Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
2016
Pagina 1 din 7
NovaLisa
TM
1. INTRODUCERE:
Chlamydia este o bacterie fr motilitate, gram negativ care se dezvolta exclusiv intracelular formnd incluziuni
caracteristice n citoplasma celulelor parazitate, uor observabile la microscopul optic. Se cunosc trei specii de Chlamydia
patogene pentru om: Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae i Chlamydia psittaci, i o specie patogen doar pentru
animale (Chlamydia pecorum). Chlamydia trachomatis este cel mai rspndit agent cu transmitere sexual din ntreaga
lume (400 500 milioane de cazuri), i numrul de infecii este n constant cretere. Infectarea n timpul naterii produce
conjunctivit sau pneumonie cu Chlamydia la nou nscui. Cazurile de infecie cu Chlamydia netratate pot duce la salpingit
cronic, apoi posibil la sarcin ectopic sau infertilitate. La brbai, Chlamydia trachomatis este principalul agent cauzal al
uretritelor non-gonococice.
Deoarece infeciile cu Chlamydia decurg frecvent asimptomatic, infeciile primare de cele mai multe ori nu sunt
diagnosticate la timp, iar pacienii se prezint la medic cu sechele i complicaii ale infeciei primare netratate.
Specie
Chlamydia
trachomatis
Chlamydia
pneumoniae
Chlamydia
psittaci
Mecanism de infectare
Se transmite direct sau prin contact
sexual:
Iniial se infecteaz membrana
mucoas
a
ochilor
i
tractul
urogenital.
Infiltraii ale membranei mucoase a
tractului respirator.
Inhalri de fecale de la psri.
Contact cu viscere aviare.
Boala
Lymphogranuloma
venereum
(LGV)
Trachoma
Conjunctivite la nou nscui i aduli;
Cervicite, salpingite, uretrite, epididimite,
proctite i pneumonii la nou nscui.
Boli respiratorii: boli ale endocardului, boli
coronariene ale inimii.
Ornithosis (Psittacosis)
Diagnostic
Serologie
PCR
Microscopic
PCR,
Serologie: detectarea antigenelor prin metoda ELISA; detectarea anticorpilor cu IF, EIA, ELISA.
2. DESTINAIE:
Trusa NovaTec Chlamydia trachomatis IgG ELISA este destinat determinrii calitative a anticorpilor IgG anti - Chlamydia
trachomatis din ser sau plasm (citrat) uman.
3. PRINCIPIUL TESTULUI:
Determinarea calitativ imunoenzimatic a anticorpilor de tip IgG anti - Chlamydia trachomatis se bazeaz pe tehnica ELISA
(Enzyme-linked Immunosorbent Assay).
Godeurile sunt cptuite cu antigene Chlamydia trachomatis la care se leag anticorpii specifici din prob. Dup splarea
godeurilor pentru a nltura componentele nelegate din prob, n godeuri se adaug anticorpi anti-IgG uman marcai cu
peroxidaz din hrean. Acest conjugat se leag la anticorpii anti-Chlamydia trachomatis imobilizai pe pereii godeurilor.
Complexul imun format n urma adugrii conjugatului este pus n evident prin adugarea substratului de
tetrametilbenzidin (TMB), care sub aciunea enzimei formeaz un produs de reacie albastru. Concentraia acestui produs
(intensitatea culorii) este proporional cu cantitatea de anticorpi specifici IgG anti-Chlamydia trachomatis din prob. Acidul
sulfuric este adugat pentru a stopa reacia i produce virarea culorii n galben. Absorbana este msurat la lungimea de
und de 450 nm cu ajutorul unui cititor ELISA.
4. MATERIALE:
4.1. Reactivi furnizai n trus:
Godeuri cptuite cu antigene Chlamydia trachomatis (IgG): 8 x 12 godeuri detaabile, sigilate n folie de
aluminiu vidat (resigilabil).
Diluent pentru prob***: 1 flacon cu 100 ml tampon pentru diluarea probelor; pH = 7,2 0,2; galben; gata de
utilizare; capac alb.
Soluie de stopare: 1 flacon cu 15 ml acid sulfuric 0,2 mol/l; gata de utilizare; capac rou.
Soluie de splare (conc. 20x)*: 1 flacon cu 50 ml tampon concentraie 20x pentru splarea godeurilor; pH = 7,2
30.01.2016
Pagina 2 din7
30.01.2016
Pagina 3 din7
Cristalele din soluie dispar prin nclzire pn la 37 C n baie de ap. Dup prima deschidere soluia de splare concentrat
este stabil pn la data de expirare dac este pstrat la 2 - 8C.
6.6. Soluie substrat TMB.
Flaconul conine 15 ml tetrametilbenzidin cu hidroperoxid. Reactivul este gata de utilizare i trebuie pstrat la 2 - 8C, ferit
de lumin. Soluia trebuie s fie incolor sau cu o uoar tent albstruie. Dac substratul devine albastru, nseamn c este
contaminat i trebuie nlturat. Dup prima deschidere a flaconului este stabil pn la data de expirare dac este pstrat la
2 - 8C.
6.7. Soluie de stopare.
Flaconul conine 15 ml soluie acid sulfuric 0,2 M (R36/38, S 26). Soluia este gata de utilizare. Se pstreaz la 2 - 8C. Dup
prima deschidere a flaconului este stabil pn la data de expirare dac este pstrat la 2 - 8C.
7. RECOLTAREA I PREGTIREA PROBELOR
Pentru aceast determinare se utilizeaz ser sau plasm (citrat) uman. Dac specimenele sunt analizate la nu mai trziu de
5 zile de la recoltare, acestea se vor pstra la o temperatura de 2 - 8C. Dac determinarea va fi efectuat mai trziu,
probele trebuie alicotate i pstrate congelate (-70-20C). Evitai ciclurile repetate de congelare - decongelare a probelor.
Dup decongelare omogenizai bine probele nainte de testare.
Inactivarea termic a probelor nu este recomandat.
7.1. Diluia probelor:
nainte de testare probele trebuie diluate 1+100 cu diluentul dedicat din trus. Dispensai 10 l prob i 1 ml diluent i
omogenizai prin vortexare.
8. PROCEDURA DE LUCRU:
8.1 Pregtirea testului:
Citii cu atenie prospectul trusei nainte de nceperea lucrului. ncrederea n rezultatele obinute depinde de stricta
respectare a protocolului aa cum este descris. n cazul n care testul se efectueaz pe un sistem automat ELISA, se
recomand creterea numrului de splri dintr-o etap de la trei la cinci i volumul soluiei de splare de la 300l la 350l
pentru a se evita efectele unei splri defectuoase. Stabilii cu atenie harta de distribuie a controalelor i probelor n
godeuri pe foaia dedicat furnizat mpreun cu trusa. Se selecteaz numrul de stripuri sau godeuri necesar si se fixeaz
pe placa suport. Resigilai restul godeurilor n punga de aluminiu i punei-le la frigider.
A se aloca cel puin:
1 godeu
(A1)
pentru blank
1 godeu
(B1)
2 godeuri
1 godeu
(E1)
30.01.2016
Pagina 4 din7
10. Pipetai cte 100 l soluie de stopare n fiecare godeu, n aceeai ordine i ritm de pipetare ca substratul TMB. n
godeurile n care lichidul a devenit albastru dup incubare, are loc virarea culorii ctre galben.
Not: Probele puternic pozitive pot conduce la formarea de precipitate de cromogen, nchise la culoare. Aceste
precipitate influeneaz citirea valorii densitii optice. Este recomandat n acest caz prediluia acestor probe cu ser
fiziologic n raport de 1:1. Probele prediluate se dilueaz apoi conform punctului 7.1. Rezultatul obinut se nmulete n
acest caz cu 2.
11. Msurai absorbana probelor la 450/620 nm nu mai trziu de 30 min. de la adugarea soluiei de stopare.
8.2. Msurarea:
Se face "aducerea la zero" a cititorului cu ajutorul blank-ului din godeul A1. Daca acest lucru nu este tehnic posibil, se va
scdea absorbana godeului A1 din absorbanele tuturor godeurilor.
Se msoar absorbana tuturor godeurilor la 450 nm i se nregistreaz valorile pentru fiecare control i prob de pacient pe
planul de distribuie i identificare.
Este recomandat citirea dual pe doua lungimi de und utiliznd 620nm ca lungime de und de referin.
n cazul testrii n duplicat se calculeaz valoarea medie a absorbanei pentru fiecare pereche de godeuri.
9.
REZULTATE
in A1
Controlul negativ
Controlul cut-off
in B1
in C1 si D1
Controlul pozitiv
in E1
Daca rezultatele obinute nu ndeplinesc aceste criterii, testul este considerat invalid i trebuie repetat.
9.2. Calcularea rezultatelor:
Valoarea de cut-off este obinut prin calcularea mediei absorbanelor controlului de cut-off.
Ex: Cut-off = absorbana controlului Cut-off 0.39 + absorbana controlului Cut-off 0.37 = 0.76 / 2 = 0.38
9.3. Interpretarea rezultatelor:
O prob este considerat POZITIV dac absorbana sa este cu 10% mai mare dect valoarea de Cut-Off. O prob este
considerat NEGATIV dac absorbana sa este cu 10% mai mic dect valoarea de Cut-Off. Probele cu absorbaele
cuprinse ntre 10% deasupra sau sub valoare de Cut-Off (zona gri) trebuie considerate INCERTE. n acest caz se
recomand recoltarea i retestarea unei noi probe dup 2 4 sptmni. Dac rezultatul retestrii se ncadreaz din nou n
zona gri, atunci proba se consider a fi NEGATIV.
9.3.1 Exprimarea rezultatelor n NTU (NovaTech Units):
NTU = absorbana (medie) a probei x 10 / cut off
Ex: 1.204x10 / 0.38= 32 NTU
Cut-off
10
Zona gri
9 11 NTU
Negativ
Pozitiv
NTU
<9
>11
NTU
NTU
nr. probe
Medie
CV(%)
seruri pozitive
12
61
2,8
Intradeterminare
seruri pozitive
nr. probe
Medie
CV(%)
24
2,07
3,7
10.2. Specificitatea diagnostic: Specificitatea diagnostic este definit ca probabilitatea ca prin testare s se obin un
rezultat negativ n absena analitului specific. Specificitatea diagnostic a fost evaluat i s-a stabilit a fi 91,3%.
30.01.2016
Pagina 5 din7
10.3. Senzitivitatea diagnostic: Senzitivitatea diagnostic este definit ca probabilitatea s se obin prin testare un
rezultat pozitiv n prezenta analitului specific. Senzitivitatea diagnostic a fost evaluat i s-a stabilit a fi >95 %.
10.4. Interferene: Nu au fost observate interferene n seruri cu concentraii de pana la 10 mg/ml hemoglobin, 5 mg/ml
trigliceride i 0.2 mg/ml bilirubin.
Nota: aceste valori se refer la grupurile de probe investigate; specificaiile de mai sus sunt orientative.
11. LIMITRI ALE PROCEDURII
Contaminarea bacterian sau ciclurile repetate nghe - dezghe pot afecta valorile absorbanelor. Diagnosticul unei boli
infecioase nu trebuie stabilit doar n baza rezultatului unui test. Un diagnostic precis trebuie s tina cont de istoricul clinic,
de simptomatologie, precum i de datele serologice. La pacienii cu imunodeficien i la nou nscui, rezultatele trebuie
interpretate cu atenie.
Pot aprea reacii ncruciate cu Chlamydia pneumoniae n cazul serurilor ce conin anticorpi anti LPS i MOMP.
12. PRECAUII I AVERTIZRI
n conformitate cu articolul 1 paragraful 2b din Directiva European 98/79/EC, dispozitivele medicale destinate
diagnosticrii in vitro sunt garantate de ctre productor a ndeplini condiiile de conformitate, performant i siguran. n
consecin procedura, informaiile, atenionrile i msurile de precauie din instruciunile de utilizare trebuie s fie urmate
ntocmai. Utilizarea truselor cu ajutorul analizoarelor sau alte echipamente similare trebuie s fie validat conform metodei
utilizate. Orice modificare de form, compoziie sau procedur, precum i orice utilizare n combinaie cu alte produse
nespecificate de productor, nu este autorizat. Utilizatorul nsui este responsabil pentru astfel de modificri. Productorul
nu este rspunztor de rezultatele elaborate prin analiza vizual a probelor.
Acest test se va utiliza numai pentru diagnostic in vitro.
Toate componentele de origine uman utilizate la producerea reactivilor din trus au fost testate anterior pentru anticorpi
anti-HIV, anti-HCV i pentru antigen HBs i au fost depistate ca fiind nonreactive . Cu toate acestea, toate materialele din
trus trebuie tratate ca material potenial infecios.
Nu utilizai mpreun reactivi din loturi diferite.
Nu utilizai reactivi de alte proveniene mpreun cu reactivii din trus.
Nu utilizai reactivi care au depit data de expirare.
Folosii pipete, vrfuri, dispensere i alte consumabile de laborator curate.
Pentru a evita contaminrile nu schimbai ntre ele capacele flacoanelor de reactivi.
Imediat dup utilizare nchidei bine capacele flacoanelor cu reactivi astfel nct s se evite evaporarea i contaminarea
microbian.
Dup prima deschidere si depozitarea ulterioar, verificai de fiecare dat nainte de utilizare ca flacoanele de conjugat i
controalele sa nu fie contaminate microbian.
Pentru a evita contaminarea ncruciata i apariia de rezultate false att probele pacienilor ct i reactivii trebuie pipetate
cu atenie direct pe fundul godeului, fr stropiri accidentale.
n timpul incubrii acoperii stripurile pentru a evita evaporarea. NovaLisa TM ELISA este destinat utilizrii numai de ctre
personal calificat care este familiarizat cu regulile de bun practic din laborator.
Atenie!: Concentraia soluiei de Bronidox L prezent n trus, nu prezint un risc semnificativ la contactul cu pielea sau
mucoasele
!
Atenie!: Acidul sulfuric irit ochii i pielea. A nu se pstra la ndemna copiilor. La contactul cu ochii, cltii cu ap din
abunden i apoi consultai medicul !
12.1 Gestionarea deeurilor:
Reziduurile chimice i cele rezultate n urma preparrii sunt n general ncadrate n categoria deeurilor periculoase.
Gestionarea unor astfel de deeuri este reglementat de legi i regulamente naionale i regionale. Contactai autoritile
locale sau companiile n msur s v ofere indicaii cu privire la debarasarea deeurilor periculoase.
13. INFORMAII PENTRU COMANDA PRODUSULUI:
Cod produs: CHLG0070
30.01.2016
Pagina 6 din7
SCHEMA TESTRII
Chlamydia trachomatis IgG - ELISA
Pregtirea testului:
Prepararea reactivilor i probelor se face precum s-a descris.
Stabilii planul de distribuie i identificare pentru toate probele i controalele conform
prospectului care nsoete trusa.
Selectai numrul de godeuri i inserai-le pe plac.
Procedura de lucru:
Blank (A1)
Control
negativ
Control pozitiv
100 l
-
100 l
-
Control negativ
Control pozitiv
Cut-off
Proba (diluie
1+100)
Cut-off
100 l
-
Probe (diluie
1+100)
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
30.01.2016
Pagina 7 din7
CHLG0070ro-