UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN

VETERINAR BUCURETI
SPECIALIZAREA C.E.P.A

Coordonator:
Prof. Univ. Dr. OGOE IULIAN
Absolvent:
MIRCEA LOREDANA

Lucrarea elaborat conine doua pri :

PARTEA I - STUDIUL BIBLIOGRAFIC
CAP.1 Mierea de albine, importan, producere, caracteristici
CAP.2 Microbiologia mierii
PARTEA a- II-a - STUDIUL EXPERIMENTAL
CAP.3 Optimizarea tehnicilor de izolare i identificare a bacteriilor
din mierea de albine
CONCLUZII

INTRODUCERE
Mierea constituie un amestec
complex de zaharuri, enzime, cear i
lipide, mpreun cu cantiti foarte
mici de minerale, aminoacizi, acizi
organici, vitamine, polen i propolis.
Acest aliment poate fi folosit att ca
ingredient, ct i consumat ca atare, ca
produs final.
Mierea se folosete, n cantitate
mult mai redus, i n scopuri
nealimentare, n medicamente,
cosmetice sau hran pentru animale.
Prin calitile sale nutritive mierea trebuie s corespund din punct de
vedere microbiologic , n sensul c nu trebuie s conin microorganisme
patogene.
Subliniez c izolarea i identificarea eventualelor bacterii prezente n mierea
de albine este o operaie dificil, din 2 motive:
- datorit numrului redus de bacterii, eventual prezente
- datorit vscozitii sale

MATERIALE I METODE
n vederea optimizrii tehnicilor de izolare i identificare a bacteriilor
din mierea de albine au fost recoltate i prelucrate, prin examene
bacteriologice complexe, 98 de probe de miere, de la productorii
particulari i din reeaua de desfacere a acestui produs.
Tabel nr.1.
Sortimentele de miere i numrul probelor recoltate n vederea realizrii
examenelor bacteriologice.
Nr.crt.

Sortimentul de miere

Numrul de probe
recoltate

Miere de man

24

Miere de tei

18

Miere de salcm

26

Miere poliflor

30

TOTAL

98

Observaii

Investigaiile au fost fcute n perioada aprilie 2008- martie 2011, n mai

multe etape succesive, ce s-au suprapus perioadelor n care famiile de albine erau
n activitate.
n general, probele de miere au fost recoltate imediat dup obinerea
mierii, urmnd transportate n Laboratorul de Microbiologie al Facultii de
Medicin Veterinar i prelucrate n aceiai zi. Atunci cnd nu a fost posibil
prelucrarea lor n aceiai zi, probele au fost meninute pn la prelucrare, la
temperatura de laborator i la ntuneric.
n investigaiile ntreprinse am cercetat comparativ prezena bacteriilor
n miere folosind dou metode:
- metoda 1: am folosit cte 10 g de miere pentru fiecare prob prelucrat
- metoda 2: cte 100 g miere, pe care le-am diluat n raport de 1/10, cu
soluie fiziologic steril.
Amestecul obinut l-am centrifugat ,timp de 30 minute, la o vitez de
7,500 turaii/minut, iar nsmnrile au fost realizate din sedimentul obinut.
Pentru realizarea investigaiilor am folosit mai multe medii de
cultur(bulion/agar cord de creier; bulion /agar Bailey; agar Bailz modificat;
mediul R.C.) astfel nct s pot izola toate speciile bacteriene, eventual prezente
n aceasta indiferent de exigenele nutritive i tipul respirator al bacteriei.

REZULTATE I DISCUII

Analiza datelor demonstreaz c din cele 98 de probe de miere

recoltate i prelucrate , au fost izolate 57 de tulpini, care n majoritate au
aparinut speciilor Gram pozitive. Din acestea 41 au aparinut genurilor
Bacillus i Phaenibacillus , iar 5 genului Lactobacillus i 1 genului
Enterococcus. Numai din 5 probe au fost izolate tulpini aparinnd genului
Clostridium.
Dintre bacteriile Gram negative au fost izolate din probele de miere
doar 3 tulpini ; 2 au aparinut speciei Pseudomonas aeruginosa i 1 speciei
Escherichia coli.
Analiza de detalii a rezultatelor obinute demonstreaz c n
probele de miere analizate au fost prezente mai ales specii bacteriene
sporogene, ncadrate n genurile Bacillus i Clostridium.

V prezint cteva aspecte morfologice i culturale ale unora dintre speciile

bacteriene izolate:

Fig nr. 1. Detaliu cultur de B.cereus - hemoliz adevarat

Fig nr. 2. Bacillus cereus - coloraie gram - Gram pozitiv, n form de tij

Fig. nr. 3. Colonii pe agar VL

de Clostridium perfringens
(dreapta - colonii lecitinaze
pozitive) - (stnga neutralizarea lecitinazei prin
ser specific)

Fig nr. 4. Frotiu din

cultur de Clostridium
perfringens bacili mari,
gram-pozitivi

Fig nr. 5. Cultur n bulion i

agar de Pseudomonas
aeruginosa
pigmentat n verde datorit
pyocyaniului

Fig nr. 6. Frotiu

colorat prin metoda
gram.
Cultur de Pseudomonas
aeruginosa - bacili Gram
negativi,
nesporogeni,
necapsulogeni.

Fig nr. 7. Mediu Levine Escherichia coli - colonii

negru, cu un luciu metalic
ca iodul

Fig. nr. 8. Frotiu

coloraie gram E.coli bacil Gram negativ,
nesporulat,
necapsulat

CONCLUZII
Ansamblul investigaiilor ntreprinse permit formularea urmtoarelor
concluzii:
1. Din cele 98 probe de miere de albine recoltate i prelucrate prin examene
bacteriologice complexe au fost izolate i identificate 57 de tulpini bacteriene:24 din
mierea de man; 18 din mierea de tei; 26 din mierea de salcm i 30 din mierea
poliflor.
2. Varianta de lucru n care s-au utilizat probe de 100 g miere pentru
nsmnarea primar s-a dovedit superioar variantei clasice n care pentru izolare
fiecare tip de mediu se nsmna cu cte 10 g de miere.
3. Dup identificare, pe baza ansamblului nsuirilor morfologice s-a demonstrat
c din cele 57 tulpini izolate, cte 8 tulpini au aparinut speciilor Paenibacillus
larvae, Bacillus alevi i Bacillus circulans; 11 tulpini au fost ncadrate n specia
Bacillus laterosporus; 7 tulpini au aparinut speciei Melissococcus pluton; 5 tulpini
au fost ncadrate n specia Clostridium perfringes; 4 tulpini au aparinut speciei
Bacillus cereus; 2 tulpini speciei Pseudomonas aeruginosa i cte o tulpin speciilor
Escherichia coli i Enterococcus faecalis.
4. Conform datelor de literatur speciile bacteriene izolate din mierea de albine,
aparin genurilor Bacillus i Clostridium i sunt reprezentate mai ales de acelea care
se izoleaz din infeciile ale albinelor adulte sau ale larvelor.