Sunteți pe pagina 1din 182

TOXICITATEA MEDIILOR

AGRESIVE I SUBSTANE
ANTIDOT
CAPITOLUL 1

NOIUNI I CONCEPTE
FUNDAMENTALE N
TOXICOLOGIE
Conf. univ. dr. ing. Paul Ctlin BALAURE
An universitar 2014 - 2015

Obiectul de studiu al toxicologiei


Toxicologia studiaz toate aspectele legate de modul n care
substanele chimice naturale sau cele produse de om provoac
efecte adverse nedorite, duntoare asupra sistemelor vii ( tiina
otrvurilor i a toxinelor). Sunt studiate fazele evoluiei unui toxic
n organism, mecanismele aciunii toxice, simptomele i
tratamentele otrvirii, metodele de determinare a substanelor toxice
ntr-un mediu, n aer, ap, sol sau n alimente, sunt evaluate riscurile
i sunt elaborate acte normative cu scopul reducerii efectelor nocive
ale acestor substane asupra sntii oamenilor i a mediului
nconjurtor.
Toxicul este orice substan chimic care ptruns n organism
pe diferite ci altereaz structural i funcional materia vie la
diferitele ei nivele de organizare, modificrile manifestndu-se din
punct de vedere clinic prin apariia unei stri patologice sau chiar a
morii.

Obiectul de studiu al toxicologiei


Efecte adverse - acele efecte produse de toxic care
pericliteaz fie supravieiurea, fie funcionarea normal a
unui individ.
Toxicitate - termenul se refer la msura n care o
substan chimic este otrvitoare sau poate produce vtmri
organismului. Termenul poate fi folosit pentru a descrie
efectul substanei asupra ntregului organism sau asupra unei
substructuri a organismului, precum o celul (citotoxicitate)
sau un organ, de exemplu ficatul (hepatotoxicitate). Termenul
include i descriea condiiilor necesare pentru apariia
efectelor adverse.
Intoxicaia este starea patologic reversibil sau nu
provocat de ptrunderea unui toxic n organism i reprezint
rspunsul organismului la substana toxic.

Obiectul de studiu al toxicologiei


Toxicologia este o tiin interdisciplinar necesitnd
cunotiine de:
chimie (chimie anorganic, chimie organic, chimie
fizic, chimie analitic, chimia mediului)
biochimie
biologie celular i molecular
fiziologie
patologie
ecologie
statistic
Exist mai multe ramuri ale toxicologiei. Dup
Hodgson i Levi (1997) [1], principalele domenii de
interes ale acestei tiine sunt:

Obiectul de studiu al toxicologiei


1. Mecanismele de aciune ale toxicelor:

Toxicologia biochimic: studiaz efectele toxicelor la nivel molecular,


enzimele ce metabolizeaz xenobioticele, generarea intermediarilor reactivi,
interaciunea cu componenii moleculari ai materiei vii, aspecte de biologie
molecular.
Carcinogeneza: studiaz evenimentele chimice i biochimice care conduc la
apariia cancerului.
Teratogeneza: studiaz evenimentele chimice i biochimice care conduc la
apariia anomaliilor fetale prin afectarea proceselelor de dezvoltare
intrauterin .
Mutageneza: studiaz afectarea materialului genetic de ctre toxice.
Toxicitatea la nivelul organelor: studiul efectelor toxicelor asupra diferitelor
organe.
Toxicologia nutriional: studiaz efectele dietei asupra toxicitii.
Toxicologia comportamental: studiaz efectele toxicelor asupra
comportamentului uman i animal.

Obiectul de studiu al toxicologiei


2. Msurarea substanelor toxice i a toxicitii:
Toxicologia analitic: se ocup cu determinarea calitativ i cantitativ a

toxicelor i a metaboliilor substan elor toxice n produse biologice i n


probe de mediu.
Patologia toxicologic: studiaz modificrile morfologice produse de toxice
asupra diferitelor subsisteme ale unui organism: organe, esuturi, celule,
structuri subcelulare.
Evaluarea toxicologic: efectuarea testelor toxicologice n vederea estimrii
efectelor toxice asupra unor organisme vii (animale de laborator).
Studii structur-activitate (QSAR din lb. Englez Quantitative Structure
Activity Relationship): urmresc stabilirea unor rela ii cantitative de corelare
a proprietilor fizico-chimice ale substan elor toxice cu toxicitatea acestora
n special n vederea realizrii unor predic ii cu privire la toxicitatea unor
substane noi, netestate nc.

Obiectul de studiu al toxicologiei


3. Toxicologia aplicat:
Toxicologia clinic: se ocup cu diagnosticarea i tratamentul

intoxiciilor la om.
Toxicologia veterinar: se ocup cu diagnosticarea i tratamentul
intoxiciilor la animale.
Toxicologia medico-legal: se ocup cu diagnosticarea intoxicaiilor
letale prin studiul modificrilor anatomopatologice produse de toxic i
prin detectarea otrvurilor n probe biologice prelevate de la intoxicai.
Ecotoxicologia: studiaz mecanismele de contaminare a mediului
nconjurtor cu poluani, transformrile poluanilor n biosfer i
efectele lor nefaste asupra ecosistemelor.
Toxicologia industrial: studiaz etiologia i patogenia intoxicaiilor cu
toxice prezente ntr-un mediu de munc industrial, evaluarea riscului
toxic, stabilirea unor limite maxime de expunere admise i a unor
reglementri de siguran a muncii.

Obiectul de studiu al toxicologiei


4. Toxicologia unor substane chimice produse n vederea

comercializrii i utilizrii lor n diferite scopuri:


Substane utilizate n agricultur: insecticide, ierbicide, fungicide,

rodenticide.
Medicamente
Aditivi alimentari
Substane chimice industriale i substane chimice casnice
Produii de combustie , n special hidrocarburi aromatice policiclice
(PAH), ce sunt asociai cu arderea incomplet a unor materiale
organice ca lemnul, crbunii, uleiurile, tutunul.
Unii produi naturali tot mai des utiliza i ca remedii naturiste sau n
suplimentele alimentare
Drogurile

Obiectul de studiu al toxicologiei


5. Toxicologia reglementar se ocup cu dou
aspecte foarte importante:
Evaluarea riscului toxicologic identificarea
riscurilor poteniale i estimarea raportului
beneficiu/risc n vederea adoptrii unor norme
legislative.
Aspectele legale se refer la elaborarea de legi i
norme care s maximizeze gradul de siguran i
s minimizeze efectele substanelor toxice asupra
sntii oamenilor i a mediului nconjurtor.

Factori
ce
influen

eaz
toxicitatea
Toxicitatea unei substane depinde de o varietate de factori, cum ar fi:

a)

Doza

b)

Durata expunerii, numrul de expuneri i frecvena acestora

c)

Calea de ptrundere a toxicului n organism sau calea de administrare (substan a


este aplicat pe piele, inhalat, ingerat, injectat)

d)

Structura chimic a substanei (inclusiv forma geometric tridimensional,


stereoizomerii i chiar enantiomerii, ca n cazul talidomidei ce a fost administrat
sub form de racemat ca medicament pentru ameliorarea strilor de grea la
gravide, dar s-a dovedit ulterior c determin apari ia malforma iilor congenitale)
i poprietile fizico-chimice ale substan ei (stare de agregare, solubilitate,
constanta de aciditate, coeficient de parti ie etc).

S-(-)-talidomida
teratogenic

R-(+)-talidomida
amelioreaz
strile de grea
la gravide

e)

Mrimea particulelor substanei

f)

Factori individuali specifici organismului (specia, rasa, sexul, vrsta, factori


genetici, starea general de sntate a organismului)

g)

Factori de mediu (prezena altor substane n mediu, temperatura, radia iile


ionizante, lumina, umiditatea, altitudinea)

Izomeria compuilor organici

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)
Toxicitatea este, n primul rnd, un concept cantitativ.

Paracelsus (1493-1541) este cel care a pus bazele tiin ifice


pentru dezvoltarea ulterioar a toxicologiei moderne.
Afirmaia sa: Toate substanele sunt otrvuri; nu
exist nici
una
care
s nu
fie
otrav.
Doza
potrivit difereniaz o otrav de un remediu., sintetizeaz
principiul de baz al toxicologiei moderne, acela al relaiei
doz-efect toxic sau doz- rspuns toxic. Rspunsul este o
msur a intensitii efectului produs de toxic. Pe conceptul
relaiei doz-efect se ntemeiaz i alte no iuni importante
specifice toxicologiei, dar i farmacologiei moderne, cum ar
fi conceptul de indice terapeutic.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Cele mai inofensive, sau chiar indispensabile vieii dintre
substane, ca de ex., apa, prezint efecte toxice cnd sunt
administrate n doze mari sau foarte mari, iar, pe de alt parte,
chiar i cele mai toxice substane cunoscute, apar ca fiind
inofensive sau chiar benefice organismului n doze extrem de
mici. Ferul, cuprul, magneziul, zincul, cobaltul manganul i
nichelul sunt necesare organismului uman, fiind prezente drept
cofactori n anumite metaloproteine cu roluri eseniale n
organism. De aceea este recomandat un anumit aport din fiecare
dintre aceste elemente metalice n dieta zilnic pentru a nu se
ajunge la o deficien a acestora n organism i, drept
consecin, la apariia anumitor boli. Pe de alt parte,
administrate n cantiti prea mari, aceste elemente produc
efecte toxice asupra organismului. Prin urmare, rela ia dozefect sau doz-rspuns este esenial n toxicologie.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Doza este cantitatea de substan care ptruns

n organism produce ntr-un anumit interval de


timp (de ex., 24 de ore) un anumit efect. De
obicei, cantitatea absolut de substan toxic nu
este relevant pentru apariia unui anumit efect
toxic, acesta din urm corelndu-se mai degrab
cu concentraia de toxic n organism. Ca atare, cel
mai adesea doza nu se exprim n uniti absolute
de mas (mg), ci n uniti relative (mg/kg corp).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Totui, nu se poate presupune c ntrega doz administrat este absorbit
de organism, i de aceea o estimare mult mai precis a expunerii la substan a
toxic o reprezint concentraia de toxic n plasma sangvin. Aceast
concentraie poate fi corelat cu concentraia de substan toxic n esuturi i
organe i, n consecin, este un biomarker al expunerii. n unele cazuri,
responabil pentru aciunea toxic este un metabolit al substan ei administrate,
caz n care ne intereseaz concentraia n snge a acestui metabolit. Similar,
pentru a putea msura rspunsul organismului la toxic, suntem interesa i n
identificarea unor biomarkeri ai rspunsului. Ace tia sunt de regul modificri
ale unor parametri biochimici, funcionali sau histologici survenite ca urmare a
expunerii la substana toxic. Menionm cteva exemple din fiecare
categorie. Apariia n snge a anumitor enzime ca urmare a vtmarii unui
organ, modificarea compoziiei urinei ca urmare a apari iei unor
disfuncionaliti metabolice sau modificarea activit ii enzimatice reprezint
exemple de modificri biochimice. Afectarea capacit ii respiratorii, a
reflexelor sau a diurezei sunt tot attea exemple de modificri ale unor func ii
fiziologice. Evidenierea unor modificri patologice la nivelul esuturilor i
celulelor sunt exemple de biomarkeri histologici ai rspunsului.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)


Rspunsurile observate pot fi de dou tipuri: cuantale i
gradate.
Rspunsurile cuantale sunt de genul totul sau nimic. Ex.:
supravieuirea sau moartea, apariia sau nu a unei tumori. Ele se
msoar raportnd numrul de indivizi care rspund la toxic la
numrul total de indivizi dintr-un grup care au fost expui
toxicului n mod egal. n cazul rspunsurilor cuantale mrirea
dozei duce la o cretere a numrului de indivizi care rspund i
nu la o intensificare a efectului toxicului.
Rspunsurile gradate sunt acele rspunsuri care pot fi
msurate pe o scal continu, de la un rspuns minim la unul
maxim. Ex: modificarea tensiunii arteriale, modificarea ritmului
cardiac, modificarea ritmului respirator, modificarea activit ii
unei anumite enzime, modificarea nivelului unui hormon etc.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Pentru determinarea toxicicitii unei substane

se poate proceda n mai multe moduri.


1. Epidemiologic, prin observarea unei popula ii
de organisme (plante, animale sau oameni) expuse
la un toxic.
2. In vivo, prin administrea toxicului unei
populaii de plante sau animale, n condiii bine
controlate, i nregistrarea efectelor.
3. In vitro, prin expunerea celulelor sau a unor
fracii subcelulare ale organismelor la toxicul testat.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
n 1927, farmacologul britanic J. W. Trevan a conceput
un test in vivo pentru a compara toxicitatea diferitelor
medicamente, introducnd noiunea de doz medie letal 50
(DL50) [2]. n descrierea cantitativ a relaiei doz-rspuns,
Trevan a ales un rspuns de tip cuantal, moartea animalelor
de laborator testate, deoarece aceasta este cel mai u or de
msurat rspuns toxic, evitndu-se astfel posibilele
ambiguiti i erori de msurare la extremele scalei n cazul
rspunsurilor gradate. n plus, letalitatea permite s fie
comparate, din punct de vedere al toxicitii, substan e ale
cror mecanisme de aciune toxic pot fi foarte diferite.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Conceptul doz-efect se bazeaz pe urmtoarele ipoteze:

1. Rspunsul se datoreaz substanei chimice


administrate.
2. Exist o structur molecular int sau molecul
receptor cu care substana toxic interac ioneaz pentru a
produce rspunsul.
3. Rspunsul depinde de concentra ia substan ei toxice
la locul su de aciune.
4. Concentraia compusului toxic la locul de ac iune este
corelat cu doza administrat.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

2. Legarea toxicului de reptorul su molecular.

Efectul toxic apare n urma legrii substanei toxice de o


molecul int din organism sau un receptor molecular fa de care
aceasta are afinitate. Legarea toxicului de inta sa molecular se
poate face fie prin legturi covalente, fie prin legturi
intermoleculare necovalente (legturi de hidrogen, atracii
electrostatice, legturi van der Waals, interaciuni hidrofobe).
intele moleculare ale substanelor toxice sunt n general proteinele
(cu rol structural sau funcional), coenzimele, lipidele i acizii
nucleici. Deoarece aceste molecule au roluri eseniale pentru buna
funcionare a celulei vii, modificarea acestora n urma interaciunii
cu substana toxic are ca rezultat afectarea celulei din punct de
vedere structural i/sau funcional. Ca urmare a dialogului complex
ntre celule i a funcionrii lor corelate i integrate i, eventual, ca
urmare a absorbiei toxicului n arborele circulator i ulterior a
distribuiei sale ctre toate esuturile i organele, efectele pot fi
resimite la nivelul ntregului organism (efect toxic sistemic).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

n cazul unei asocieri necovalente, toxicul i inta sa molecular


trebuie s fie complementare att din punct de vedere geometric (steric, ca
form i dimensiuni modelul lact-cheie) ct i din punct de vedere
interacional, n special complementaritatea hr ilor poten ialului
electrostatic molecular al celor dou suprafee care interac ioneaz.

E3
E1

E2

E4
E5

E4
E6
Toxic

Molecul
int
(receptor
molecular)

Receptor Rspuns la Rspuns la Rspuns la Rspuns la


molecular
nivel
nivel
nivelul
nivelul
alterat
molecular celular unui organ ntregului
organism

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)
3. Cum depinde rspunsul de concentraia
toxicului la locul aciunii sale.
Legarea toxicului de receptorul su
molecular poate fi reversibil sau ireversibil. n
cazul unei legri reversibile se poate scrie
echilibrul:
k
R+T
RT, caracterizat de constanta de
k
disociere a complexului toxic-receptor, KT,

R T k1 ; R = receptor; T = toxic; RT = complex toxic-receptor;


KT

k , k = constantele de vitez pentru disocierea, respectiv


RT k2 formarea complexului toxic-receptor
2

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns (efect)

Dac se noteaz cu [Rt] concentraia total de receptori, atunci se poate scrie:

Rt R RT
Rt T RT T K ;
T
RT
RT KT T Rt T ;
RT T
Rt KT T

Considernd c efectul toxic, E, este proporional cu concentraia


complexului toxic-receptor i c efectul maxim, Emax, se obine atunci cnd toi
receptorii moleculari sunt ocupai, adic atunci cnd [ Rt] = [RT], se poate scrie:

E k3 RT

Emax k3 Rt ;
E Emax

RT sau E E T
R
K T
max

(1)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Cnd [T] = 0, E = 0
Cnd E = Emax/2, KT = [T], deci constanta de

disociere a complexului toxic-receptor reprezint


concentraia toxicului la care efectul su este egal
cu jumtate din efectul maxim.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)


n funcie de caracterul reversibil sau ireversibil al interac iunii toxicreceptor, rspunsurile obinute pot s difere foarte mult. n cazul
interaciunilor reversibile, la concentraii mici de toxic, ocuparea
receptorilor poate fi neglijabil i, ca atare, este posibil ca aparent s nu
existe niciun rspuns, ceea ce duce la apari ia unui prag al dozei sub care nu
exist niciun efect observabil. De asemenea, rspunsul poate fi unul de
foarte scurt durat, deoarece concentra ia ce produce efecte este posibil s
fie atins doar tranzitoriu. Este posibil ca doze mici de toxic, chiar n cazul
unor expuneri repetate sau continue, s nu produc efecte msurabile.
n cazul unei interaciuni ireversibile toxic-receptor, teoretic, o singur
interaciune este suficient pentru apariia efectului. Expuneri continue sau
repetate ntr-un anumit interval de timp pot avea un efect cumulativ care
depinde de viteza cu care organismul poate resintetiza receptorul R, de
exemplu o enzim, n acel interval de timp.
Relaia (1) exprim dependena efectului toxic, E, de concentraia
toxicului, [T]. ntr-o reprezentare grafic normal (rspuns n func ie de
doz) a ecuaiei (1), curba obinut are urmtoarea alur:

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

De obicei, se apeleaz la reprezentarea rspunsului n


funcie de logaritmul dozei, deoarece aceasta se preteaz mult
mai bine la liniarizare, aa cum se va vedea mai departe. n
acest mod de reprezentare curba doz-rspuns ia forma unei
sigmoide.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)

4.
Concentraia toxicului la locul su de aciune depinde
de doza de toxic administrat. Doza medie letal, DL50.
Doza medie letal 50, DL50, este doza care, fiind
administrat unei populaii de animale de laborator, se
estimeaz c va provoca moartea a 50% dintre indivizii
respectivei populaii, ntr-un anumit interval de timp.
Observm de la nceput c DL50 nu este o constant biologic,
ci o mrime virtual, determinat statistic. n orice popula ie
testat, vor exista indivizi care vor muri n urma administrrii
unor doze de toxic mai mici dect DL50, precum i indivizi
care vor supravieui administrrii unor doze mai mari dect
DL50, aceasta fiind o consecin a variabilitii biologice.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)
ntr-un experiment clasic de determinare a DL50 se
procedeaz n felul urmtor: un eantion de animalele de
laborator, cel mai adesea oareci sau obolani, pe care se
testeaz toxicitatea unui compus, este mprit n mai multe
grupe, fiecare grup fiind format dintr-un numr de indivizi
(de preferin acelai) ce au acelai acelai sex i aproximativ
aceeai greutate i vrst. Tuturor animalelor din fiecare grup
li se administreaz pe aceeai cale (de ex. intraperitoneal)
aceeai doz, progresiv cresctoare de la o grup la alta, de
compus testat i se nregistreaz numrul de decese nregistrate
ntr-un anumit interval de timp (de ex. 1h n cazul unei
administrri intraperitoneale la oareci) din fiecare grup.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Datele experimentale obinute pot fi reprezenate grafic n mai multe moduri [3]. Figura din dreapta sus este
o histogram reprezentnd distribuia frecvenei deceselor, exprimat procentual, pe grupele de animale
supuse testului, mai exact pe intervale (numite clase) ale dozelor de compus testat administrate. Histograma
este alctuit din n dreptunghiuri cu baze egale care reprezint clasele. nalimile dreptunghiurilor
reprezint frecvenele mortalitii fiind egale cu procentul de decese din fiecare grup (procentul de decese
la o anumit doz administrat) minus procentul de decese din grupa imediat precedent (procentul de
decese la doza imediat inferioar). Dac bazele dreptunghiurilor se ngusteaz foarte mult (la limit
tinznd ctre zero), respectiv dac numrul de dreptunghiuri (de clase) crete foarte mult (la limit tinznd
ctre infinit), se obine curba desenat peste histogram. Dac mrimea eantionului este suficient de mare,
distribuia frecvenei deceselor pe intervale de doze administrate este o distribu ie normal (sau Gauss),
n form de clopot. Exist un numr mic de indivizi sensibili care mor la doze mici de toxic, un numr mic
de indivizi rezisteni care mor doar la doze mari de toxic, iar cei mai muli indivizi mor la o valoare medie a
dozei. Valoarea abscisei pentru care curba atinge maximul corespunde valorii DL50. Figura din dreapta
mijloc reprezint aceleai date, dar este o reprezentare a mortalitii cumulate n funcie de doza
administrat i are alura unei sigmoide. Diferena dintre reprezentarea prin histogram i cea prin sigmoid
este urmtoarea. Dac n grupa creia i s-a administrat doza de 50 mg/kg corp mor 30% dintre animale, iar
n grupa creia i-au fost administrate 100 mg/kg corp mor 50% dintre animale, nseamn c n intervalul de
doze 50<D100 mg/kg corp mor 20% dintre animale. Acesta este modul de reprezentare a datelor
din histogram. n schimb, curba sigmoid reprezint mortalitatea cumulat, adic unei doze de
50 mg/kg corp i corespunde o mortalitate de 30%, iar unei doze de 100 mg/kg corp, o mortalitate
de 50%. Doza letal 50, DL50, poate fi determinat folosind curba sigmoid, dar pentru acurateea
determinrii se prefer liniarizarea curbei sigmoide prin transformarea procentelor de
mortalitate cumulat n uniti probit (figura din dreapta jos). n toate cele trei moduri diferite de prezentare
a datelor experimentale, axa absciselor este gradat pe o scal logaritmic.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
La dimensiuni mari ale eantionului, distribu ia frecven ei mortalit ii pe
intervale de doze administrate este o distribuie normal.
n teoria probabilitilor, o distribu ie normal (Gauss) a unei variabile
aleatoare continue (aparinnd mulimii numerelor reale), x, este descris de
x 2
funcia:

f x

1
e
2

2 2

(2)

caracterizat de dou mrimi,


valoarea medie sau valoarea ateptat a distribu iei i
- deviaia standard care este o msur a gradului de mpr tiere a valorilor n
jurul valorii medii.
Relaii de calcul pentru mrimile i .
Se noteaz
cndaritmetic
se refer alavalorilor
media aritmetic
Valoarea ateptat a distribu
iei estecumedia
pe care lea ia
variabila aleatoare,
x. valorilor variabilei aleatoare x calculat pentru ntrega
N
1

xi (3) populaie i, respectiv, cu x atunci cnd se refer la


media aritmetica a valorilor variabilei aleatoare
N i 1
dintr-un eantion extras din respectiva populaie; N
dimensiunea populaiei sau, respectiv, a eantionului

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)

Deviaia standard, , pentru ntrega populaie se calculeaz cu rela ia (4),


iar pentru un eantion, deviaia standard se noteaz cu s i se calculeaz cu
relaia (5).
N

i 1

x x
N

i 1

(4)

N 1

(5)

Deviaia standard este rdcina ptrat a varianei, deci:


variana populaiei = 2 (6)
variana eantionului = s2 (7)

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Dac setul de date este prezentat sub forma unei serii de


distribuie cu grupare de date, cum este cazul distribu iei frecven ei
mortalitii pe grupe de doze, formulele pentru calculul valorii medii
a distribuiei i a deviaiei standard (deci, implicit, i a varian ei) se
modific [4]. Astfel, valoarea medie a distribu iei se calculeaz cu
formula (8) n care:
- xi reprezint marca clasei i, calculat ca media aritmetic dintre
limita inferioar i cea superioar a clasei (mijlocul intrevalului i);
- fi este frecvena corespunztoare clasei i, adic numrul de
valori din distribuia de date care se ncadereaz n intervalul i;
- nsumarea se face pe numrul de clase i, evident, este egal cu
numrul total de valori din distribuia de date respectiv, ceea ce se
exprim matematic prin relaia (9).
m

f x
i

i 1

f
i 1

N fi
i 1

(8)

(9)

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Deviaia standard se calculeaz cu formula (10).

x
m

i 1

x fi

N 1

(10)

n continuare vom da un exemplu numeric pentru a clarifica modul


n care se folosesc aceste formule.
Un eantion compus din 30 de brba i prezint urmtoarea
distribuie a nlimii indivizilor din e antion.
Clasa (intervalul) de nlimi (cm) Marca clasei (xi)

Nr. de indivizi (fi) din clas

158-163

160,5

164-169

166,5

170-175

172,5

11

176-181

178,5

182-187

184,5

188-193

190,5

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Calculnd media nlimilor brbailor din eantion cu rela ia (8),
obinem:
x

160,5 3 166,5 5 172,5 11 178,5 2 184,5 6 190,5 3 5247

174,9 cm
3 5 11 2 6 3
30

Reinem c, ntruct nu sunt cunoscute nlimile indivizilor din


eantion, ci doar numrul de indivizi avnd nlimile cuprinse ntr-un
anumit interval de nlimi, rezultatul obinut este doar o estimare a
valorii reale a mediei de nalime a eantionului respectiv.
Similar, folosind formula (10), se poate estima devia ia standard a
distribuiei nalimii indivizilor din eantion.
s

160,5 174,9

3 166,5 174,9 5 172,5 174,9 11 178,5 174,9 2 184,5 174,9 6 190,5 174,9 3
9 cm
30 1
2

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

n cazul unei distribuii normale, aproape toate valorile


(99,7%) pe care le ia variabila aleatoare se afl n intervalul a
trei deviaii standard fa de valoarea medie. Aria total de
sub curb reprezint 100%.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
De ex., dac nlimea medie a popula iei adulte dintr-o
ar este 178 cm, iar deviaia standard este de 8 cm, rezult
c, presupunnd o distribuie normal a nl imilor, 68% din
populaie va avea nlimi cuprinse n intervalul (170-186)
cm i c nlimea a peste 95% dintre oameni va fi cuprins n
intervalul (162-194) cm (adic dou devia ii standard de o
parte i de alta a mediei). Trei devia ii standard (154-202) cm
vor cuprinde nlimile ale aproape ntregii popula ii
(99,73%). Cu ct valoarea deviaiei standard este mai mare cu
att valorile variabilei aleatorii prezint o mpr tiere mai
mare fa de medie, sunt distribuite pe un interval mai larg.
Cu ct deviaia standard este mai mic, cu att distribu ia este
mai ngust. Dac deviaia standard ar fi zero, to i indivizii
populaiei ar avea exact aceeai nlime i anume 178 cm .

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)

Normarea
distribuiei
se
realizeaz
reprezennd grafic pe axa absciselor valorile
xx
s

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns (efect)


n cazul DL50, aceasta reprezint chiar valoarea medie a distribuiei frecven ei mortalit ii pe intervale de
doze administrate. Prin urmare, DL50 minus o deviaie standard reprezint DL15,9 (doza care omoar 16% dintre
indivizii populaiei testate), iar DL50 plus o deviaie standard reprezint DL84,1 (doza care omoar 84% dintre
indivizii populaiei testate). Pe curba sigmoid, n intervalul DL 16 DL84 (o deviaie standard de o parte i de
alta a DL50) variaia mortalitii cumulate cu doza administrat este aproape liniar. Prin intermediul devia iei
standard, mortalitatea
cumulat (exprimat
n procente) poate fi
transformat n uniti
probit (de la
probability units n
limba englez). Pentru
a evita lucrul cu valori
negative, s-a convenit s
se atribuie dozei letale
50 probitul 5. Apoi, se
adaug, respectiv se
scade cte o unitate de
probit, pentru fiecare
deviaie standard situat la
dreapta, respectiv la stnga
dozei letale medii 50.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Se poate realiza astfel un tabel [5-8] care


coreleaz, prin intermediul deviaiei standard,
procentul de indivizi dintr-o populaie care
rspund la o anumit doz de toxic administrat,
cu unitile de probit.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)
De ex., dac o doz administrat produce
moartea a 47% dintre indivizii unei populaii
(DL47), acelei doze i corespunde o valoare probit
de 4,92.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Dac n locul mortalitii cumulate procentuale se
reprezint grafic, n funcie de logaritmul dozei administrate,
unitile probit, se obine o linie dreapt n locul curbei
sigmoide. Deoarece, frecvena mortalitii prezint o
distribuie normal n raport cu logaritmul dozelor, iar
unitile probit sunt corelate cu procentul cumulat al
deceselor tocmai prin intermediul aceleiai distribu ii
normale, este normal ca unitile probit s prezinte o varia ie
liniar
logaritmul dozei. De ex.,
x k logn
y raport
; o relaiecu
neliniar
z k ' log y ; o alt relaie neliniar
x k
dar,

k'
k
x z
k'

; o relaie liniar

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Reprezentarea grafic probit n funcie de logaritmul dozei este deci o dreapt de ecua ie:

y unitati probit a b x ; unde x lg Doz din care se poate determina DL50, ca:
5 a
b

nDL
rela
ia de mai sus,(11)
a este ordonata la origine, iar b este panta dreptei. Aceste valori pot fi u or
50 10
determinate dac se reprezint datele experimentale cu ajutorul unui program, ca de ex. Excel.
Doza medie letal 50 este deci o mrime determinat statistic. Mrimile statistice caracterizeaz
eantioane i sunt estimri ale parametrilor unei popula ii. De ex., dac se determin DL 50 pe un
eantion de animale de laborator, i se repet experimentul pe un alt e antion, este foarte probabil
s se obin valori diferite, din cauza variabilit ii biologice a indivizilor din cele dou e antioane.
Se poate obine astfel o distribuie a valorilor DL 50 a eantioanelor. Dac ne imaginm c putem
obine toate eantioanele posibile, de o anumit mrime, dintr-o popula ie dat, distribu ia valorilor
DL50 ce caracterizeaz aceste e antioane va fi o distribu ie normal, iar valoarea medie a
distribuiei valorilor DL 50 ale tuturor eantioanelor va fi valoarea DL 50 pentru ntrega populaie, un
rezultat cunoscut n statistic sub numele de teorema limitei centrale. De obicei, se utilizeaz un
singur eantion [3], se determin DL50 pentru acel eantion i se estimeaz valoarea DL 50 pentru
ntreaga populaie cu un anumit nivel de ncredere. Valoarea DL 50 pentru ntreaga populaie va fi
cuprins ntr-un interval de ncredere avnd o limit inferioar i una superioar, de tipul urmtor:

DL

50 esantion

t x , DL50 esantion t x

sau

DL50 populatie DL50 esantion t x

(12)

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)

Relaia (12) este aplicarea relaiei statistice generale


de definire a intervalului de estimare a valorii unui
anumit parametru, n cazul nostru DL50, al unei
x
populaii. n aceast relaie,
reprezint
devia ia
standard a distribuiei valorii medii a eantioanelor,
numit i eroarea standard a mediei, i se calculeaz fie
cu relaia (13), fie cu relaia (14), n funcie de faptul
dac se cunoate deviaia standard a ntregii popula ii,
, sau, aa cum se ntmpl cel mai adesea, numai

devia
s, a eantionului
ia standard,
(13)
x

N
s
x
(14)
N
N dimensiunea eantionului (de ex, n cazul determinrii DL 50 numrul total
al indivizilor din eantionul pe care se efectueaz testul).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
innd cont de relaiile (12) i (14), rezult c dimensiunea intervalului de
ncredere este dat de (15),
dimensiune a intervalul ui de ncredere

2t s
N

(15)

n cazul DL50, deviaia standard, s, a eantionului poate fi calculat prin


mai multe metode, toate aproximative,
folosindu-ne de ecua ia corela iei
liniare stabilite ntre unitile probit i logaritmul dozelor. Astfel o formul
2
pentru ss lg[6-13]
(16)
DL 50 este:

n relaia (16), b reprezint panta dreptei uniti probit n func ie de


logaritmulprobit
dozeiprobit
i poate fi calculat cu relaia:
b

lg Doza

2
2

lg Doza 1

(17)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Consultnd
tabelul care coreleaz mortalitatea
procentual cumulat cu unitile probit, se observ c la o
mortalitate de 84% corespunde un probit de 5,99, pe care l
vom aproxima cu 6, iar la o mortalitate de 16% corespunde
un probit de 4,01, valoare pe care o vom aproxima cu 4.
innd cont de acestea, relaia (17) se poate rescrie sub forma
relaiei (18). Cu aceast aproximaie, relaia (16), pentru
calculul deviaiei standard a logaritmului dozei medii letale
50, ia forma relaiei (19) [11].
b

64
lg D84 lg D16

(18) s lg DL50 2

lg DL

84

lg DL16 lg DL84 lg DL16


(19)

2
2

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
O formul mai precis [6,7,9,12] pentru
calculul deviaiei standard a logaritmului dozei
medii letale 50, este urmtoarea,
lg Doz
m lg DL50

2
m

s lg DL50
1
2
2
b
m lg Doz lg Doz
2

(20)

n care m reprezint numrul de grupe n care


a fost mprit eantionul de animale folosit
pentru testarea toxicului.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Parametrul DL50 al ntregii populaii poate fi estimat cu diferite nivele


de ncredere. Un nivel de ncredere de 90% al intervalului de estimare,
numit n acest caz i interval de ncredere de 90%, trebuie n eles n
modul urmtor: dac toxicul este testat pe mai multe e antioane de
animale de laborator i, calculndu-se valorile DL 50 pentru fiecare
eantion n parte, se construiesc folosindu-se rela ia (12) intervale de
estimare a parametrului DL50, atunci nou din zece astfel de intervale,
ceea ce corespunde unei probabiliti de 90%, sau 0,9 notat cu (1- ), vor
conine valoarea real a DL50 a ntregii populaii care rmne n continuare
necunoscut. Complementar, unul din zece astfel de intervale de estimare,
ceea ce corespunde unei probabiliti de 10% sau 0,1 notat cu i
numit i nivel de nencredere, nu va con ine valoarea real DL 50 a ntregii
populaii. Cu alte cuvinte, nivelul de nencredere,
, este probabilitatea ca statistica cunoscut, a
unui eantion extras la ntmplare din
populaie, s se afle n afara intervalului de
estimare.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Distribuia eantioanelor, in cazul unei dimensiuni mici a
acestora nu este o distribu ie normal, ci o distribu ie de tip t
sau distribuie Student. Distribuia Student este simetric fa
de medie ca i distribuia normal, dar este mai aplatizat
dect o distribuie normal. Distribuia t este sub distribu ia
normal n jurul mediei i este peste distribu ia normal
departe de medie sau cu alte cuvinte procentual avem mai
multe valori situate la marginile distribuiei i mai pu ine
valori situate n zona central comparativ cu o distribu ie
normal. Forma distribuiei Student se apropie de cea a
distribuiei normale, pe msur ce dimensiunea e antionului
crete.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Dac eantionul folosit pentru estimarea valorii
DL50 pentru ntreaga populaie este de dimensiuni
mici, deci este caracterizat de o distribuie de tip t,
atunci valoarea coeficientului t, numit i valoare
critic, din relaia de calcul a intervalului de
ncredere (12), se determin din tabele [14] n
funcie de numrul de grade de libertate, df (degree
of freedom) i de nivelul de ncredere (1-) dorit. n
cazul estimrii valorii medii a distribuiei, cum este
i DL50, df = N 1 (N dimensiunea eantionului).

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
De ex., dac eantionul este format din 30 de
indivizi i se dorete un nivel de ncredere de 95%
pentru intervalul de estimare a DL50, din tabel se
gsete valoarea critic t = 2,045. Dac pentru
acelai eantion (avnd deci aceeai dimensiune, N
i aceeai deviaie standard, s) se dorete un nivel
de ncredere de 99% pentru intervalul de estimare a
DL50, atunci valoarea critic t crete la 2,756, iar
intervalul de ncredere se mrete (vezi i relaia
(15) pentru dimensiunea intervalului de ncredere).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Cu alte cuvinte, cu ct se impune un nivel
de ncredere mai mare pentru estimarea
valorii DL50 pentru ntrega populaie cu att,
probabilitatea ca valoarea DL50 a unui
eantion oarecare extras din popula ie s se
afle n afara intervalului de estimare scade,
dar n acelai timp intervalul de ncredere se
lrgete, deci devine mai puin precis.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Pentru reducerea dimensiunii intervalului de ncredere i,
deci, creterea preciziei estimrii men innd n acela i timp
nivelul de ncredere dorit, se poate mri dimensiunea N a
eantionului. Din tabelul caracteristic distribu iei Student
prezentat anterior se vede c valoarea critic t pentru un
anumit nivel de ncredere (1 ) scade pe msur ce
numrul de grade de libertate
cre te. De asemenea, termenul
s
din relaia (15) Npentru dimensiunea intervalului de
ncredere scade odat cu cre terea lui N.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)


O alt metod de estimare a unui interval de ncredere de 95% pentru
DL50 este metoda Litchfield-Wilcoxon [15-17]. Dup ce se realizeaz analiza
probit i se determin valorile pentru DL50, DL84 i DL16 din ecuaia dreptei
uniti de probit n funcie de logaritmul dozei, se parcurg urmtorii pai:
1. se calculeaz aa numita funcie pant (slope), notat cu S, cu rela ia
(21).
DL84 DL50

DL50 DL16 (21)


S
2
2. se determin N numrul total de animale supuse testului la acele doze

sau concentraii la care rspund ntre 16% i 84% dintre indivizi.


f LDvaloarea
3. se calculeaz
exponentului din ecuaia (23) a factorului
50
relaia (22). 2,77
exponent

N'

(22)

cu

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
4. se gsete valoarea factorului

(23).
f LD S
50

2 , 77
N'

f LD

50

cu relaia

(23)

5. se calculeaz limitele superioar i inferioar

ale intervalului de ncredere de 95% cu


relaiile (24) i, respectiv (25).
limita superioar LD50 f LD

50

limita inferioar

LD50
f LD
50

(24)
(25)

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Ilustrm modul de calcul al dozei medii letale 50 i al
unui interval de ncredere de 95%, prin urmtorul exemplu.
Un toxicolog a efectuat o serie de teste pentru a determina
toxicitatea acut a toxicului X asupra pe telui zebr (unul
dintre cei mai comuni petiori de acvariu). Doze diferite de
toxic X au fost administrate la cinci grupuri de pe ti ori (cte
o sut n fiecare grup) i toxicologul a notat ci pe ti ori au
murit n fiecare grup, obinnd rezultatele tabelate mai jos.
Doza de toxic Numrul de petiori mori
X
(mg/kg corp) n fiecare grup (dintr-o sut)
5,4
7,1
8,2
10,1
11,9

1
12
34
81
98

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Mai nti verificm c distribuia frecven ei mortali ii pe intervale de


dozaj este o distribuie normal. Pentru acesta construim o histogram
care ilustreaz frecvena mortalitii n func ie de logaritmul dozelor
administrate.
Doza de toxic X
(mg/kg corp)

Numrul de petiori mori n fiecare grup


(dintr-o sut)
5,4
7,1
8,2
10,1
11,9

Interval de dozaj
logD0,732394
0,732394<logD0,85125
8
0,851258<logD0,91381
4
0,913814<logD1,00432
1
1,004321<logD1,07554
7
logD>1,075547

Log Doz
1
12
34
81
98

Frecvena
mortaliii(%)
1
11
22
47
17
2

0,732394
0,851258
0,913814
1,004321
1,075547

Probit
2,67
3,82
4,59
5,88
7,05

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Cu ajutorul histogramei putem estima valoarea dozei
medii letale DL50, folosind relaia (8) pentru estimarea
valorii medii a distribuiei.
x lg DL50

0,732394 0,851258 11 / 2 (0,851258 0,913814 ) 22 / 2 (0,913814 1,0043214 ) 47 / 2


97

(1,0043214 1,075547 ) 17 / 2
0,9369169
97
DL50 10 x 10 0 ,9369169 8,648 mg/kg corp

Folosind aceste date experimentale se poate trasa


curba sigmoid i aceasta poate fi liniarizat prin
transformarea mortalitii cumulate n uniti probit.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns (efect)


Determinarea dozei medii letale DL50
f(x) = 12.78x - 6.9
R = 0.99

Dup liniarizarea curbei sigmoide se calculeaz doza medie letal 50, cu rela ia
(10). Similar se calculeaz lgDL84 i lgDL16 i valorile corespunztoare DL84 i DL16.

lg DL50

5 6,8965
0,93094 ; DL50 10 0 , 93094 8,53 mg/kg corp
12,779

6 6,8965
1,009195 ; DL84 101, 009195 10,2134 mg/kg corp
12,779
4 6,8965
lg DL16
0,852688 ; DL16 10 0 ,852688 7,1234 mg/kg corp
12,779
lg DL84

n continuare, vom estima valoarea DL 50 pentru ntreaga populaie, calculnd un


interval de ncredere de 95% al acestei valori prin cele dou metode prezentate.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Vom calcula mai nti deviaia standard a
logaritmului dozei medii letale, DL50, cu
formulele (16), (19) i (20) i apoi intervalele de
ncredere de 95% corespunztoare cu relaia (12).
Rezultatele obinute sunt tabelate mai jos.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Deoarece dimensiunea eantionului, N = 500, este mare, distribuia t devine o
distribuie normal i n relaia de calcul a intervalului de ncredere 95% s-a
folosit valorea critic t = 1,96, corespunztoare unei distribuii normale. n cazul
unei distribuii normale, 1,96 deviaii standard de o parte i de alta a valorii medii
cuprind 95 de procente din aria total de sub curba Gauss. n general, pentru un
numr de grade de libertate df > 200 i pentru un nivel de ncredere (1 ) = 0,95,
valoarea critic din relaia (12) de definire a intervalului de ncredere este t = 1,96.
Intervalul de ncredere poate fi calculat i cu ajutorul func iei CONFIDENCE
din programul Excel. Sintaxa utilizat este urmtoarea: =CONFIDENCE(nivelul
de nencredere , deviaia standard s, dimensiunea eantionului N). Se apas tasta
Enter i programul returneaz valoarea func iei CONFIDENCE. n cazul nostru
concret pentru =CONFIDENCE(0.05,0.1116,500), programul returneaz valoarea
0,009782. Apoi se calculeaz limitele superioar i, respectiv, inferioar ale
intervalului de ncredere 95%, mai nti pentru logaritmul dozei medii letale 50 i,
apoi, pentru DL50, dup cum urmeaz.

limita inferioar lg DL50 lg DL50 0,009782 0,93094 0,009782 0,921158 ; limita inferioar DL50 100 , 921158 8,34 mg/kg corp
limita superioar lg DL50 lg DL50 0,009782 0,93094 0,009782 0,940722 ; limita superioar DL50 10 0 , 940722 8,724 mg/kg corp

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Am estimat astfel doza medie letal 50 pentru ntreaga populaie i un
interval de ncredere de 95% sub forma:
DL50 populatie 8,53 0,19 mg/kg corp
.
Dup cum se poate observa dimensiunea intervalului de ncredere 95%
pentru deviaia standard a logaritmului dozei letale medii 50 este egal cu:
2 t s lg DL50 2 1,96 0,111594104

0,019563 0,940723043 0,921159734


N
500

Mai departe, vom construi un interval de ncredere de 95% pentru doza


medie letal 50, aplicnd metoda Litchfield-Wilcoxon. Pentru aceasta,
calculm mai nti funcia slope, S, cu relaia (21), utiliznd valorile valorile
DL84 i DL16, calculate anterior.
10,2134
8,53

8,53
7,1234 1,19735 1,19746
S

1,1974
2
2

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Deoarece numrul de animale testate n
intervalul DL16 DL84 este N = 200, valoarea
exponentului calculat cu relaia (22) este:
exponent

2,77
0,19586
200

Atunci, calculnd valoarea factorului


relaia (23), obinem:
f LD 1,1974 0 ,19586 1,0359
50

f LD

50

cu

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)

Acum putem calcula limitele superioar i inferioar ale


intervalului de ncredere de 95% cu rela iile (24) i, respectiv
(25).
limita superioar DL50 8,53 1,0359 8,836 mg/kg corp
limita inferioar DL50

8,53
8,234 mg/kg corp
1,0359

Intervalul de ncredere 95% pentru valoarea dozei medii


letale DL50 pentru ntrega populaie este deci (8,23 8,83)
mg/kg corp.
Observm c intervalul de ncredere 95% ob inut prin
metoda Litchfield-Wilcoxon este mai larg dect cel calculat
prin metoda precedent, deci metoda Litchfield-Wilcoxon
este mai puin precis.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Estimarea dozei medii letale 50 este util
pentru
compararea
toxicitii
diferitelor
substane. Toxicitatea unei substane este cu att
mai mare cu ct valoarea DL50 este mai mic (cu
ct este necesar o cantitate mai mic dintr-o
anume substan pentru a produce un anumit
rspuns, precum moartea a 50% dintre indivizii
unei populaii ntr-un anumit interval de timp, cu
att substana respectiv este mai toxic).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Din acest punct de vedere al potenialului lor
toxic reflectat prin valoarea DL50, substanele pot
fi mprite n ase clase de la practic netoxice
pn la supertoxice [18, 3].
Toxicitate

Practic netoxice
Cu toxicitate redus
Moderat toxice
Foarte toxice
Extrem de toxice
Supertoxice

Valoarea DL50 estimat pentru om n


cazul unei administrri orale (mg/kg
corp)
> 15000
5000 - 15000
500 - 5000
50 500
5 50
<5

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Tabelul urmtor prezint valorile DL50 pentru
diferite substane, preciznd calea de administrare i
animalul pe care s-a testat toxicitatea substanei [19].

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Intrrile 1-3 n tabel corespund unor substan e supertoxice, 4-6 unor substan e extrem
de toxice, 7-12 unor substan e foarte toxice, 13-16 unor substan e moderat toxice, intrrile
17 i 18 unor substane cu toxicitate redus, iar intrrile 19 i 20 unor substan e lipsite
practic de toxicitate. O astfel de clasificare, de i util din punct de vedere al normelor de
ambalare, etichetare i avertizare asupra poten ialului toxic al diferitelor substan e, este mai
degrab general, grosier i, neaducnd informa ii specifice, adeseori irelevant. Doza
medie letal 50 singur nu este suficient pentru realizarea unei compara ii corecte ntre
toxicitatea a dou sau mai multe substan e. Un factor esen ial pentru o astfel de compara ie
este i panta curbei doz-rspuns despre care valoarea DL 50 nu furnizeaz niciun fel de
informaie.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Panta curbei doz-rspuns poate furniza informa ii cu privire la
mecanismul de aciune a toxicului. O pant foarte abrupt reflect un
singur efect deosebit de intens, cum ar fi blocarea ireversibil a unei
enzime sau interferena cu o func ie metabolic vital, ca de ex., n
cazul ionului cianur care interac ioneaz specific cu citocromul a 3, o
enzim a lanului transportor de electroni. Legndu-se foarte puternic
de aceast enzim, ionul cian ntrerupe lan ul transportor de elctroni
care este parte integrant a func iei vitale de respira ie celular. Din
contr, un efect toxic mult mai pu in specific, deci depinznd inerent de
mai multe variabile, se reflect ntr-o valoare mai mic a pantei. Dac
dou substane diferite prezint aceea i valoare pentru panta curbei
doz-rspuns, atunci aceasta poate fi un indiciu al faptului c cele dou
substane diferite acioneaz prin acela i mecanism sau prin mecanisme
similare.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Mortalitatea (%)

Cnd curbele doz-rspuns a dou substane


diferite au pante paralele, atunci, n mod evident,
substana cu valoare DL50 mai mare este mai puin
toxic (n figur substana A mai toxic dect
substana B).

Doza (scal logaritmic)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Mortalitatea (%)

Situaia se complic atunci cnd curbele doz-rspuns corespunztoare celor dou


substane au pante diferite.
Dac dou substane diferite,
A i B au aceeai doz medie
letal DL50, toxicitatea lor
relativ depinde de doza
administrat. n exemplul
urmtor se observ c dac se
compar valorile DL20 se
concluzioneaz c substana B
este mai toxic ca A, dar dac
Doza (scal
comparm valorile DL70 concluzia este c
logaritmic)
substana A este mai toxic dect B.
Cu ct curba doz-rspuns are o
pant mai mare, cu att deviaia standard a frecven ei mortalit ii fa de valoarea medie
DL50 este mai mic i invers, cu ct panta este mai mic cu att devia ia standard este mai
mare. Cu alte cuvinte, intervalul DL20 DL70 din exemplul prezentat este mult mai ngust
pentru substana A dect acelai interval corespunztor substan ei B.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Exprimarea cantitativ a toxicitii prin intermediul rela iei doz-rspuns permite compara ii nu
numai ntre substane diferite, ci i ntre rspunsuri diferite sau ntre specii diferite de animale.
Un parametru foarte util n farmacologie este indicele terapeutic care se bazeaz pe compararea
rspunsurilor diferite pe care le produce aceea i substan administrat n doze diferite. Indicele
terapeutic al unei substane (IT) se calculeaz cu rela ia (26) n care DE 50 este doza medie eficient din
punct de vedere farmacologic [36, 37].

IT

DL50
DE50

(26)

Acest indice d indicaii cu privire la


posibilitatea utilizrii medicamentului
respectiv n condiii de siguran. Dup
cum se vede din figura alturat, cu ct
cele dou curbe pentru efectul
farmacologic i, respectiv, efectul letal,
sunt mai apropiate, cu att crete
probabilitatea apariiei unui efect advers
letal la unii indivizi sensibili n urma
administrrii dozei medii eficiente
terapeutic. Deci cu ct IT este mai mare,
cu att securitatea utilizrii medicamentului crete i riscul terapeutic se diminueaz. n
general, indicele terapautic trebuie s aib o valoare peste zece.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Un alt parametru al siguranei utilizrii unui medicament, mai drastic
dect IT, este marja de securitate (MS) sau factorul de securitate cert, definit
de relaia (27).
DL1
MS
(27)
DE99
Limita de securitate standard (Lss) se definete ca:

Lss MS 1 100 (28)

S considerm exemplul ipotetic al unei substane medicamentoase


pentru care DL1 = 100 mg, iar DE99 =10 mg.
Atunci avem:
100 10 100 900
Lss
10
, ceea ce nseamn c acea doz care este
eficient n proporie de 99%, trebuie
mrit cu 900% pentru a produce o
mortalitate de 1% n cadrul unei populaii.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Folosirea unor parametri de estimare a
gradului de securitate a unui medicament, mai
severi dect indicele terapeutic, cum sunt marja
de securitate i limita de securitate standard, este
justificat de faptul c estimrile bazate exclusiv
pe valoarea dozei medii letale DL50, fr
cunoaterea formei i a pantei curbei dozrspuns, ar putea conduce la concluzii eronate,
fiind astfel riscante.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Anumite efecte toxice pot fi observate doar peste o
anumit doz-prag. Nivelul maxim al dozei pentru care
nu se observ niciun efect se numete NOEL (din lb.
englez: no observed effect level). Conform conceptului
potrivit cruia efectul toxic apare n urma interaciunii
dintre toxic i un receptor molecular, intensitatea
efectului toxic (rspunsul) depinde de numrul de
receptori ocupai de ctre toxic i este posibil ca un efect
observabil s apar numai dup ce un numr minim de
receptori au fost ocupai, ceea ce explic existena unui
anumit prag al dozei sub care nu se observ niciun efect.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Un exemplu n acest sens, l reprezint intoxica ia cu monoxid de
carbon (CO). inta molecular a monoxidului de carbon este
hemoglobina, proteina transportoare a oxigenului n snge. Hemoglobina
este o metaloprotein conjugat avnd ca grupare prostetic hemul.
Hemul este o combinaie complex coninnd fer. Combinaiile complexe
conin un ion metalic (de obicei al unui metal tranzi ional) central,
nconjurat (coordinat) de un numr bine definit de molecule sau ioni,
denumii liganzi, cu care acesta stabilete legturi covalente coordinative.
Numrul de coordinare depinde esenial de natura ionului central, el
putnd lua valori de la 2 la 12. Liganzii sunt direct lega i de ionul metalic
central cruia i doneaz perechi de electroni neparticipan i. Liganzii
monodentai ocup o singur poziie coordinativ n jurul ionului central.
Liganzii polidentai se leag la acela i ion central prin mai mul i atomi
donori ocupnd mai multe poziii coordinative.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

EDTA- acid etilendiaminotetraacetic


ligand hexadentat
Cation complex
Ion central Co3+, cifra de coordinare 6
NH3 ligand monodentat

Anion complex
Ion central Co2+, cifra de
coordinare 6
Ligand hexadentat, EDTA

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
n cazul hemului, ionul central este un ion
feros (Fe2+), care are numrul de coordinare 6. n
hem, ionul central Fe2+ este tetracoordinat de
dianionul porfirinei care este un sistem ciclic
conjugat plan de 18 electroni , cu caracter
aromatic.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Hem b (ngroat ligandul tetradentat)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
n hem, ferul central mai are la dipozi ie dou poziii pentru
coordinare putnd s mai lege doi liganzi monodenta i.
n hemoglobin, una dintre aceste poziii se ocup prin
coordinare cu atomul de azot al unui rest de histidin
din catena polipeptidic a proteinei globin, realizndu-se
astfel legtura dintre gruparea prostetic i protein.
Geometria hemului n hemoglobin este una piramidal.
n complexul pentacoordinat, ferul
ocup vrful piramidei, situndu-se n
afara planului inelului porfirinic.
Hemoglobina este o protein
heterotetramer constituit din dou
subuniti (catene polipeptidice
Geometrie piramidal (ferul este situat n vrful
distincte) i dou , ()2, asociate
prin fore intermoleculare necovalente. piramidei, n afara planului inelului porfirinic)
Fiecare subunitate are propria sa grupare prostetic, astfel c
n hemoglobin exist de fapt, 4 grupri prostetice de hem.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
n mod normal, cea de a asea poziie coordinativ a
ionului Fe2+ este ocupat reversibil de ctre oxigen. n
plmn, oxigenul difuzeaz prin membrana alveolelor
pulmonare i apoi prin membrana celulelor ro ii din
capilarele pulmonare. Cnd ntlne te hemoglobina, oxigenul
ocup i ultima poziie coordinativ a ferului rmas liber n
hem. Prin legarea oxigenului de hem se formeaz
oxihemoglobina, iar geometria hemului se schimb. Spre
deosebire de geometria piramidal a ferului pentacoordinat
din hemoglobina liber, n oxihemoglobin, ferul
hexacoordinat adopt o geometrie octaedric, ionul Fe 2+
situndu-se n planul inelului porfirinic.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Geometrie octaedric (ferul n planul


inelului porfirinic)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Modificarea geometric rezultat ca urmare a legrii oxigenului
de ctre o singur grupare hem, are ca rezultat modificarea
conformaiei ntregii proteine, astfel nct n noua form geometric
este mai uor pentru cele trei grupri prostetice de hem rmase s
lege i ele oxigenul [38]. Acest efect este cunoscut n biochimie sub
numele de cooperativitate. Astfel, hemoglobina transport oxigenul
n snge ctre esuturi i organe unde acesta este cedat pentru a fi
folosit n reaciile consumatoare de oxigen i productoare de
energie (catabolice) ale respiraiei celulare.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Dac n aerul inspirat este prezent monoxid de
carbon, atunci acesta concur cu oxigenul la
ocuparea ultimei poziii coordinative rmas
liber n hem. Legarea monoxidului de carbon,
cu formarea carboxihemoglobinei, este
reversibil, la fel ca i legarea oxigenului, dar
monoxidul de carbon se leag mai puternic de
hem dect o face oxigenul. Aceasta cre te riscul
unei intoxicaii cu monoxid de carbon,
deoarece unei concentraii relativ mici de
monoxid de carbon n aerul inspirat i
corespunde o concentraie mult mai mare de
carboxihemoglobin n snge.
Carboxihemoglobina

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Din punct de vedere toxicologic, nu se observ efecte toxice la
concentraii de carboxihemoglobin mai mici de 20% , cu alte cuvinte
efectele apar numai dup ce 20% din cantitatea total de hemoglobin
din snge a fost ocupat de monoxidul de carbon [36, pp. 18].
O alt situaie care poate conduce la existena unui prag pentru
toxicitate este aceea n care un receptor, precum o enzim, ajunge s
fie complet ocupat sau saturat. De exemplu, dac o enzim implicat n
detoxifierea organismului prin metabolizarea toxicului pe o anumit
cale este saturat, atunci ea las loc liber transformrii toxicului pe o
alt cale metabolic care este responsabil de toxicitatea acestuia. Cu
alte cuvinte, toxicitatea se manifest dup un anumit prag, cnd a fost
depit capacitatea de autoprotejare i autoreparare a organismului.
De asemenea, dac un sistem de transport activ implicat n excreia
toxicului este saturat, atunci la creterea dozei peste pragul de saturare
vor aprea efectele toxice.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Valoarea cea mai mare a dozei pentru care nu se observ o
cretere semnificativ a rspunsului toxic se numete NOAEL
(din lb. englez no observed adverse effect level). Nivelul cel
mai sczut al dozei la care apar efectele adverse se nume te
LOAEL (din lb. englez lowest observed adverse effect
level).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Cnd efectul expunerii la o substan este
apariia cancerului, unele autoriti precum
Agenia Guvernamental pentru Protecia
Mediului din Statele Unite (EPA) consider c nu
exist o doz-prag sigur, iar curba doz-rspuns
nu este o curb sigmoid, ca cele discutate pn
acum, ci trece perin zero. Cu alte cuvinte dozaprag este zero, i niciun nivel de expunere la
respectiva substan nu este sigur.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Conceptul de doz-prag are o importan deosebit n
toxicologie, fiind folosit n estimarea riscului la om prin
extrapolarea rezultatelor testelor toxicologice pe animale. De
exemplu, cunoscndu-se valoarea NOAEL determinat din studii
toxicologice pe animale, se poate calcula doza zilnic admisibil
(DZA), adic doza de substan care poate fi ingerat zilnic de un
individ uman, pe parcursul ntregii sale vie i, n condi ii de
siguran, conform cunotinelor actuale. DZA se calculeaz
mprind valoarea NOAEL la un factor de securitate ( FS). De
obicei, factorul arbitrar FS are valoarea 100, inndu-se cont de
diferena dintre specii (factor 10) i de diferen ele dintre indivizii
NOAEL
NOAEL
umaniDZA
datorate
variabilit
ii biologice
(factor 10) [36, pp. 423].
(29)

FS

100

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
DZA a fost introdus n 1962 de ctre exper ii
Organizaiei pentru Agricultur i Alimentaie a
Naiunilor Unite (FAO) i cei ai Organizaiei Mondiale
a Sntii (WHO) pentru aditivii alimentari.
Pentu mediul nconjurtor se calculeaz cu rela ia
(30) doza medie zilnic pe durata vie ii LADD (din lb.
englez lifetime average daily dose) care este
aplicabil nu numai omului ci i altor specii din mediu
[37].
LADD

concentratia toxicului in mediu frecventa expunerii durata expunerii


(30)
greutatea corporala durata vietii

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Pentru mediul de munc, dar i pentru mediul comunal, se stabile te


concentraia maxim admisibil (CMA) care reprezint concentra ia de
substan la care pot fi expui muncitorii, timp de 8 ore zilnic, pe perioade
lungi de timp, sau chiar pe ntrega via, fr ca s apar efecte adverse, cu
excepia persoanelor hipersensibile. Pe lng concentra ia maxim admisibil,
pentru mediul de munc se mai calculeaz i anumite valori limit de
concentraii denumite i valori prag [37]. Exist trei tipuri de astfel de valori:
- valori prag ca medii ponderate care reprezint concentra iile medii
ponderate n timp i se calculeaz innd cont de concentra iile de substan la
care este supus lucrtorul n diferite momente ale zilei de lucru (de 8 ore) i de
durata expunerilor respective; se noteaz cu VL8.
- valori prag limit pe termen scurt reprezint concentra ia de substan
la care lucrtorul nu trebuie s fie expus mai mult de 15 minute i care nu
trebuie s fie atins de mai mult de 4 ori pe zi sau la intervale mai mici de o
or; se noteaz cu VLs.
- valori plafon reprezint concentra iile ce nu trebuie s fie dep ite n
niciun moment pe parcursul zilei de lucru.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Curbe doz-rspuns n form de U.

1. Nutrieni eseniali. Exist o serie de substane , ca de ex.


majoritatea vitaminelor i oligoelemente, precum seleniul i anumite
metale grele (cobalt, cupru), care sunt necesare n cantiti mici
pentru sntatea i buna funcionare a organismului, dar care nu pot
fi sintetizate de ctre organism i trebuie introduse n organism prin
alimentaie. Astfel de substane se numesc nutrieni eseniali. Dac
nivelul acestor substane n organism se reduce sub o anumit
limit, situaie denumit n general deficien sau caren,
funcionarea normal a organismului este afectat, deci apare un
efect advers, care n anumite situaii poate fi chiar letal. Dac din
contr, concentraiile acestor compui n organism cresc peste
concentraiile normale fiziologic, excesul din aceti compui
determin de asemenea efecte toxice care, n cazuri extreme, pot
provoca moartea organismului.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Rspuns (%)

Curba doz-rspuns are deci, n acest caz, o form de U,


existnd dou praguri, unul minim i altul maxim, pentru
apariia rspunsului toxic, concentraiile cuprinse ntre aceste
praguri fiind cele normale fiziologic [3, 39].

Deficien
Efect advers

Exces
Efect advers
Concentraii
normale

Doz

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
2. Fenomenul de hormesis reprezint un alt caz n care curba
doz-rspuns are o form deosebit de cea obinuit de sigmoid.
Exist anumite substane, unele chiar supertoxice, care atunci cnd
sunt administrate n doze foarte mici nu prezint efecte adverse, ci
dimpotriv efecte benefice sau protectoare. Exist de exemplu
indicii, c animalele expuse la doze sczute de dioxin, prezint o
inciden mai mic a anumitor tipuri de cancer, comparativ cu un
grup martor de animale neexpuse la dioxin. O alt substan care
prezint fenomenul de hormesis este alcoolul etilic. Este
binecunoscut faptul c n doze mari, consumul cronic de alcool,
crete riscul apariiei cancerului esofagian, cancerului hepatic,
cirozei i duneaz sistemului cardiovascular.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Dar, exist de asemenea, suficiente dovezi epidemiologice i clinice c,
atunci cnd este consumat n cantiti mici pn la moderate, alcoolul etilic
reduce incidena bolilor cardiovasculare i a atacului de cord [40]. Explicarea
fenomenului de hormesis se bazeaz pe premiza c un stres blnd provocat de
doze mici de toxic stimuleaz mecanismele protectoare i reparatoare ale
organismului [36, pp. 26].

Aspectul calitativ al toxicitii


Toxicitatea nu este un concept exclusiv cantitativ. Toxicitatea unei
substane nu depinde numai de doza administrat, ci, evident, i de
structura i proprietile substanei respective i de caracteristicile
organismului asupra cruia aceasta acioneaz. Pe aspectul calitativ al
toxicitii se bazeaz conceptul de toxicitate selectiv.
Toxicitatea selectiv se refer la caracteristica unei substan e de a fi
puternic toxic fa de o specie biologic i relativ inofensiv pentru o alt
specie biologic [41]. Toxicitatea selectiv este extrem de important n
proiectarea unor substane destinate controlului unor agen i patogeni,
(cazul bolilor infecioase n care se dore te ca medicamentul utilizat n
tratamentul bolii s fie ct mai toxic pentru agentul patogen int, dar ct
mai puin toxic pentru organismul tratat), al duntorilor din agricultur (n
cazul unui ierbicid, de ex., se dorete eradicarea buruienilor, dar nu i a
plantelor de cultur) sau al unor parazi i (cnd se urmre te distrugerea
parazitului fr ca organismul gazd s fie i el afectat).

Aspectul calitativ al toxicitii


Aciunea toxic se poate manifesta selectiv ntr-una din

urmtoarele dou situaii.


1. Toxicul se acumuleaz preferenial n anumite celule i
esuturi, acesta fiind motivul principal al toxicit ii selective a
unei substane pentru un anumit tip de esut n raport cu alte
esuturi. De exemplu, eficiena tratamentului hipertiroidiei cu
iod radioactiv se bazeaz tocmai pe abilitatea selectiv a
glandei tiroide de a acumula iod.
2. Toxicul interacioneaz specific fie cu o structur
citologic fie cu un sistem biochimic sau o cale metabolic ce
joac un rol esenial n cazul speciei afectate, dar nu apare
sau joac un rol minor n cazul speciilor neafectate.

Aspectul calitativ al toxicitii


De ex., antibioticele -lactamice ca penicilinele i cefalosporinele
au efect bactericid prin inhibarea sintezei peretelui celular al celulei
bacteriene. Celulele umane nu au perete celular i, deci, nu sunt
afectate n acest mod de antibiotic.

Insecticidele organofosforice ac ioneaz asupra procesului de


transmitere a influxului nervos prin sinapse, i ca atare afecteaz
animalele i nu plantele, deoarere acestea din urm nu posed un
sistem nervos. Multe ierbicide ac ioneaz prin inhibarea selectiv a
procesului de fotosintez, i, prin urmare, efectele lor adverse asupra
animalelor care nu posed un astfel de sistem biochimic sunt reduse.

Aspectul calitativ al toxicitii


Aciunea chimioterapic a sulfamidelor exploateaz diferenele dintre specii n
ceea ce privete metabolismul acidului folic (vitamina B9). Acidul folic este
redus n ficat la acidul tetrahidrofolic care este un cofactor important n sinteza
nucleotidelor purinice i pirimidinice i, deci, a acizilor nucleici. Organismul
oamenilor i al majoritii vertebratelor nu pot ns sintetiza acidul folic i, de
aceea, au nevoie de un aport de acid folic din dieta zilnic. Pe de alt parte,
anumite bacterii gram-negative sunt incapabile s asimileze acidul folic din
nutrieni. n schimb, ele au capacitatea de a sintetiza un precursor al acidului
tetrahidrofolic, acidul dihidropteroic, din 6-hidroximetil-7,8-dihidropteridin i
acid p-aminobenzoic. Aceast reacie este catalizat enzimatic de dihidropteroat
sintetaz. Datorit asemnrii structurale cu molecula de acid p-aminobenzoic,
sulfonamidele inhib aceast reacie enzimatic. n acest fel, bacteriile
respective sunt private de acid tetrahidrofolic i cum acesta este un cofactor
esenial n sinteza acizilor nucleici, replicarea acestor bacterii este inhibat.
Organismul uman nu este afectat, deoarece nu prezint aceast cale metabolic.

Aspectul calitativ al toxicitii

Aspectul calitativ al toxicitii


Medicamentul biseptol conine dou substan e medicamentoase: o
sulfamid (sulfametoxazolul) i trimetoprim.

Trimetoprimul inhib n bacterii enzima dihidrofolat reductaza care


catalizeaz ultima etap n sinteza acidului tehtrahidrofolic. Aceast enzim
este prezent i n organismul uman, fiind implicat n transformarea acidului
folic n acid tetrahidrofolic n ficat.

Acid folic

Aspectul calitativ al toxicitii


Totui, enzima uman este diferit de cea
bacterian i nu este inhibat de trimetoprim.
Astfel, dei reducerea dihidrofolatului la
tetrahidrofolat este o cale metabolic comun
att pentru organismul bacterian, ct i pentru
cel uman, enzimele implicate n aceast cale
difer i, ca atare, inhibarea acestei ci
metabolice se produce doar n celula
bacterian.

Aspectul calitativ al toxicitii


Dac, ntr-o specie biologic procesele biochimice implicate n detoxifiere i n excre ia
toxicului sunt rapide, atunci aciunea toxic asupra acestei specii va fi mult redus comparativ
cu alte specii pentru care procesele mai sus men ionate sunt mai lente sau chiar absente. Un
exemplu n acest sens este insecticidul malation, care are o toxicitate relativ redus pentru
mamifere. Malationul este activat metabolic att n insecte, ct i n mamifere, prin
transformare oxidativ de ctre citocromul P450 n malaoxon, un metabolit inhibitor al
colinesterazei mult mai toxic dect malationul. Colinesteraza este enzima care catalizeaz
hidroliza neurotransmitorului acetilcolin, o reac ie care permite unui neuron colinergic s
revin la starea de repaus de dinaintea stimulrii sale. Pe de alt parte, i insectele i
mamiferele dispun i de sisteme de detoxifiere, prin hidroliz enzimatic sub ac iunea
esterazelor. Monoacidul format sufer apoi reac ii de conjugare din care rezult compu i cu
masa molecular mai mare i, n consecin , cu capacitate mai redus de a traversa
membranele biologice, dar cu polaritate mai mare, deci care pot fi mai u or excreta i
(eliminai). Toxicitatea redus a malationului fa de mamifere comparativ cu insectele, se
explic prin faptul c n mamifere viteza proceselor metabolice de deazactivare (detoxifiere)
este superioar vitezei proceselor de activare metabolic prin transformare n malaoxon, pe
cnd la insecte situaia este exact invers, si anume activarea oxidativ decurge mai repede
dect detoxifierea hidrolitic. Cu alte cuvinte, n insecte predomin activarea metabolic fa
de dezactivare (detoxifiere), pe cnd la mamifere procesele de detoxifiere predomin fa de
procesul de activare metabolic [38, pp.64, 42].

Aspectul calitativ al toxicitii


La mamifere, transformarea
metabolic A este mai rapid
dect transformarea metabolic B.
La insecte, transformarea
metabolic B este mai rapid
dect transformarea metabolic A.

Aspectul calitativ al toxicitii


Interaciunile. Chiar dac n teste de laborator, cum ar fi de

exemplu testul pentru determinarea DL 50, organismele sunt


supuse aciunii toxice a unei singure substan e, acest lucru se
ntmpl rareori n viaa de zi cu zi. De exemplu, tratamentul
unei boli poate necesita administrarea simultan a mai multor
substane medicamentoase. Chiar i pacienii care primesc un
singur medicament sunt expui simultan i altor substan e
chimice provenite din mediu sau din alimenta ie. Prin urmare o
problem major n prevederea efectului pe care administrarea
simultan a acestor substane l poate avea asupra organismului
este cunoaterea modului n care ele se influen eaz reciproc i
a tipului de interaciuni posibile ntre substan e.

Aspectul calitativ al toxicitii


Efectul aditiv. Cea mai simpl situaie este aceea n care ntre dou sau mai
multe substane nu exist interac iuni, ceea ce nseamn c la o administrare
simultan a acestor substan e efectul produs asupra organismului va fi unul aditiv.
Fiecare dintre substane are un anumit efect toxic asupra organismului atunci cnd
este administrat individual. Efectul produs de administrarea simultan a
substanelor este pur i simplu suma efectelor lor individuale. Matematic, efectul
aditiv se exprim prin rela ii de genul: 1 + 1 = 2 sau 1 + 5 = 6. Insecticidele
organoclorurate prezint un efect aditiv.
Efectul de sinergie se refer la situa ia n care administrarea simultan a dou
substane ce prezint acelai tip de efect toxic, produce un efect mai intens dect
suma efectelor individuale ale substan elor. n termeni matematici: 1 + 1 = 4 sau 1 +
5 = 10. De ex., att etanolul ct i tetraclorura de carbon sunt hepatotoxice, dar
administrate mpreun sunt mult mai toxice dect administrate separat. Un alt caz
este cel al azbestului i fumului de igar, care amndou cresc inciden a cancerului
pulmonar. Azbestul crete inciden a cancerului pulmonar de 5 ori, iar fumul de
igar de 11 ori. Combinarea celor dou are ca rezultat o mrire de 40 de ori a
riscului de a dezvolta cancer pulmonar [21, pp. 8, 36, pp. 14].

Aspectul calitativ al toxicitii


Efectul de potenare se refer la situaia n care o substan care ea

nsi nu produce efecte adverse intensific efectul toxic al unei alte


substane. n termeni matematici: 0 + 1 = 5 sau 0 + 5 = 20. Un exemplu
este cel al medicamentului disulfiram utilzat n tratamentul
alcoolismului cronic. Dei la dozele administrate disulfiramul nu
prezint efecte adverse, dac se combin cu etanol apar efecte toxice ca
urmare a interferenei disulfiramului cu metabolismul etanolului.
Antagonismul se refer la situaia n care o substan chimic
contrabalanseaz efectul advers al altei substan e, sau cu alte cuvinte
expunerea concomitent la dou substane chimice produce un efect
mai puin intens dect suma efectelor pe care le-ar produce cele dou
substane dac ar aciona indepenedent una de alta. n termeni
matematici: 1 + 1 = 0 sau 1 + 5 = 2. Pe efectul de antagonist se bazeaz
aciunea substanelor antidot.

Aspectul calitativ al toxicitii


Din punct de vedere al mecanismelor care stau la baza
interaciunilor, acestea pot fi grupate n patru clase:
1. Funcionale (fiziologice) sunt acele interac iuni n care ambele
substane acioneaz asupra aceluia i sistem al organismului, eventual
prin mecanisme diferite. De ex., scderea drastic a tensiunii arteriale
ca urmare a unei supradoze de barbiturice poate fi contracarat prin
administrarea unei substane vasoconstrictoare care cre te tensiunea
arterial.
2. Chimice sunt acele interac iuni n care o substan se combin
chimic cu o alt substan astfel modificndu- i toxicitatea fie n sensul
creterii, fie n sensul descre terii ei. De ex., EDTA-ul se folose te ca
antidot n intoxicaia cu metale grele, deoarece formeaz combina ii
complexe (chelai), mai puin toxice, cu aceste metale.

Aspectul calitativ al toxicitii


3. Metabolice. Una dintre substane interfer cu metabolismul celeilalte
substane modificndu-i astfel toxicitatea. Un exemplu este mrirea toxicitii
insecticidului malation (sinergism) atunci cnd este administrat mpreun cu
un alt insecticid organofosforic (EPN). EPN-ul blocheaz detoxifierea
malationului, mrindu-i astfel toxicitatea. Un alt exemplu, este blocarea de
ctre disulfiram a enzimei acetaldehid-dehidrogenaza. n mod normal,
alcoolul etilic este metabolizat n ficat, mai nti la acetaldehid sub aciunea
enzimei alcool-dehidrogenaza. Acetaldehida este un metabolit toxic,
detoxifierea producndu-se prin oxidarea acesteia la acid acetic, reac ie
catalizat de enzima acetaldehid-dehidrogenaza. Disulfiramul inhib aciunea
acestei enzime. Prin urmare, dei n tratamentul alcoolismului, disulfiramul se
administreaz la doze practic netoxice, ingerarea simultan de alcool l face
s produc efecte adverse (efect de potenare) ca urmare a interferen ei sale
cu metabolismul alcoolului i a acumulrii n organism de acetaldehid,
metabolit toxic al etanolului.

EPN

Disulfiram

Aspectul calitativ al toxicitii


4. Interaciunile la nivelul receptorilor sunt ntlnite mai ales n cazul
antagonismului. Cele dou substane interacioneaz cu acelai receptor,
ca de exemplu, oxigenul i monoxidul de carbon care ambele se leag de
hemoblobin. De aceea, intoxicaiile cu monoxid de carbon se trateaz cu
oxigen care dislocuiete monoxidul de carbon din carboxihemoglobin.
Studiul interaciunilor este deosebit de important din mai multe
motive, cum ar fi:
- permite proiectarea unor substane antidot eficiente n tratamentul
diverselor intoxicaii
- permite utilizarea n condiii de siguran i eficien a
medicamentelor, dar i a pesticidelor, prin cunoaterea diferitelor tipuri de
interaciuni, de sinergism sau dimpotriv de antagonism, dintre
substanele medicamentoase, respectiv dintre substanele active din
diferitele pesticide.
- permite elaborarea unor reglementri mai eficiente n vederea
diminurii riscului toxicologic rezultat din expunerea simultan la diferite
substane provenite din mediu i/sau din alimentaie.

Clasificarea substanelor toxice


n general, exist trei tipuri de entiti toxice:
Chimice care includ substane anorganice (ex: plumb, mercur, arsen,

azbest, clor, acid cianhidric i sruri ale acestuia, nitrii, oxizi de azot,
oxizi de sulf etc.) i organice (ex: alcool metilic, pesticide, majoritatea
medicamentelor, otrvuri produse de unele organisme vii etc.).
Biologice - includ acele bacterii i virusuri capabile s provoace boli
organismelor vii. Msurarea toxicitii biologice este complicat de faptul
c pragul limit (threshold dose) poate fi reprezentat de un singur
organism.
Fizice - se refer la factori crora nu le atribuim n mod uzual atributul
toxic, cum ar fi: ocuri fizice, vibraii, sunete, cldur, frig, radia ii
neionizante precum lumina vizibil i infraroie, dar i radiaii ionizante
ca razele X, , , .
Substanele toxice pot fi clasificate dup mai multe criterii.

Clasificarea substanelor toxice


1. Dup origine, substanele toxice pot fi:

Naturale (toxine)- Orice otrav de origine microbian (produs de


microorganisme patogene ca virusuri, bacterii, protozoare, fungi), vegetal
sau animal care interacioneaz specific cu anumite componente celulare,
biomacromolecule precum enzime sau receptori celulari provocnd
moartea celulei, alterarea dezvoltrii, creterii i func ionrii normale sau
moartea organismului. Ex. de toxine de origine animal: veninurile de
erpi, vipere, scorpioni, pianjeni, peti, albine; ex. de toxine de origine
microbian: toxina botulinic, o neurotoxin de natur proteic produs de
bacteria Clostridium botulinum, toxina tetanic produs de Clostridium
tetani etc.; ex. de toxine vegetale: alcaloizi precum stricnina, morfina,
papaverina, nicotina, glicozide cianogene (care ajunse n aparatul digestiv
elibereaz HCN), ricina (o glicoprotein din planta de ricin) etc.

Morfina (principalul agent


activ din opiu)

Clasificarea substanelor toxice


Atunci cnd sunt ingerate, glicozidele
cianogene precum amigdalina din smburii
de caise formeaz acid cianhidric sub
aciunea enzimelor din aparatul digestiv.
Rezultate ca produs principal sau
subprodus al unei activiti umane.Uneori
produse supertoxice,ca
2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina pot fi
rezultatul unor reacii secundare i pot
contamina n mod nedorit produsul principal
al unei sinteze chimice. De ex,
2,4,5-triclorofenoxidul, utilizat ca
intermediar n sinteza ierbicidului selectiv
2,4,5-T (acid 2,4,5-triclorofenoxiacetic),
poate reaciona cu el nsui la temperatur
nalt formnd 2,3,7,8-tetraclorodibenzop-dioxina. Aceast reacie secundar scpat
de sub control a dus la accidentul industrial
de la Seveso (Italia) n 1976. Atunci 6 tone
de substane chimice, coninnd i 1 kg de
dioxin au fost evacuate accidental n
atmosfer i rspndite pe o suprafa de
18 km2, rezultnd cea mai mare expunere
cunoscut vreodat a unei populaii la acest
compus deosebit de periculos.

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice


Atragem atenia asupra faptului c termenul de
compus natural nu trebuie asociat automat cu lipsa
de toxicitate i sigurana n folosire sau consum,
dup cum nici termenul de compus de sintez nu
nseamn automat c acel compus este toxic sau
prezint riscuri atunci cnd este folosit sau
consumat. Exist substane naturale supertoxice,
de ex. toxina botulinic, i compui de sintez
practic inofensivi, de ex. etilvanilina (aroma
artificial de vanilie).
Etilvanilina

Clasificarea substanelor toxice


2. Dup celulele sau organul int asupra cruia
acioneaz; de exemplu, substanele pot fi hepatotoxice
(afecteaz ficatul), neurotoxice (afecteaz sistemul
nervos), nefrotoxice (afecteaz rinichiul) sau pot prezenta
toxicitate pulmonar.
3. Dup efectele speciale pe care le produc asupra
organismului, distingem mai multe categorii de substane,
i anume:
a) Carcinogenice acele substane care produc cancer,
de ex. hidrocarburile aromatice polinucleare (PAH).

Clasificarea substanelor toxice


b) Mutagenice substane care modific materialul genetic (ADN-ul) unui organism.
c) Teratogenice substane care produc malformaii congenitale.
d) Perturbatori endocrini sau ageni activi hormonal (endocrine disruptors n lb.
englez) - substane chimice de natur exogen care interfer cu ac iunea hormonilor din
sistemul endocrin i afecteaz funcionarea normal a organismului uman sau animal
provocnd efecte adverse. Comunicaiile intercelulare din organismului uman sunt
realizate n principal cu ajutorul a trei sisteme: sistemul nervos, sistemul endocrin i
sistemul imun. Sistemul nervos transmite mesaje senzoriale ctre creier i permite un
rspuns rapid la modificri i evenimente brute din mediul nconjurtor. Sistemul
endocrin utilizeaz hormonii, care sunt mesageri chimici (molecule semnalizatoare)
eliberai direct n snge de glandele cu secreie intern, cu rolul de a regla, prin procese
mai lente, metabolismul, de a pstra echilibrul hemodinamic i echilibrul electrolitic, i de
a menine diferitele constante ale mediului interior (ansamblul fluidelor organismului)
cum ar fi pH-ul sngelui, concentraia de dioxid de carbon n snge, concentra ia de
glucoz n snge, temperatura corpului ntre limitele valorilor normale. Acest proces de
reglare se numete homeostazie. Hormonii joac un rol primordial n procesul de cre tere
i dezvoltarea, n transformrile profunde ale pubert ii prin care organismul copilului
devine un organism adult capabil de reproducere i joac de asemenea un rol n
determinarea unei anumite dispoziii.

Clasificarea substanelor toxice

Sistemul endocrin este format din:


- Glande
- Hormoni (mesageri chimici)
- Receptori
Secreia hormonal a unei glande este activat de un stimul. Stimulul poate fi
de exemplu apariia unei perturbaii precum abaterea de la valoarea normal a unei
constante a mediului interior, ca de exemplu nivelul de glucoz n snge. Glanda
posed receptori ce pot sesiza aceast variaie i rspunde la stimul prin eliberarea
n snge a unui hormon. Hormonii sunt molecule semnalizatoare (signaling
molecules in lb. englez) implicate n comunicarea i transmiterea de informaii
ntre celule. Ele poart n structura lor chimic un mesaj. Aceti mesageri chimici
circul prin snge pn cnd ntlnesc o celul int. Hormonii acioneaz deci la
distan fa de locul producerii lor. Celula int are anumii receptori specifici
pentru hormonul respectiv [43]. Receptorii sunt molecule proteice ncorporate n
membrana celular sau prezente n citoplasm (n cazul hormonilor liposolubili
care pot trece prin membrana plasmatic). Hormonii interacioneaz cu receptorii
lor specifici de care se leag prin fore intermoleculare necovalente formnd
complexul hormon-receptor. Formarea complexului supramolecular receptorhormon se bazeaz pe complementaritatea formei geometrice i a interaciunilor
(legturilor intermoleculare non-covalente) dintre grupele funcionale ale
ligandului (hormonului) i receptorului, asemntor complementaritii lactcheie.

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice


n urma legrii hormonului, receptorul sufer o modificare a conforma iei sale. Aceast
modificare de conformaie reprezint semnalul chimic care declan eaz o succesiune de
evenimente biochimice (o cascad biochimic) ce reprezint calea de transmitere (sau
transducere) a semnalului pn la un efector situat n interiorul celulei int. Odat ce
semnalul ajunge la efector acesta execut un rspuns celular al crui rezultat este
modificarea fiziologic a stimulului iniial ce a determinat eliberarea hormonului, n sensul
diminurii perturbaiei i revenirii constantei mediului intern (n exemplul ales, concentra ia
de glucoz n snge) la valoarea normal. Acesta este mecanismul general de reglare
hormonal a metabolismului i de meninere a homeostaziei, prin feedback negativ (bucl
de control nchis) [44]. Exist i un control prin feedback pozitiv (bucl deschis), un
mecanism n care rspunsul sistemului la apariia unei perturba ii este amplificarea
perturbaiei. n anumite situaii, organismul are nevoie de un astfel de control prin feedback
pozitiv, un exemplu fiind refelexul Ferguson ce apare n timpul na terii i este un reflex
neuroendocrin ce const n esen n faptul c producerea unei contrac ii are ca rezultat
amplificarea contraciilor. Totui, feedback-ul pozitiv este tolerat de organism doar pe
termen scurt, pe termen lung ducnd la instabilitate [45].
Hormonii nu sunt singurele molecule semnalizatoare. Neurotransmi torii,
medicamentele sau substanele toxice sunt alte tipuri de mesageri chimici.

Clasificarea substanelor toxice


Hormonii steroizi conin un schelet hidrocarbonat, lipofil,
de gonan sau steran, format din trei inele ciclohexanice i un
inel ciclopentanic condensate, notate A D, n care
stereochimia jonciunilor dintre inele B i C i C i D este
trans, trans. Stereochimia jonciunii dintre inelele A i B este
trans n -steran i cis n -steran. Datorit caracterului
liposolubil al scheletului de steran, hormonii steroizi pot s
traverseze membrana plasmatic i anvelopa nuclear
ajungnd n nucleu, acolo unde se afl receptorii lor
specifici de care se leag.

-Steran

-Steran

Clasificarea substanelor toxice


Receptorii hormonilor steroizi sunt proteine cu rol de factori de transcriere care, n
stare inactiv, sunt formate din mai multe subuniti polipeptidice. Legarea hormonului
steroid de receptorul su induce o modificare conforma ional a receptorului n urma
creia acesta pierde o parte dintre subunitile proteice i totodat dimerizeaz. n noua
sa conformaie, factorul de transcriere este activat i dup ce mai ata eaz nc o
protein, este capabil acum s se lege de o secven regulatoare a ADN-ului, un
promotor, n amonte de o gen [46, 47]. n urma legrii factorului de transcriere de
promotor, transcrierea genei int respective este activat. Se sintetizeaz astfel o
macromolecul de ARN mesager care prsete nucleul i n citoplasm serve te ca
ablon pentru sinteza unei proteine specifice ce se realizeaz n ribozomi. Acest proces
prin care informaia stocat n ADN duce la sinteza unei proteine se nume te expresie
genetic. Astfel, rolul hormonilor steroizi este de regulatori ai expresiei genetice.
Deoarece proteinele joac roluri cheie n realizarea tuturor func iilor celulare, prin
sinteza unor proteine specifice se formeaz caracterele morfologice i func ionale ale
celulei (fenotipul celular). Expresia genetic a unei celule determin deci fenotipul
acesteia, funcia celulei i rspunsul pe care aceasta l are la ac iunea factorilor externi
(mediului). Este clar, prin urmare, c orice interven ie strin n mecanismul de reglare a
expresiei genetice a unei celule, va avea drept consecin e alterarea metabolismului
celular i a funcionrii normale a celulei.

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice


Hormonii steroizi au roluri multiple n organism, contribuind la
controlul metabolismului, proceselor inflamatorii, func iilor imune,
echilibrului hidro-electrolitic, dezvoltrii caracterelor sexuale.
Perturbatorii endocrini interfer cu ac iunea hormonilor steroizi, prin
cel puin trei tipuri de mecanisme [47, 48].
d.1). Imit aciunea unui hormon natural, cum ar fi hormonii
estrogeni (estradiol, estriol, estron) sau androgeni (testosterona),
modificnd conformaia receptorului i ini iind astfel un rspuns.
Efectul toxic apare ca urmare a unui dezechilibru produs de formarea n
exces a unui produs al expresiei genetice sau, dimpotriv, din cauza
inhibrii transcrierii unei gene, ntr-un moment nepotrivit pentru
organism. De ex., prezena n organismul mascul a unei substan e ce
imit aciunea hormonilor estrogeni duce la feminizarea masculilor i
incapacitatea lor de a se reproduce.

Clasificarea substanelor toxice

d.2). mpiedic aciunea normal a hormonilor prin blocarea situsului


activ al receptorilor. Toxicul se leag de receptorul hormonului natural i
mpiedic astfel accesul hormonului la situsul activ al receptorului. Spre
deosebire ns de legarea hormonului, legarea toxicului nu schimb
conformaia receptorului i nu iniiaz
niciun rspuns.

Clasificarea substanelor toxice


d.3). Afecteaz sinteza, transportul, metabolismul i
eliminarea hormonilor.
Perturbatorii endocrini sunt molecule de dimensiuni
mici, lipofile. Pot fi mprite n dou categorii:
- hormoni de sintez, ca de ex. contraceptivele orale
sau hormonii de cretere folosii ca aditivi alimentari n
hrana animalelor.
- substane chimice produse industrial ce au diverse
utilizri pe scar larg (de ex. Bisfenolul A, utilizat la
fabricarea sticlelor din material plastic, precum i a
conservelor metalice pentru alimente i buturi).

Clasificarea substanelor toxice


La femei perturbatorii endocrini pot provoca:
cancer ovarian i de sn, fibroz chistic la
nivelul snului, chisturi ovariene, endometrioz,
fibrom uterin, boli inflamatorii pelviene. La
brbai efectele provocate de perturbatorii
endocrini pot fi: calitate slab a materialului
seminal (numr redus de spermatozoizi,
mobilitate sczut), cancer testicular, boli de
prostat.

Clasificarea substanelor toxice


Exemple de perturbatori endocrini:
1,1,1-tricloro-2,2-bis(4-clorofenil)etanul (DDT-ul este un insecticid ce a fost larg utilizat
pentru combaterea pduchilor ce sunt vectori ai tifosului exantematic. Actualmente este interzis
utilizarea lui. Nu este biodegradabil; urme de DDT au fost gsite chiar i n grsimea
pinguinilor din regiunile arctice.)

Bifenili policlorurai (PCBs)

Difenileteri polibromurai (PBDE)

Clasificarea substanelor toxice


Ftalaii sunt compui utilizai pentru a face

materialele plastice mai flexibile (plastifiani). Se


regsesc n numeroase obiecte precum jucriile,
materiale medicale din plastic etc. Ex., bis (2etilhexil)ftalatul. Produce tulburri endocrine la
bebeluii de sex masculin.

Clasificarea substanelor toxice


Dietilstilbestrolul
(4,4-(3E)-hex-3-en-3,4diildifenolul). ntre anii 1940-1970, a fost
administrat femeilor gravide ca medicament pentru
prevenirea riscului de avort. Ulterior s-a constat c
utilizarea lui poate determina anomalii
uterine la feii de sex feminin, capabile
s antreneze sterilitatea i chiar s
creasc riscul apariiei tumorilor
vaginale dup pubertate. A fost retras
de pe pia n 1977.

Clasificarea substanelor toxice


Bisfenol A (BPA); 4,4'-(izopropililiden)difenol se folose te la sinteza r inilor
epoxidice. Se regsete n materialele plastice utilizate la fabricarea sticlelor de buturi
rcoritoare, a foliei de plastic din interiorul cutiilor de conserve, a dopurilor din plastic,
a cutiilor alimentare din plastic, a biberoanelor i tetinelor din material plastic, a evilor
de cauciuc din plastic, a jucriilor din plastic, a cernelii de printer. Este periculos
deoarece poate migra uor din materialele plastice n ap, buturi sau alimente, proces
care este accelerat de prezena unui mediu acid (ca n buturile carbo-gazoase) sau bazic
(praful de copt).

Teoria perturbatorilor endocrini afirm c expunerea la doze mici de substan e


chimice care pot s interacioneze cu receptorii hormonali poate s afecteze cre terea,
reproducerea i alte procese mediate hormonal. Teoria sus ine c ntruct hormonii
endogeni sunt prezeni i acioneaz n organism n cantit i extrem de mici (de ordinul
nanogramelor), este posibil ca perturbatorii endocrini s dezvolte efecte adverse ce
afecteaz funcionarea normal a sistemului endocrin la doze mult mai mici dect cele
necesare pentru o alt substan toxic ce ac ioneaz printr-un mecanism diferit.

Clasificarea substanelor toxice


De asemenea, momentul expunerii este presupus a fi extrem de
important, deoarece ci hormonale diferite sunt active n momente
diferite, n stadii diferite ale dezvoltrii organismului. n mod
deosebit n cazul organismelor tinere care cresc rapid, interferen a
cu procesele hormonale de comunicare poate avea efecte profunde
asupra organismului. Depinznd de stadiul dezvoltrii, interferen a
cu sistemul hormonal poate avea ca rezultat efecte ireversibile
neobservate la indivizi aduli expui la aceeai doz pentru aceeai
perioad de timp. Experimente pe animale au identificat momente
critice n anumite perioade ale dezvoltrii intrauterine i la un
anumit timp dup natere, cnd expunerea la substane chimice
care fie interfer cu, fie mimeaz aciunea hormonilor, are efecte
adverse care persist i la vrsta adult.

Clasificarea substanelor toxice


4. Dup mecanismul de aciune. De ex.:
Anticolinergic

blocheaz legarea neurotransmitorului


acetilcolina de receptorii muscarinici prezeni n membrana
celular a anumitor neuroni.
Inhibitor de colinesteraz

Decuplant al fosforilrii oxidative de catena respiratorie.

Pentru a menine i perpetua starea vie, organismele au nevoie de


un aport continuu de energie din mediu. Organismele vii au sisteme
specializate prin care extrag energia din mediul nconjurtor, o
convertesc n alte forme de energie mai potrivite cerinelor lor, o
stocheaz i apoi o folosesc pentru sinteza propriilor sisteme
biochimice complexe din precursori simpli precum i n alte procese
ce necesit aport de energie, cum ar fi locomoia i transportul activ
al diferitelor specii chimice n interiorul organismului.

Clasificarea substanelor toxice


Totalitatea transformrilor compu ilor chimici i a energiei din organismul viu
poart numele de metabolism. Procesele biochimice de transformare a materiei i
energiei sunt organizate func ional n secven e de reac ii consecutive, catalizate
enzimatic i numite ci metabolice, n care produsul unei reac ii enzimatice devine
substrat pentru reacia urmtoare. Metabolismul are dou laturi opuse care se
desfoar simultan i se afl ntr-un echilibru dinamic: catabolismul i anabolismul.
Procesele metabolice care se desf oar la nivel celular constituie metabolismul
intermediar. Catabolismul cuprinde procesele prin care molecule complexe de
dimensiuni mari (proteine, polizaharide, lipide) sunt degradate la molecule mai
simple, de dimensiuni mai reduse, i se elibereaz energia chimic con inut n aceste
macromolecule complexe (molecule combustibil). Macromoleculele sunt mai nti
degradate pn la unit ile lor monomere, aminoacizi n cazul proteinelor,
monozaharide n cazul polizaharidelor, iar trigliceridele (lipide complexe) la acizi
grai. Aceti compui sufer n continuare degradri oxidative cu consum de oxigen,
produii finali de degradare fiind dioxidul de carbon i apa. Anabolismul reprezint
latura sintetic a metabolismului, n care organismul i sintetizeaz propriile structuri
moleculare i supramoleculare complexe (precum proteinele, acizii nucleici,
polizaharidele), pornind de la constituen ii lor de baz i folosind energia eliberat n
procesele catabolice.

Clasificarea substanelor toxice


Problema care se pune este, deci, cea a modului n care se
realizeaz transferul energiei de la procesele catabolice,
generatoare de energie, la cele anabolice, consumatoare de
energie. n general, procesele biochimice care decurg cu
eliberare de energie sunt denumite procese exergonice, iar
cele care decurg cu consum de energie, procese endergonice.
Transferul energiei n sisteme biologice, n care
temperatura este constant, nu se poate realiza dect prin
reacii cuplate. Dou reacii sunt cuplate atunci cnd reac ia
exergonic determin desfurarea celeilalte reac ii care este
endergonic. Exist dou variante de cuplare a reac iilor
biochimice.

Clasificarea substanelor toxice


4.1. Cuplarea printr-un intermediar chimic (metabolit) comun. Se ntlne te n
situaia a dou reacii succesive ntre care exist un intermediar comun. Dac una dintre
reacii este endergonic (G > 0), ea poate avea totu i loc, prin cuplare cu o reac ie
exergonic (G <0), cu o condiie i anume ca energia eliberat de reac ia exergonic s
fie mai mare dect energia ce trebuie furnizat reac iei endergonice pentru ca aceasta s
se desfoare n sensul defavorizat termodinamic. Ex.: fosforilarea glucozei. Reac ia
glucozei cu fosfatul (Pi) este o reacie endergonic, defavorizat energetic i nu va avea
loc. Hidroliza adenozin trifosfatului (ATP)la adenozin difosfat (ADP) i fosfat anorganic
(Pi) este o reacie puternic exergonic. Reac ia total este fosforilarea glucozei de ctre
ATP (suma celor dou reacii pariale de mai sus) i are loc cu u urin . Reac ia
exergonic furnizeaz energia necesar reaciei endergonice (trage dup ea reac ia
endergonic). Intermediarul comun, n acest caz, este anionul fosfat.
Componenta
endergonic;

Gend 0

Componenta exergonic;

Gex 0

Gtotal Gend Gex 0; Gex Gend

Clasificarea substanelor toxice


Figura prezint o
analogie mecanic a
conceptului de
cuplare [49].

4.2. Cuplarea printr-un intermediar energetic comun. O


modalitate important de transfer al energiei de la procesele
catabolice (exergonice) la cele anabolice (endergonice) este de
a sintetiza n procesele catabolice un compus cu poten ial
energetic ridicat i de a utiliza acest compus n procesele
anabolice. Un astfel de compus este adenozin trifosfatul (ATP).

Clasificarea substanelor toxice


ATP-ul este sintetizat n procesele catabolice din
adenozin difosfat (ADP) i fosfat anorganic (Pi) i
nmagazineaz energia eliberat n procesele de degradare
oxidativ a moleculelor combustibil sub form de energie
chimic a legturii macroergice, bogate n energie, de tip
fosfoanhidrid, a gruprii fosfat terminale din molecula sa.

Clasificarea substanelor toxice


El stocheaz pe termen scurt energia rezultat din procesele catabolice, pe
care apoi o cedeaz proceselor anabolice atunci cnd gruparea sa fosfat terminal
este hidrolizat cu formare de ADP i fosfat anorganic. Astfel, ATP-ul
funcioneaz ca un cont curent energetic al celulei vii. Ac ionnd de o manier
ciclic ca un cru al energiei de la procesele catabolice la cele anabolice, fiind
n permanen consumat n procesele anabolice i resintetizat n cele catabolice,
ATP-ul reprezint veriga de legtur dintre cele dou laturi opuse ale
metabolismului pe care le cupleaz. Timpul mediu de via al unei molecule de
ATP este de aproximativ un minut.

Ciclul ATP-ului

Clasificarea substanelor toxice


Cea mai mare parte din ATP este sintetizat prin
procesul de fosforilare oxidativ a ADP-ului n
mitocondrii ( organite celulare ce func ioneaz ca
nite centrale energetice ale celulei vii).
Fosforilarea
oxidativ
reprezint
punctul
culminant al metabolismului generator de energie:
toate cile de degradare oxidativ a moleculelor
combustibil converg spre aceast etap final n
care energia eliberat n procesele catabolice este
utilizat pentru sinteza ATP.

Clasificarea substanelor toxice


Fosforilarea oxidativ are dou componente:
- Componenta exergonic este reprezentat de lan ul transportor de
electroni sau catena respiratorie.
Prin degradarea oxidativ a moleculelor combustibil se formeaz ca produs
final dioxidul de carbon i rezult a a numi ii echivalen i de reducere, formele
reduse NADH i FADH2 ale coenzimelor de oxido-reducere, nicotinamidadenin dinucleotida i, respectiv, flavin-adenin dinucleotida. Partea final a
acestor reacii de degradare oxidativ este reprezentat de reac iile din ciclul
acizilor tricarboxilici (ciclul acidului citric sau ciclul Krebs) care se produc n
matricea mitocondrial. Rolul echivalen ilor de reducere rezulta i din ciclul
Krebs este de a transfera electronii ctre acceptorul final de electroni care este
molecula de oxigen ce se reduce la ap, conform urmtoarelor reac ii:
NADH + H+ + O2 NAD+ + H2O
FADH2 + O2 FAD + H2O

(31)
(32)

Clasificarea substanelor toxice


n chimie, cedarea de electroni se nume te
oxidare, iar acceptarea de electroni se
numete reducere. Un reductor cedeaz
electroni i se oxideaz. Electronii ceda i de
reductor sunt acceptai de un oxidant care se
reduce. Coenzimele de oxido-reducere pot
exista n dou forme: oxidat, respectiv,
redus, interconvertibile prin procese redox.

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice


Echivalenii de reducere NADH i FADH 2 cedeaz doi
electroni. Electronii nu sunt ns ceda i direct oxigenului, ca n
reaciile (31) i (32). Aceste reac ii sunt puternic exergonice i
eliberarea brusc a unei asemenea cantit i mari de energie, ar
distruge practic celula vie. De aceea, transferul electronilor de la
echivalenii de reducere la oxigen se face secven ial prin
intermediul unor proteine transportoare de electroni care formeaz
catena respiratorie. Aceste proteine sunt localizate n membrana
intern a mitocondriei.
- Componenta endergonic a fosforilrii oxidative este sinteza
ATP prin fosforilarea ADP, proces ce se realizeaz cu ajutorul
enzimei ATP sintaza pe seama energiei eliberate de componenta
exergonic.

Clasificarea substanelor toxice


Cuplarea reaciilor redox din lanul transportor de electroni cu
fosforilarea ADP-ului este reprezentat schematic mai jos.

Clasificarea substanelor toxice


n reaciile redox exergonice ale lan ului transportor de electroni se elibereaz suficient
energie pentru a susine sinteza endergonic a ATP-ului din ADP i fosfat anorganic.
Problema care se pune este, din nou, cea a mecanismului prin care se realizeaz transferul
de energie (cuplarea) ntre reac iile exergonice ale catenei respiratorii i fosforilarea
endergonic a ADP-ului. Teoria care este acceptat de majoritatea comunit ii tiin ifice
este teoria chemiosmotic elaborat n 1961 de P. D. Mitchell, laureat al Premiului Nobel
pentru chimie n 1978. Mare parte din energia eliberat n reac iile redox ale lan ului
transportor de electroni este utilizat pentru a pompa simultan protoni din matricea
mitocondrial n spaiul intermembranar, prin membrana intern, cu ajutorul unor
complexe proteice transportoare de protoni situate n membrana intern a mitocondriei i
asociate cu enzimele lanului transportor de electroni. Se creaz i se men ine astfel un
gradient de protoni ntre cele dou fe e ale membranei interne a mitocondriei. Gradientul
de protoni este un gradient electrochimic avnd dou componente:
- gradientul electric; cum protonii au sarcin pozitiv, fa a extern, cea dinspre spa iul
intermembranar, a membranei interne a mitocondriei este ncrcat pozitiv comparativ cu
faa intern, cea dinspre matricea mitocondrial.
-gradientul chimic; pH-ul pe fa a extern a membranei interne este mai acid dect pe
faa intern.
Acest gradient de potenial electrochimic reprezint o form de conservare temporar a
energiei eliberate n procesele redox ale lan ului transportor de electroni.

Clasificarea substanelor toxice

n momentul n care protonii vor curge n mod spontan n sensul


gradientului electrochimic de la potenial mare spre poten ial mic, adic
dinspre spaiul intermembranar, prin membrana intern, napoi spre
matricea mitocondrial, gradientul de potenial se mic oreaz (se descarc)
i energia stocat temporar n acest gradient este eliberat i serve te la
fosforilarea ADP-ului. Acest proces este realizat cu ajutorul ATP sintazei.
ATP sintaza este un motor molecular, un complex proteic format din mai
multe subuniti organizate funcional n dou por iuni: o por iune
transmembranar (F0) i o poriune situat n matricea mitocondrial (F1).

Clasificarea substanelor toxice


Rolul poriunii F0 este acela al unui canal ionic
care faciliteaz trecerea protonilor n sensul
gradientului de potenial electrochimic (transport
pasiv) prin membrana intern a mitocondriei. Acest
canal ionic devine activ (se deschide) numai atunci
cnd potenialul protonilor atinge o valoare ce
conine suficient energie pentru a susine reacia de
fosforilare a ADP cu formare de ATP.
Rolul poriunii F1 este unul sintetic, de a cataliza
sinteza ATP din ADP i fosfat anorganic.

Clasificarea substanelor toxice


Orice substan care disipeaz gradientul de protoni dintre
cele dou fee ale membranei interne a mitocondriei, priveaz
sinteza ATP de sursa sa de energie, cu alte cuvinte,
decupleaz lanul transportor de electroni (componenta
exergonic a fosforilrii oxidative) de sinteza ATP
(componenta endergonic a fosforilrii oxidative) i reduce
astfel capacitatea celulei de a sintetiza ATP. O astfel de
substan este 2,4-dinitrofenolul care, fiind un transportor de
protoni prin membran, duce la anularea gradientului de
protoni implicat n cuplarea catenei respiratorii cu fosforilarea
oxidativ.

Clasificarea substanelor toxice


Un alt transportor de protoni este antibioticul valinomicina.

Valinomicina

Cum cea mai mare parte a ATP-ului celular se sintetizeaz prin fosforilarea
oxidativ a ADP-ului, aciunea pe termen lung a decuplan ilor este periculoas
deoarece las procesele anabolice fr surs de energie.

Clasificarea substanelor toxice


Figura urmtoare ilustreaz procesul fosforilrii oxidative cuplate cu lan ul
transportor de electroni
[49, pp. 723].

Clasificarea substanelor toxice


O reprezentare schematic a mitocondriei este prezentat n
figura urmtoare. Se observ c membrana intern este mai lung
dect membrana extern, motiv pentru care formeaz falduri
numite criste mitocondriale care ptrund adnc n spa iul matricei
mitocondriale. Aria membranei interne este cam de cinci ori mai
mare dect cea a membranei externe. Acest fapt este justificat de
localizarea n membrana
intern mitocondrial a
enzimelor din lanul
transportor de electroni
i a ATP sintazei, deci cu ct
aria membranei interne
este mai mare cu att crete i
capacitatea mitocondriei de a
sintetiza ATP.

Clasificarea substanelor toxice


5. Dup compoziia chimic, de ex.:

Metale grele (Pb, Cd, Hg)


Dibenzodioxine policlorurate (PCDDs)
Policlorodibenzofurani (PCDFs) etc.

6. Dup scopul n care sunt utilizate, de ex.:

Pesticide
Medicamente
Solveni
Aditivi alimentari etc.
7. Dup starea de agregare n condi ii normale: substan e gazoase, lichide,
solide.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Tipuri de efecte toxice
Reacii alergice. Alergia este o reacie advers la o substan rezultat

n urma unei sensibilizri anterioare prin expunere la substan a


respectiv. Reacia alergic este mediat imunologic. Majoritatea
substanelor i a metaboliilor lor sunt de dimensiuni prea mici pentru a fi
recunoscute ca substane strine (non-self) de ctre sistemul imunitar. De
aceea, pentru a forma un antigen i, deci, pentru a provoca un rspuns
imun, astfel de substane, numite haptene, trebuie mai nti s se combine
cu o protein endogen. Dup formarea antigenului, acesta declanseaz
procesul de formare a anticorpilor specifici care dureaz 1-2 sptmni.
Dac dup formarea anticorpilor, organsimul este expus din nou
substanei chimice respective sau uneia similare structural, se produce
interaciunea antigen-anticorp care duce la apari ia manifestrilor tipice
alergiei. Reaciile alergice sunt diverse, interesnd diferite organe i
mergnd de la iritaii minore pe piele pn la oc anafilatic letal.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Idiosincraziile. Termenul desemneaz o intensitate anormal a

efectelor produse de o substan asupra anumitor indivizi, incluznd att


o sensibilitate extrem la doze mici, ct i cazul invers, adic
insensibilitate neobinuit la doze mari. Un exemplu clasic l constituie
reacia idiosincrazic dezvoltat de anumi i pacien i manifestat prin
relaxare muscular prelungit, de durata a ctorva ore i apnee (oprire
temporar a respiraiei) ca urmare a administrrii unei doze standard,
normale de succinilcolin. Succinilcolina este un relaxant al mu chilor
scheletici, ce are o perioad scurt de ac iune ca urmare a metabolizrii
sale rapide de ctre o enzim aflat n mod normal n snge i numit
butirilcolinesteraz plasmatic. Reacia idiosincrazic este determinat
genetic. Butirilcolinesteraza din sngele pacien ilor care prezint reac ia
idiosincrazic este mai puin eficient n degradarea succinilcolinei, ca
urmare a unui polimorfism al genei ce codific aceast enzim.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Un alt tip de reacie idiosincrazic este sensibilitatea deosebit a
anumitor oameni fa de nitrii i al i compu i capabili s oxideze
ionul Fe2+ din hemoglobin la Fe3+, formnd methemglobina.
Aceasta din urm, spre deosebire de hemoglobin, nu poate lega
oxigenul. n mod normal, methemglobina este redus napoi la
hemoglobin de enzima NADH-methemglobin reductaza. Pacien ii
cu reacie idiosincrazic la nitri i prezint o activitate redus a
acestei enzime ca urmare a unei modificrii genetice ce are ca
rezultat nlocuirea unui singur aminoacid din catena polipeptidic a
enzimei normale (un rest de serin este nlocuit cu unul de prolin).
Persoanele care prezint acest tip de modificare genetic pot s
sufere de hipoxie (aport insuficient de oxigen) ca urmare a
administrrii unei doze de nitri i care este inofensiv pentru
oamenii normali.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Efecte toxice imediate i ntrziate. Efectele toxice

imediate sunt acele efecte care apar rapid dup o


singur administrare a substanei. Efectele toxice
ntrziate sunt acelea care care apar dup scurgerea unei
anumite perioade de timp din momentul administrrii.
De obicei, efectele carcinogene sunt efecte toxice
ntrziate. De ex., fiicele mamelor tratate cu
dietilstilbestrol n perioada graviditii pot dezvolta
cancer vaginal n perioda tinereii, la 20-30 de ani de la
expunerea lor la aceast substan n perioada vie ii
intrauterine [50].

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Efecte toxice reversibile i ireversibile. Atunci

cnd o substan toxic produce leziuni unui esut,


efectul poate fi reversibil sau ireversibil n funcie
de capacitatea de regenerare a esutului respectiv.
De ex., leziunile ficatului sunt de obicei
reversibile, datorit capacitii mari de regenerare
specifice ficatului, pe cnd leziunile sistemului
nervos central (SNC) sunt ireversibile deoarece
celule SNC nu se pot divide i nu pot fi nlocuite.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Efecte toxice locale i sistemice. Aceast diferen iere se face n func ie de locul de ac iune al

substanei toxice. Efectele locale sunt acelea care apar la primul loc de contact dintre organism i toxic.
De ex, inhalarea de clor produce leziunea i imflamarea esuturilor cilor respiratorii superioare cu
posibile efecte letale, dei o cantitate foarte mic de clor este absorbit n fluxul sangvin. Efectele
sistemice necesit absorbia toxicului n marea circula ie sau circula ia sistemic i distribu ia sa n
esuturi i organe aflate la distan de locul de intrare a toxicului n organism i de locul absorb iei sale n
snge. Locul de aciune al toxicului este diferit deci de locul n care are loc primul contact dintre toxic i
organism. Majoritatea substanelor, cu excep ia celor foarte reactive, prezint efecte toxice sistemice.
Unele substane prezint ambele tipuri de efecte. De ex,. tetraetilplumbul, (C 2H5)4Pb, produce efecte
locale pe piele i la locul de absorb ie, dar este transportat de ctre snge i produce efecte sistemice
asupra sistemului nervos central i altor organe. Cele mai multe substan e ce prezint efect toxic sistemic
nu manifest aceeai toxicitate fa de toate organele, ci efectele toxice se resimt n special asupra
anumitor organe (puine ca numr), numite organe int. Nu este obligatoriu ca organul int s reprezinte
n acelai timp i locul de concentra ie maxim a toxicului n organism. Sngele distribuie toxicul n toate
esuturile i organele, iar acestea re in cantit i mai mici sau mai mari de toxic n func ie de afinitatea lor
pentru acesta. n general se folose te urmtoarea terminologie:
- pentru esuturile i organele int asupra crora ac ioneaz toxicul se folose te termenul de
localizare;
- pentru celelalte esuturi i organe ce re in cantit i importante de toxic fr ca toxicul s ac ioneze
asupra lor se folosete termenul de stocare.
De obicei, organul int nu este i locul de stocare a toxicului n organism. De ex., plumbul este stocat
n oase, dar acioneaz asupra esuturilor moi; insecticidele organoclorurate sunt stocate n esuturile
adipoase, dar acioneaz asupra sistemului nervos central.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Intoxicaiile. Din punct de vedere clinico-evolutiv, intoxica iile pot fi
clasificate n:
- intoxicaii acute
- intoxicaii subcronice
- intoxicaii cronice
Intoxicaiile acute apar atunci cnd o doz mare de substan toxic
ptrunde n organism, ca urmare a unei expuneri unice sau a unor
expuneri repetate, dar ntr-un interval scurt de timp (maxim 24 de ore).
Simptomatologia apare brusc, este bine conturat i evolueaz rapid.
Intoxicaiile subcronice apar n urma unor expuneri repetate la toxic
care se ntind pe o perioad de timp de ordinul sptmnilor sau lunilor.
Intoxicaiile cronice sunt rezultatul unor expuneri repetate pe parcursul
a mai multor luni sau chiar ani de zile. Aciunea toxic se datoreaz
acumulrii substanei n organism, sau a creterii progresive a leziunilor
provocate, cu apariia unei stri patologice fr manifestri evidente dar
care se poate acutiza pe fondul scderii condiiei fiziologice generale sau
n cazul mobilizrii substanei toxice din depozite.

Fazele evoluiei unei substane


toxice n organism
Pn la producerea efectului toxic, o substan chimic parcurge mai multe faze, i anume:
- faza de expunere
- faza toxicocinetic
- faza toxicodinamic.
Evident, nainte ca toxicitatea s se poat manifesta, substan a toxic trebuie s vin n
contact cu o suprafa a corpului precum pielea, ochiul sau o mucoas a tractului alimentar
sau respirator. Dup cum am vzut, efectul poate fi unul local, la nivelul cii de ptrundere,
sau sistemic ca urmare a absorb iei toxicului n marea circula ie i distribu iei sale n ntregul
organism.
Faza toxicocinetic cuprinde efectele i aciunile organismului asupra substan ei toxice.
Substana este absorbit n marea circula ie, distribuit prin arborele circulator ctre toate
esuturile i organele, metabolizat i n final eliminat din organism. Absorb ia depinde de
calea de ptrundere a toxicului n organism sau calea de administrare. Prin metabolizare,
organismul poate transforma substana toxic n metaboli i mai polari i mai hidrofili ce pot fi
eliminai mai uor, metabolizarea avnd astfel o contribu ie important la detoxifierea
organismului. Este posibil ns i situaia invers, n care metabolitul rezultat este mai toxic
dect substana iniial, organismul realiznd astfel activarea xenobioticului, ca de ex., n
cazul glicozidelor cianogene.

Fazele evoluiei unei substane


toxice n organism
Etapele fazei toxicocinetice de la adminsistrarea substan ei toxice pn la
eliminarea sa total din organism se desfoar simultan. Viteza de parcurgere a
etapelor toxicocinetice i proporia de molecule ce sunt implicate n orice
moment n fiecare dintre etape, reprezint profilul toxicocinetic propriu fiecrei
substane toxice.
Efectele i aciunile substanei asupra organismului sunt cuprinse n faza
toxicodinamic. Legarea substanei toxice de receptorii specifici declanseaz
rspunsul toxic al organismului. Efecte biochimice ale formrii complexului
toxic-receptor pot fi: inhibarea activita ii enzimatice, alterarea permeabilit ii
membranei celulare, modificarea metabolismului proteinelor, carbohidra ilor i
lipidelor, inhibarea respiraiei celulare etc. Aceste modificri biochimice se
traduc n plan fiziologic prin modificri ale ritmului cardiac, ritmului respirator,
temperaturii corpului, tensiunii arteriale, modificri la nivelul sistemului nervos
central etc.
Figura urmtoare este o reprezentare schematic a etapelor parcurse pn la
apariia efectului toxic.

Fazele evoluiei unei substane


toxice n organism

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor
Odat ce o substan chimic este eliberat n mediul nconjurtor, ea este supus ac iunii
factorilor de mediu, abiotici i biotici, ce se concretizeaz prin transportul i transformarea
chimic a substanei. S considerm de exemplu un pesticid utilizat n agricultur pentru
combaterea duntorilor i aplicat prin pulverizare a solului. El nu va rmne numai n aria de
aplicare, ci se va rspndi, ptrunznd ca un contaminant att n atmosfer, ct i n apele de
suprafa i n cele subterane. Particule de pesticid pot fi antrenate de vnt, ajungnd astfel n
atmosfer, de unde vor reveni pe Pmnt odat cu ploile i, direct sau prin intermediul
scurgerilor de suprafa, o parte din pesticid va ptrunde i n apele de suprafa . De
asemenea, pesticidul va ptrunde i n apele subterane odat cu infiltrarea apei prin sol. n sol
exist bacterii descompuntoare care transform materia organic n materie anorganic,
aceasta din urm intrnd apoi n ciclurile biogeochimice (ciclul carbonului, ciclul azotului i
ciclul oxigenului). Microorganismele din sol au astfel o ac iune detoxifiant. Totu i unele
pesticide nu sunt biodegradabile i persist n sol i ap perioade foarte lungi de timp putnd
intra n lanurile trofice i avansa verig cu verig n aceste lan uri regsindu-se n final drept
contaminani ai alimentelor de origine vegetal sau animal. Deosebit de periculoase, n acest
sens sunt pesticidele organoclorurate, deoarece sunt liposolubile i pot fi u or preluate de
organisme din sol, ap sau aer. Dac nu sunt rapid metabolizate ele persist un timp suficient
de lung n organism pentru a putea fi transferate organismului ce reprezint urmtoarea verig
a lanului trofic respectiv (vezi figura urmtoare).

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor

Lan trofic simplificat


Mai mult dect att, n fiecare organism verig a lan ului trofic, toxicul lipofil
ingerat odat cu hrana tinde s fie acumulat n esuturile adipoase, pe cnd restul
hranei este metabolizat i excretat, ajungndu-se astfel la o cre tere semnificatic
a concentraiei de toxic n organism. La un anumit nivel al lan ului trofic,
acumularea de toxic devine vtmtoare. Este sigur c sub ierea cojii oului
anumitor psri rpitoare este produs de acumularea de DDT i DDE
(diclorodifenildicloroetilena obinut prin dehidrohalogenarea DDT-ului) n
organismele lor i este favorizat i de predispozi ia organismului acestor psri la
acest tip de toxicitate.

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor
Bioacumularea este definit ca procesul prin care organismele vii
acumuleaz substane chimice att din mediu, ct i din hran. Deoarce pentru
a ptrunde din mediu n organism, substanele chimice trebuie s traverseze
stratul dublu fosfolipidic al membranelor biologice, bioacumularea este direct
corelat cu lipofilicitatea (solubilitatea n lipide) a substanei chimice [51].
Mediul acvatic reprezint principalul loc n care substanele chimice lipofile
sunt transferate din mediul abiotic n biot. Aceasta se datoreaz n special
faptului c prin membranele respiratorii (branhii) ale petilor trec cantiti
imense de ap, ceea ce favorizeaz extracia eficient a substan elor
liposolubile prezente n ap. Bioacumularea substanelor lipofile este extrem de
eficient la organismele acvatice, concentraia toxicului n aceste organisme
ajungnd s depeasc cu cteva ordine de mrime concentraia sa n mediul
nconjurtor. Capacitatea organismelor acvatice de a acumula xenobiotice
lipofile este direct proporional cu coninutul n grsimi al respectivelor
organisme, ntruct xenobioticele lipofile sunt stocate n esuturile grase.

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor
Odat ptrunse ntr-un organism acvatic, substan ele chimice pot fi
transferate de-a lungul lan ului trofic, de la prad la prdtor. A a cum
am artat deja, n cazul unei substan e lipofile, acest transfer poate s
aib ca efect creterea progresiv, cu fiecare verig a lan ului trofic, a
concentraiei de substan lipofil n organism. Figura urmtoare
ilustreaz acest concept al bioacumulrii. Se consider un exemplu
ipotetic al unei substan e lipofile ce are un factor de bioacumulare egal
cu 2, indiferent dac sursa contaminrii cu aceast substan este
mediul acvatic sau o verig a lan ului trofic. Se observ amplificarea
progresiv a bioacumulrii la fiecare verig a lan ului trofic,
ajungndu-se in acest fel la o concentra ie de toxic mult mai mare n
corpul vulturului de mare (captul lan ului trofic), comparativ cu
concentraia de toxic din mediul nconjurtor (apa i, respectiv, aerul n
exemplul ales).

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor
Ilustrarea conceptului
de bioacumulare.
Concentraiei de toxic lipofil
n mediu acvatic i s-a
atribuit n mod arbitrar
valoarea 1,
iar factorului de
bioacumulare
valoarea 2. Numerele
ncercuite reprezint valorile
concentraiilor de toxic
n organismele
corespunztoare
fiecreia dintre verigile
lanului trofic [1, Figure
26.3, pp. 469].

Referine bibliografice
[1]. E. Hodgson, A textbook of modern toxicology, 3 rd Edition, Wiley Interscience,

2004, pp 5-8.
[2]. J. Trevan, Proc. R. Soc. 101 B, 1927, 483-514.
[3]. C. D. Klassen, Principles of Toxicology in Toxicology: The Basic Science of
Poisons, 3rd Edition, Editors C.D. Klassen, M.O. Amdur, and J. Doull, Macmillian,
New York, 1986, pp. 11-32.
[4]. S. Balint, L. Tnasie, Statistic noti e de curs, Universitatea de Vest din
Timioara, pp.12, web-ng.info.uvt.ro/~balint/files/ statistica.pdf
[5]. S. S. Desphande, Handbook of Food Toxicology, Marcel Dekker, Ink, New York,
Basel, 2002, Table 6.4, pp. 133.
[6]. D. J. Finney, Probit Analysis, Cambridge: The University Press, 1971, pp 33-34.
[7]. D. J. Finney, Arch. Toxicol., 56, 1985, 215-218.
[8]. C. I. Bliss, The Statistics of Bioassay, Academic Press, New York, 1952.
[9]. M. Roberts, C. B. C. Boyce, Principles of Biological Assay in Methods in
Microbiology, Edited by J. R. Norris and D. W. Ribbons, Volume 7A, Academic
Press, London and New York, 1972, pp. 153-191.

Referine bibliografice
[10]. J. T. Litchfield, J. W. Fertig, Johns Hopkins Hosp. Bull., 69,
1941, 276-286.
[11]. M. N. Ghosh, Statistical Analysis in Fundamentals of
Experimental Pharmacology, 2nd Edition, Scientific Book Agency,
Calcutta, 1984, pp. 187-189.
[12]. S. P. McKee, S. A. Klein, Perception & Psychophysics, 37 (4),
1985, 286-298.
[13]. M. Weis Bentzon, P. Krag, Bull. Wld. Hlth. Org., 29, 1963, 745751.
[14]. E. A. Heinrichs, S. Chelliah, S. L. Valencia, M. B. Arceo, L. T.
Fabellar, G. B. Aquino, S. Pickin, Manual for testing insecticides
on rice, International Rice Research Institute, Manilla, Philippines,
1981, Appendix A, Table 8, pp. 106.

Referine bibliografice
[15]. J. T. Litchfield, F. A. Wilcoxon, J. Pharmacol. Exp. Ther., 96, 1949, 99-113.
[16]. F. W. H. Beamish, G. L. Mackie, K. Cottenie, R. J. Frank, M. T. Rush,
Biology of Polluted Waters Laboratory Manual, University of Guelph,
Guelph, Ontario, Canada, 2009.
[17]. M. C. Newman, Quantitative Ecotoxicology, CRC Press, 2013, pp. 144146.
[18]. T. A. Gossel, J. D. Bricker, Principles of Clinical Toxicology, Raven Press,
New York, 1984.
[19]. Hayes Handbook of Pesticide Toxicology, 3 rd Edition, Volume1, Academic
Press, 2010, Table 1.2, pp. 25 i Table 1.5, pp. 49.
[20]. C. Lamanna, E. R. Hart, Toxicol. Appl. Pharmacol., 13, 1968, 307-315.
[21]. J. H. Duffus, Introduction to Toxicology in Fundamental toxicology, Edited
by J. H. Duffus and H. G. J. Worth, RSC Publishing, 2006, Table 1.1, pp. 2.

Referine bibliografice
[22]. T. C. Marrs, Toxicology of Organophosphate Nerve Agents, in
Chemical Warfare Agents Toxicology and Treatment, 2nd Edition, Editors:
T. C. Marrs, R. L. Maynard and F. R. Sidell, Wiley, 2007, Table 5, pp.
197.
[23]. http://www.sciencelab.com/msds.php?msdsId=9927707
[24]. Safety (MSDS) data for caffeine.
[25].
http://pmep.cce.cornell.edu/profiles/extoxnet/metiram-propoxur/paraquat
-ext.html
[26]. https://www.caymanchem.com/msdss/70260m.pdf
[27]. http://extoxnet.orst.edu/pips/carbaryl.htm
[28]. http://pmep.cce.cornell.edu/profiles/extoxnet/24d-captan/24d-ext.html

Referine bibliografice

[29].
http://nepis.epa.gov/Exe/ZyNET.exe/9
100YD4J.txt?ZyActionD=ZyDocument&Cli
ent=EPA&Index=1986%20Thru%201990&Doc
s=&Query=&Time=&EndTime=&SearchMetho
d=1&TocRestrict=n&Toc=&TocEntry=&QFi
eld=&QFieldYear=&QFieldMonth=&QField
Day=&UseQField=&IntQFieldOp=0&ExtQFi
eldOp=0&XmlQuery=&File=D%3A%5CZYFILE
S%5CINDEX%20DATA%5C86THRU90%5CTXT
00000025%5C9100YD4J.txt&User=ANONYMO

Referine bibliografice
[33]. http://www.nafaa.org/ethanol.pdf
[34].
http://www.hmdb.ca/system/metabolites/msd
s/000/000/190/original/HMDB00258.pdf?1358
895907
[35].
https://www.google.ro/url?sa=t&rct=j
&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ved=0CC4Q
FjAA&url=http%3A%2F%2Fwww.bugwood.or
g%2Fpat%2Fpowerpoint%2F03.%2520Toxic
ology%2520-%2520General.ppt&ei=F59hU

Referine bibliografice
[36]. J. A. Timbrell, Principles of Biochemical Toxicology, 4 th Edition, Informa
Healthcare, New York, London, 2009, pp. 22-24.
[37]. F. Loghin, Toxicologie general, Editura Medical Universitar Iuliu
Haieganu, Cluj-Napoca, 2002, pp. 92-96.
[38].
http://2012books.lardbucket.org/books/general-chemistry-principles-patterns-and
-applications-v1.0/section_27_06.html
[39]. S. F. Zakrzewski, Environmental Toxicology, 3 rd Edition, Oxford University
Press, 2002, pp. 24-25.
[40]. E. Z. Hanna, S. P. Chou, B. F. Grant, Alcohol Clin. Exp. Res. 21, 1997, 111118.
[41]. A. Albert, Selective Toxicity, 5th Edition, Chapman and Hall, London, 1973.
[42]. T. R. Fukuto, Environmental Health Perspectives, 87, 1990, 245-254.
[43].http://www.emc.maricopa.edu/faculty/farabee/biobk/biobookendocr.html
[44]. http://click4biology.info/c4b/6/hum6.5.htm
[45]. http://moodle.rockyview.ab.ca/mod/book/print.php?id=58094

Referine bibliografice
[46]. G. M. Cooper, R. E. Hausman, The Cell A molecular Approach,
4th Edition, ASM Press, Whasington, D. C., Sinauer Associates, Inc.,
Sunderland, Massachusetts, 2007, pp. 602-603.
[47]. W. G. Landis, M-H. Yu, Introduction to Environmental
Toxicology: Impacts of Chemical upon Ecological Systems, 3 rd
Edition, Lewis Publishers, 2003, pp. 142-144.
[48]. D. Ciorba, A. Armencea, G. Gfu, P. David, F. Mihai, Ecoterra,
29, 2011, 13-16.
[49]. D. L. Nelson, M. M. Cox, Lehninger Principles of Biochemistry,
5th Edition, W. H. Freeman and Company, New York, 2008, pp. 23.
[50]. E. E. Hatch, J. R. Palmer, L. Titus-Ernstoff, JAMA, 280, 1998,
630-634.
[51]. F. L. McEwen, G. R. Stephenson, The Use and Significance of
Pesticides in the Environment, Wiley, New York, 1979.