LUCRARE PRACTIC|

1

DIFUZIUNEA {I
OSMOZA

A. Studiul influen]ei unor factori fizici

asupra ratei difuziunii
A1. Definirea [i explicarea fenomenelor de
agita]ie termic\, difuziune [i osmoz\
A2. Legile osmozei. Solu]ii false [i solu]ii
adev\rate
A3. Osmolalitate [i osmolaritate. Calculul
presiunii osmotice
A4. Aplica]ii medicale

B. Metoda celor dou\ micrometre pentru

m\surarea dimensiunilor celulare
B1. Microscopul optic
B2. Micrometrul ocular [i micrometrul
obiectiv

C. Evaluarea cantitativ\ a fenomenului de

osmoz\
C1. Osmoza la celulele vegetale
C2. Osmoza la nivelul hematiei

D. Exerci]ii [i ntreb\ri
La nivelul membranelor naturale se petrec schimburi de substan]\ f\r\ de care celulele vii
nu ar putea supravie]ui. Acestea implic\ fenomene de transport ale solventului sau/[i ale
solvi]ilor intra- [i extracelulari. Lucrarea de fa]\ v\ permite s\ observa]i [i s\ `n]elege]i
fenomenul de transport membranar al solventului, osmoza, utiliznd drept modele de studiu
c e l u l a v e g e t a l \ [i h e m a t i a , comparativ. Ca urmare a transportului transmembranar de
ap\ (solventul uzual al solu]iilor biologice), celulele `[i modific\ dimensiunile. Pentru a observa
aceste modific\ri de ordin microscopic vom utiliza m i c r o s c o p u l o p t i c , iar pentru a le
evalua cantitativ, vom ata[a acestuia dou\ micrometre, utiliznd m e t o d a c e l o r d o u \
micrometre.

LUCRARE PRACTIC|

a) Materiale necesare :


3 eprubete cu agar


solu]ii 5 mM de :


metil orange


bicromat de potasiu


sulfat de cupru

Substan]a

Distan]a
(timp: 2 ore)

Metil orange
Bicromat de
potasiu
Sulfat de
cupru
Tabel de rezultate

PARTEA PRACTIC|

Difuziunea poate fi influen]at\ de greutatea

molecu-lar\ [i de concentra]ia moleculelor.

a ) Efectul greut\]ii moleculare

Mod de lucru:
1. Lua]i trei eprubete con]innd deja o coloan\ de agar
(10 ml gel polizaharidic, `n stare semifluid\).

2. Ad\uga]i 3 ml din solu]iile de aceea[i concentra]ie a

unor compu[i colora]i, cu masa molecular\ diferit\
(prezentate al\turat).
3. Nota]i nivelul la care se g\se[te limita de separa]ie a
celor dou\ medii, pentru fiecare eprubet\.
4. La sfr[itul orelor de lucr\ri practice: nota]i nivelul la
care a ajuns solu]ia colorat\ [i m\sura]i distan]a pe
care a difuzat.

Nota]i datele `n tabelul de rezultate.

b) Materiale necesare:

3 eprubete cu agar

solu]ii de metil orange de
b)Efectul
gradientului
de
concentra]ii :
concen-tra]ie
1 mmol, 5 mmol, 10 mmol
Mod de lucru:
sol. metil
Distan]a
1. Lua]i alte trei eprubete cu agar.
orange
(timp: 2 ore)
1 mmol
2. Ad\uga]i `n fiecare eprubet\ 3 ml din solu]ia aceluia[i
5 mmol
compus (metil orange) dar de concentra]ii diferite.
10 mmol
Tabel de rezultate
3. 3. Realiza]i acelea[i m\sur\tori ca [i la punctul a) [i
nota]i rezultatele `n tabelul de rezultate.

LUCRARE PRACTIC|

B. Metoda celor dou\ micrometre pentru

m\surarea dimensiunilor celulare

Participarea fenomenului de osmoz\ la schimbul

de substan]\ dintre celul\ [i mediul `nconjur\tor poate fi
observat\ prin experien]e simple, utiliznd microscopul
optic.

surs\ de
lumin\

lentil\
condensor
preparat
lentil\
obiectiv

lentil\
ocular
imagine
a) Mersul razelor de
lumin\ la microscop
Fig. 4 (a, b)
Microscopul optic
- schem\

Descrierea microscopului optic

Microscopul optic obi[nuit (fig. 4) este un sistem
de lentile convergente astfel realizat `nct s\ poat\ fi
folosit pentru observarea unor structuri cu dimensiuni `n
general de ordinul micrometrilor (10-6 m) format din:
Partea optic\
optic\, care se compune dintr-un sistem de
iluminare [i dou\ sisteme de lentile convergente:
obiectivul cu distan]\ focal\ de c]iva milimetri [i
ocularul, cu distan]\ focal\ de ordinul centimetrilor.
Sistemul obiectiv este alc\tuit dintr-un sistem
centrat de lentile a[ezate `ntr-o anumit\ ordine `ntr-un tub
metalic montat direct sau prin intermediul sistemului
revolver la partea inferioar\ a tubului microscopului.
Obiectivele au notat\ puterea m\ritoare care variaz\ `ntre
x10 [i x90.
Sistemul ocular este alc\tuit dintr-un sistem de
lentile situate la partea superioar\ a tubului
microscopului. Puterea m\ritoare a ocularelor care
variaz\ `ntre x5 [i x15. Exist\ microscoape monoculare
[i binoculare (cu dou\ oculare).

Oc

b) Este reprezentat\
schematic alc\tuirea
[i formarea imaginii
n microscop:
Oc = ocular;
Ob = obiective;
R = sistem revolver;
Mv = macroviza;
mv = microviza;
c = condensor;
d = diafragm\;
l = surs\ de lumin\
(poate fi plasat\ [i la
exterior, `n fa]a
microscopului).

R
Ob
Pl
Mv
mv
c, d
l
3

LUCRARE PRACTIC|

obiectiv

u
?

mediu cu
indice n

preparat

lamel\
lam\

Fig. 4

(c) Microscopul optic

detaliu la nivelul
obiectivului
(d) Imagine de ansamblu

Sistemul de iluminare serve[te pentru a aduce

la obiectul examinat lumina de la o surs\ natural\ sau artificial\. Este situat sub platina microscopului [i se
compune din surs\ de lumin\ (natural\ sau, de obicei,
artificial\ - bec electric), oglind\, diafragm [i condensor.
Unele microscoape au un sistem de iluminare cu bec
situat `n piciorul microscopului [i oglinda deta[abil\.
Partea mecanic\ serve[te la sus]inerea p\r]ii optice
[i a obiectului examinat. Ea se compune din picior,
coloan\, platin\ [i un dispozitiv de punere la punct
format din [urubul macrometric [i cel micrometric.
Puterea m\
m \ ritoare a microscopului este dat\ de
produsul dintre puterea m\ritoare a obiectivului [i cea a
ocularului. Microscoapele optice actuale ating o putere
m\ritoare de x2000.

Puterea de rezolu]ie
(sau separatoare)
rezolu]i e
separatoare
reprezint\ calitatea cea mai important\ a unui microscop.
Ea reprezint\ capacitatea unui sistem optic de a separa
dou\ puncte apropiate (al\turate) astfel `nct aceste
puncte s\ fie percepute distinct la nivelul imaginii finale.
Prin termenul general de rezolu]ie se `n]elege abilitatea
unui sistem optic de a detecta detaliile unui obiect.
Puterea de rezolu]ie este invers propor]ional\
propor]ional \ cu
distan]a minim\
minim \ ( ) `ntre dou\
dou \ puncte luminoase
luminoa se
ale obiectului, percepute separat. Prin urmare,
dac\ se noteaz\ puterea de rezolu]ie cu P, rezult\ c\
1

. Cu ct este mai mic cu att puterea de rezolu]ie

P este mai mare. Distan]a minim\ , denumit\ [i

distan]\
distan] \ minim\
minim \ rezolutiv\
rezolutiv \ sau minimum
separabil este dat\ de formula lui Abb:
Abb
P=

Puterea de rezolu]ie a
microscopului este limitat\ de
distan]\ minim\ . Astfel, `n
cazul microscopului optic
este de 0,38 m. La valori mai
mici ale acestuia apar
fenomene de difrac]ie [i, deci,
nu mai este posibil\ formarea
unei imagini clare.

Principalele m\rimi caracteristice unui microscop optic:

=
unde:

1,22
2n sin u

= lungimea de und\ a luminii utilizate la

microscop
n = indicele de refrac]ie al mediului (aer) prin care
trece lumina (dintre obiectiv [i lama din sticl\ pe
care se afl\ preparatul care este observat la
microscop)
4

LUCRARE PRACTIC|

~n condi]iile actuale,
pentru examenul `n lumina
alb\, jum\tatea unghiului
de deschidere maxim al
unui obiectiv neputnd
dep\[i 71, distan]a minim\ dintre dou\ puncte
care pot fi v\zute separat
este de 0,38 m.

Din formula lui Abb se

poate observa c\ puterea de
rezolu]ie se poate m\ri prin
utilizarea unei surse cu
ct mai mic, ca `n cazul
microscopului cu radia]ii
ultraviolete [i, `ndeosebi, `n
cazul microscopului
electronic (v. [i curs).

u = jum\tatea unghiului de deschidere a conului

luminos ce cade pe obiectiv (v. fig. 4c).
Se observ\ c\ este cu att mai mic (iar rezolu]ia este
mai mare) cu ct n [i u sunt mai mari. M\rimea n X sinu
se nume[te apertur\
apertur \ nume
nu meri
me ric
ri c \ [i poate fi m\rit\ `n
dou\ moduri:
1. M\rind indicele de refrac]ie al mediului existent `ntre
obiectiv [i lama ce con]ine preparatul; astfel,
obiectivele sunt de dou\ feluri: uscate [i umede (cu
imersie), dup\ cum `ntre ele [i lamel\ exist\ aer (n =
1) sau un mediu cu indicele de refrac]ie mai mare
dect
1
(ex:
ulei
de
cedru,
n = 1,52).
2. M\rind unghiul u, prin construc]ie (obiective cu
distan]a focal\ foarte mic\, care s\ poat\ fi apropiate
foarte mult de preparat).
Puterea separatoare a unui microscop optic este, deci,
limitat\ de lungimea de und\ a radia]iei utilizate (vizibil,
390 720 nm), de indicele de refrac]ie al mediului (care
nu poate dep\[i 1,5) [i de construc]ia obiectivului, care
impune o valoare maxim\ a unghiului u.
Puterea de m\
m\rire (P) este m\rimea numeric egal\ cu
raportul dintre unghiul u sub care se vede imaginea
la microscop [i m\rimea obiectului AB.
u'
P=
AB
Puterea de m\rire se exprim\ `n dioptrii [i este invers
propor]ional\ cu distan]ele focale ale obiectivului [i
ocularului.
Puterea de p\
p\trundere este o calitate ce apar]ine
obiectivelor cu putere de m\rire mic\. Datorit\
acestei calit\]i se poate vedea `n profunzimea
obiectului examinat. Ea variaz\ `n raport invers cu
m\rimea unghiului de deschidere a obiectivului.

A
B

etin\\
retin

Fig. 5 Formarea imaginii la microscop

LUCRARE PRACTIC|

PARTEA PRACTIC|

c
Ansamblul metodelor cu
ajutorul c\rora se pot m\sura
dimensiunile obiectelor
microscopice se nume[te
micro
microme
crometrie.
metrie.
Materiale necesare:
necesare
micrometru ocular
micrometru obiectiv
microscop optic

Principiul metodei
Se suprapune imaginea microscopic\ a obiectului
de m\surat peste imaginea unei sc\ri gradate etalonat\ `n
prealabil.
Se utilizeaz\ dou\ tipuri de micrometre (fig. 6):
ocular [i obiectiv. Micrometrul obiectiv este o lam\ de
sticl\ pe care sunt marcate diviziuni echidistante cu
valoare cunoscut\ de 10m. El serve[te la etalonarea
micro
microme
crometru
metrului
trului ocular;
ocular acesta este un disc de sticl\
introdus `n sistemul ocular [i la rndul lui are marcate
diviziuni echidistante (sub form\ de re]ea). Imaginea lui
este dat\ numai de lentila ocular, `n timp ce micrometrul
obiectiv este m\rit de `ntreaga putere m\ri-toare a
microscopului.
A etalona micrometrul ocular `nseamn\ a stabili
o coresponden]\ `ntre o diviziune a micrometrului ocular
[i un anumit num\r de diviziuni ale micrometrului
obiectiv. ~n acest fel, diviziunile micrometrului ocular
pot fi exprimate `n unit\]i de lungime.
Mod de lucru:

1) Se a[eaz\ pe platina microscopului lama

micrometru obiectiv (cu scala `n sus). Aceasta se fixeaz\
cu ajutorul celor doi cavaleri.

Fig. 6

Micrometrul ocular (cu p\trate)

[i micrometrul obiectiv
10

20

30

2) Realiza]i acum imaginea la microscop: se aduce

`n axul microscopului obiectivul x10 prin rotirea
sistemului revolver. Privind din lateral, se rote[te viza
macrometric\ spre `nainte [i se coboar\ tubul microscopic pn\ ce obiectivul se apropie de preparat. Viza
macrometric\ se mic\ foarte `ncet. Apoi, privind prin
ocular, cu ajutorul aceluia[i [urub macrometric, rotit `n
sens invers, se ridic\ `ncet tubul pn\ ce apare imaginea
`n cmpul microscopului. ~n continuare se procedeaz\ la
completarea punerii la punct a imaginii cu ajutorul [urubului micrometric care va fi mi[cat `n ambele sensuri. Se
recomand\ ca `ntotdeauna cnd examina]i un preparat la
microscop s\ ]ine]i permanent mna pe [urubul
micrometric. Folosind obiectivul x10 se formeaz\
imaginea diviziunilor micrometrului obiectiv.

LUCRARE PRACTIC|

Fig. 10

Celule vegetale `n
mediul hiperton

Materiale necesare:

microscop binocular

lame [i lamele de sticl\

3 vase Petri

solu]ii cu osmolarit\]i
diferite :
- NaCl 9 g/l (mediu "izoton")
- NaCl 20 g/l (mediu "hiperton")
- ap\ distilat\ (mediu "hipoton")

pipete Pasteur

3 frunze (segmente de 2-3
cm) de Valisneria spiralis

lam\ pentru sec]ionarea
frunzelor [i realizarea
preparatului microscopic

PARTEA PRACTIC|

a) Osmoza la alga Vallisneria spiralis

Utiliznd microscopul optic, ve]i observa
modific\rile unor celule vegetale ( alga Vallisneria
spiralis) puse `n medii izoosmotice, hipoosmotice [i
hiperosmotice.
Cele mai evidente modific\ri apar `n privin]a
volumului [i formei celulare. Pentru a le observa ave]i
nevoie de a m\sura dimensiunile unei celule prin metoda
descris\ anterior, micrometria.
Mod de lucru:

1) Se pun `n cele 3 vase Petri respectiv cca 20 ml mediu

hipoton, mediu izoton [i mediu hiperton [i `n fiecare
cteva frunzuli]e de plant\.
2) Se las\ astfel 20 minute dup\ care se examineaz\ la
microscop cte o frunz\ din fiecare mediu. Pentru a fi
examinat\ la microscop, frunza, a[ezat\ pe lama de
sticl\, se sec]ioneaz\ `n grosime (tangen]ial, cu o lam\ de
ras pentru a ob]ine un fragment ct mai transparent). Se
a[eaz\ fragmentul de frunz\ pe lama de sticl\, apoi se
a[eaz\ pe platina microscopului `n a[a fel `nct frunza s\
se afle `n dreptul orificiului central al platinei. Se
folose[te obiectivul x10.
3) Se rote[te dispozitivul revolver [i se formeaz\
imaginea cu obiectivul x20, care a fost folosit [i pentru
etalonarea micrometrului ocular.
4) Se m\soar\ diametrul longitudinal [i transversal
pentru un num\r de 10 celule; datele se trec n tabel, `n
care:
I = mediu izo- osmotic;
II = mediu hipoosmotic;
III = mediu hiperosmotic;
L = diametru longitudinal;
T = diametru transversal
m = media aritmetic\
b) Osmoza la hematii
Pentru a pune `n eviden]\ fenomenul de osmoz\ la
nivelul biomembranelor, se poate realiza un experiment
asem\n\tor, dar de data aceasta utiliznd eritrocitele;
7

LUCRARE PRACTIC|

I
L T

II

III

1
2
3

acestea reprezint\ un model de studiu deosebit de

accesibil `n raport cu alte celule animale. ~n plus aceast\
alegere este dictat\ [i de frecventa varia]ie a volumului
celular, ca urmare a varia]iei presiunii osmotice, intra sau
extraeritrocitar, `n raport cu o larg\ categorie de st\ri,
fiziologice sau patologice, ale organismului (de exemplu
simpla manevr\ de injectare intravenoas\ a unor solu]ii
hipo- sau hiperosmolare poate avea un astfel de efect).

Mod de lucru:

5
6

Ve]i observa dimensiunea transversal\ ("diametrul")

celulelor. Se va lucra cu 5 recipiente: `n A ave]i o
suspensie de eritrocite `n mediu izoosmotic lor (NaCl 9
g/l); `n B [i B1 ave]i solu]ii hipoosmotice de concentra]ii
diferite (NaCl 3 g/l [i respectiv 6 g/l); `n C ave]i solu]ie
izoosmotic\ (NaCl 9 g/l); `n D ave]i solu]ie
hiperosmotic\ (NaCl 40 g/l).

7
8
9
10
m
tabel de rezultate

pentru B
pentru B1

35 minute
35 minute

pentru C
pentru D

20 minute
30 minute

intervale de timp

1) Pune]i cu o pipeta Pasteur cte 1 ml suspensie din recipientul A `n fiecare dintre recipientele B, C, D.
2) ~n continuare, la anumite intervale de timp (precizate
`n tabel), ve]i lua cte o pic\tur\ din con]inutul recipientelor B, C [i D [i o ve]i examina la microscop.
Ve]i remarca c\ celulele puse `n C (mediu izoosmotic)
nu-[i modific\ dimensiunile. Celulele puse `n D (mediu
hiper-osmotic) se ratatineaz\ (`[i mic[oreaz\ diametrele
[i cap\t\ un aspect crenelat). Celulele puse `n B1 [i
scoase dup\ primul interval de timp sunt turgescente (au
diametrele m\rite) iar cele puse `n B sunt par]ial sau total
distruse (fenomenul de hemoliz\).

Descrie]i ce observa]i.

LUCRARE PRACTIC|

t
~n organism, presiunea exercitat\ prin intermediul pistonului (`n fig.11) este `nlocuit\ de
presiunea creat\ de pompa cardiac\ care men]ine o presiune hidrostatic\ superioar\ presiunii
oncotice (presiunea oncotic\ poate fi definit\ ca fiind presiunea osmotic\ determinat\ doar de
macromolecule, `n cazul `n care membrana este permeabil\ att la ap\ ct [i la molecule mici) la
nivelul capilarelor glomerului renal. Aceasta determin\ un flux net de ap\ ([i microelemente) din
plasm\ spre exteriorul capilarului (spa]iul Bowman), fenomen de ultrafilatrare plasmatic\
(primul satdiu `n formarea urinii). Este u[or de `n]eles de ce, `n caz de hipotensiune arterial\
marcat\, presiunea hidrostatic\ din capilarele glomerulare devine inferioar\ presiunii oncotice [i
ultrafiltrarea renal\ se opre[te, clinic aprnd anuria.

a)

b)

Fig. 11

a) Fenomenul de osmoz\; b) Fenomenul de osmoz\ invers\

Explica]ii n text.

LUCRARE PRACTIC|

D. Exerci]ii [i ntreb\ri:

1. Un subiect de 60 kg prezint\ urm\toarele caracteristici:

- masa lichidelor extracelulare = 20 % din masa corpului
- masa lichidelor intracelulare = 50 % din masa corpului
Ionograma a permis evaluarea presiunii osmotice a plasmei: 280 mOsmoli/l.
a. Aceste cifre sunt normale?
b. Calcula]i presiunea osmotic\ n fiecare compartiment.
c. S\ consider\m c\ subiectul prime[te o perfuzie de NaCl intravenoas\ de 36,27 g n 2 litri de ap\.
n care sens se vor face deplas\rile de ap\ [i ce volum de ap\ va trece dintr-un compartiment n
altul, presupunnd c\ membrana care separ\ cele 2 compartimente este impermeabil\ la ioni [i c\
subiectul nu elimin\ nici o cantitate de ap\. Care va fi presiunea osmotic\ a plasmei la echilibru?
( Se dau : Na+ = 23; Cl- = 35.5)
2. Se utilizeaz\ un epiteliu simplu asimilabil unei membrane biologice pentru a realiza un
osmometru.
2
Presiunea limit\ de ruptur\ a acestei membrane este de 1,013 x 105 N/m . Ce se ntmpl\ dac\ una
dintre fe]ele membranei fiind n contact cu apa pur\, cealalt\ este introdus\ n:
a. solu]ie de NaCl 4 g/l
b. solu]ie de uree 10 g/l
c. solu]ie de NaCl 1 g/l
Se dau:
T = 27 C
R = 8,32 joule/mol/Kelvin
2
g = 9,8 m/s
3. Calcula]i puterea rezolutiv\ limit\ n cazul unei surse de lumin\ verde ( = 520 nm) la un
microscop cu imersie bun\ (apertura numeric\ = 1,6).
Cum este rezolu]ia n compara]ie cu a unui microscop cu apertura numeric\ = 0,65 [i lumin\ alb\
(0,55 x 10 6m)?
4. Lichidele fiziologice, din corpul uman,
con]in mai mult\ sare dect apa dulce
(din ruri) [i mai pu]in\ sare dect
apa de mare. De ce n realitate nu se
produce efectul din figura 10?

Fig. 12

a) Ap\ de mare,
b) Ap\ dulce (ru)
a)

b)

10