Diagnostic clinic

de laborator
Biochimia clinic

Diagnosticul clinic de laborator

studiaz
interdependena
ntre
starea

este o disciplin medico-tiinific, care :

fiziologic (patologic) a organismului
i modificarea n compoziia celulelor
i lichidelor biologice;
elaboreaz metode de cercetare
obiectiv a componenei celulare i
chimice a esuturilor i lichidelor
biologice;

Diagnosticul clinic de laborator

la norm,
determinarea
utilizeaz
dateledevierilor
obinutede
pentru
:
determinarea diagnozei, prognozei
maladiilor,
estimarea eficacitii tratamentului,
efectuarea controlului asupra
terapiei medicamentoase,
profilaxia patologiilor.

Diagnosticul clinic de
laborator include mai multe direcii
:

Biochimie clinic, hematologie clinic,

citologie, imunologie, microbiologie,
micologie, parazitologie, toxicologie clinic.

75% din toate investigaiile clinice n prezent

se efectueaz cu aplicarea metodelor de
biochimie clinic, deoarece a fost
demonstrat, c la baza patogeniei majoritii
maladiilor stau dereglri primare sau
secundare ale metabolismului.

Metodele biochimice i fizico-chimice sunt

mult mai diverse, iar deseori i semnificativ

mai informative dect cele microscopice.

Obiectele de cercetare clinicobiochimic sunt:

Lichidele biologice: sngele,

lichidul cefalorahidian,
transudatele, exudatele,
urina, saliva;
esuturile.

Etapele
investigaiilor
de laborator

Preanalitic

Analitic

Postanalitic

Etapele
investigaiilor de laborator

Etapa preanalitic
include:

Selectarea i solicitarea investigaiei de

laborator;

Alegerea termenilor optimali pentru

efectuarea investigaiei;

Pregtirea pacientului ctre recoltarea

probei biologice;

Recoltarea adecvat a probei biologice;

Prelucrarea primar a probei,
transportul i pstrarea ei.

Etapa preanalitic :
Indicarea testelor

1. Faza preanalitica
n exteriorul
laboratorului 20%

Obinerea biomaterialului

Transportarea

nregistrarea
i pstrarea

2. Faza preanalitic
n interiorul
laboratorului 37%

Centrifugarea
Repartizarea pe aparate
Pregtirea probelor

Etapa analitic const n:

Prelucrarea preliminar special
a probei biologice;

Efectuarea testului de
laborator;

Controlul calitii investigaiilor.

Etapa postanalitic
include:

Primirea rezultatelor investigaiei

de ctre medicul-clinician;
Interpretarea rezultatelor
obinute;
Luarea deciziei referitor la
necesitatea testrilor
suplimentare;
Prescrierea tratamentului

Etapa preanalitic:
- pentru a selecta i a solicita investigaiile de
laborator este necesar:

A efectua o analiz clinic complex a

strii pacientului

A determina care investigaii de laborator

sunt necesare de a fi efectuate n scopul
obinerii unei informaii maximal utile.

A completa corect buletinul de trimitere

Profilul Biochimia sngelui"

Teste biochimice standard. Permit de a depista la
timp devierile n starea organismului, de a pune
diagnoza i de a elabora programul tratamentului.
Se recomand de efectuat o dat la jumtate de an.

l (Alanin aminotransfera za)

s ( Aspartat aminotransfera za)
Proteina total
Fraciile proteice (Serum Protein Electrophoresis)
Bilirubina total
Bilirubina direct
Gamma-glutamil transferaza (GGT)
Fosfataza alcalin +( Potassium), Na+(Sodium), l(Cloride)
Creatinina
Urea
Glucoza
Colesterol total

Profil Cardiorisc"
Teste biochimice, ce permit de a aprecia afectarea
recent a miocardiocitelor, precum i riscul
dezvoltrii patologiilor cardio-vasculare n viitor.

LDH (Lactat dehydrogenaza)

LDH-1
l (Alanin aminotransferaza)
s ( Aspartat aminotransferaza)
+( Potassium), Na+(Sodium), l-(Cloride)
Creatin kinaza
Creatin Kinaza-MB
Protrombina
Proteina C-reactiv (CRP)
Trigliceride
Fibrinogen
Colesterol total
HDL Colesterol
LDL Colesterol

Profil Lipidic"

Teste biochimice, utilizate n diagnosticul

aterosclerozei i aprecierea riscului complicaiilor
(boala ischemic a cordului, infarct miocardic,
patologii vasculare ale encefalului).

Trigliceride
Colesterol total
HDL Colesterol
LDL Colesterol

Profilul Investigaii hepatice :

screening"
l (Alanin aminotransferaza)
s ( Aspartat aminotransferaza)
Bilirubina total
Bilirubina direct
Gamma-glutamil transferaza (GGT)
Fosfataza alcalin

Profilul Investigaii hepatice :

complet"
Teste biochimice, ce permit de a depista i de a
caracteriza gradul de afectare a celulelor hepatice ,
de a aprecia starea funcional a ficatului , de a
elucida cauzele posibile ale patologiei .

l (Alanin aminotransferaza)
s ( Aspartat aminotransferaza)
Proteina total
Fraciile proteice (Serum Protein
Electrophoresis)
Bilirubina total
Bilirubina direct
Gamma-glutamil transferaza (GGT)
Fosfataza alcalin
Protrombina
Colinesteraza

Profilul Investigaii renale"

Teste biochimice pentru aprecierea strii
funcionale a rinichilor i depistarea patologiilor
renale.

Creatinina
Urea
+( Potassium), Na+(Sodium), l-(Cloride)
Ca (Calcium total)
g (Magnesium)
P (Fosfor neorganic)
Analiza general a urinei (cu microscopia
sedimentului)

Profil diabetic"
Testul de baz pentru diagnosticul diabetului
zaharat. Testul este important n alegerea terapiei i
monitoringul tratamentului. n monitoringul
diabetului se utilizeaz i teste, ce dau o informaie
retrospectiv despre starea metabolismului
glucidic.

Glucoza
Hemoglobina glicozilat (HbA1,
Glycated Hemoglobin)
C-Peptidul
Fructozamina

Profilul Diagnostilul
osteoporozei"
Teste biochimice destinate pentru aprecierea general
a metabolismului mineral, reglrii lui, precum i
pentru aprecierea coninutului markerilor
metabolismului osos.

Ca (Calcium total)
P (Fosfor neorganic)
Hormonul paratiroid (Parathyroid hormone, PTH)
Creatinina
N-steocalcina
Dezoxipiridinolina (n urin)

Reguli importante n alegerea

termenilor optimali pentru efectuarea
investigaiei de laborator :

Recoltarea probelor biologice se

efectueaz de obicei ntre orele 7

i 9 dimineaa.

Recoltarea probelor se

efectueaz dup 8-12 ore de

inaniie (n stare bazal).

Recoltarea probelor se efectueaz

nainte de procedurile diagnostice i

terapeutice, capabile s influeneze
rezultatele testelor.

n cazul administrrii medicamentelor

este necesar de a lua n consideraie

posibilele efecte ale preparatului asupra
parametrului testat i de a alege
perioada de timp cnd aceste efecte
sunt minime.

Obligatoriu se indic timpul exact de

recoltare a probei n documentele
corespunztoare.

Etapa preanalitic:

la alegerea termenilor optimali pentru

efectuarea investigaiei de laborator
este
necesardiferitor
de a luacompui
n consideraie
coninutul
n snge
c:
variaz n dependen de:

- ritmul circadian (diurn, sezonier)

- fazele ciclului menstrual (la
femei)

Parametrii sanguini, nivelul crora

variaz esenial n decursul zilei:
Hormoni: Electroliii: Elemente
figurate:
Adrenalina
Aldosterona
Testosterona
ACTH
Somatotropina
Cortozolul
Prolactina
Tiroxina
Noradrenalina

Fe

Na
K
Fosfaii

Eritrocite
Eozinofile

Parametrii sanguini, nivelul crora

variaz esenial n dependen de
fazele ciclului menstrual :
Hormonul foliculostimulator
Hormonul luteinizant

aldosterona

Sporesc nainte de ovulaie

Parametrii sanguini, nivelul crora

variaz esenial n dependen de
fazele ciclului menstrual :
Estrogenii

Progesterona

Parametrii sanguini, nivelul crora

variaz esenial n dependen de
fazele ciclului menstrual :
colesterolul

Scade la ovulaie

Fosfaii
fierul

Scad la menstruaie

Factorii, ce influeneaz asupra

rezultatelor investigaiilor de
laborator:
Variabile intrinseci

Particularitile
individuale ale
pacientului:

rasa

vrsta
sexul

N PARAMETRU
1.
2.

AlAT, U/l
AsAT, U/l

VRSTA BRBAI FEMEI

0-100

0-41

0-31

0-10
11-100

15-60
0-37

15-60
0-31

12-64

9-36

3. -Glutamiltransferaza 0-100
4.

alfa-Amilaza, U/l 0-100

8-53

5.

0-100

0-60

Lipaza, U/l
Fosfataza
alcalina, U/l

0-17
18-100

0-448
0-258

7.

LDH, U/l

0-1
2-100

0-500
0-480

PARAMETRU

VRSTA

BRBAI FEMEI

8.

Creatinfosfokinaza

0-1
2-100

24-229
24-195

9.

Proteina total
g/l

0-1
1-2
3-14
15-60
61-100

10.

Acidul uric,
mol/l

0-14
15-100

190-440
214-448

190-363
137-363

11.

Creatinina,
mol/l

0-1
2-5
6-17
18-60
61-90
91-100

98-156
27-62
44-88
80-115
71-115
88-150

18-35
27-62
44-88
53-97
53-106
53-115

24-170
51-73
56-75
60-80
64-83
62-81

PARAMETRU

VRSTA

BRBAI FEMEI

12.

Trigliceridele,
mmol/l

0-5
6-11
12-15
16-19
20-29
30-39
40-49
50-100

0,34-0,97
0,35-1,22
0,41-1,56
0,45-1,84
0,5-2,09
0,55-3,21
0,63-3,37
0,7-3,25

0,36-1,12
0,4-1,29
0,46-1,56
0,45-1,45
0,45-1,45
0,43-1,81
0,5-2,1
0,62-2,79

13.

Colesterol total,
mmol/l

0-4
5-15
15-19
20-24
25-29
30-34
35-39
40-44
45-70

2,9-5,1
3,1-5,2
3,1-5,4
3,2-5,6
3,4-6,3
3,6-6,6
3,8-6,9
3,9-7,0
4,1-7,2

3,1-5,2
3,2-5,2
3,2-5,6
3,3-5,8
3,4-6,0
3,6-6,3
3,8-6,5
3,9-6,7
4,2-7,4

PARAMETRU

VRSTA BRBAI FEMEI

15.

Glucoza,
mmol/l

0-6
7-19
20-60
61-100

4,1-7,0
3,9-5,9
3,9-6,4
4,6-6,4

16.

Albumina, g/l

0-14
15-18
19-60
61-90

38-54
32-45
38-51
32-46

PARAMETRU VRSTA

BRBAI FEMEI

17. Calciu,
mmol/l

0-14
15-100

1,76-3,52
2,15-2,57

18. Fosfor,
mmol/l

0-1
2-3
4-6
7-9
10 - 12
13 - 15
16 - 18
19 - 100

1,15 - 2,15
1,00 - 1,95
1,05 - 1,8
0,95 - 1,75
1,05 - 1,85
0,95 - 1,65
0,85 - 1,60
0,84 - 1,45

19. Fier, mol/l

0-1
2 - 12
13 - 25
26 - 40
41 - 100

6 - 28
4 - 24
7 - 28
6 - 30
7 - 22

6 - 28
4 - 24
7 - 30
4 - 24
7 - 28

PARAMETRU VRSTA BRBAI FEMEI

20. Magneziu,
mmol/l

0-1
2 - 17
18 - 100

21. Zn, mol/l

0-1
1-5
6-9
10-13
14-19
20-100

0,48 - 1,05
0,60 - 0,95
0,73 - 1,06
10-20
10-18
12-16
12-15
12-18
10-18
9-15
7-23

Influena rasei asupra rezultatelor

investigaiilor de laborator:

Creatinkinaza
Negri

Europeni

Amilaza
Indieni

Factorii, ce influeneaz asupra

rezultatelor investigaiilor de laborator:
Particularit
Particularit
ile
ile
alimentaiei
alimentaiei

Efort
Efort fizic
fizic i
i
stres
stres
emoional
emoional

Variabile extrinseci
Fumatul,
Fumatul,
alcoolul
alcoolul,,
cofeina
cofeina,,
drogurile
drogurile
Medicamente
Medicamente
le
le

Proceduri
Proceduri
diagnostice
diagnostice i
i
terapeutice
terapeutice
((roentgenografi
roentgenografi
aa,,
colonoscopia
colonoscopia,,
proceduri
proceduri
fizioterapeutice
fizioterapeutice
))

Influena inaniiei asupra

parametrilor biochimici sanguini:
Parametrul
Inaniie
48 ore
Inaniie
72 ore

Tipul efectului

Bilirubina

Sporire

Glucoza

Scdere

Trigliceride
Acizi grai liberi

Sporire

Influena alimentaiei asupra

parametrilor biochimici sanguini :
Parametrul

Tipul efectului

Produse
bogate n
lipide

+
Trigliceride
Fosfataza
alcalin

Sporire

Produse
bogate n
proteine i
purine
(carnea)

Acid uric
Ureea

Sporire

Influena alimentaiei asupra

parametrilor biochimici sanguini :
Parametrul

Tipul efectului

Produse
Colesterol
bogate n acizi
grai
nesturai

Scdere

Produse
bogate n
serotonin
(banane,
tomate, etc.)

Sporire

Acid 5-oxiindolilacetic

Influena alimentaiei asupra

parametrilor biochimici sanguini :
Parametrul

Tipul efectului

Produse
bogate n
pigmeni
(rodii,
portocale)

Bilirubina

Sporire

Cofeina

Glucoza
Acizi grai liberi

Sporire

Influena asupra parametrilor

biochimici sanguini :
Parametrul

Tipul efectului

Alcool

Lactat
Acid uric
Trigliceride
-glutamiltransferaza
Glutamatdehidrogenaz
a
Transaminazele

Sporire

Morfina

-amilaza

Sporire

Lipaza

Influena asupra parametrilor

biochimici sanguini :
Parametrul

Tipul
efectului

Efort fizic

Lactat
Glucoza
Acizi grai liberi
Transaminaze (ALAT,
S)
Creatinkinaza
Lactatdehidrogenaza
(LDH)
Aldolaza

Sporire

Fumatul

Acizi grai liberi

Sporire

Influena asupra parametrilor

biochimici sanguini :
Parametrul

Tipul
efectului

Stresul

Lactat
Glucoza
Acizi grai liberi
Fierul

Sporire

Schimbare
a brusc a
poziiei
corpului

Enzime
Proteina total i fraciile
proteice
Bilirubina
Colesterol
Trigliceride

Sporire

Medicamente ce influeneaz
rezultatele testelor biochimice de
laborator
Parametrul
-amilaza
Bilirubina
Calciu

Medicamentul Tipul efectului

Preparate
colinergice

Sporire

fenobarbital

Scdere

Contraceptive
hormonale
Androgeni

Sporire

Corticosteroizi

Scdere

Medicamente ce influeneaz
rezultatele testelor biochimice de
laborator
Parametrul
Colesterol

Medicamentul Tipul efectului

ACTH

Sporire

Heparina
Tiroxina

Scdere

Creatinkinaza

Dexametazona
Digoxina
Fenobarbital

Sporire

Creatinina

Antibiotice

Sporire

Medicamente ce influeneaz
rezultatele testelor biochimice de
laborator
Parametrul
Glucoza
Proteina
total
L
S

Medicamentul Tipul efectului

Furosemid
ACTH
Adrenalina

Sporire

Corticosteroizi
Steroizii anabolici

Sporire

Ampicilana
Gentamicina
Oxacilina
Opiaii

Sporire

Pregtirea pacientului ctre

recoltarea probei biologice

Instruirea
pacientului
cu privire la diet,
regim i procedurile
de recoltare

Recoltarea materialului biologic

primar pentru investigare
n calitate de material biologic pentru investigaiile
clinice de laborator cel mai frecvent este utilizat
sngele. Recoltarea sngelui se efectueaz prin :

Venepuncie;
Recoltarea sngelui capilar.
Sngele venos constituie materialul biologic
preferenial pentru investigaiile biochimice,
hormonale, serologice, imunologice, precum
i pentru investigaiile hematologice.

Venepuncie VACUETTE

Dezinfectm locul punciei i

aplicm garoul

Efectum venepuncia

Scoatem garoul i colectm sngele

n eprubetele necesare

Cu atenie
amestecm sngele

Scoatem acul

Cauzele ntreruperii getului de snge n timpul venepunciei

Colapsul venei

Optimal

Vrful acului este lipit

de peretele venei

Acul a strpuns
vena

Recoltarea materialului biologic

primar pentru investigare
Recoltarea sngelui venos se efectueaz cu
ajutorul unor sisteme speciale cu vacuum ,
care:

exclud complet contactul cu materialul biologic

i asigur securitatea att a pacientului, ct i
a personalului medical,
exclud contactul sngelui cu mediul extern,
prentmpin destrucia celulelor sanguine,
asigur un raport optim snge/stabilizator,
- aceasta permite de a evita defecte ale
materialului biologic, contribuie la stabilitatea
analiilor i obinerea unui rezultat corect al
testului de laborator.

Sistemul VACUTAINER
const din trei componente
:

1. Ac special bidirecionat cu o supap

protectoare

2. holder VACUTAINER

3. Eprubet steril
cu coninut dozat de vacuum.

Prioritile fa de
sistemele deschise:
durata recoltrii sngelui se reduce cu
30-40%, constituind doar 7-10 sec.

se reduc cazurile de hemoliz (de la 58 la 2%) datorit evitrii destruciei

mecanice a eritrocitelor .

Se minimizeaz formarea microcheagurilor, deoarece sngele

contacteaz imediat cu
anticoagulantul.

Prioritile fa de
sistemele deschise:
Perioada de timp ntre recoltarea sngelui
i contactului su cu anticoagulantul este
ntotdeauna constant;

Este constant i raportul

snge/anticoagulant deoarece:
- volumul anticoagulantului este dozat
exact n procesul de producere a eprubetei;
- volumul sngelui recoltat este determinat
de volumul dozat de vacuum din eprubet

Prioritile fa de
sistemele deschise:
Reducerea timpului de aplicare a

garoului, deoarece la recoltarea n

eprubete cu vacuum garoul se
poate scoate foarte rapid.

Sterilitate.

Influena duratei de aplicare a

garoului la venepuncie asupra
rezultatelor testelor de laborator
CO2

Parametrul

Durata aplicrii garoului, min.

0

2,38

2,45

2,52

2,58

Proteina total, g/l

72

74

77

80

Albumina, g/l

39

40

42

43

Calciu, mmol/l

Capacele i etichetele eprubetelor sunt

colorate n diferite culori n
dependen de tipul eprubetei.

Succesiunea de recoltare a
sngelui n diferite tipuri de
eprubete:
Material

Eprubeta

Investigaiile

Culoarea

1.

Eprubet fr aditivi,cu
aditivi sau cu activatori
ai coagulrii

Ser

biochimice,
serologice

Roie

2.

Eprubet cu citrat de Na

Plasma

coagulograma

Eprubet cuLiheparin
sau heparin

Snge
integru
/plasma
Snge
integru
/plasma

3.

imunologice,
electrolii,EAB

Verde

Hematologice,
PCR

Violet

Plasma

glucoza,lactat

Sur

4.

Eprubet cu EDTA

5.

Eprubet cu inhibitor al
glicolizei

biologic

Albastr

Aditivi polimeri pentru

eprubete cu vacuum
(pentru separarea serului):
Granule de polisterol pentru

coagularea rapid a sngelui i

formarea unui cheag compact

Gel polietesteric pentru

separarea elementelor
figurate ale sngelui i
serului la centrifugare

Aditivii polimeri (granulele de

polisterol i gelul poliesteric)
uureaz separarea serului/plasmei

Durata i condiiile de pstrare a

sngelui recoltat:

Se permite doar un singur ciclu de congelare-decongelare a serului

Se interzice congelarea sngelui integru
Materialul biologic se pstreaz cu att mai bine cu ct este mai joas temperatura de pstrare

Cele mai frecvente cauze

ale alterrii materialului
biologic dup recoltare:

Hemoliza
Metabolismul celulelor sanguine
Reaciile chimice din ser/plasm
Aciunea microorganismelor
Evaporarea apei/sublimarea
Procese osmotice
Aciunea luminii
Difuzia gazelor

Metode n biochimia
clinic

Metodele principale sunt metode

fizico-chimice de analiz:

Metode optice
Metode cromatografice
Electroforeza

Metode n biochimia
clinic
Metodele optice se bazeaza pe

masurarea proprietatilor optice

ale substantei i sunt bazate pe
nregistrarea modificrilor razei
de lumin la trecerea ei prin
soluia examinat.

Metode fotometrice sunt:

refractometria;
polarimetria;
fotometria.

FOTOMETRIA
1. Fotometrie de absorbie
a) spectrofotometria -metodele bazate pe

masurarea absorbtiei luminii de catre substantele

colorate

b) nefelometria - msoar absorbtia luminii de catre

corpurile necolorate aflate in suspensie se numesc

turbidimetrice

c) turbidimetria - msoar dispersia luminii de

catre particulele care se precipita, suspendate in
solutie, lucrandu-se cu precipitat colorat sau
necolorat.

2.Fotometrie de emisie
a) fluorimetria

FOTOMETRIA
de absorbie

Legea Bugher Lambert Beer lege fizic, conform

creia are loc micorarea intensitii razei de lumin
monocromatic la trecerea ei prin mediul de absorbie .

Pentru cercetri sunt utilizate fotocolorimetrele n

care fluxul luminos cu intensitatea I0 este trimis printro cuva sau printr-o eprubeta care contine solutia de
analizat. Fluxul cu intensitatea I, care a reusit sa
treaca prin cuva fara sa fie absorbit, cade pe o celula
fotoelectrica. Celula fotoelectrica transforma energia
luminoasa in energie electrica, care se masoara cu un
galvanometru sensibil.

METODA PCR
N DIAGNOSTIC

 Reacia polimerazic n lan

metod a biologiei moleculare,

care permite de a obine o
amplificare semnificativ a
anumitor secvene specifice de
ADN.

 Metoda este bazat pe copierea

selectiv multipl a unui anumit

fragment specific de ADN (sau ARN) cu
ajutorul enzimelor in vitro. Are loc
copierea numai a secvenei de ADN,
care are o anumit consecutivitate dat
a bazelor azotate i numai n cazul, cnt
el este prezent n materialul cercetat.

Componentele reaciei
ADN-matricea
Praimeri
ADN-polimeraza termostabil
Substrate
dezoxiribonucleotidtrifosfai
Ioni Mg2+
Soluie-tampon

Principiul
PCR
Denaturarea

matricea bicatenar dublu

helix de ADN este nclzit la 94-96C pentru
ca catenele s se despiralizeze i s se separe .
Annealing- unirea complimentar a matricei
cu praimerul la aprox. 54C.
Elongarea- ADN-polimeraza sintetizeaz
catena complimentar, polimeriznd bazele
azotate suplimentate n mediul de reacie; Taqpolimeraza este maximal activ la 72C.

Etapele efecturii PCR:

1. prelucrarea materialului biologic.

Centrifugarea materialului biologic

2. Extragerea ADN/ARN

1. La sediment se adaug soluia pentru extragerea A

Centrifuga
Vortex
Termostat

2.AMESTECARE
3. nclzire a cte min la 55 95
4. Centrifugarepentru obinerea supernatantului cu ADN

3. Pregtirea probelor pentru

amplificare: introducerea n eprubet a probelor
biologice, primerilor, polimerazei, substratelor pentru
polimerizarea ADN.

Probele pregtite pentru

amplificare

4.
Amplificarea

Amplificator

Amplificator pentru real-time

PCR

5. Electroforeza

- pregtirea gelului pentru camera de

electroforez

Camer pentru electroforez cu soluie

tampon

Gelul dup electroforez

7. nregistrarea rezultatelor la
transiluminator (in lumin
ultraviolet)

Citirea rezultatelor
Prezena
PCR unei benzi luminoase strict la nivelul

controlului pozitiv n proba de analizat semnific

prezena agentului patogen respectiv n proba dat.
Lipsa bandei luminoase la nivelul controlului pozitiv
n proba de analizat semnific lipsa agentului
patogen respectiv n proba dat.

K+ - control pozitiv
K- - control negativ
1,2,7,9,10,11 probe clinice cu rezultate pozitive
3,4,5,6,8,12 probe clinice cu rezultate negative