Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
12
aglicon nu este elucidat; toi agliconii care prezint nuclee fenolice sunt toxici n stare liber, iar
condensarea lor cu un glucid permite diminuarea toxicitii.
Heterozidele au adesea o toxicitate foarte ridicat pentru speciile care nu le biosintetizeaz.
Cuplul flavon - antocianidin, are un rol n procesele de oxido-reducere; flavonele i
antocianii, filtrnd lumina i oprind unele radiaii, intervin n toate procesele fiziologice sensibile la
radiaiile solare: fotosintez, transpiraie, fototropisme, nclzirea esuturilor, germinaie, cretere.
De asemenea, au rol n atragerea insectelor polenizatoare i a frugivorelor care contribuie la
diseminarea unor semine.
Heterozidele cianogenetice au rol de aprare contra ierbivorelor.
Clasificarea heterozidelor, ca i evidenerea lor, se bazeaz pe gruparea agluconic.
6.2.2.1 Evidenierea heterozidelor cianogenetice
La hidroliz, heterozidele cianogenetice elibereaz acid cianhidric (de unde i numele). Cel
mai rspndit este amigdalozidul, care se gsete n smburii prunoaselor, din care se extrage cu
eter. Prin hidroliz cu acizi diluai se formeaz dou molecule de D- glucoz, una de benzaldehid
i una de acid cianhidric.
Aceeai produi de hidroliz se obin i cu beta - glucozidaz (din complexul proteic
enzimatic numit emulsin, care nsoete ntotdeauna amigdalozidul din smburii de prunoase). La
o aciune blnd, beta glucozidaza scindeaz numai un rest de glucoz i formeaz heterozida
prunasina (identificat n coaja cireului slbatic).
Materiale necesare: smburi de prunoase, mojar, hrtie periodat, Na2 CO3 10%,
eprubete, dop de cauciuc, stativ pentru eprubete.
Modul de lucru: Se sparg ntr-un mojar smburi de prunoase. Se adaug cteva picturi
de ap peste seminele mrunite; se amestec bine, se modeleaz amestecul sub form rotund
i se introduce ntr-o eprubet.
Se introduce apoi n eprubet o hrtie de filtru periiodat (hrtia se mbib cu acid picric
1%, se usuc i se pstreaz ntr-un plic; la ntrebuinare se tamponeaz cu vat mbibat ntr-o
soluie de Na2 CO3 10 % i se introduce umed n eprubet).
Se acoper cu un dop i se las n repaus; emulsina vine n contact cu glucozidul i
anionul cian (CN- ) eliberat fiind volatil, ajunge la hrtie i modific culoarea acidului picric, din
galben n crmiziu.
6.2.2.2 Evidenierea heterozidelor flavonice i antocianice
Sunt heterozidele cele mai importante prin frecvena i abundena lor n plante. Numeroase
plante i datoresc culoarea frunzelor (varieti de Fagus sp. (fag), Coryllus sp. (alun) etc. cu
frunze rou-nchis), a fructelor (bacele de Ligustrum vulgare (lemn cinesc), a rdcinilor (Beta sp.
(sfecla roie) i mai ales a florilor, acestor heterozide, care sunt localizate n vacuolele celulelor
epidermice sau a parenchimurilor; de aceea heterozidele se mai numesc pigmeni flavonici i
pigmeni antocianici. Coloraiile lor nu trebuie confundate cu cele datorate pigmenilor
carotenoizi, insolubili n vacuole i localizai, cel mai adesea n cromoplaste.
A. Evidenierea pigmenilor flavonici din esuturi fr clorofil
Pigmenii flavonici au ca grupare agliconic un compus derivat din flavoni: oxiflavona,
oxiflavonol, etc. Se pot extrage cu ap, ap acidulat, acid tricloracetic, aceton, alcool etilic,
cristaliznd sub form de ace grupate n tufe.
Cu srurile de fier se coloreaz n verde, verde - oliv, verde - brun; cu alcalii n galben
intens, galben - lmie, galben - verde, galben portocaliu. Reduc acidul osmic i azotatul de
argint.Glucidul pe care-l conin este de obicei D - glucoza sau alt hexoz sau pentoz.Pigmenii
flavonici confer culoare galben esutului vegetal.
Materiale necesare: cutie Petri, sticl de ceas, NH4OH conc., HCl conc., flori cu petale
albe.
Modul de lucru: ntr-o cutie Petri se aeaz flori sau petale albe i o sticl de ceas cu
NH4OH conc.; apoi se acoper cu capacul: petalele devin galbene, ca urmare a formrii unor
44
sruri cu flavonozidele din sucurile celulare. Trecnd aceste petale ntr-o atmosfer cu acid ele se
decoloreaz.
B. Evidenierea pigmenilor flavonici din extracte
Materiale necesare: flori albe, petale galbene, rdcini i frunze de Taraxacum officinalis,
mere galbene, frunze verzi de Viola odorata, mojar, aceton, acid tricloracetic 8 %, eprubete, bec
de gaz, plnie, frtie de filtru, pipete, NaOH conc., HCl, FeCl3, FeSO4 1-5%, acetat de plumb 10%,
reactiv Fehling, stativ pentru eprubete.
Modul de lucru: din materialul vegetal se prepar un extract la cald (prin fierbere n ap,
sau acid tricloracetic, timp de 5 -10 minute). Extractul se filtreaz iar filtratul obinut este utilizat
pentru efectuarea unor reacii chimice de evideniere a pigmenilor flavonici.
a) peste 3 - 4 ml extract se adaug cteva picturi de NaOH conc.; apare o coloraie
galben, sau galben - portocalie; neutraliznd cu HCl soluia se decoloreaz.
b) peste 3 - 4 ml extract se adaug cteva picturi de FeCl3 sau FeSO4 1-5 % ; apare o
coloraie verde, verde - oliv, artnd caracterul fenolic al flavonilor;
c) peste 3 - 4 ml extract se adaug cteva picturi de acetat de plumb 10% ; se obine un
precipitat floconos galben sau galben - portocaliu. Aceast reacie este foarte
caracteristic pentru pigmenii flavonici;
d) prin fierbere cu acid clorhidric 5 % se elibereaz glucidul, nct reacia Fehling devine
pozitiv dup neutralizarea soluiei.
C. Evidenierea pigmenilor antocianici din extracte
Pigmenii antocianici sunt pigmeni albatri, roii, violei, abundeni mai ales n flori.
Agliconul este antocianidina, care are o structur foarte apropiat de flavonoli, din care
deriv prin reducere. Exist foarte numeroase antocianidine, cele mai rspndite fiind
pelargonidinele din Pelargonium sp., cianidinele din corolele de Centaurea cyanus i
delfinidinele din corolele de Delphinium sp. Antocianidinele variaz n privina culorii, funcie de
pH-ul sucului vacuolar: albastru la pH alcalin, rou la pH acid i violet la pH neutru.
Schimbarea culorii dup pH-ul mediului:
Materiale necesare: rdcin de Beta sp. (sfecl roie), Brassica sp. (varz roie), flori cu
petale roii, flori cu petale albastre, acid acetic diluat, NH4OH diluat, acetat de plumb 10%,
FeCl310%, eprubete, pipete, plci Petri, bec de gaz.
Modul de lucru:
1. ntr-o atmosfer cu vapori de HCl se introduc cteva petale roii i albastre; cele roii
rmn roii iar cele albastre devin roii;
2. ntr-o atmosfer cu vapori de amoniac petalele roii devin albastre, cele albastre devin
verzi i cu timpul se nglbenesc, datorit pigmenilor flavonici supranumerari;
3. se prepar un extract din sfecl roie i unul din varz roie, prin fierbere n ap: cel din
sfecl este rou, cel din varz este albastru - violet;
4. se iau n dou eprubete civa ml din extractele apoase; se adaug cteva picturi de
acetat de plumb 10 %; se obin precipitate colorate n albastru, verde, rou sau violet;
5. se iau ntr-o eprubet civa ml de extract apos; se adaug 1-2 picturi de FeCl310 %; se
obine o coloraie nchis ca i n cazul taninurilor, fapt ce arat o nrudire cu acestea prin
caracterul fenolic.
6.2.2.3 Evidenierea heterozidelor fenolice
Heterozidele fenolice au ca grupare agliconic un nucleu fenolic. Se ntlnesc n numr
mare n natur, cu excepia glicozidei fenolului simplu.
A. Evidenierea salicinei
Salicina se ntlnete n frunzele i coaja de salcie i este D - glucozida alcoolului salicilic
(saligenina).
Modul de lucru: O ramur de Salix alba (salcie) se taie transversal foarte oblic, iar suprafaa
de seciune, precum i suprafaa intern a suberului se pensuleaz cu H2SO4 70%, cu ajutorul unei
45
baghete. Peste 5-10 minute, suprafaa pensulat se coloreaz n rou - violet, culoare
caracteristic salicinei.
B. Evidenierea coniferinei
Descoperit la conifere i apoi la sparanghel, coniferina a fost identificat ulterior i la alte
specii. Este glicozida alcoolului coniferilic, fiind prezent n toate esuturile lignificate; prezena ei
indic indirect prezena ligninei.
Modul de lucru: Pe o achie de brad se adaug 1- 2 picturi de reactiv Hohnel (fenol +
KClO3) i 1 2 picturi de HCl conc.; apare o coloraie verde - albstruie
C. Evidenierea siringinei
Siringina se gsete n suberul ramurilor de liliac, n tulpina de iasomie, avnd ca grupare
agliconic alcoolul siringenina. Suprafaa intern a suberului de la o ramur de liliac se trateaz cu
1-2 picturi de H2SO4 70%; apare o coloraie verde.
6.2 3. Evidenierea taninurilor
Taninurile sunt substane fenolice de natur variat, cu foarte numeroi hidroxili, ceea ce
le confer proprieti reductoare remarcabile.
Nu conin azot n molecula lor. Sunt formate din glucoz i acid galic.
Cu srurile de fier dau precipitate nchise la culoare (negre, brune, albastru nchis), iar cu
proteinele dau combinaii complexe insolubile, imputrescibile i foarte rezistente.
Taninurile se ntlnesc n majoritatea plantelor (frunze, scoar, fruct) n cantiti variabile.
Se extrag din ritidoma de stejar.
n celule se gsesc n stare coloidal (n sucul vacuolar) sau sub form de granule (n
citoplasm); adesea reprezint agliconul unor heterozide sau se combin cu mucilagiile, gumele
sau celuloza. Uneori sunt localizate n celule speciale (idioblaste, tanifere), prezente n
parenchimuri, cum este cazul la Rosa canina (mce).
Materiale necesare: ritidom de stejar, nuc, castane slbatice, FeCl3 10%, acetat de plumb
10 %, K2Cr2O7 - soluie diluat, eprubete, pipete, stativ pentru eprubete.
Modul de lucru: Se prepar un extract apos (prin fierbere timp de 10 minute) folosind unul
din materialele biologice mai sus enumerate. Cu extractul obinut se efectueaz reacii de culoare
(vezi tabelul 5.1).
Tabelul nr.5.1 Reacii de evideniere a taninurilor
Nr.
eprubet
1.
Volumul de extract
Volumul de reactiv
Coloraia obinut
Verde - brun,
2.
3.
Precipitat alb
Precipitat brun
7. Respiraia plantelor
Respiraia este procesul fiziologic de degradare oxidativ a substanelor organice
sintetizate n fotosintez, n care se elibereaz energia necesar desfurrii proceselor vitale.
Respiraia se realizeaz n fiecare celul la nivelul hialoplasmei i a condriozomilor, iar la
exterior se manifest sub forma unui schimb de gaze: absorbie de oxigen molecular din aer i
eliminare de dioxid de carbon :
46
Materiale necesare: tub din sticl alungit i lrgit la un capt ( tip osmometru Dutrochet),
stativ, vas cu mercur, capsul sau fiol de sticl, dop de cauciuc prevzut cu orificiu, tub de
cauciuc cu clem, semine germinate, soluie de KOH 30%.
Modul de lucru. Se introduc ntr-un osmometru Dutrochet semine germinate, se acoper
cu un dop strbtut de un tub de cauciuc prevzut cu o clem.
Se fixeaz osmometrul pe un stativ , astfel ca tubul lui s fie scufundat ntr-un vas cu
mercur. Dup fixare se deschide clema de la captul tubului de cauciuc, se atrn de crligul de
pe partea inferioar a dopului un vas mic n care se afl o soluie de KOH 30 %.
Se acoper osmometrul cu un dop, lsnd clema deschis pentru a uniformiza presiunea
din interior cu cea extern.
Se nchide apoi clema i dup un interval de timp, dependent de intensitatea respiraiei
materialului vegetal de analizat, se va constata c mercurul urc n tubul osmometrului.
Interpretare. Mercurul urc n tub deoarece dioxidul de carbon degajat de semine fiind fixat de ctre
hidroxid, nu mai compenseaz sub raportul presiunii oxigenul absorbit n respiraie, astfel c presiunea intern scade
comparativ cu exteriorul .
A + BH2
47
AH2 + H2O2
2H2O + O2
48