DIAGNOSTICUL

VIRUSOLOGIC


1.
2.
3.
4.
5.
6.

Diagnosticul virusologic consta in:

Recoltarea si prelucrarea produselor patologice ;
Examinarea directa a virionilor la microscopul
electronic ;
Izolarea virala ;
Identificarea antigenelor virale specifice ;
Identificarea secventelor genomice specifice ;
Confirmarea serologica .

1.Recoltarea si prelucrarea
produselor patologice
Produsele patologice variaza in functie de patogenia
infectiei virale:
in cazul afectiunilor cailor respiratorii
superioare:secretii nazale,tampon
faringian,spalatura nazo-faringiana
(v.gripale,paragripale,adenovirusuri,enterovirusuri);
afectiuni ale cailor respiratorii
inferioare:sputa,aspirat bronsic ;
afectiuni eruptive:lichid vezicular,tampon
faringian,fecale,sange
(v.variolic,herpetic,enterovirusuri,rujeolic,rubeolic);
afectiuni ale sistemului nervos central:LCR,sange
,fecale,tampon faringian,saliva
(enterovirusuri,v.herpetic,v. rabic) ;
hepatite :sange,materii fecale.

Transportul produselor la laborator se face la temperatura

joasa,in recipiente cu gheata sau cu zapada carbonica.
In laborator,produsele se amesteca cu mediile de
conservare ce contin ioni
minerali,vitamine,aminoacizi,indicatori de ph.
In final,produsele se centrifugheaza timp de 30 de minute
la 5000 rot./min.,pastrandu-se supernatantul=produs
prelucrat

2.Examinarea directa a virionilor

cu ajutorul microscopului optic nu se pot vizualiza decat
virionii din familia Poxviridae ;
imunoelectronomicroscopia aduce insa informatii
importante-se folosesc anticorpi marcati cu substante
electronoopace care recunosc specific celulele infectate
;

3.Izolarea virala

Izolarea se face pe sisteme celulare

vii(culturi celulare,ou embrionat de
gaina,animale de laborator),urmarinduse efectele virus-specifice

1.CULTURILE CELULARE-reprezinta
substrate de celule eucariote
intretinute in vitro in conditii adecvate
de nutritie,temperatura,ph.

Culturile celulare
-in functie de tesutul sursa,culturile
celulare se impart in:
culturi primare provenite din tesuturi de
animale adulte normale ;
culturi diploide ,tesutul de origine fiind
embrionul sau fatul uman ;
linii celulare continue sau
tumorale,tesutul de origine fiind o tumora.

Efectele virus specifice sunt :

efectul citopatic-reprezentat de modificarile morfologice
celulare consecutive multiplicarii virusurilor citopatogene ;
efectul hemaglutinant-particulele de virus eliberate in
mediul culturii celulare ,se absorb pe suprafata
eritrocitelor ,determinand aglutinarea lor ;

 efectul hemadsorbant-consta in atasarea hematiilor pe

suprafata virusurilor care nu-si manifesta efectul
citopatogen ;
efectul transformant-apar fenomene de cancerizare in
vitro ;
incluziile virale-evidentiate prin coloratii speciale sau
prin metode moderne(imunofluorescenta) .

Inocularea
2.Oua embrionate-inocularea se face intraamniotic si
intraalantoidian .
3.Animale de laborator-inocularea se face
subcutanat(soarecii nounascuti),intracerebral(soarecii
adulti),intranazal(dihori sau soareci),intraperitoneal .

4.Identificarea antigenelor
specifice
Reactia de imunofluorescenta-se bazeaza
pe proprietatea fluorocromilor de a se
lega de imunoglobuline,fara a le modifica
proprietatile imunologice,iar legarea lor
de un antigen corespunzator confera
complexului Ag-Ac fluorescenta ;
Reactia de inhibare a hemaglutinarii-in
prezenta serului imun specific de
tip,efectul hemaglutinant al virusului nu
se mai produce ;

 ELISA-se bazeaza pe reactia imuna Ag-Ac in care

elementul cunoscut(Ac specifici) este fixat pe un suport
solid de polistiren iar unul dintre elementele reactiei
numit conjugat este cuplat cu o enzima (peroxidaza) ;
Radioimunanaliza-consta intr-o reactie de competitie
intre doua antigene pentru acelasi anticorp .

5.Identificarea secventelor
genomice specifice
Tehnica Southern-blot compara fragmentele AND
rezultate dint-o secventa lunga,clivata cu enzime de
restrictie (endonucleaze care scindeaza dublul helix) ;
Tehnica Spot hybridization poate determina si prezenta
unei secvente genomice virale specifice in situ,in probe
recoltate direct din organismul infectat ;

 PCR sau tehnica de amplificare genica-a revolutionat

detectia patogenilor bacterieni,virali,fungici ; in reactii
in lant,catalizate de polimeraza ADN,se amplifica
exponential o secventa tinta din acidul nucleic care
urmeaza a fi detectat .

6.CONFIRMAREA SEROLOGICA

In cadrul diagnosticului serologic se pun

in evidenta Ac din serul de testat in
prezenta Ag viral standard ;
Reactiile Ag-Ac utilizate sunt :
a) reactia de seroneutralizare-consta in
incubarea amestecurilor dintre dilutii
binare din serul de testat si antigenul
viral standard si apoi inocularea la gazda
sensibila ; reactia pozitiva consta in
absenta efectului virus specifica asupra
gazdei ;

b) reactia de fixare a complementului - indica prezenta sau

absenta Ac fixatori de complement (calitativa) sau
stabileste titrul Ac in serul de cercetat si cresterea lor in
dinamica (cantitativa);
c)reactia de hemaglutinare pasiva-prezenta Ac (specifici
Ag) in serul de cercetat este urmata de formarea unor
retele,cu prinderea hematiilor si aparitia aspectului de
hemaglutinare.