Cap.3.3.

Imbogatirea produsului
3.3.1. Precipitarea proteinelor dintr-un extract brut de levuri cu sulfat de amoniu
3.3.2.Desalinizarea si conditionarea solutiei proteice saline prin dializa filtratoare in flux ascendent

3.3.1. Precipitarea proteinelor dintr-un extract brut de levuri cu sulfat de amoniu

( NH4)2SO4

INTRODUCERE

-una dintre primele etape in descoperirea produsului este cea de precipitare proteica
- scopul precipitarii cu sare neutra, este fie de concentrare, fie de fractionare a
produsului dorit ( prin fractionare se poate obtine o imbogatire de 2-5 ori a produsului,
deoarece diferite proteine precipita la diverse concentratii de sulfat de amoniu)

SCOPUL
-construirea curbelor de precipitare in prezenta de sulfat de amoniu pentru enzimele:
fumaraza
glucozo-6-fosfat dehidrogenaza
proteinele unui extract brut de Sacharomyces cerevisae 40% ;
-pe baza acestor curbe se observa daca proteinele se separa sau nu sub actiunea sulfatului de amoniu;

PARTEA EXPERIMENTALA
- granulele fine de ( NH4)2SO4 se adauga lent sub agitare continua la un extract brut de levuri pana la o
saturatie de 40%;
- se determina activitatea enzimatica si concentatia proteica a supernatantului;
-se compara activitatea enzimatica totala si concentratia proteica a extractului brut cu
valorile obtinute dupa precipitare.

CONCLUZII

-prin aceasta metoda de precipitare proteica cu o sare neutra, rezulta diminuarea hidratarii
proteinelor in favoarea ionilor sarii;
-concentratia ce reclama precipitarea proteinei specifice depinde de:
sarea utilizata
pH
temperatura;
-reproductibilitatea precipitarii este dependenta de:
cota la care este adaugata sarea (2-10 g\1min)
durata de agitare a suspensiei
modul de adaugare a sarii.

3.3.2.Desalinizarea si conditionarea solutiei proteice saline prin dializa filtratoare in

flux ascendent
INTRODUCERE
-in aceasta etapa solutia proteica care este insotita de o inalta concentaratie de sare, trebuie
conditionata:
cantitatea de sare trebuie redusa si plasata in alt sistem de solutie-tampon
la scara mica - in tuburi de dializa
la scara inalta gel filtrare si dializa filtratoare;

PARTEA EXPERIMENTALA

-pentru dializa filtratoare in flux ascendent, se utilizeaza fie un modul plat, fie un modul de fibre
cu cavitati;
-in aceasta etapa volumul solutiei proteice ce este desalinizata trebuie pastrat constant prin aditie
de apa la solutia tampon, urmata de inlaturarea efectiva a sarii (fig.3.6);
-in dializa filtratoare membranele utilizate sunt impermeabile la moleculele proteice si nu
impiedica trecerea moleculelor mici;
-in general, aceste membrane sunt utilizate pentru:
schimbul de saruri sau zaharuri
inlaturarea substantelor cu greutati moleculare mici.

Fig.3.6. Filtrarea dialitica in sistem de fibre incrucisate de tip Amicon (dupa Schweizer, 1997)

CONCLUZII
-rata de desalinizarea este aceeasi cu rata de filtrare transportul este un proces consectiv;
-dializa filtratoare se realizeaza intr-un modul in flux ascendent;
-scopul filtrarii in flux ascendent, din punct de vedere al fluxului mecanic, este de a preveni
crearea unei membrane secundare a proteinei.