul radiaiei transmise. 0 a
0
1
Se defineste factorul de absorbtie al mediului
0
Raportul

este factorul de transparen al mediului sau factorul de transmisie.

0

Fluxul radiatiei transmise este legat de grosimea stratului strabatut in substanta prin legea BeerLambert:

0 10 m d
unde m este numit modul zecimal de extinctie ,
Marimea d reprezinta grosimea stratului de substanta strabatut de radiatie.
In cazul solutiilor, modulul de extinctie este direct proportional cu concentratia
m c

unde este numit coeficient de extinctie, iar dimensional depinde de unitatile de masura in care se
exprima concentratia c.
Astfel legea Lambert Beer descrie modificarile suferite de fluxul de radiatie la trecerea printr-un
strat de solutie de concentratie c, care are grosimea d.

0 10 cd
sau
Pentru respectarea stricta a acestei legi trebuie ca fanta aparatului sa permita trecerea unei radiatii
strict monocromatice. Pe de alta parte raportul

depinde si de timpul de raspuns al dispozitivului si

0

circuitelor de detectie a radiatiei aflate in componena aparatului spectral. Dac n soluii se manifest
i interaciuni intermoleculare atunci pot s apar abateri semnificative de la legea Lambert-Beer.
schema de principiu a unui spectrofotometru sunt prezentate n Figura 3.

Figura 3 Schem de principiu i elemente componente ale unui spectrofotometru

1 - surs de radiaie, 2 - monocromator (reea de difracie) , 3 - oglinzi semitransparente. 4 - cuv cu
substan, 5 - detector de radiaie
6 - sistem de nregistrare