DIAGNOSTIC SEROLOGIC

DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL
INFECIEI HIV

investigaii de triaj


imuno-enzimatice ELISA

de confirmare




imunoamprente
radioimunoprecipitare
imunofluorescen

de difereniere (HIV 1/2)

tehnici rapide de diagnostic

Metode imunoenzimatice
ELISA

Metode imunoenzimatice
ELISA
D etecta rea a n tig en elo r

enzyme-linked immunosorbent assay

Permit detectarea anticorpilor.

ant ico rp i spe c ific i

Este posibil determinare cantitativ

ant ico rp i m arca i e nz im a t ic

La reacii particip:
 un reactant imunologic ataat de un suport solid (peretele
unui recipient)
 un reactant imunologic marcat enzimatic - peroxidaza
 substrat specific (cromogenic)
 substane pentru stoparea reaciei

ant ig e n?
su b strat cro m o g en
D etecta rea a n tico rp ilo r
sto p ar ea reac ie i

ant ico rp ant ig lo bu lin ic m arc at

Reaciile au loc n aparate automate, semiautomate.

ant ico rp?

ant ig e n c u no sc ut

Metode imunoenzimatice
ELISA

Testul Western Blot

permite identificarea individual a anticorpilor anti-HIV

pn la 5% rezultate false, prin erori tehnice.

ELISA pozitiv trebuie confirmat prin
 folosirea altor teste ELISA bazate pe alte principii
 test de confirmare tip Western Blot (WB).

Testele fals pozitive:
 boli de colagen,
 hepatite cronice,
 malarie
 persoane cu anumite fenotipuri HLA.

specifici antigenelor virale.

Antigenele sunt separate prin electroforez i transferate

pe membrane de nitroceluloz care se incubeaz cu serul

pacientului.

Anticorpii din ser leag specific proteinele virale i sunt

identificai prin comparare cu controale standard.

o prob este pozitiv dac prezint benzi pozitive pentru

cel puin dou din cele trei antigene majore gag, pol, env.

Testul Western Blot

Criteriile CDC de interpretare:

cel puin 2 din urmtoarele benzi:


p24, gp41 sau gp160/120 pentru un test pozitiv

nici una pentru un test negativ

prezena oricrei alteia pentru un rezultat indeterminat

METODE DIRECTE

Replicarea viral demonstrat prin:



evidenierea i dozarea antigenului p24,

detectarea unor secvene genomice prin
amplificare genic
izolarea virusului.

Aceste tehnici evidentiaz infecia n

timpul ferestrei imunologice

(seroconversiei).

METODE DIRECTE
Ag p24

O caracteristic a infeciei cu HIV


coexistena antigenului p24 cu anticorpii anti-p24

pe tot parcursul bolii, n concentraii diferite.
Creterea antigenului p24 la valori detectabile n
faza de seroconversie sau n faze terminale
limiteaz utilizarea acestui test doar pentru aceste
perioade.

TESTELE RAPIDE

conin suspensii microscopice de particule (latex,

gelatin, hematii tanate) cuplate cu antigen viral.

Anticorpii din serul testat aglutineaz aceste

particule care formeaz un depozit vizibil cu

ochiul liber sau la microscop dup numai 5
minute.

utile n zone endemice, dac este necesar
rapiditatea n orientarea diagnosticului serologic

nu necesit echipamente speciale

METODE DIRECTE
Ag p24

determinarea cantitatii de antigen p24 liber din

plasm sau supernatantul din culturi celulare.

Antigenemia p24 are valori mai mari iniial i apoi mai

mici, tardiv n timpul infeciei cu HIV

tehnic ELISA de tip sandwich,
 anticorpii anti-p24 se gsesc n godeuri
 se incubeaz cu serul sau plasma pacientului
 antigenul liber se leag specific
 este msurat intensitatea culorii.

Reacia de polimerizare n lan

(PCR)

Tehnica const n amplificarea ADN existent n cantiti

foarte mici printr-o serie de cicluri replicative.

ofer informaii despre ncrctura viral. Cuantificarea

acesteia este util n:

diagnosticul infeciei, ndeosebi la nou-nscuii din

mame seropozitive

urmrirea evoluiei bolii

evaluarea eficacitii diverselor tratamente

antiretrovirale.