Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
si masurilor de control care se impun in industrializarea ei, este un produs cu tipuri si niveluri
reduse de microorganisme. Numarul total de germeni din probele de miere poate varia de la
cateva zeci la cateva mii pe gram fara a exista o cauza predictibila. Microbii care intereseaza in
prelucrarea mierii dupa recoltare sunt cei care se gasesc in mod obisnuit in acest produs (cum ar
fi levurile, mucegaiurile si bacteriile formatoare de spori), cei care arata calitatea sanitara sau
comerciala a mierii (de ex: bacteriile coliforme si levurile), cele care determina boli infectioase
ale albinelor si cei care in anumite conditii ar putea cauza imbolnavirea omului.
Levurile sunt unele dintre putinele microorganisme care se pot multiplica in miere,
deoarece tolereaza aciditatea si nivelurile mari de zaharoza. Fiind osmofile, ele se pot multiplica
chiar in mierea naturala si determina fermentarea acesteia. Levurile dominante gasite in mierea
fermentata sunt specii din genurile Saccharomyces, Candida, Debaryomyces, Torula si
Torulopsis.
Mucegaiurile din miere provin din continutul intestinal al albinelor, din stup sau din
mediul in care albinele isi desfasoara activitatea sau in care se prelucreaza mierea si apartin mai
ales genurilor Alternaria, Aspergillus, Penicillium.
Bacteriile. Prin comparatie cu alte alimente neprelucrate termic, numarul de bacterii din
miere este mult mai mic (zeci sau sute) si variaza in functie de tipul de miere, starea de prelucrare
(cruda, finita, comerciala), vechime, timpul de recoltare. Speciile intalnite apartin genurilor
Alcaligenes, Bacillus, Brevibacterium, Clostridium, Enterobacter, Flavobacterium, Klebsiella,
Micrococcus, Neisseria, Proteus, Pseudomonas, Xanthomonas s.a.
Sporii bacterieni, mai ales cei ai bacteriilor din genul Bacillus, se gasesc cu regularitate in miere;
sunt gasiti de asemenea si spori clostridieni, dar mai putin frecvent. Sporii de Clostridium
botulinum sunt gasiti mtr-o fractiune din probele de miere testate in mod obiijnuit si la niveluri
scazute. Mierea a fost incriminata ca o sursa de spori botulinici, responsabiii de cazurile de
botulism infantil.
De asemenea, se gasesc in miere si forme nevegetative ale speciilor bacteriene cauzatoare
de boli. Deoarece bacteriile nu se pot multiplica in miere, un numar mare al bacteriilor in forma
vegetativa ar putea indica o contaminare recenta de la o sursa secundara. Anumite
microorganisme pot supravietui in miere sub forma vegetativa mai mult timp, in conditii
experimentale, la temperaturi scazute.
Capacitatea mierii de a inhiba sau de a distruge microorganismele se datoreaza urmatorilor
factori:
- continutul ridicat de zahar si foarte redus in apa libera, ceea ce determina deshidratarea,
zbarcirea i moartea celulelor microbiene;
- aciditatea (pH < 4,5);
- sistemul de oxidare a glucozei din miere, care determina formarea peroxidului de
hidrogen, produs toxic pentru microorganisme, cunoscut mult timp inainte de identificare sub
denumirea de "inhibina";
- continutul foarte redus de proteine si raportul C/N mare al mierii;
- lipsa de oxigen din miere, oxigenul atmosferic neputand patrunde in miere datorita
vascozitatii acesteia; majoritatea microorganismelor contaminante au nevoie de oxigen pentru a
se putea dezvolta;
- prezenta in miere a unor substante chimice si enzime nefavorabile dezvoltarii
microorganismelor: pinocembrina, lisozima, acizii fenolici, terpenele, benzil-alcoolii, diferite
substante volatile;
- sarcina electrica. nefavorabila creata de zaharurile reducatoare din miere care
descurajeaza multiplicarea mucegaiurilor si a bacteriilor aerobe.
Sursele de contaminare microbiana a mierii pot fi primare (polenul, tubul digestiv al
albinelor, praful, aerul, apa, solul si nectarul florilor) si secundare (care includ aerul, personalul
care manipuleaza alimentele, contaminarea incrucisata, echipamentele si constructiile). Sursele
secundare de contaminare sunt controlate prin respectarea regulilor de buna practica.
Cercetarile care au vizat studierea perioadei de supravietuire a microorganismelor
patogene in miere au aratat :
- Pseudomonas aeruginosa supravietuieste doar 8 zile;
- Salmonella enteritidis (cea mai rezistenta dintre salmonele) n-a mai fost izolata dupa.
34 de zile;
- Staphylococcus aureus rezista in miere maximum 20 de zile;
- genul Mycobacterium, cunoscut pentru capacitatea sa de a supravietui timp indelungat
in mediile cele mai defavorabile, nu rezista mai mult de 77 zile.
Aceste considerente ne permit sa afirmam ca mierea nu poate fi considerate drept vector
al microorganismelor respective, din cauza perioadei scurse intre elaborarea ei, conditionarea sj
vanzarea catre consumatori.
Deoarece mierea de albine nu reprezinta un substrat favorabil supravietuirii si
multiplicarii microorganismelor, ea posedand capacitatea de a le inhiba sau de a le distruge,
examenul microbiologic nu a constituit o preocupare pentru specialists in domeniu.
Totusi, datorita. faptului ca rare tipuri de microorganisme persista in miere, de regula in
stare dormanda, iar unele specii de levuri pot sa se multiplice si sa. modifice produsul, facandu-1
impropriu pentru consum uman, in ultimul timp producatorii si specialistii acorda interes din ce
in ce mai mare calitatii microbiologice a mierii si de multe ori impun examinarea ei
microbiologic inainte de comercializare.
Pe masura ce vor aparea noi si diverse intrebuintari ale mierii si se vor dezvolta noi
tehnologii, vor fi create si necesitatea unor informatii suplimentare despre microorganismele din
miere, pentru o mai cuprinzatoare intelegere a caracteristicilor ei microbiologice.
2.1. Definite
2.2. Importanta
2.3.
Clasificarea mierii
2.4. Caracteristicile
2.5.
materiei prime
2.6. Caracterele
2.7. Caracteristicile
2.7.1. Proprietafile
2.7.2. Compozitia
2.8.
fizice
chiinica a mierii
2.9. Conditionarea
2.10. Falsificarea
2.11. Mierea
mierii
mierii
toxica
2.1. Definitie
Conform Codex Alimentarius S legislatiei Uniunii Europene, mierea este "substanta
dulce naturala, produsa de albinele din specia Apis mellifera, din nectarul plantelor sau din
secretiile partilor vii ale acestora ori din excretiile, pe sectiunile vii ale plantelor, ale insectelor
care se hranesc prin sectiune din plante pe care albinele le colecteaza, le transforma,
combinandu-le cu substante proprii specifice, le depoziteaza, le deshidrateaza, le stocheaza si le
lasa in faguri pentru a se,, matura".
Orice produs asemanator cu mierea care nu este elaborat in exclusivitate de catre albine
nu intra in notiunea de miere, in aceasta categorie incadrandu-se substituirile de orice fel. De
asemenea, orice produs asemanator cu mierea care este obtinut din alte materii prime decat
nectarul sau mana nu intra in notiunea de miere, chiar daca acele substante sunt culese de catre
albine, sunt prelucrate de acestea i sunt depozitate in celulele fagurilor. Este vorba in principal
de practica hranirii intensive a albinelor cu sirop de zahar sau alte substante edulcorante in
scopul obtinerii de miere marfa. Tot asa, nu se poate da denumirea de miere produselor care
contin mai mult de 22 % apa si 5 % zaharoza sau altor categorii de miere artiflciala obtinuta prin
diferite metode chimice.
Extractia mierii din faguri pentru trebuintele omului trebuie efectuata numai dupa ce procesul de
prelucrare a materiilor prime de catre albine a fost incheiat, deci cand cea mai mare parte din
celulele umplute cu miere au fost capacite. Operatia trebuie sa se efectueze in conditii bune de
igiena, astfel incat produsul sa nu se impurifice cu substante straine, iar contaminarea
microbiana sa fie cat mai redusa posibil. In continuare, prelucrarea tehnologica (filtrarea,
decantarea, omogenizarea), ambalarea si pastrarea trebuie efectuate
Din punct de vedere caloric, 1 kg miere este echivalent cu: 1,6 kg carne de vita; 2,3 kg
carne de pasare; 2,1 kg peste; 4,7 1 lapte de vaca; 50 de oua; 6 kg mere; 25 de banane. Din punct
de vedere al numarului de calorii, 30 g de miere au 91 de calorii; 30 de galbenusuri de ou - 87 de
calorii; 30 g carne de vita - 56 de calorii; 30 g cartofi - 30 de calorii; 30 g de lapte de vaca - 22
de calorii. De asemenea, mierea, comparativ cu celelalte produse analizate, este mai competitive,
costul unor sortimente de carne fiind de 3 pana la 5 ori mai mare decat eel al mierii .
Mierea este un aliment care nu ar trebui sa lipseasca din hrana zilnica a copiilor, tinerilor,
batranilor. Continutul bogat de zaharuri o recomanda in indulcirea ceaiurilor, cafelelor, sucurilor
naturale din fructe sau soia, sosurilor si dulciurilor. Consumul constant de miere determina la
copii o crestere ponderala rapida, dezvoltare intelectuala si crestere a imunitatii. Copiii de 5-12
ani pot consuma 15-40 g miere/zi. Chiar si copiii mai mici pot consuma o lingurita de miere
dizolvata in ceai/lapte si pentru adulti, in special pentru astenici si pentru cei obositi, este foarte
indicat consumul de miere .
Cele peste 70 de substante biologic active continute de miere ii confera o pluralitate de
efecte care o fac sa aiba un larg evantai de actiuni terapeutice globale, din care enumeram
urmatoarele: trofice (intaritoare), fortifiante, tonice, cicatrizante, conservante, protective
antigerminative, nutritive, hemostatice, regeneratoare. La aceste actiuni se adauga cele speciale
ale plantei medicinale din care provine sau cele specifice ale unor substante identificate
(vitamine, enzime, antibiotice s.a.).
Mierea de albine este utila in afectiuni digestive (constipatie, diaree, colita, gastrita, ulcer,
arsuri la stomac), respiratorii (faringita, laringita, sinuzita, tuse, bronita), cardiovasculare
(ischemie cardiaca, ulcer varicos, boli de inima), cutanate (acnee, arsuri si rani), probleme
oftalmologice (conjunctivita, infectii oculare) si stomatologice, afectiuni hormonale la femei
(dismenoree, infertilitate i frigiditate), anemii, afectiuni psihiatrice si neurologice s a.
Mierea este folosita cu succes in medicina de familie ca laxativ usor, ca somnifer, pentru
ca un pahar cu apa indulcita cu miere, baut seara, inainte de culcare, alunga insomniile. Mierea
se mai foloseste si in durerile de stomac, fiind un bun pansament pentru protectia mucoasei.
Mierea este buna si dupa o petrecere prelungita, pentru ca lumineaza capul celor ametiti de
aburii alcoolului. Cei care sunt ametiti dupa un chef zdravan se dezmeticesc repede band un
pahar cu apa indulcita cu miere. Mierea este folosita si ca unguent impotriva crapaturilor pielii,
degeraturilor etc. Aceasta proprietate cicatrizanta se explica prin faptul ca mierea excita limfa
din tesuturi scotand-o la suprafata ranii, in asa fel incat ea antreneaza impuritatile si bacteriile,
care apoi sunt eliminate. Mierea contine si acid formic, care este un puternic dezinfectant.
Mierea este apreciata si datorita actiunii sale antitoxice. S-a stabilit, de exemplu, ca in
cazul intoxicatiilor cu ciuperci, glicemia scade de la 1 g/1 la 20 cg/1, situatie in care, daca
bolnavilor li se administreaza ceaiuri cu miere sau apa saturata cu miere, inlocuind astfel
glucoza din organism distrusa de otrava continuta de ciuperca, acetia sunt salvati de la moarte.
Proprietatile conservante, bactericide si bacteriostatice ale mierii erau recunoscute inca
din antichitate.
2.3.Clasificarea mierii
- miere scursa: mierea obtinuta prin drenarea fagurilor fara larve (puiet), deschii
(necapaciti);
- miere extrasa. mierea obtinuta prin centrifugarea fagurilor fara larve (puiet),
deschii (necapaciti);
- miere presata: mierea obtinuta prin presarea fagurilor fara larve (puiet), cu sau
fara incalzire moderata la o temperatura de maximum 45 C;
- miere amestecata: un amestec omogen de doua sau mai multe tipuri de miere
avand sursa florala, culoarea, aroma, densitatea sau originea geografica diferite;
- miere filtrata. mierea obtinuta prin indepartarea materiiior straine organice si
anorganice, ceea ce duce la indepartarea, in mod semnificativ, si a polenului. Daca filtrarea duce
la indepartarea unei cantitati semnificative de polen, se impune informarea corecta a
consumatorilor in acest sens, prin intermediul unei mentiuni corespunzatoare incluse la
etichetare.
3. dupa consistenta:
- mierea lichida (fluida);
- mierea cristalizata (sau mierea granulatd). mierea in care o parte din continutul
natural de glucoza trece spontan sub forma de cristale mai mari sau mai mici.
4. dupa culoare: incolora, galben-deschisa, aurie, verzuie, bruna sau roscata s.a..
5. dupa aroma, diversele sorturi de miere se apreciaza prin miros si degustare,
sursa animala, reprezentata de substantele dulci, bogate in zaharuri, eliminate de unii paraziti ai
plantelor, cunoscute sub numele generic de mana.
a) Nectarul constituie sursa cea mai importanta cantitativ cea mai valoroasa calitativ. El
este un produs complex de secretie al glandelor nectarifere florale sau extraflorale, sub forma
unei solutii glucidice de concentratii diferite, avand originea in seva plantelor.
Nectarul contine aceleasi elemente primare ca si mierea, dar in alta forma si in alte
proportii. Pentru a deveni direct consumabil si conservabil pentru o perioada lunga de timp, el
trebuie prelucrat de catre albine intr-un mod specific animala, reprezentata de substantele dulci,
bogate in zaharuri, eliminate de unii paraziti ai plantelor, cunoscute sub numele generic de
mana.
a) Nectarul constituie sursa cea mai importanta cantitativ cea mai valoroasa calitativ. El
este un produs complex de secretie al glandelor nectarifere florale sau extraflorale, sub forma
unei solutii glucidice de concentratii diferite, avand originea in seva plantelor.
Nectarul contine aceleasi elemente primare ca si mierea, dar in alta forma si in alte proportii.
Pentru a deveni direct consumabil si conservabil pentru o perioada lunga de timp, el trebuie
prelucrat de catre albine intr-un mod specific.
Principalii componenti ai nectarului sunt zaharoza, glucoza fructoza, care se
gasesc in cantitati mari, iar alfa-metil glucozidele, maltoza, melibioza, trehaloza, amibioza,
rafinoza, melezitoza in cantitati reduse. In afara de zaharuri, in compozitia chimica a nectarului
intra si alte substante in cantitati mai mici, uneori infime, cum ar fi: acizi grasi, rasini, dextrine,
diferiti compusi cu fosfor si azot, saruri minerale, proteine, enzime, vitamine, levuri, substante
biologic active, substante aromate. Dintre vitamine, acidul ascorbic (vitamina C) se gaseste in
cantitate apreciabila in nectar, iar unele zaharuri (cum ar fi manoza, galactoza si ramnoza) sunt
toxice pentru albine si le reduc longevitatea. Nectarul contine enzime care il transforma, chiar in
momentul secretarii, in glucoza si fructoza, fie in totalitata, fie partial, iar reactiile mai complexe
conduc la formarea unor zaharuri ca maltoza, precum si a unor zaharuri superioare. S-a constatat
ca nectarul majoritatii plantelor contine invertaza, enzima care are proprietatea de a scinda
zaharoza in glucoza si fructoza.
Greutatea specifica a nectarului variaza in limite cuprinse intre 1,02 si 1,35, iar reactia lui
poate fi acida, bazica sau neutra, in general avand un pH acid. Continutul de apa este de circa 55
%.
b) Mana este acea substanta dulce, limpede vascoasa, uneori solidificata, ce se afla in
anumite perioade ale anului pe frunzele, ramurile sau tulpinile plantelor, ca si pe portiunile
corespunzatoare de sol. Ea poate fi de origine vegetala (cand este secretata direct de frunzele,
mugurii sau alte parti din planta) sau de origine animala, cand este excretata de anumite insecte
care paraziteaza vegetatia lemnoasa si mai rar cea ierboasa, numite in mod popular paduchi de
plante (afide), pureci de frunze (psilide) si paduchi cu carapace sau paduchi testosi (lecanide).
Initial, picaturile de mana sunt lichide (apoase) si transparente stralucitoare, ca roua (din
care cauza mierea de mana se mai numeste miere de "roua"). Pe masura deshidratarii, ele devin
din ce in ce mai vascoase, iar datorita oxidarii, impregnarii cu diferite microparticule din
atmosfera (granule de polen, praf etc.) i contaminarii cu diverse microorganisme (cum ar fi
algele), ii schimba culoare i capata o nuanta intunecata (verzuie, maronie, rocata sau bruna).
Lipsa nectarului din aria de zbor a albinelor le determina sa culeaga orice substanta
dulce, inclusiv mana.
Compozitia chimica a manei este influentata de un mare numar de factori: specia plantei
parazitate, specia insectei producatoare de mana i stadiul ei de dezvoltare, starea timpului
(calduros, uscat, umed, racoros), gradul de impurificare a atmosferei i natura acesteia, nivelul
de contaminare cu microorganisme categoria acestora, timpul scurs de la eliminarea manei pana
la recoltarea ei de catre albine. Pe langa zaharurile obisnuite (glucoza, fructoza, zaharoza,
maltoza), mana contine i cantitati variabile de zaharuri cu structura complexa. in mana s-a
decelat chiar si un zahar specific (melezitoza), care se pare ca este sintetizat in tractusul digestiv
al insectelor producatoare de mana. Astfel, in mana produsa de insectele care paraziteaza unele
conifere cum ar fi zada (laricea), acest trizaharid poate sa ajunga pana la 30 % din glucidele
totale. Mana mai contine pentozani, gume, mucilagii si alte substante hidrocarbonate complexe
de tipul pectinelor. De asemenea, mana este bogata in substante minerale (pana la 4-5 % din
substanta uscata), in substante azotoase uzate din punct de vedere biologic si in enzime. In
schimb, este lipsita de substante aromate, care sunt specifice nectarului florilor.
Datorita compozitiei chimice complexe, transformarea manei in miere necesita un efort
mult mai mare din partea albinelor comparativ cu prelucrarea nectarului, iar o parte din
componentele produsului final sunt inutilizabile, constituie balast i sunt chiar daunatoare pentru
sanatatea lor pe perioada de iernare.
2.5. Producerea mierii de catre albine
Acest proces complex incepe cu recoltarea materiilor prime (nectarul si mana) de catre
albine cu ajutorul aparatului bucal si se incheie cu capacirea fagurilor in care este depozitata
mierea.
Aparatul bucal al albinei este adaptat pentru supt si Iins, el fiind format din mandibule, maxile si
labium, ultimele doua segmente formand trompa. Mandibulele sunt doua piese articulate mobil
pe obraz, sunt actionate de muschi puternici si servesc la ingerarea granulelor de polen, la
roaderea capacelelor si modelarea solzilor de ceara, la cladirea fagurilor, la curatirea stupului si
la sustinerea trompei atat in timpul repausului, cat si al activitatii. La baza mandibulelor se
deschid doua glande mandibulare ce sunt foarte mici la trantori, bine dezvoltate la albinele
lucratoare si foarte mari la matci. Secretia acestor glande, impreuna cu cea a glandelor
faringiene, formeaza saliva. Trompa (proboscisul) se compune din doua piese laterale (maxile)
i una mediana (labium), care servesc la recoltarea hranei lichide prin aspiratie si lins, moment
m care toate piesele componente se alatura, formand un tub cu lumen mai mare la baza i mai
redus la varf, diametrul acestuia variind direct cu vascozitatea hranei. In momentul aspiratiei
solutiilor zaharoase, trompa este indreptata inainte, cu baza ridicata in sus. Materia prima
absorbita de trompa patrunde in esofag este depozitata in gua albinei; aceasta este o dilatatie a
esofagului, capacitatea ei putand ajunge pana la 75 mg.
Prelucrarea materiilor prime se realizeaza prin doua categorii de procese: prelucrarea
enzimatica si prelucrarea hidrica.
- prelucrarea enzimatica apare ca o necesitate specifica albinelor de a transforma
zaharoza, maltoza, melezitoza si celelalte zaharuri cu structura complexa din compozitia
nectarului si manei in zaharuri simple, direct si complet asimilabile, respectiv glucoza si
fructoza. Aceasta cerinta se justifica prin aceea ca in perioada de inactivitate (in timpul
iernarii) albinele trebuie sa consume astfel hrana incat sa nu mai necesite transformari prin
procesul de digestie si sa nu mai lase reziduuri in tubul digestiv, deci sa fie absorbita si
asimilata in cvasitotalitate. Se poate afirma ca prin prelucrarea enzimatica albinele isi digera
hrana inainte de a o consuma si o pastreaza in aceasta forma pana in momentul consumului.
-prelucrarea hidrica se realizeaza in doua trepte: initial diluarea, in final concentrarea.
Diluarea initiala a materiei prime este o consecinta fireasca a incorporarii unei cantitati
apreciabile de saliva, care este vectorul enzimelor zaharolitice. Pe de alta parte, diluarea apare
ca o conditie a activitatii enzimatice, deoarece pe substrat concentrat activitatea enzimatica este
foarte slaba. Concentrarea finala incepe numai dupa ce prelucrarea enzimatica a fost incheiata.
Rostul ei se refera la trei aspecte principale.
-stabilizarea mierii prin blocarea proceselor enzimatice, conditie care se realizeaza numai
prin reducerea pronuntata a continutului de apa;
-blocarea activitatii microorganismelor, deoarece in substrat foarte concentrat acestea nu
se mai pot dezvolta;
-realizarea unui produs nutritiv supraconcentrat, care presupune un spatiu redus de
depozitare, tinind cont de dimensiunile reduse si relative fixe ale stupilor.
Prelucrarea incepe chiar in timpul recoltarii materiei prime, cand secretia salivara este
puternic stimulata. Nivelul de excitare a secretiei salivare in timpul recoltarii, deci i cantitatea
de saliva, respectiv de enzime zaharolitice adaugate, este conditionat de mai multi factori:
-cu cit gradul de concentrare a materiei prime este mai mare, cu atat aceasta este diluata
cu o cantitate mai mare de saliva; cu cat continutul de polizaharide este mai mare fata de eel de
monozaharide (cum este cazul, de exemplu, al manei sau nectarului de castan salbatic), cu atat
diluarea este mai mare;
-cand pentru a colecta aceeasi masa de nectar albina trebuie sa viziteze un numar mai
mare de flori, excitarea salivara este prelungita, deci diluarea se accelereaza.
Materia prima diluata cu saliva este aspirata prin trompa si depozitata in gua.
Recoltarea se intrerupe numai dupa ce gusa este complet umpluta. Sunt insa si situatii in care,
prin secretia salivara abundenta (dictata de una din imprejurarile mentionate mai sus),
organismul albinei sufera o deshidratare pronuntata, care inhiba secretia salivara ulterioara,in
acest caz albina intrerupe culesul si il reia dupa rehidratare (adapare), pana la umplerea gusii.
Enzimele adaugate o data cu saliva isi incep imediat activitatea zaharolitica, aceasta
desfasurandu-se neintrerupt in timpul recoltarii si in continuare in timpul zborului catre stup. In
ansamblu insa, in acest timp relativ scurt transform area enzimatica a zaharurilor este redusa.
Finisarea transformarii enzimatice se realizeaza in stup.
Ajunsa in stup, albina culegatoare preda recolta, prin regurgitare, unei albine lucratoare,
care o ingurgiteaza. Aceasta din urma nu o depoziteaza direct in celulele fagurilor, ci o preda
altei albine lucratoare, operatia repetandu-se cu alte cateva albine lucratoare; in acest circuit, la
fiecare regurgitare-ingurgitare albinele dilueaza materialul adus cu o noua cantitate de saliva,
deci echipamentul enzimatic se imbogateste treptat. in continuare, materialul adus in faza finala
a prelucrarii enzimatice este depozitat sub forma de picaturi mici in celule, unde se definitiveaza
procesul de prelucrare. In acest scop, o albina si apoi alte cateva pe rand continua operatiile de
ingurgitare-regurgitare chiar in celula, adaugand de fiecare data noi cantitati de enzime. Aceste
operatii de "vanturare" nu sunt facute in scopul concentrarii, dimpotriva, prin saliva incorporate
diluarea se mentine sau se accentueaza. Prelucrarea enzimatica se incheie cand circa 90 % din
zaharul total este adus la forma de zaharuri simple (glucoza si fructoza).
In acest moment incepe a doua treapta a prelucrarii hidrice, concentrarea.
Concentrarea rapida se realizeaza sub influenta a trei factori:
- ventilatia energica produsa de albine cu ajutorul aripilor;
- temperatura ridicata din stup (35-38 C);
- masa redusa a picaturii de miere de pe fundul celulei, care favorizeaza deshidratarea in
timp scurt.
Pe masura deshidratarii, mierea este transferata in celulele de depozitare,
deshidratarea continuand si in timpul umplerii acestora. Pe masura concentrarii mierii,
activitatea enzimelor scade treptat pana la un punct critic, cand devine practic nula. Acest
moment corespunde cu nivelul de concentrare de minimum 80 % substanta uscata (maximum 20
% apa), acest nivel marcand incheierea procesului de prelucrare, cand albinele trec la capacirea
celulelor umplute cu miere, forma sub care aceasta poate fi conservata timp indelungat.
Scaderea continutului de apa duce la reducerea spatiului ocupat pentru stocare si la
marirea presiunii osmotice a mierii. Microorganismele nu pot sa traiasca si nici sa se inmulteasca
in miere din cauza presiunii osmotice. Daca ele sunt in stadiul de spori, nu sunt afectate de
aceasta presiune datorita invelisului sporal si continutului redus de apa. Astfel, daca o bacterie
este introdusa intentionat sau involuntar in miere sub forma vegetativa, aceasta este literalmente
deshidratata si omorata.
Extractia mierii din faguri pentru trebuintele omului trebuie efectuata numai dupa ce
procesul de prelucrare de catre albine a fost finisat, deci numai dupa ce majoritatea celulelor au
fost capacite. Mierea recoltata din fagurii cu celule necapacite este de o calitate inferioara,
deoarece inainte de capacire procentul de apa este mai mare de 20 %, iar transformarea
zaharozei in glucidele componente este in plin proces de desfasurare.
O familie de albine poate sa stranga intr-un sezon melifer, practicand stuparitul pastoral,
pana la 150 kg de miere. Pentru a aduna 1 kg de miere, o albina trebuie sa efectueze 120.000 150.000 de zboruri de cules, iar pentru a produce aceasta cantitate de miere albinele unei familii
parcurg aproximativ 24.000 km.
2.6. Caracterele organoleptice ale mierii
Caracteristicile organoleptice ale mierii sunt conditionate de categoria acesteia (de nectar
sau de mana), de speciile florale din care provine, de compozitia ei chimica, de modul de
extractie din faguri, de modul de conditionare si de timpul si conditiile de pastrare.
Aspectul si consistent (vascozitatea). Aspectul mierii fluide este in general
transparent-stralucitor, dar in unele situatii acesta poate deveni usor opalescent datorita
microcristalelor de zaharuri dispersate in toata masa de miere.
In celulele fagurilor si imediat dupa extractie, toate sorturile de miere au consistenta fluida.
Vascozitatea acesteia este determinata in special de continutul de apa si de temperatura. Mierea
proaspata se prezinta de obicei sub forma unei substante dense, semilichida, semitransparenta,
care incepe treptat sa se cristalizeze i sa se intareasca. Mierea nematurata, cand este luata cu
lingurita si invartita in jurul acesteia, se scurge, pe cand mierea maturata se infasoara in jurul ei
ca o panglica si se prelinge sub forma de fir subtire care devine discontinuu la un moment dat,
rupandu-se.
Consistenta mierii variaza de la starea fluida-subtire cand umiditatea este in preajma valorii
de 20 %, pana la fluida-groasa, pronuntat vascoasa, cand umiditatea variaza intre 16-17 %,
continutul de apa influentand mult vascozitatea mierii: cu cat o miere contine mai multa apa, cu
atat este mai fluida. La un continut optim de apa in miere de 16-17 %, aceasta este de 6 ori mai
vascoasa decat mierea cu 25 % apa. Vascozitatea mierii este ridicata la temperatura de 20-30 C
si scade rapid intre 30 i 40 C, iar peste aceasta temperatura ea nu mai variaza mult, fiind
inutila incalzirea mierii peste 40 C pentru a o face fluida .
Mierea care a fermentat sau este in curs de fermentare, precum si mierea falsificata, are o
consistenta mai lichida decat cea normala. De asemenea, mierea care contine mai multa fructoza
este mai lichida decat cea cu mai multa glucoza si zaharuri complexe. Mierea obtinuta din zahar
invertit contine mai multa melitoza, iar la scurgere se trage sub forma de fir subtire neintrerupt.
Vascozitatea este micsorata si de aerul sau gazele care pot fi inglobate, asa cum se intalneste la
mierea proapat recoltata (in faza de decantare), dar in special la mierea in stare de fermentare.
Datorita compozitiei chimice specifice, mierea de mana are o vascozitate particulara
diferita de cea a mierii de flori, si anume fluida-cleioasa. Unele sorturi de miere de mana au un
continut ridicat in melezitoza si cristalizeaza foarte repede, uneori chiar in faguri, extragerea
facandu-se foarte greu este asa-numita miere-beton (cum este cea obtinuta, de exemplu, de la
larice).
Consistenta mierii se apreciaza dupa rezistenta intampinata la omogenizare dupa modul
de curgere pe o bagheta de sticla.
CRISTALIZAREA MIERII Prin caracteristicile lor naturale, toate sorturile de miere de
flori din tara noastra, cu exceptia celei de salcam, cristalizeaza in timp relativ scurt de la
extractia din faguri (1-3 luni). In termeni populari, mierea cristalizata este cunoscuta si sub
numele de miere zaharisita, insa aceasta expresie este incorecta, deoarece presupune ca in
timpul cristalizarii se mareste cantitatea de zahar din miere, ceea ce este gresit, pentru ca in
mierea cristalizata se gasete aceeasi cantitate de zaharuri ca si in mierea lichida.
Cristalizarea mierii de flori este un proces natural, principalul factor al acesteia
constituindu-1 proportia celor doua zaharuri majoritare, respectiv glucoza (zahar foarte usor
cristalizabil) si fructoza (zahar foarte greu cristalizabil). Limita cristalizarii mierii corespunde
raportului fructoza/glucoza de 1,3. La mierea pura de salcam, valoarea acestui raport este mai
mare de 1,3, ceea ce explica marea ei rezistenta la cristalizare, deci mentinerea starii fluide o
perioada lunga de timp in conditii normale de pastrare (1 an sau chair mai mult). La toate
celelalte sorturi de miere de flori, valoarea acestui raport este mai mica de 1,3. Cristalizarea lor
se va instala cu atat mai repede cu cat valoarea raportului se apropie de 1 sau devine subunitara
(cum este cazul mierii de floarea-soarelui, de rapita sau de pomi fructiferi).
Mierea de mana are alta comportare la cristalizare decat mierea de flori. Continutul
relativ mare de zaharuri complexe, ca si substantele pectice si gumoase constituie o frana pentru
instalarea si desfasurarea cristalizarii. Unele sorturi de miere de mana au insa un continut bogat
in melezitoza, zahar cu potential de cristalizare foarte ridicat. Mierea de mana care contine peste
15 % melezitoza cristalizeaza chiar in faguri, imediat dupa ce a fost produsa de catre albine.
Extractia acesteia din faguri prin centrifugare este greoaie si incomplete.
Culoarea. Culoarea de ansamblu a mierii de flori este galbena, cu o foarte mare
variabilitate de nuante, conditionate initial de speciile de plante de la care provine mierea:
aproape incolora, alba-galbuie, galbuie, galbena pronuntat, galbena-portocalie, galbena- verzuie,
galbena-rosietica etc. Pentru doua sorturi de miere culoarea este sever reglementata de norme,
anume pentru mierea de salcam (la care trebuie sa fie cat mai deschisa posibil) si pentru mierea
de mana (la care trebuie sa fie cat mai inchisa).
Culoarea naturala initiala a mierii de flori este conferita de pigmentii vegetali (caroten,
clorofila, xantofila etc.) din nectar si din polen, in special de cei din clasa flavonoidelor.
Gustul. Gustul mierii se datoreste zaharurilor, acidului gluconic, prolinei si taninurilor.
Se apreciaza ca puterea indulcitoare a mierii este cu 28 % mai mare decat a unei solutii de
zaharoza de aceeasi concentrate. Aceasta particularitate isi are originea in faptul ca cel putin
jumatate din glucidele mierii este alcatuit din fructoza in stare libera (se stie ca, dintre toate
zaharurile cunoscute, fructoza are cea mai mare capacitate indulcitoare, si anume cu 73 % mai
mare deat a zaharozei).
Gustul mierii de flori este dulce, placut, caracteristic, uneori cu nuante mai mult sau mai
putin pronuntate in functie de provenienta si compozitia ei, iar cand fermenteaza primeste un
gust acrisor. Aceasta nuanta discret acrisoara, racoritoare, sesizabila in special la mierea
provenita de la pomii fructiferi si de la salcam, se datoreste imbinarii aromei acesteia cu
dulceata zaharurilor din compozitia ei si cu aciditatea data de acizii organici. La sorturile de
miere de salcie, castan, iarba neagra, pe langa gustul dulce se percepe si o nuanta amaruie destul
de pronuntata.
Gustul mierii de mana este moderat dulce, inferior ca intensitate oricarui sort de miere de
flori, particularitate care se datoreste faptului ca ea are un continut de zahar invertit mai mic, in
medie cu 10 % fata de mierea florala.
Aroma. Fiecare sort de miere de flori are o aroma specifica, ce isi are originea in
uleiurile eterice existente in nectarul si polenul plantelor din care provine. Nuanta si intensitatea
sunt conditionate de natura, varietatea, proportia si cantitatea substantelor aromate pe care le
contine mierea respectiva. In general, aroma tuturor sortimentelor este placuta, dar cea mai
accentuata aroma o are mierea din faguri sau mierea proaspat extrasa. Dintre sorturile de miere
din Romania, cea mai pronuntata aroma o are mierea de otetar, tei si faneata de deal, iar cea mai
discreta aroma o are cea de salcie, castan, rapita.
Mierea imprumuta usor mirosuri straine, astfel ca ambalarea in vase care nu au fost bine
spalate sau depozitate in incaperi neaerisite, la un loc cu alte produse care emana mirosuri
puternice (branza, peste, varza murata, petrol etc.), duce la degradarea mierii.
Mierea provenita de la albinele hranite cu sirop de zahar sau cea direct falsificata, fiind
lipsita de substante organice volatile, nu va avea aroma intalnita la mierea naturala.
Mierea de mana, avand alta origine, contine mult mai putine substante aromate si ca
atare prezinta o aroma mult mai slaba ca mierea florala. Cele mai aromate sorturi de mana sunt
cele provenite de la conifere, care prezinta o aroma placuta de rasina.
2.7. Caracteristicile fizico-chimice ale mierii
2.7.1. Proprietatile fizice
In afara de aspect, consistenta (vascozitate), culoare, gust si aroma, care au fost descrise
mai sus, mierea mai are o serie de proprietati fizice, ce vor fi detaliate in continuare:
Higroscopicitatea este proprietatea mierii de a absorbi, in anumite conditii, umiditatea
din aerul atmosferic, motiv pentru care se impune pastrarea sa in spatii cu umiditate scazuta si in
vase inchise, in caz contrar mierea absorbind o cantitate mare de apa si fiind supusa proceselor
de fermentare i degradare. Higroscopicitatea mierii de mana este mai mica decat a mierii
florale, ceea ce este reprezinta un aspect pozitiv pentru ca absoarbe mai greu umiditatea din
mediul inconjurator.
Presiunea osmotica (activitatea apei) este un parametru important al mierii, avand
legatura cu continutul de apa. Prezinta diferite variatii, inregistrand o valoare ridicata, intre 0,5
(la un continut de apa de 16 %) si 0,6 (la 18,3 % apa), intr-un interval de temperatura intre 4-37
C .
Conductivitatea electrica este unul din parametrii cu ajutorul carora se verifica
autenticitatea mierii de mana. Aceasta contine o cantitate mai mare de substante minerale, de
acizi i de substante azotoase decat mierea de flori, deci si conductivitatea eiectrica a ei va fi mai
mare. La mierea de flori conductivitatea electrica este mult mai mica si valoarea ei difera de la
un sort la altul, de aceea acest parametru nu constituie un criteriu de control al calitatii mierii
florale.
Densitatea (sau greutatea speeifica) a mierii este puternic influentata de continutul ei de
apa, respectiv create si descreste pe masura micsorarii sau sporirii procentului de apa.
Densitatea mierii de albine masurata la temperatura de 20 C trebuie sa fie de minimum
1,4170. Semnificatia acestui parametru consta in aceea ca prin cunoasterea valorii lui putem sa
calculam cu exactitate greutatea unui anume volum de miere, fara a mai fi necesara cantarirea
(astfel, mierea cu 20 % apa are greutatea specifica de 1,4170, deci 1 dm 3 sau 1 litru de miere la
temperatura de 20 C va cantari 1,4170 kg).
Indicele de refractie da indicatii asupra procentului de apa si a greutatii specifice a
mierii, determinarea lui facandu-se cu ajutorul refractometrului, fiind necesara o corectie in
functie de temperatura la care s-a facut examinarea.
Devierea luminii polarizate, care strabate mierea la dreapta sau la stanga, da indicatii
asupra naturii zaharurilor i prin aceasta posibilitatea stabilirii provenientei mierii.
Turbiditatea. Mierea naturala contine intotdeauna, in suspensie materii coloidale,
astfel mierea pusa intr-un vas este putin tulbure chiar
filtrata. Aceasta turbiditate este mai mult sau mai putin accentuata, in functie de sortiment.
Caldura specifica medie reprezinta cantitatea de caldura. La mierea grosiera,
respectiv fin cristalizata, aceasta valoare este de 0,64 cal/g/C, respectiv de 0,73 cal/g/C, care
arata ca este nevoie de mai putina energie pentru a incalzi mierea, decat pentru a incalzi
acelasi volum de apa.
Conductibiiitatea termica variaza in functie de continutul in apa, de temperatura si
de gradul de cristalizare, avand valori intre 118x10 si 143xl05 cal/cm/sec/C. Valorile gasite
pentru miere arata ca aceasta este rea conducatoare de caldura .
Componentii
Romania
Belgia
Apa (%)
16,46
Americii
17,10
15,56
Glucoza (%)
Fructoza (%)
Zaharoza (%)
Maltoza (%)
33,96
38,45
3,10
3,79
31,00
38,50
1,50
7,20
32,19
38,10
2,01
2,54
Acizii organici prezenti in miere sunt numerosi, dar cel care predomina este acidul
gluconic, care provine din glucoza si are un important rol conservant si bactericid. Au mai fost
pusi in evidenta si acizii acetic, lactic, malic, succinic, butiric, citric, piroglutamic si formic.
Acesta din urma, desi este in cantitate infima, constituie un element conservant cu efect
dezinfectant si bactericid. Acizii organici i sarurile lor provin din nectar, din mana sau din
corpul albinelor. Ei dau aciditatea libera (titrabila sau aparenta) a mierii, indiferent daca se
gasesc in forma disociata sau nedisociata. Aciditatea reala (sau activa) se refera numai la acizii
in forma disociata, deci la concentratia ionilor de hidrogen (H ), si se exprima sub forma de
unitati de pH. Valorile normale ale pH-ului mierii se situeaza in domeniul 3,4 - 6,1 (cu o medie
de 3,9), deci reactia chimica reala a ei este pronuntat acida. In cazul mierii de mana, aciditatea
este mai ridicata decat la mierea florala, pH-ul situandu-se in medie in jurul valorii de 4,6, la
mierea de brad putand ajunge chiar la 5.
Continutul in acizi organici al mierii este intre 0,017-1,17, cu o medie de 0,57 %.
Substantele minerale. Mierea contine numeroase substante minerale, a caror cantitate
variaza in limite foarte largi, apreciindu-se la maximum 0,35 % la mierea florala (de cele mai
multe ori insa fiind in jur de 0,1 %), pe cand mierea de mana are un continut mult mai bogat,
care se poate apropia de 1 %.
Elementele eel mai bine reprezentate sunt potasiul (care reprezinta aproape jumatate din
substantele minerale), clorul, sulful, calciul, sodiul, fosforul, magneziul, siliciul, fierul,
manganul si cuprul, al caror continut este prezentat in tabelul de mai jos:
Tabelul nr. 2
Elementele minerale din miere (mg/kg) (dupa Popescu N., Meica S., 1997)
Elementul
Potashi
Clor
Sulf
Calcm
Sodiu
Fosfor
Maguezin
Siliciu
Fier
Mangan
Cupru
0,3
0.29
0.17
0.14
0.44
0.70
4.09
0.56
0.52
0.35
9.53
1.04
Parametrul
Valoarea admisa
crt.
Continutul in zaharuri
1.1.
Continutul de glucoza si fructoza
-mierea din inflorescenta
-minimum 60g/100
g miere
miere
2.
Umiditatea
- in general iarba neagra (Calluna vulgaris) si miereamaximum 20 % maximum
destinata industriei alimentare in general
3.
23 % maximum 25 %
nuere
Conductivitatea eiectrica
mierea care nu este enumerate mai jos si -maximum 0.8 mS/cm
amestecuri ale acestor tipuri de miere
-
5.
spp.)
Aciditatea libera
in general mierea destinata industriei alimentare
-maximum 50
miliechivalenti
acid la 1.000 grame miere
-maximum 80
miliechivalenti
acid
diastazica
hidroximetilfurfurol
6.
si
(HMF)
continutul
deterininat
de
dupa
procesare ^i amestecare
Aciditatea diastazica {scara Schade)
-
alimentare
-
-minimum 8
minimum 3
la
alimentare
-maximum 40 mg/kg
miere (sub rezerva
prevederilor de la doua
liniuta)
-maximum 80 mg/kg
Conditionarea mierii
Mierea extrasa prin centrifugare nu poate fi direct imbuteliata deoarece, prin proiectarea
picaturilor de miere pe peretii extractorului, incorporeaza in acestea aer, sub forma unor bule
microscopice. In mierea proaspat extrasa ajung, de asemenea, particule de ceara smulse din
fagure in momentul descapacirii, fragmente de propolis, mici cantitati de polen provenit din
celulele cu polen ce se gasesc in numar mare sau mic printre celulele cu miere, larve si alte
impuritati.
Prin conditionarea mierii se intelege totalitatea procedeelor tehnice menite sa asigure
purificarea acesteia pentru pastrarea proprietatilor fizico-chimice si biologice in perioada
conservarii. Procesele prin care se realizeaza conditionarea se refera la filtrarea mierii,
limpezirea ei, reducerea continutului de apa,lichefierea mierii cristalizate,pasteurizarea si
conservarea ei.
Filtrarea mierii se face in momentul extragerii ei, cu ajutorul unei strecuratoare,
pentru a o separa de resturile de capacele, de eventualele larve sau impuritati. Filtrarea se mai
poate face si in momentui turnarii mierii in maturator, prin asezarea deasupra gurii acestuia a
unei site fine, confectionata de obicei din tesatura textila.
Cea mai buna metoda de a purifica (limpezi) mierea consta in lasarea ei cateva zile intrun vas numit maturator, pentru decantare, timp in care bulele mari de aer se ridica repede la
suprafata datorita dimensiunilor lor si diferentei de densitate dintre aer si miere. Cu cat bulele
sunt mai mici, cu atat se ridica mai incet; de asemenea, particulele de ceara se ridica mai incet
decat aglomerarile de polen. Daca mierea este foarte vascoasa sau a inceput sa cristalizeze,
purificarea devine practic imposibila. Asadar, in timpul limpezirii, corpurile straine se separa pe
baza dimensiunilor, cele usoare ridicandu-se la suprafata, de unde sunt eliminate cu ajutorul unei
linguri, iar cele grele se lasa la baza vasului. Evacuarea mierii curate se face prin intermediul
unui robinet situat la o anumita distanta fata de fundul maturatorului. Mierea aflata sub robinet
se colecteaza separat, urmand a fi supusa unui nou proces de limpezire.
Durata de limpezire a mierii mai depinde de temperatura si de inaltimea vasului. In cazul
unui strat de 1 cm inaltime, durata de limpezire la diferite temperaturi este de 150 de zile la 10
C, de 30 de zile la 20 C, de 18 ore la 30 C, de 6 ore la 40 C si de 2 ore la 50 C. Cu cat
inaltimea maturatorului creste, cu atat durata de limpezire este mai lunga.
Deshidratarea mierii se refera la eliminarea surplusului de apa din faguri sau din
mierea extrasa, in scopul prevenirii fermentarii ei. Sunt supuse acestui proces toate cantitatile de
miere al carei continut de apa depaseste 18 %. Deshidratarea mierii se face in timpul limpezirii
ei, in aceleasi vase, iar pentru o mai rapida maturare a ei este indicat ca maturatoarele sa fie
mentinute in camere incalzite si uscate.
In lipsa acestor maturatoare speciale si cand cantitatea de miere este mica, limpezirea si
maturarea ei se pot face chiar in bidoanele in care se pastreaza.
Lichefierea mierii cristalizate. Se stie ca toate sortimentele de miere cristalizeaza mai
mult sau mai putin. Cristalizarea nu poate fi socotita ca un defect, dimpotriva, constituie o
garantie a calitatii mierii. Cu toate acestea, multi consumatori prefera mierea in stare fluida si
manifesta rezerve pentru cumpararea si consumul celei cristalizate. Din aceasta cauza apicultorii
au cautat solutii pentru lichefierea mierii cristalizate. Lichefierea apare si ca o necesitate
tehnologica, deoarece numai in aceasta mierii, limpezirea ei, reducerea continutului de apa,
lichefrerea mierii cristalizate, pasteunzarea si conservarea ei.
Filtrarea mierii se face in momentul extragerii ei, cu ajutorul unei strecuratoare, pentru
a o separa de resturile de capacele, de eventualele larve sau impuritati. Filtrarea se mai poate
face si in momentui turnarii mierii in maturator, prin asezarea deasupra gurii acestuia a unei site
fine, confectionata de obicei din tesatura textila.
Cea mai buna metoda de a purifica (limpezi) mierea consta in lasarea ei cateva zile intrun vas numit maturator, pentru decantare, timp in care bulele mari de aer se ridica repede la
suprafata datorita dimensiunilor lor si diferentei de densitate dintre aer si miere.
Lichefierea mierii cristalizate prin incaizire este un proces foarte delicat. Ea trebuie
facuta numai in unitati specializate si sub control de laborator. Tratamentul termic efectuat in
conditii empirice conduce la degradarea mierii, la transformarea ei intr-o solutie banal a de
zahar. De aceea este de dorit ca apicultorii sa valorifice mierea cristalizata ca atare si sa renunte
la lichefierea ei prin incalzire.
Pentru a pastra mierea in stare lichida, este absolut necesar sa i se anihileze cristalele de
glucoza pe care inca le contine, lucru care se realizeaza prin pasteurizarea ei.
Pasteurizarea mierii se face cu scopul de a distruge toti germenii care pot provoca
fermentarea ei si de a topi cristalele initiale existente, care fara aceasta operatie ar determina
inceperea cristalizarii.
Pentru prelungirea duratei de mentinere a starii fluide s-au incercat diferite scheme de
pasteurizare la 70-75 C cu timp de contact foarte scurt (1-2 minute). Procedeul asigura
distrugerea completa a microcristalelor si nu afecteaza in mod semnificativ calitatea mierii, dar
prezinta si cateva dezavantaje:
-
pasteurizatoarele clasice cu placi nu pot fi folosite pentru miere, deci sunt necesare
cristalelor de zaharuri la nivelul articulatiilor sau al altor locuri ascunse, deci riscul
reinsamantarii mierii pasteurizate cu germeni de cristalizare;
-
inglobarea de aer (care este un factor favorizant pentru instalarea cristalizarii) decat daca aceste
operatii se efectueaza sub vid.
Ambalarea mierii se face imediat dupa terminarea proceselor tehnologice descrise mai
sus. Alegerea ambalajului depinde de doua categorii de motivatii: una se refera la cele de ordin
tehnic, cealalta la cele de ordin estetic. Astfel, deoarece mierea ataca majoritatea metalelor,
vasele pentru miere nu vor fi confectionate din fier sau alte metale decat cositorite sau emailate.
Vasele ideale pentru ambalarea mierii sunt cele confectionate din aluminiu, sticla sau alte
materiale transparente. Vasele opace, spre deosebire de cele transparente, ascund uneori
defectele de prezentare pe care o tehnica mai atenta le-ar fi putut evita. Vasele pentru ambalat
mierea trebuie sa fie perfect etane.
Pastrarea mierii se realizeaza in vrac sau imbuteliata.
Pastrarea in vrac se face in cazul mierii neprelucrate. Mierea cu un continut de apa sub
17,1 % se pastreaza foarte bine indiferent de continutul de levuri, cea cu continut de apa cuprins
intre 17,1 si 18 % numai in cazul in care levurile nu depasesc 1.000 ufc/g, cea care are intre 18,1
si 19 % apa se pastreaza doar daca numarul levurilor nu depaseste 10 ufc/g, iar intre 19,1 si 20
% numai In cazul in care acestea nu depasesc 1 ufc/g. Indiferent de continutul de levuri, mierea
cu o umiditate de peste 20 % fermenteaza si este supusa procesului de degradare.
Mierea se pastreaza in containere ce se inchid ermetic, confectionate din materiale
rezistente la umiditate. Introducerea de substante conservante in miere, desi impiedica procesele
Falsificarea mierii
Mierea de albine face parte din categoria produselor care sunt pretabile la o gama larga
de falsificari, prin substituiri sau adaosuri nepermise. Falsificarile pot fi totale sau partiale,
directe sau indirecte.
Falsificarea mierii este datorata in exclusivitate omului in dorinta de a comercializa o
cantitate mai mare de produs i de a obtine beneficii necuvenite.
Cele mai importante falsificari ale mierii sunt prezentate in tabelul urmator:
Tabelul nr. 4
Principalel cai de falsificare a mierii (dupa Marghita L.A., 1997)
Pentru
corectarea
gustului
Substante
indulcitoare
zaharate
Substance
indulcitoare
sintetice
Zaharina
Dulcine
Glicerina
Aniidon
Gelatina
Clei
Pentru corectarea
consistentei
Falsificari
directe
Pentru corectarea
culorii
Pentru impiedicarea
fermentarii
Pentru neutralizarea aciditatii
Substante pectice
Gume
Caramel
Culori de anilina
Acid salicilic
Acid benzoic
Bicarbonat de sodiu
Pentru corectarea
sedimentului
Pentru corectarea
Falsificari
echipamentului enzimatic
Miere de la albine hranite cu zaliar
Carbonat de sodiu
Hidroxid de sodiu
Polen de flori recoltat manual
Polen recoltat de albine
Diamalt sau alt extract din
culturi de
drojdii
indirecte
Mierea toxica
In situatii exceptional, se pot intalni cazuri cand mierea provenita din anumite surse de
nectar poate declansa la om tulburari trecatoare de tip toxic sau de alta natura.
Prin notiunea de miere naturala toxica se intelege acea miere a carei toxicitate pentru
om este data de prezenta unei substante naturale, recoltata in timpul culesului sau rezultata din
prelucrarea materiilor prime de catre albine. Aceasta definitie exclude toate pesticidele sau alte
produse utilizate pentru protejarea culturilor sau a coloniilor de albine, ca de altfel si poluantii
casnici ori industriali.
Relatari privind imbolnavirea oamenilor prin consumul mierii toxice exista inca din
Antichitate, datorita lui Xenofon, Diodor din Sicilia, Strabon, Pliniu eel Batran.
lntoxicatii cu miere, atat ale oamenilor, cat ale albinelor, au fost semnalate in Turcia,
S.U.A., India, Nepal, Noua Zeelanda, Japonia, Africa de Sud, Ungaria, Elvetia etc.
Plantele generatoare de miere toxica si simptomele intoxicatiei
Plantele
susceptibile de a fi la originea mierii toxice apartin unui numar redus de familii botanice, iar in
cadrul acestor familii doar unele specii sunt considerate ca fiind periculoase. Trebuie retinut ca
nu toate plantele cunoscute si mentionate drept toxice dau in mod obligatoriu si miere toxica,
deoarece principiile toxice se gasesc concentrate in nectar (cazul cel mai frecvent), in polen sau
in mana. In general, toxicitatea nectarului este cea care imprima si mierii acest caracter. Polenul
poate fi toxic, dar cum el nu constituie decat o parte infinitezimala a mierii, principiile toxice
continute de acesta se dilueaza. Cu toate acestea, natura polenului mierii poate oferi informatii
pretioase, mai ales in cazurile cand albinele viziteaza specii de plante al caror nectar este
cunoscut ca fiind toxic. In cazul manei, planta trebuie sa fie parazitata in mod obligatoriu pentru
ca albina sa poata ingera ulterior toxicul.
Un element foarte important in epidemiologia intoxicatiei este abundenta plantelor toxice
intr-o anumita zona, fapt care permite ca in final mierea rezultata sa contina o cantitate suficienta
de toxic susceptibila de a provoca imbolnavirea.
Principalele plante care contribuie la obtinerea mierii toxice sunt prezentate in cele ce
urmeaza:
- familia Ericaceae, plantele acestei familii sunt responsabile de majoritatea intoxicatiilor
date de miere. Speciile considerate periculoase apartin prioritar genurilor Rhododendron,
Azalea, Kalmia, Andromeda, Pieris i Triptaleia. Cele mai inseminate specii toxice sunt
Rhododendron ponticum (intalnita in bazinul Marii Negre i in Peninsula Iberica), R. luteum
(fosta Iugoslavie, Anatolia, Rusia, Caucaz, insula Lesbos), R. arboretum si R. campanidatum
(India, Nepal), R. thompsonii si R. maximum (America de Nord), Kalmia angustifolia si K
latifolia (America de Nord), Andromeda japonica si Triptaleia paniculate (Japonia).
Aceste plante contin in frunzele si florile lor grayanotoxine, a caror doza toxica pentru
om este de 3 mg/100 g miere. Simptomele apar in general foarte rapid (15-25 de minute de la
ingestie) si se traduc prin tulburari digestive (greata, vomismente, eventual diaree), cardiace
(bradicardie, dureri la nivelul pieptului, aritmie si hipotensiune severa) si nervoase (cefalee,
amortirea extremitatilor, furnicaturi, uneori convulsii si paralizie progresiva), la care se adauga
tulburari de vedere, o stare de slabiciune pronuntata si pierderea cunostintei.
-
raspandite in sudul Europei, Japonia, Noua Zeelanda, Noua Guinee si America de Sud. Plantele
contin in frunze si fructe substante toxice (tutina, hyenanchina, coryamirtina) cu actiune
convulsivanta, asemanatoare stricninei. Mierea provenita de la Coriaria arborea (din Noua
Zeelanda) contine pana la 6,7 mg tutina/100 g, un singur miligram din aceasta substanta fiind
suficient pentru a provoca la om greata, vomismente si incapacitate de lucru pentru 24 de ore.
Intoxicatia apare ca urmare a consumului unor cantitati foarte mici de miere (15-25 g) si se
manifesta predominant prin tulburari nervoase, hipersensibilitate si convulsii. Un element
interesant din punct de vedere epidemiologic este faptul ca floarea speciei amintite nu secreta
nectar si nici polenul acesteia nu este toxic, tutina fiind absorbita de catre o insecta parazita a
plantei (Scolyopa australis), care secreta o mana toxica.
-
tropicale si subtropicale. Una dintre aceste specii, Gelsemium serpervirens, intalnita in sudul
Statelor Unite si in Mexic, contine un alcaloid toxic al sistemului nervos (gelsemina), care
provoaca agitatie, cecitate, greata, oboseala si convulsii.
Mierea toxica in Romania
In tara noastra exista, atat in flora spontana, cat si in cea "importata", plante capabile de a
furniza miere toxica. Astfel, maselarita {Hyoscyamus niger) este comuna la noi, fiind intalnita la
marginea drumurilor, pe taluzuri si pe solurile nisipoase. Alte specii capabile de a furniza miere
toxica sunt laptele-cainelui {Euphorbia cyparisias), ciumafaia {Datura stramonium), cucuta,
Aconitum spp., leandrul {Nerium oleander), Senecio spp.
Din fericire, flora melifera din tara noastra este foarte bogat reprezentata, fapt ce reduce
semnificativ posibilitatea concentrarii unor principii toxice pana la niveluri care ar putea
declansa stari morbide, de aceea riscul unor intoxicatii grave cu miere este relative mic.
Dimpotriva, mierea din alte tari (Turcia, India, Noua Zeelanda, Nepal .a.), a caror flora este
bogata in specii periculoase, nu ofera aceleasi garantii.
CAPITOLUL 3
MICROBIOLOGIA MIERII
3 .1. Generalitati
2.8. Capacitatea
2.9.
antimicrobiana a mierii
Apa
Nectarul floral
Polenul si pastura
Albinele
Microbiologia puietului si adultilor de albine lucratoare si de
matci adulte
-
8. Surse secundare
2.10.
Bacterii
-
aerobi
3.4.2.1.1.2. Germeni
3.4.2.1.1.3. Alte
-
bacterii
Alte microorganisme
Botulismul infantil
Concluzii
3.1. Generalitati
Mierea si celelalte produse apicole au imaginea de a fi produse naturale, sanatoase si
curate. Totusi, in zilele noastre produsele apicole sunt obtinute intr-un mediu poluat din diverse
surse, fiind de cea mai mare importanta pentru apicultori de a localiza si exclude aceste surse,
contaminarea (inclusiv cea de natura microbiana) putandu-se produce ca urmare a practicilor
apicole sau din mediul inconjurator.
Mierea reprezinta o materie complexa pentru investigatii microbiologice. Continutul ridicat de
zaharuri, pH-ul scazut si existenta diferitelor oxidaze inhiba cresterea microorganismelor, dar in
acelasi timp fac mai dificila detectarea acestora. In plus, vascozitatea ridicata complica utilizarea
probelor de miere ca material de analiza. Pentru a depasi aceste dificultati, au fost dezvoltate mai
multe metode, incluzand dilutia, centrifugarea, dializa si filtrarea prin membrane.
Datorita proprietatilor intrinseci ale mierii, care afecteaza cresterea si supravietuirea
microorgansimelor prin actiunea bacteriostatice sau bactericide, este de asteptat ca mierea sa
contina un numdr mic si o varietate limitata de microorganisme,fiind lipsita de forme
vegetative. Cele care supravietuiesc rezista la solutii concentrate de zaharuri, la aciditate si la
actiunea altor factori antimicrobieni prezenti in miere. Aceste microorganisme includ bacterii
sporogene, levuri osmofile si mucegaiuri.
Printre cei mai frecventi contaminanti microbieni din miere sunt sporii de Bacillus si
Clostridium, fungii din genurile Alternaria, Aspergillus, Penicillium, Mucorsi Saccharomyces,
ca si agentii patogeni ai albinelor (cum ar Bettsya alvei, Paenibacillus larvae, Paenibacillus
alvei agentii micozelor albinelor, Ascosphaera apis si Ascosphaera major)
Levurile si
mucegaiurile sunt responsabile de fermentarea mierii cu un continut de apa ridicat. Mai mult,
existenta tulpinilor de B. alvei, A. apis si A. major poate constitui un indicativ al practicilor
necorespunzatoare de ingrijire a stupilor. Prezenta clostridiilor sulfito-reducatoare in miere
fiirnizeaza dovezi ale contaminarii sau poluarii. Sporii de C. botulinum se pot detecta in miere,
de obicei la niveluri reduse, prezenta lor fiind periculoasa in special pentru sugari si copiii mici.
Bacteriile coliforme si levurile sunt indicatori ai calitatii sanitare sau comerciale a mierii.
Totusi, unele dintre microorganismele prezente in miere (cum sunt cele din genul
Bacillus) produc substante care asigura protectia albinelor impotriva germenilor patogeni, cum
ar fi ciuperca Ascosphaera apis, care cauzeaza boala puietului varos.
Prezenta microorganismelor in miere se poate datora mai multor cauze:
-
sunt deja prezente in materiile prime utilizate de catre albine (nectarul mana);
rezulta din activitatea biologica a albinelor in timpul elaborarii si depozitarii
Posibiiitatile de contaminare a mierii din cauza interventiei umane se pot explica prin:
- folosirea de localuri necorespunzatoare pentru obtinerea mierii, cu conditii
igienice nesatisfacatoare;
- utilizarea de apa care nu este potabila pentru spalarea incaperilor si
echipamentului;
-
i materialelor necorespunzatoare;
- lipsa de ingrijire pentru prevenirea expunerii mierii si materialelor utilizate,
inainte si dupa extractie, la praf si la contactul cu insecte (muste, viespi, gandaci, furnici) sau cu
dejectiile animalelor de curte (gaini, curci, gaste), comensale (soareci, sobolani) sau de casa
(caini si pisici), al caror acces in salile de extractie a mierii nu este impiedicat;
microbiana, dar atunci cand este utilizata ca substrat de contact cu rana, diluarea cu exsudatele
din rana reduce aceasta osmolaritate la un nivel care intrerupe controlarea infectiei. Cu toate
acestea, s-a demostrat ca ranile
infectate cu microorganisme (spre exemplu Staphylococcus aureus) sunt rapid sterilizate de catre
miere.
Acest remediu stravechi pentru tratamentul ranilor infectate a fost "redescoperit " de
curand de catre profesia medicala, mai ales atunci cand metodele conventionale de tratament nu
au fost eficiente." in anii '30 ai secolului al XX-lea au aparut numeroase articole medicale
referitoare la actiunea dezinfectanta a mierii aplicata pe plagi. O data cu introducerea
antibioticelor insa, atentia oamenilor obisnuiti si a medicilor a fost deviata catre acestea. Studiile
anilor '30-'50 ai secolului trecut, care au confirmat actiunile cicatrizante ale mierii, au condus la
elaborarea de procedee terapeutice aplicabile si astazi. Mult mai recent, in ultimele decade,
interesul cu privire la calitatile antimicrobiene si cicatrizante ale mierii a revenit, motivat de
confruntarea tot mai frecventa cu linii microbiene polirezistente fata de antibiotice, cu
numeroasele efecte adverse ale utilizarii antibioticelor si cu o orientare din ce in ce mai
accentuata catre utilizarea produselor naturale in medicina.
Proprietatile antimicrobiene ale mierii de albine se reduc sau dispar in produsele din
miere, forma sub care aceasta se valorifica de foarte multe ori. Produsele din miere (constituite
in principal din miere, dar si din unele ingredinte adaugate) nu au aceleasi proprietati
antimicrobiene ca mierea ca atare. Uneori mierea se foloseste ca ingredient principal in
prepararea altor produse care nu se trateaza termic (salamuri fermentate, diverse siropuri s.a.)
sau in unele produse de cofetarie-patiserie. In aceste cazuri, proprietatile antimicrobiene ale
mierii se reduc sau dispar.
In literatura de specialitate exista numeroase raportari privind investigatiile care au stabilit
existenta si natura factorilor antimicrobieni din miere, o revizuire cuprinzatoare fiind facuta de
Peter Molan (1992).
Capacitatea mierii de a inhiba sau de a distruge microorganismele se datoreaza
urmatorilor factori:
- continutul ridicat de zaharuri (peste 95 % din substanta uscata) si foarte redus in apa
libera (deci activitatea apei redusa, aw= 0,56-0,62), ca si umiditatea mica (14-21 %), ce mentin o
Mierea este destul de acida, pH-ul fiind in general cuprins intre 3,2 si 4,5, suficient de
scazut pentru a inhiba activitatea multor microorganisme patogene, deoarece pH-ul optim pentru
cresterea lor variaza intre 7,2 si 7,4. Valorile minime de pH pentru dezvoltarea unor specii
bacteriene obisnuite care cauzeaza infectarea ranilor sunt: Escherichia coli - 4,3; Salmonella
spp. - 4,0; Pseudomonas aeruginosa - 4,4; Streptococcus pyogenes - 4,5. Astfel, in mierea
nediluata, aciditatea este un factor antibacterian semnificativ. Dar, in cazul in care mierea este
diluata, in special prin fluidele corporale, care sunt bine tamponate, pH-ul nu va fi atat de scazut
i aciditatea mierii nu poate fi un inhibitor eficient al multor specii de bacterii.
Acizii organici nedisociati prezinta i ei activitate antimicrobiana deoarece, fiind foarte
solubili in membranele celulare, pot provoca alterari in permeabilitatea celulara si in fosforilarea
oxidativa la nivelul transportului de electroni.
Factorii fitochimici
Dovada pentru existenta altor factori antibacterieni este data in principal de faptul ca
sistemul care genereaza peroxidul nu explica in intregime activitatea antibacteriana observata,
deoarece au fost raportate izolari de substante antibacteriene din miere diferite de peroxidul de
hidrogen. In plus, s-a constatat ca incalzirea mierii, care inactiveaza glucozoxidaza, determina
scaderea activitatii impotriva unor specii microbiene, in timp ce impotriva altora se pastreaza
aceasta activitate. Desi stabilitatea enzimei variaza in diferitele sorturi de miere, au existat
raportari despre miere la care stabilitatea a fost mult in exces fata de aceasta variatie, ceea ce
arata ca trebuie sa fie implicat un factor antibacterian suplimentar. Dovada cea mai directa
pentru existenta factorilor antibacterieni neperoxidici in miere este data de raportarile privind
persistenta activitatii antimicrobiene in mierea tratata cu catalaza pentru a elimina activitatea
peroxidului de hidrogen, ca si in mierea tratata prin caldura pentru a inactiva glucozoxidaza. Au
fost identificate, de catre diversi cercetatori, mai multe substante chimice cu activitate
antibacteriana:
pinocembrina,
terpene,
benzilalcooli,
lizozim,
acid
3,5-dimetoxi-4-
de sursa florala si de modul de procesarea a mierii. Prezenta ionilor metalici, a acidului ascorbic
si a catalazei din nectar poate distruge peroxidul de hidrogen.De asemenea, caldura si lumina pot
distrage glucozoxidaza.
Pentru a asigura eficacitatea unui anumit sort de miere in ceea ce priveste folosirea ei ca
agent antimicrobian, trebuie sa-i fie determinate activitatea, iar conditiile de pastrare trebuie
monitorizate in vederea limitarii expunerii la lumina si caldura.
Procedeul clasic de determinare a activitatii antimicrobiene a unei mieri este evaluarea
"numarului de inhibina", definit ca gradul de dilutie (realizat treptat, prin metoda dilutiilor
succesive) la care mierea mai are inca putere antimicrobiana. Activitatea antimicrobiana este
cuantificata de concentratia inhibitorie minima (MIC - minimum inhibitory concentration), care
reprezinta valoarea minima a concentratiei necesare pentru completa inhibare a cresterii
microbiene.
Studiile pe un foarte mare numar de probe de miere arata un domeniu larg al activitatii
antimicrobiene, dei in cazul multora se constata doar un nivel scazut al acestei activitati.
Numeroase cercetari au documentat variabilitatea tipurilor de miere in ceea ce priveste
activitatea lor antimicrobiana.
Cu toate ca datele existente sunt insuficiente pentru a identifica cu claritate activitatea
antibacteriana a tuturor tipurilor de miere, exista dovezi ale activitatii antimicrobiene ridicate a
unor sorturi de miere, cum ar fi mierea de mana din padurite de conifere din regiunile muntoase
ale Europei Centrale si mierea de manuka {Leptospermwn spp.) d i n Nona Zeelanda.
Dintre studiile efectuate referitoare la activitatea antimicrobiana a mierii, amintim doar
cateva:
-
multor tipuri de miere provenite din Noua Zeelanda. Rezultatele obtinute in urma utilizarii a 345
de probe de miere monoflorala nepasteurizata (provemte de la 26 de surse florale) au aratat ca
activitatea antibacteriana a diferitelor sortimente de miere variaza in functie de sursa florala de
provenienta. Mierea provenita de la florile de manuka (arbore de ceai - Leptospermum
scoparium) si de firuta (limba-boului - Anchusa officinalis) a avut activitate antibacteriana
datorata unui compus nonperoxidic;
-
eficace in inhibarea multiplicarii bacteriilor care infecteaza ranile. Totui, ordinea eficacitatii in
cazul a 7 specii bacteriene a depins de natura activitatii antibacteriene a mierii;
-
studiind mierea de manuka, Molan (1999) a aratat ca aceasta a avut cea mai puternica
cercetatorii egipteni au evaluat mierea bmta, nematurata, din diferite regiuni, pentru
efectele ei antimicrobiene. Desi toate probele au avut efecte similare asupra bacteriilor gramnegative si gram-pozitive in concentratii mici, de 6,25 %, ele nu au fost eficace impotriva levurii
Candida albicans si a mucegaiului Aspergillus niger. De asemenea, au fost evaluate pentru
activitatea lor antimicrobiana fractioni extrase din miere. Din 4 fractiuni, doar extractul de
etilacetat din miere a fost eficient impotriva bacteriilor, levurilor si mucegaiurilor;
-
de albine fara ac pe 7 tulpini diferite de bacterii (S. aureus, E. coli, Klebsiella pneumoniae, P.
aeruginosa, Bacillus subtilis, Bacillus stearothermophilus var.calidolactis o alta tulpina de
Bacillus subtilis) si au ajuns la concluzia ca toate tulpinile bacteriene au fost afectate de
diferitele tipuri de miere examinate., gradul de inhibitie variind in functie de tipul de miere si de
tulpina bacteriana; in functie de originea florala, mierea cea mai activa contra bacteriilor a fost
cea in care a predominat polenul din genurile Mimosa si Eucalyptus. De asemenea, s-a constatat
ca efectul bacteriostatic depaseste constant efectul bactericid;
- Taormina et a'l. (2001) au comparat mierea din 6 surse florale e in ceea ce priveste
activitatea inhibitoare asupra tulpinilor de Escherichia coli OI57:H7, Salmonella typhimurium,
Shigella sonnei, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus i Bacillus cereus si au
constatat ca, in general, mierea mai inchisa la culoare a avut o activitate inhibitoare si o putere
antioxidanta mai mari decat cea deschisa;
- in Spania, Gallardo-Chacon et al. (2008) au evaluat 31 de probe de miere pentru
abilitatea lor de a inhiba dezvoltarea a 10 bacterii patogene: Escherichia coli 0157:H7,
Salmonella enterica ser. Typhimurium, Shigella sonnei, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus
cereus, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus 9144, MRS A (Methicilin Resistant
Staphylococcus aureus), Streptococcus mutans i Enterococcus faecalis. Toate bacteriile gramnegative, cu exceptia P. aeruginosa, au fost sensibile la toate probele de miere, ca i la mierea
artificiala folosita ca etalon la o concentrate de 25 %.
De asemenea, fiecare germen gram-pozitiv a aratat grade diferite de sensibilitate la
tipurile de miere;
-
un
studiu
recent
documenteaza
sensibilitatea
tulpinilor
multirezistente
de
ulcerul gastric (al carui principal agent cauzal este Helicobacter pylori): este sensibil
diareile cu etiologie microbiana. Utilizarea mierii in aceste afectiuni este intalnita inca
din Roma Antica. S-a constatat ca, fata de bacteriile care pot afecta tubul digestiv, mierea
poliflora (cu putere mare peroxidica) are actiune bacteriostatica la o concentratie de 4-8% (v/v)
si bactericide la 5-10% (v/v)
-
tratamentul local al plagilor din cele mai vechi timpuri. intr-o varietate enorma de leziuni,
mierea a dat de fiecare data rezultate excelente. Factorul principal este peroxidul generat in
miere, el eliberandu-se treptat in mediul umed al plagilor, avand o actiune antiseptica, stimuland
proliferarea celulelor din marginile sanatoase (efect cicatrizant). Peroxidul favorizeaza
neoformatia de capilare (un prim pas al regenerarii tisulare); de asemenea, este utilizat ca
mesager intre diferite tipuri de celule active in raspunsul imun la infectii si activeaza proteazele
in tesuturile implicate in cicatrizare.
Nectarul floral
Bacterii. Examinand nectarul provenit de la florile de citrice, bumbac si plante din
desertul Arizonei, Gilliam et al. (1983) au gasit putine bacterii la citrice (bacili gram- negativi) si
la plantele de desert (bacili gram-negativi, bacili gram-pozitivi si coci gram- pozitivi), pe cand la
bumbac nu au gasit microorganisme; aceste rezultate au fost explicate si prin existenta unor
substante antibacteriene in nectar.
Levuri. Este cunoscuta asocierea dintre anumite specii de levuri cu florile si insectele,
deoarece unele specii de insecte realizeaza polenizarea si in acelasi timp transmit levurile catre
nectarul florilor in timpul vizitelor lor la florile entomofile. Flora levuliforma a glandelor
nectarifere ale florilor include o larga diversitate de specii de levuri, acestea variind in functie de
regiunea geografica si de specia de plante. Este posibil ca inocularea incrucisata a nectarului de
catre insecte sa joace un rol important in raspandirea levurilor la diferite specii de plante, la fel
ca si, poate, comportarea nectarului diferitelor plante ca un mediu nutritiv natural.
Examinand 324 de probe de glande nectarifere de la flori apartinand la 9 specii diferite,
Sandhu si Waraich (1985) au gasit levuri la 232 (67,84 %) dintre acestea. Speciile de levuri au
fost in numar de 36 si au apartinut la 12 genuri (Candida, Saccharomyces, Oosporidium,
Rhodotorula, Torulopsis, Pichia, Hansenida, Debaryomyces, Endomycopsis, Trichosporon,
Geotrichum si Winged). Cei mai frecvent izolata specie a fost Candida blankii (la 4,68 % din
probe), urmata de C. cacaoi si Saccharomyces cerevisiae. Genul Candida a fost gasit cel mai
des, cu nu mai putin de 16 specii, in timp ce genul Hansenida a fost reprezentat de 4 specii,
Debaryomyces si Rhodotorula de cate 3 specii fiecare, Pichia si Torulopsis de cate 2 specii, iar
celelalte genuri au fost reprezentate de catre o singura specie. Glandele nectarifere de la rucola
(Eruca sativa) au furnizat eel mai mare numar de culturi pozitive (92,11 %), urmate de rapita
salbatica (Brassica campestris), cu 81,57 %. Cu toate acestea, eel mai mare numar de specii de
levuri a fost obtinut de la lamai (Citrus medico) - 12 specii, urmat de ridiche (Raphanus sativus)
- 11 specii
Polenul si pastura
In ceea ce priveste prezenta microorganismelor in miere, polenul reprezinta o sursa
majora, atat eel recoltat de albine direct din flori {polenul floral), cat si cel depozitat in corbicule
(polenul corbicular) sau direct in faguri {polenul pre-digeraf = pastura). Se stie ca
transformarea polenului in pastura si modificarile biochimice care caracterizeaza acest proces
sunt rezultatul actiunii microbiene, in principal al fermentatiei lactice cauzate de bacterii si
levuri (Lactobacillus, Pseudomonas i Saccharomyces). Se pare ca levurile, chiar daca initial
sunt prezente in numar mic in polen, cresc dupa fermentarea lui in faguri, rezistand aici mai mult
toate ca C. albidus si R. glutinis au mai fost gasite si in pastura. Prin urmare, modificarile
biochimice care se petrec in polenul depozitat in stup limiteaza levurile care pot supravietui. De
asemenea, numarui de izolate i de specii a scazut in timp.
Prin urmare, putem spune ca polenul floral a continut cele mai multe specii de levuri
(diversitatea acestei flore diminuandu-se dupa colectarea polenului de catre albine si
depozitarea lui in stupi) si ca proprietatile fizice si chimice ale polenului si pasturii influenteaza
compozitia florei de levuri.
Mucegaiuri
Prezenta mucegaiurilor se explica prin raspandirea lor larga in mediul inconjurator, fiind
gasite in mod obisnuit in sol si pe plantele care servesc drept suirsa de hrana pentru
albine.Arizan et al. (1967) au izolat Absidia ramnosa, Aspergillus spp. (A. flavus, A. fumigatus,
A. niger, A. terreus, A. versicolor), Mucor mucedo, Penicillium clavigerum, P. purpurogenum,
Rhizopus nigricans si Trichothecium roseum din polenul de porumb indian colectat mecanic. In
1971, Egorova a izolat A. flaws, A, versicolor, Mucor alboalter, Penicillium granulatum,
Penicillium solitum si Sporotrichum olivecum. Sainger et al. (1978) a raportat ca Altemaria
alternata a fost eel mai frecvent izolat din polenul de la 3 plante anuale ierbacee. Alte
mucegaiuri izolate din polen au fost Aspergillus luchuensis, A. nidukms, A. sulphureus,
Cladosporium oxysporum, Epicoccum purpurascens, Fuscmum oxysporum, Monilia fnictigena,
Monilia sitophita i Trichoderma viridae.
Studiind prezenta mucegaiurilor in polenul floral, in cel corbicular si In pastura
provenite de la migdal, Gilliam et al. (1989) au izolat fungi apartinand la 16 genuri: Altemaria
(A. tennis), Arthrinium (Arth. phaeospermum), Aspergillus (A. niger, A. versicolor, A. flavus, A.
amstelodami, A. ustus), Aureobasidium (Aur. pullulcins), Chaetomium (C. elatum),
Chaetomidium
(C.
pilosum),
Cladosporium
(C.
cladosporioides,
C.
herbarum,
C.
si
Penicillium crustosum. Mucegaiurile izolate din pastura, dar nu si din polenul floral sau
corbicular, au fost Aspergillus amstelodami, A. flavus si Paecilomyces varioti. Astfel, fiecare
proba din fiecare tip de polen a diferit in ceea ce priveste microflora de mucegaiuri si speciile
dominante: in polenul floral, speciile dominante au fost Mucor spp.; In polenul corbicular, P.
corylophilum si P. crustosum; in pastura de o saptamana, P. cyclopium si P. corylophilum; in
pastura de 3 saptamani, nu a existat o specie clar predominanta; In pastura de 6 saptamani, A.
niger. Mucegaiurile care nu au fost prezente in polenul floral dar au fost identificate in polenul
corbicular in pastuira au fost introduse de catre albine in timpul colectarii i depozitarii. Cele
mai evidente exemple sunt Aur. pullulans, P. corylophilum, P. crustosum di Rhizopus nigricans,
in schimb, Mucor spp., mucegaiul dominant in polenul floral, nu a fost gasit in eel corbicular di
in pastura.
Polenul floral a furnizat eel mai mare numar de izolate, dar cel mai mic numar de
specii. In contrast, polenul depozitat In faguri timp de 3 saptamani a dat cele mai putine izolate,
dar eel mai mare numar de specii. In general, numarul izolatelor a scazut in polen dupa
colectarea si depozitarea lui in faguri de catre albine.
Asadar, ca si in cazul levuri lor si germenilor din genul Bacillus, flora de mucegaiuri a
polenului corbicular si a pasturii este rezultatul inoculdrilor microbiene de catre albine si al
transformarilor chimice din polen in timpul regurgitarilor, prin amestecarea cu miere secretii
glandulare, ca al fermentdrii microbiene; toate acestea permit unor specii sa supravietuiasca, iar
altora nu.
Albinele
Indiferent de modul cum ajung microorganismele in/pe corpul lor, albinele constituie
sursa principald a germenilor prezenti in miere.
Digestia hranei se realizeaza datorita prezentei secretiilor glandulare, enzimelor si
bacteriilor. O asociere echilibrata a speciilor microbiene cu nunneroase interactiuni simbiotice si
competitive, cunoscute ca microflora gastrointestinala indigena, constituie parte integranta a
oricarui organism sanatos. Microflora simbiotica a tubului digestiv al albinelor melifere mature
Noile albine lucratoare care ies din celule sunt inoculate cu microorganisme atunci cand
incep sa se hraneasca. Inocularea microbiana si colonizarea tubului digestiv are loc in 4 zile
dupa eclozionare, ca rezultat al consumului de polen si prin schimburile de hrana cu albinele mai
in varsta din colonie.
Microflora intestinala a lucratoarelor mature variaza in functie de varsta, sezon si aria
geografica, cu toate ca unele specii microbine se intalnesc regulat. Dominante sunt bacteriile
pleomorfe gram-variabile, Bacillus spp., enterobacteriaceele, mucegaiurile si levurile.
Suprafata corpului atat la albinele doici, cat si la albinele adulte culegatoare este relativ
libera de microorganisme, lucru care se datoreaza in mare parte comportamentului de curatire. In
general, la mai putin de 20 % din albine s-au gasit microorganisme pe suprafata corpului. Fungii
(mucegaiuri si levuri) au fost izolate mai frecvent decat bacteriile. De asemenea, rezultate
pozitive s-au gasit mai mult la culegatoare decat la doici, datorita posibilitatilor de contaminare
din afara stupului.
La albinele melifere, microflora normala este concentrata in special in portiunea
posterioara a tubului digestiv, si anume in intestinul subtire si in intestinul gros, cu capsula
rectala.
Bacterii
Tysset si Durand (1968) au raportat ca populatia redusa de germeni sporogeni in
continutul intestinal al aibinelor indica faptul ca acesti bacili se gasesc aici in tranzit intrucat
bacteriile sporogene sunt prezente in sol si sunt gasite doar accidental si in numar limitat pe
organele florale ale plantelor. Astfel, ei au postulat ca albinele au sanse reduse de a fi
contaminate masiv. Mai mult, ei cred ca presiunea osmotica ridicata si pH-ul relativ scazut ale
continutului intestinal al albinelor limiteaza de asemenea populatia de bacilli.
Bacteriile pleomorfe gram-variabile
Sunt cele mai comune microorganisme intestinale la lucratoarele adulte si la matca , dei
au fost izolate si de la larve si excrementele acestora , din polenul floral si corbicular, din pastura
si chiar din cateva probe de miere recoltata direct din faguri din excrementele larvelor, din
polenul depozitat si din proviziile larvelor . Aceste bacterii se prezinta atat sub forma de bacili,
cat si sub forma cocoida si au o variabilitate foarte mare de reactie la coloratia Gram. Unele
tulpini si/sau specii au fost identificate ca Bacterium sau Achromobacter eurydice sau apartinand
genurilor Lactobacillus, Corynebacterium si Bifidobacterium.
Enterobacteriacee
Bacilii gram-negativi apartinand enterobacteriaceelor intalniti in mod obisnuit in
intestinul albinelor sunt din genurile Escherichia (E. coli\ Enterobacter (E. cloacae, E.
aerogenes), Klebsiella (K. pneumoniae), Proteus, Hafnia, Erwinia si Shigella .
Cei mai mare numar de specii si cea mai mare carcatura microbiana (31.524 ufc) au fost
gasite in intestinele albinelor intre lunile august si noiembrie. Bacili gram- negativi au fost
rareori asociati cu puietul, dar au fost gasiti in intestinele matciior- Bacillus spp.
Bacteriile de forma bacilara, formatoare de spori, apartinand genului Bacillus sunt in
mod obisnuit asociate cu albinele. Femelele pot inocula hrana cu specii de Bacillus, care au un
rol in predigerarea, transformarea si/sau conservarea hranei depozitate, cat si in controlul
microorganismelor concurente sau al celor alterative. Aceasta asociere este foarte veche, asa
cum rezulta din cercetarile privind albinele fara ac conservate in chihlimbar timp de 25-40 de
milioane de ani.
Intr-un studiu referitor la speciile de Bacillus din intestinele albinelor, efectuat pe 388 de
lucratoare adulte, au fost identificate 110 izolate apartinand la 13 specii, predominante fiind B.
megaterium, B. subtilis, B. pumilus, B. licheniformis, B. circulans si Paenibacillus alvei.
Albinele din coloniile care zboara liber contineau Bacillus spp. in medie 190 ufc/intestin
primavara (martie-aprilie) si 9.638 ufc toamna (septembrie).
Bacillus spp. au fost microorganismele predominante in excrementele larvelor de
lucratoare, cele mai frecvente fiind B. subtilis i B. megaterium; in intestinele matcilor cele mai
intalnite au fost B. cereus si B. megaterium .
Inglis et al. (1998) au gasit in tractul alimentar al albinelor urmatoarele specii de
bacterii: Bacillus licheniformis, B. brevis, B. mycoides, Paenibacillus macerans si P.polymyxa.
Caracterizand flora bacteriana heterotrofica cultivabila a stupilor de albine, Piccini et al.
(2004) au evaluat prezenta a si numarul bacteriilor in fagurii cu puiet si pe podeaua stupilor in
diferite perioade ale anului. Numarul bacteriilor gasite in fagurii cu puiet a fost considerabil mai
scazut decat acela de pe podeaua stupilor . De asemenea, s-a observat o crestere numerica a
bacteriilor din faguri in perioada de iarna catre vara, reflectand probabil activitatea coloniei in
timpul acestor sezoane. In probele recoltate de pe podeaua stupilor nu au fost diferente in functie
de sezon.
au
izolat
din
intestinele
aibinelor
bacterii
apartinand
genurilor
De asemenea, prevalenta lor a fost mai mare primavara (au fost gasite in medie 44 ufc/albina
toamna si 3.528 ufc/albina primavara). Levurile au fost rare in fagurii sanatosi si doar la una din
110 matci s-au gasit levuri. Speciile cel mai frecvent izolate de catre Gilliam si Prest au fost
Torulopsis magnoliae, T. glabrata, Candida parapsilosis si Hansenida anomala . In schimb,
Sandhu si Waraich (1985), cercetand prezenta levurilor in gusile albinelor (328 de probe) si
legatura acestora cu cele din nectar, au gasit 30 de specii de levuri din 13 genuri (Candida,
Debaryomyces, Endomycopsis, Hansenula, Pichia, Rhodotorula, Torulopsis, Saccharomyces,
Wingea, Brettanomyces, Cryptococcus, Dekkera si Kluveromyces), primele 9 genuri fiind
comune gusilor albinelor si nectarului floral. Cele mai multe (o treime) dintre speciile
identificate apartineau genului Candida
In ceea ce priveste incarcatura microbiana a tractului intestinal, in tabelul nr. 5 este
prezentat numarul de microorganisme in functie de sezon.
Tabelul nr. 5
Numarul de microorganisme (log ufc/g) din portiunea mijlocie a
tractului digestiv rect la albine, in perioadele de iarna si de vara (Dupa Rada et a/.,1997;
Kacaniova et/., 2004)
Grupul de microorganism
Portiunea mijlocie a
Rect
Anaerobi totali
tractului digestiv
Iarna
Vara
Iarna
8.62 0.42 8.17 0.63 9.62
Vara
9.49 1.05
0.43
8.01 0.55 7.71 0.70 9.60
9.40 1.37
pozitivi
Aerobi totali
0.51
5.00
4.42 1,40
Lactobacili
1.04
7.24 0.67 7.01
1,36
8.66
8.37 1.99
Colifonni
0.63
2.50 2.63 3.57
0.73
3.77
3.95 1.70
Stafilococi
1.14
3.22 0.54 3.81
1.40
3.48
3,75 1,28
Bacillus spp.
1.03
2.44 0.52 3,72
0.77
3.59
3,45 0,60
LeMin
0,69
5.48 1.41 3.92
0.87
3.80
3.41 0,90
Pseudomonas spp.
1.03
1.02
2.86 0.21 1.54 0.39 4.19
2.05 0.88
1.02
Cele mai multe cercetari privind sursele primare ale prezentei microorganismelor in
miere au fost facute in scopul intelegerii ecologiei microbiene a albinei. In tabelul nr. 6 este
redata, pe genuri, o lista a microorganismelor care sunt asociate cu albinele.
Microflora aibinelor din coloniile salbatice
Albinele din coloniile salbatice din Arizona Centrala, localizate in grote stancoase, in
gauri sau agatate in copaci, contineau in intestine aceleasi tipuri de microorganisme ca si
albinele crescute in stupi de lemn din sudul Arizonei, lucru care demonstreaza constanta
microflorei la albine, chiar daca sunt salbatice sau sunt crescute in stupine, pe zone separate
de cateva sute de km .
Microorganisme asociate cu albinele non-Avis moderne si stravechi
Pentru a extinde cunostintele referitoare la asocierile dintre microbi si albine, au fost
izolate si identificate microorganisme din hrana depozitata de la mai mult de 25 de specii de
albine eusociale fara ac si solitare din zone tropicale si temperate . Rezultatele au aratat
prezenta Bacillus spp., in mod exclusiv sau predominant, sau nici un microb in hrana
depozitata, la aproape toate albinele examinate.
Tabelul nr. 6
Aureobasidium
C \mdida
Cryptococcus
Debaiyomyces
Ertdomycopsis
Hansenula
Issatchenkia
Kloeckera
Kodamaen
Pichia
Pseudozytua
Rhodotorula
Sacciiaronn ces
Starmerella
Torulopsis
Z\ gosaccharoui)
ces
Wingea
In tabel nu sunt incluse microorganismele care sunt patogeni specifici ai albinelor, ele
nefacand obiectul lucrarii de fata.
Proba ca relatia dintre albine si Bacillus spp. este straveche a venit din raportul lui
Cano et al. referitor la izolarea, amplificarea si determinarea secventelor la segmentele de ADN
de la Bacillus spp. provenite din tesutul abdominal de la 4 specimene de Proplebeia dominicana,
o specie disparuta de albine fara ac, descoperite in chihlimbar vechi de 25-40 milioane de ani,
provenit din Republica Dominicana. Secventele de ADN erau Inrudite una cu alta si cu acelea de
Postgate si Priest, autorii au fost constienti de riscul contaminarii, fiind astfel foarte exigenti cu
metodele lor pentru a evita contaminarea si a deraonstra ca tulpina de Bacillus sphaericus a
provenit din interiorul albinei. O problema si mai importanta poate constitui identificarea
proprietatilor fizice si chimice ale chihlimbarului care ii permit acestuia conservarea ADN-ului
si bacteriilor dincolo de limitele teoretice. Cano R. J. enumera deshidratarea, osmolaritatea
ridicata, mediile libere de oxigen, protejarea de radiatii ultraviolete si temperaturile ambientale
stabile ca factori ce pot face chihlimbarul o sursa potrivita de ADN preistoric (si, se presupune,
de spori bacterieni stravechi). Ultimii doi factori decurg din situarea sub pamant a exploatarilor
de chihlimbar din Republica Dominicana. Deshidratarea rapida si anoxia ar putea stopa
reproducerea in situtia Bacillus sphaericus. In acest caz, sporii ar putea fi tot atat de vechi ca si
albinele, scenariul cel mai probabil fiind acela ca specia de bacterii ingropata in interiorul
albinelor a fost mentinuta de catre nutrienti organici externi chiar din chihlimbar insusi sau
dintr-o sursa exterioara, care au patruns prin fisurile sub-microscopice sau prin defectele de
structura ale chihlimbarului.
Surse secundare
Datele referitoare la sursele secundare de contaminare a mierii cu microorganisme sunt
relativ putine in literatura stiintifica. Analiza microbiologica cuprinzatoare a mierii arata ca este
mult mai probabil sa se produca o contaminare mierobiama in timpul sau dupa extragerea mierii
decat in stup.
Sursele secundare de contaminare microbiana a mierii sunt adesea aceleai ca si la alte
produse alimentare. Aceste surse includ oamenii, echipamentul, recipientele, vantul, prafol,
insectele, animal ele si apa. Ele atentioneaza ca microbii pot supravietui mai mult decat se crede
de obicei si ca regulile de buna practica sunt importante pentru controlul microbilor in toate
alimentele, inclusiv miere.
Levurile au fost gasite in echipamentul folosit la extragere mierii; acest echipament
contaminat poate raspandi levurile si in mierea necontaminata .
Caile posibile de transmitere la mierea extrasa includ aerul (in incaperea unde se extrage mierea
sau in timpul cand aceasta este ambalata), lucratorii care manipuleaza alimentele (de la infective
pielii, stranut ori contaminarea fecala deschisa), contaminarea incruciata (in mare masura de la
animate sau produsele acestora) si echipamentul (incluzand aici si resturile de mancare si apa).
Podelele, peretii si plafoanele pot de asemenea sa fie rezervoare de microbi care ajung in
produsele alimeetare. De asemenea, acarienii care infesteaza coloniile de albine pot transmite
fungi, bacterii, virusuri.
Mii de ufc/g de microbi sub forma vegetativa (care se considera ca nu exista si nu se pot
dezvolta in miere) ar putea indica o contaminare recenta a mierii dintr-o sursa secundara.
Contaminarea fecala poate proveni din surse indirect cum ar fi mainile contaminate ale
prelucratorilor si manipulatorilor, ca si din apa contaminata. Microorganismele de contaminare
fecala, ca si alte bacterii nesporogene mor la scurt timp dupa ce ajung in miere.
Sursele secundare de contaminare sunt controlate prin standardele de sanitatie si prin
regulile de buna practica.
Contaminarea se face pe cale bucala, prin consumul de hrana infectata, iar raspandirea
bolii, prin albinele hoate, trantori, precum prin schimb de faguri infectati sau folosirea
inventarului apicol nedezinfectat.
-
Puietul pietrificat (Aspergiloza): este o boala cauzata de mai multe ciuperci din
genul Aspergillus, eel mai frecvent fiind implicat A.flavus, apoi A. niger, A. fumigatus s.a.
Miceliul acestor miceti, de culoare verzuie, respectiv negricioasa, produce spori a caror
rezistenta la actiunea factorilor fizici sau chimici este destul de scazuta; astfel, sunt distrusi prin
incaizire la 60 C timp de 30 de minute si de dezinfectantii obisnuiti, cum ar fi fenolul 2,5 %,
sublimatul coroziv 1 %o, formolul 5 % etc. Ciuperca A. flavus este foarte raspandita in natura si
albinele vin frecvent in contact cu ea. Patrunsa in stup, boala se extinde asupra puietului si
albinelor vii, contaminarea facandu-se pe cale bucala o data cu consumul de nectar, polen sau
apa infectata. Evolutia bolii este agravata de actiunea factorilor nefavorabili de mediu, in special
de umiditate.
- Melanoza: este produsa de ciuperca Melanosella mors apis, ce se localizeaza in ovare,
afectand aparatul genital al matcii i glandele salivare ale aibinelor lucratoare. Se banuieste ca
ciuperca patrunde in stup o data cu recoltarea mierii de mana.
3.4.2. Microorganisme indicatori de igiena si salubritate
Microorganismele din miere pot influenta calitatea sau siguranta acesteia. Datorita
proprietatilor ei naturale si masurilor de control din industria mierii, aceasta este produsa cu
tipuri i niveluri minime de microorganisme.
Microbii care intereseaza sunt cei care se gasesc in mod obisnuit in miere (cum ar fi
levurile, mucegaiurile si bacteriile sporogene), cei care arata calitatea ei sanitara sau comerciala
(spre exemplu, coliformii si fungii) si cei care in anumite conditii pot cauza imbolnaviri la
oameni.
Numarul total de germeni din probele de miere poate varia de la zero la zeci de mii per
gram, fara un motiv previzibil sau observabii.
Majoritatea probelor de miere contin niveluri detectabile de levuri. Desi numarul
acestora in multe probe este <100 ufc/g, levurile se pot dezvolta in miere, ajungand la valori
foarte mari, dar acest lucru se poate monitoriza prin practicile standard de productie, incluzand si
numararea microorganismelor viabile. Astazi este general acceptat ca numarul de spori de levuri
in diferite sortimente de miere poate varia in limita a 10 milioane, de la 1 in 10 g pana la
1.000.000/g.
Numarul de mucegaiuri din miere este de ordinul zecilor sail sutelor, un numar mare
putand indica o contaminare recenta.
Sporii bacterieni, mai ales cei din genul Bacillus, sunt cu regularitate gasiti in miere. De
asemenea, sporii de C. botulinum sunt prezenti in multe din probele testate, in mod normal in
numar mic. Nakano et al. (1989) au observat o scadere a sporilor viabili dupa ce mierea a fost
pastrata un an la 25 C si au concluzionat ca "anumite procese care au loc in timpul limpezirii si
depozitarii prelungite contribuie la scdderea incidentei sporilor in mierea din comert"
Cu toate acestea, se pare ca sporii pot persista in miere un timp nedefinit, dar ei nu
germineaza (nu se transforma in forme vegetative care se pot multiplica).Formele vegetative ale
bacteriilor ce provoaca boli la oameni nu s-au gasit in miere si, cum bacteriille nu se multiplica
in miere, un numar mare de bacterii sub forma vegetativa indica o contaminare recenta de la o
sursa secundara. Daca insa aceste forme vegetative sunt introduse, accidental sau experimental,
ele pot supravietui in miere perioade destul de mari de timp, in special la temperaturi scazute.
Bacterii
Prin comparatie cu alte alimente neprelucrate termic, numarul de bacterii din miere este
mult mai mic (zeci sau sute) si variaza in functie de tipul de miere, starea de prelucrare (cruda,
finita, comerciala), vechime, timpul de recoltare.
In timpul colectarii si prelucrarii, mierea ar putea fi contaminata cu diferite bacterii
patogene sau potential patogene purtate de operator motiv pentru care se impun masuri
adecvate pentru a se evita sau pentru a se reduce cat mai mult posibil contaminarea in timpul
acestor operatiuni.
Speciile intalnite apartin genurilor Alcciligenes, Bacillus, Brevibacterium, Clostridium,
Enterobacter, Flavobacterium, Klebsiella, Micrococcus; Neisseria, Proteus, Pseudomonas,
Xanthomonas etc.
Specii, cantitati si frecventa izolarii
Germeni aerobi
Conform datelor publicate, valorile numarului total de germeni aerobi viabili pentru
diferite sorturi de miere pot varia de la 0 la cateva mii per gram. Aceasta variatie poate fi
datorata tipului de proba (miere cruda, miere maturata sau miere din reteaua de vanzare cu
amammtul, prospetimii mierii, perioadei de recoltare si tehnicilor analitice folosite.
Tysset et al. (1970) au testat 14 probe de miere proapat recoltata, din Franta, si au gasit
ca numarui de germeni viabili a variat de la 25 la 1600 ufc/g, cu o medie sub 100 ufc/g. Autorii
au opinat ca mierea cu un numar total de germeni foarte ridicat (circa 10.000 ufc/g) ar putea fi
acceptabila daca alte criterii microbiologice (de exemplu, numarui levurilor sau absenta
contaminarii fecale) sunt satisfacute.
Din 175 de probe de miere din comert, recoltate din diferite regiuni ale Frantei, Tysset si
Rousseau (1981) au gasit o valoare medie pentru germenii viabili de 227 ufc/g, cu valori care au
variat intre 3 i 9500 ufc/g.
Nakano si Sakaguchi (1991) au testat 270 de probe de miere din puncte de vanzare cu
amanuntul din Japonia au inregistrat un numar mediu de germeni aerobi de 83 ufc/g; din 35 de
probe de origine externa (din import) au raportat germeni viabili la valori de la 0 la 72 ufc/g, cu
o medie de 24 ufc/g. Ei au constatat ca numarui de germeni aerobi a fost mai mare la mierea
contaminata cu C. botulinum. Germenii mobili formatori de colonii de Bacillus alvei erau
predominant printre aerobi. B. alvei a stimulat producerea de toxina de catre C. botulinum tip F
in mediile de cultura incubate in conditii aerobe.
miere s-ar putea datora posibilei stimulari a dezvoltarii sale de catre B. alvei sau alte
microorganisme in anumite faze ale maturarii.
Valori mai mici ale numarului de aerobi totali au fost raportate de Piana et al. (1991), care
au gasit valori variind intre 1 si 55 ufc/g.
Iurlina si Fritz (2005), analizand miere comerciala obtinuta din supermarketuri, miere
recoltata din stupine si miere livrata in vrac, au gasit bacterii mezofile aerobe la toate probele.
Pentru mierea comerciala pentru cea din stupine, numerele gasite au fost similare, cu valori care
au variat intre 30-1200 ufc/g, respectiv 60-1100 ufc/g. Pentru mierea comerciala valoarea medie
a fost de 244 ufc/g, iar pentru mierea din stupine de 500 ufc/g. Cea mai mica valoare medie (223
ufc/g) a fost obtinuta la mierea vrac pentru industrie, care a avut valori intre 40-500 ufc/g. Cei
mai mare numar estimat de bacterii mezofile (3 x 10 4 ufc/g) s-a gasit intr-o proba de miere
recoltata din comert, proba care avea si un numar total de coliformi de 10 ufc/g. Dupa cum se
observa, valoarea medie a fost mai apropiata de cea obtinuta de Tysset si Rousseau (1981), insa
distributia a fost mai mica (30-1200 ufc/g).
Numarul total de bacterii aerobe gasit de Jo et al (2005) in patru tipuri de miere (de
salcam, poliflora i 2 tipuri locale) a variat intre 85 si 450 ufc/g.154
Germeni din genurile Clostridium si Bacillus
Cercetarile privind microorganismele anaerobe din miere s-au axat in principal pe
Clostridium botulinum. Aceasta a dus ia descoperirea aproape exciusiva a altor specii
clostridiene, cum ar fi C. beijerinckii, C. perfrigens, C. butyricum si C. sordellii. Este de
semnalat izolarea lui C. perfringens, care nu prezinta pericol de intoxicare pentru consumatori
daca este ingerat in miere. Intr-adevar, alimentele implicate in astfel de fenomene sunt carnurile
fierte si pasarile, preparate la care mierea este folosita rareori. Cu toate acestea, acest
microorganism poate fi considerat in continuare un indicator al poluarii fecale, deoarece
habitatul sau natural este constituit de catre intestinele animalelor (inclusive ale omului). C.
perfringens, ca si C. difficile i C. botulinum, pot cauza infectii intestinale generatoare de toxine
la copii. Aceste infectii sunt provocate prin ingerarea microorganismelor sau a sporilor lor, care
colonizeaza intestinul copiilor mai mici de un an si produc toxine.
Data fiind importanta si implicatiile prezentei C. botulinum in miere, aceasta problema este
tratata mai pe larg intr-un capital separat
Printre speciile bacteriene din miere, cele mai reprezentative apartin genului Bacillus. Sau gasit B. alvei si Paenibacillus larvae (agentii locii europene si americane), precum si B.
cereus, component al fiorei intestinale a albinei, ca si alte specii de Bacillus. Bonvehi si Jorda
(1993) arata ca sporii de bacterii din genul Bacillus sunt mai multi in mierea poliflora decat in
cea monoflora .
Trebuie subliniat faptul ca aceste microorganisme nu cauzeaza probleme daca sunt
ingerate cu mierea ca atare.
Dimpotriva, ele pot deveni periculoase in cazul in care mierea este folosita ca ingredient
in diverse preparate alimentare (cu sau fara tratare termica), care ofera conditii optime de
temperatura i umiditate si favorizeaza dezvoltarea microbilor.
Incercand sa afle de ce numarul de spori botulinici variaza atat de mult in cazul probelor
de miere, Huhtanen et al. (1981) au gasit ca numarul de germeni din genul Bacillus a variat de la
0 la 80 ufc/g, iar numarul de microrganisme anaerobe de la 1 la 132 ufc/g. De asemenea, au mai
fost izolati Alcaligenes, Pseudomonas, Flavobacterium si bacterii nesporogene gram-pozitive .
Kokubo et al. (1984) au studiat incidenta sporilor de Bacillus si Clostridium in mierea din
fabricile de procesare si din reteaua comerciala de vanzare cu amanuntul (retaileri). Au fost gasiti
spori in 67 din cele 71 de probe de miere testate (deci un procent de 94 %), la niveluri de 10-100
spori/g. Cei mai multi dintre spori apartineau genului Bacillus, specia predominant fiind B.
cereus, urmata de B. coagulcms, B. megaterium i B. alvei. 56 de probe din cele 71 (adica 79 %)
contineau spori de Clostridium, in 6 probe gasindu-se C. perfringens. Niciuna dintre probe nu a
continut spori de C. botulinum
In 24 din cele 50 de probe analizate de Piana et al. (1991) au fost gasiti spori de B.
cereus, numarui lor variind in intervalul 0,1-1 ufc/g. Nu s-au izolat C. perfringens i C.
botulinum, cu toate ca s-au gasit spori apartinand unor bacterii anaerobe neidentificate in 22 din
cele 50 de probe, la niveluri variind intre 0,1-1 ufc/g. Spori apartinand unor specii microbiene
aerobe au fost gasiti in toate probele, numarui acestora variind intre 1-67/ per gram
Analizand 42 de probe de miere colectate din stupine din Argentina, De Centorbi et al.
(1994) au constatat ca toate probele contineau Bacillus spp.; 21,4 % dintre tulpini au fost
catalogate ca fiind B. alvei. Pe de alta parte, in mierea argentiniana din reteaua comerciala, B.
cereus a fost detectat in 78 % din probe, cu valori sub 10.000 spori/kg {Monetto et a I., 1999).
Din cele 70 de probe de miere examinate de Iurlina si Fritz (2005), un numar de 16 (23
%) au continut Bacillus spp., fiind identificate B. cereus, Bacillus pumilus i Bacillus
laterosporus. 6 din cele 16 probe pozitive au fost din mierea din comert, in care B. cereus, B.
pumilus si B. laterosporus au avut o incidenta de 26 %, 13 % i 26 %. Cele 9 probe ramase sunt
de miere din stupine, B. cereus fiind singura specie izolata, cu o incidenta de 24 %. in mierea
vrac destinata industrializarii, Bacillus spp. a avut cea mai scazuta incidenta (doar 10 %), fiind
izolat doar B. cereus, lucru care se poate datora amestecarii probelor de la diferiti apicultori,
ducand la o diluare a mierii cu distributia inegala a microorganismelor.
In 4 tipuri de miere (de salcam, poliflora si 2 tipuri indigene), Jo et al. (2005) au gasit
ca numarul de germeni din genul Clostridium a variat intre 0 si 450 ufc/g.
In schimb, Naman et al. (2005), analizand miere marocana cu diferite origini botanice,
incluzand tipuri uniflorale (Eucalyptus, Thymus, Euphorbia) i multiflorale, au gasit spori de
bacterii din genul Bacillus la majoritatea probelor analizate, la niveluri variind de la < 10 ufc/g
pana la 200 ufc/g.
Analizand 433 de probe de miere recoltata din Argentima, in diferitia ani, Lopez si
Alippi (2007) au gasit o contaminare cu specii ale genului Bacillus la 174 de probe (circa 40 %).
Dintre acestea, 114 (26,3 %) erau B. cereus, 52 (12 %) B. megaterium, 5 (1,1 %) B. mycoides i
3 (0,7 %) B. thuringiensis. Rezultatele au aratat ca a existat un grad ridicat de diversitate, atat
fenotipic, cat si genotipic, printre tulpinile de B. cereus izolate din miere. Aceasta diversitate
sugereaza origini diferite ale contaminarii cu aceasta bacterie, cum ar fi polenul, albinele, ceara,
echipamentele si praful. Pana in prezent, nu se cunoaste ca mierea sa fi fost implicata in focare
de toxiinfectii cauzate de B. cereus, cu toate ca acest lucru este, evident, posibil. Prin urmare,
monitorizarea mierii pentru prezenta B. cereus poate fi oportuna, ca masura de precautie.
Alte bacterii
Studiile realizate de Tysset et al. (1970) in legatura cu examinarea calitativa a
microorganismelor izolate in urma analizei mierii din Franta in ceea ce priveste numarul total de
germeni a avut drept rezultat identificarea unor specie bacteriene apartinand urmatoarelor
genuri: Bacteridium, Bacterium, Bacillus, Brevi bacterium, Enterobacter,Flavobacterium,
Klebsiella, Micrococcus, Neisseria, Proteus, Pseudomonas si Xanthomonas. Cele mai multe
bacterii izolate apartineau genului Bacillus, mai prcis cereus pumilus-13 % din probe contineau
Micrococcus si Pseudomonas (pe care autorii il atribuie intestinelor albinelor). De asemenea,
autorii au sugerat ca Flavobacterium lactis a ajuns in miere de la oameni prin intermediul apei
contaminate.
Ruiz-Argueso si Rodriguez-Navarro (1975) au gasit doua grupuri principale de bacterii,
clasificate in Gluconobacter si Lactobacillus, in mierea aflata in procesul de maturizare. Un al
treilea grup, clasificat ca Zymomonas, a fost izolat ocazional. Lactobacillus si Gluconobacter
dispar dupa ce gradul de umiditate minim (aproximativ 18%) este atins, eel dintai cu mult mai
repede insa decat eel din urma.
Bartoli (1993) a izolat, din cateva probe de miere, Staphylococcus aureus, prezenta
acestuia datorandu-se probabil masurilor deficitare de igiena in titnpul proceselor de colectare i
procesare a mierii. Acelasi germen a fost izolat in 3 din cele 12 probe de miere neprelucrata
destinata ambalarii in S.U.A. Se pare ca el este prezent in miere doar rareori, nefiind capabil sa
supravietuiasca procesarii mierii si cu atat mai putin sa se multiplice si sa produca enterotoxina.
Au mai fost gasiti in miere i germeni coliformi. Pascual et al. (2004) au detectat
coliformi numai intr-o singura proba, ceea ce denota o contaminare aoeidentala, secundara, de
origine umana. In schimb, Iurlina i Fritz (2005) au gasit intr-o proba de miere din comert un
numar total de coliformi de 10 ufc/g, proba respectiva avand i o incarcatura microbiana foarte
mare (3 x104 ufc/g bacterii mezofile)
Supravietuirea bacteriilor in miere
Molan (1992) arata ca supravietuirea bacteriilor difera in functie de diversele tipuri de
miere. Investigatiile asupra mierii contaminate experimental cu diferite specii de enterobacterii
si de micobacterii au demonstrat timpi diferiti de supravietuire a acestora la diferite niveluri
termice (vezi tabelul nr. 7).
Din datele de din tabel rezulta ca unele specii de enterobacterii si de micobacterii supravietuiesc
in mierea pastrata la temperaturi relativ joase (10 C sau 20 C) timp destul de indelungat si
trebuie evitata prezenta lor in miere.
miere, iar numarui lor (atunci cand sunt prezente) este foarte mic, semnificatia lor in
imbolnavirile omului prin consum de miere este foarte redusa. Totusi, un rise, chiar daca este
nesemnificativ, exista, motiv pentru care unele tari solicita ca mierea, inainte de a se
comercializa, sa fie testata in privinta calitatii ei microbiologice.
Tabelul nr. 7
Supravietuirea formelor vegetative ale bacteriilor in miere (Snowdon J.A., Cliver D.O.,
1996)
Specia bacteriana
Bacterii intestinale
nesporulate
Echvardsiella tarda
Emini a aim iovora
Escherichia coli
Temperatura
Timpul de supra
(C)
Temperatura
vietuire
Cateva zile
Referinte
Sackett (1919)
caiuerei
20
4
20
< 10 zile
8 saptamani
< 10 zile
Mycobacterium
2.1.
chelonie
2.2.
pilfer
2.3.
tuberculosis
2.4.
tuberculosis
bovis
2.5.
tuberculosis
avium
Proteus vulgaris
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella
- derbr
- dub! in
- enteritidis
- enteritidis
- typhi
- typhi
- nphimurium
-1) phi murium
Semitici marcescens
Shigella
Stapln lococcus aureus
20
20
< 10 zile
8 ore
10
10
6 him si 13 zile
2 am. 4 hini si 12
20
10
20
10
20
10
zile
34 zile
1 an. 11 hini i 5 zile
26 zile
4 hini i 21 de zile
30 zile
2 am. 4 luni i 12
20
10
10
zile
18 zile
Tysset si Durand (1973)
2 luni i 22 de zile T> sset si Durand (1976)
20 zile
Tysset si Durand (1976)
Levuri
Acestea sunt unele dintre putinele microorganisme care se pot multiplica in miere,
deoarece tolereaza aciditatea si nivelurile mari de zaharoza.
Fiind osmofile, ele constituie o problema in industria mierii, deoarece se pot multiplica
chiar in mierea naturala. De asemenea, se pot dezvolta chiar la niveluri reduse ale apei
disponibile, asa cum sunt in cazul mierii maturate. Drept urmare, levurile osmofile fermenteaza
cu usurinta mierea.
Conditiile care favorizeaza fermentatia in miere includ cresterea umiditatii, temperaturile
moderate, structura granuloasa, un numar ridicat de levuri si prezenta pulberilor si azotului.
Fermentarea determina transformarea zaharozei in alcool, CO2, acizi organici si diferiti
compusi cu miros si arome nedorite. Alcoolul se poate transforma in acid acetic, iar dioxidul de
carbon da mierii aspect spumos si tulbure
formeaza o faza mai grea, in partea de jos a recipientului de pastrare, constand in principal din
glucoza, si o faza mai usoara, deasupra primeia, alcatuita mai ales din fructoza si apa. Aceasta
separare determina fermentarea din cauza continutului ridicat de apa al fazei superioare, care
favorizeaza cresterea si dezvoltarea microorganismelor fermentative.
Facand un studiu minutios referitor la corelatia dintre continutul de apa al mierii, gradul
de contaminare cu levuri i tendinta ei de fermentare, Lochhead (citat de Barzoi i Apostu,
2002) a ajuns la urmatoarele concluzii:
Continutul de apa al mierii
< 17,1 %
Tendinta de fermentare
Lipsete, indiferent de numarui drojdiilor
17,1 - 18 %
18,1 - 19 %
19,1 - 20 %
peste 20 %
Pericol permanent
Rezulta deci ca, de fapt, factorul hotarator al declansarii alterarii fermentative a mierii il
constituie continutul ei de apa. Mierea florala din regiuni umede contine mai multe levuri si se
poate altera in fagure.
Dupa cum se observa, umiditatea de peste 17 % determina multiplicarea levurilor
osmofile. fn cazul in care umiditatea depaseste 19 %, o singura celula intr-un gram de miere este
suficienta pentru a incepe procesul de fermentatie. Mierea cu un numar foarte mare de levuri nu
este acceptabila ca gust si nu poate fi comercializata.
O alta conditie care favorizeaza cresterea levurilor osmofile este temperatura. Intr- adevar,
acestea se multiplied intre 0 i 40 C, temperatura optima fiind de 27 C .
Mucegaiurile identificate au fost: Aspergillus candidus (28,7 %), A. flavus (57,5 %), A.
fumigatus (45,0 %), A. niger (51,3 %), Mucor spp. (31,3 %) si Penicillium spp. (38,8 %),
nivelurile variind intre 10 si 100 ufc/g.
Dintre levuri, au fost identificate 2 specii: Candida humicola (75 %) i
Saccharomyces spp. (88,8 %), cu un nivel de contaminare . Faptul ca aceste levuri au fost
detectate cu frecventa foarte mare >7 la niveluri de contaminare ridicate arata ca levurile
osmofde respective ar putea reprezentat indicatori utili pentru aprecierea calitatii microbiologice
a mierii.
Iurlina si Fritz (2005) au gasit ca 50 (71 %) din cele 70 de probe examinate (provenite
din comert, din stupine si din mierea vrac destinata industrializarii) au avut valori egale sau mai
mici de 470 ufc/g pentru mucegaiuri si levuri. Cele mai mici valori au fost gasite in probele de
miere din comert (intre 0-300 ufc/g, cu o valoare medie de 34 ufc/g). in cazul mierii din stupine,
valorile au fost intre 0-470 ufc/g, cu o medie de 164 ufc/g. Mierea vrac a avut aceeasi gama de
valori ca si mierea comerciala, dar valoarea medie a fost de circa 100 ufc/g. Incidenta
mucegaiurilor si levurilor pentru mierea comerciala, cea din stupine si cea vrac a fost 47 %, 59
% si respectiv 70 % 149
Alte microorganisme
In afara de levuri, mucegaiuri si bacterii, in miere pot si prezente si alte microorganisme,
dar informatiile referitoare la acest subiect sunt foarte putine in literatura stiintifica.
Algele pot fi prezente in mierea de mana si In "sedimentul din miere" in anumite conditii
climatice, cum ar fi atunci cand umiditatea relativa este ridicata.
Dinoflagelatele pot ajunge in miere din filtrele de diatomee pentru pamant, dar nu sunt
viabile.
Unele virusuri umane enterice, cum ar fi virusul hepatitei A, ajunse in miere (mai ales in
conditii de uscaciune), pot persista, insa numarul lor scade cu rate dependente de temperatura si
timp. Deoarece materiile fecale umane reprezinta o sursa exclusiva de virusuri umane enterice,
masurile de control care protejeaza hrana albinelor de materiile fecale umane preintampina
prezenta acestora in miere.
Germeni
de anaerobi
germeni
et
din
Levuri
mucegaiuri i
Bacillus
< 100
0-2.500
(media
(media
100)
254)
ai
si Mucegaiur
genul
(aerobi)
Tysset et ai (1970) 25 - 1.600
Hiihtaiien
Testul11
Germeni
Levuri
1 - 132
0-80
(1981)
Tysset si Rousseau3 - 9.500
0-2.500
(1981)
(media 90)
(media
227)
Root (1983)
Kokiibo et ai (1984)
Nakano etal. (1989)
Nakano
si0-72
Sakagticlii (1991)
0.1 - 10
10 - 100
1 - 132
0 - 180
0-300
(media 24)
(media
0.1 - 1
0.1 - 1
< 1 - Kf
9)
1 - 3.500
30
10' - Kf
1 -43
20
10 -100
1 - 1.5x10 s
0 - 470
0 - 450
< 10 200
< 10
100 - 4.500
(2007)
Fungi
Levuri
Ascosphaera
Candida
Debaiyomyces
Hansenula
Lipomyces
Xematospora
Oo&porirfmmi
Pichia
RtaxfokM'wfcv
Saccharomyces
Scl! izo sacch aron n ce s
Schuannioim ces
Ton/la
Mucegaiuri
Acremonimn
Altemaria
Aspergillus
Atrichia
Cephalosporiitiu
Chaetomium
'luhuspurrttm
Coniothecium
Fusarium
Hormiscium
Mucor
Mycelia
Penicillium
Xeisseria
Proteus
Pseudomouas
Staphylococcus
Xanthomonas
Zymomonas
Torulopsis
Trichosporon
Zi gosaccharonn ces
F'eronsporaceae
Perron eli a
Rhizopus
Scopulariopsis
Trichoderma
Triposporium
Uredinaceae
Ustilagmaceae
max. 100;
/ g0
max. 10;
max. 100;
Salmonella / 25 g
absent.
Tabelul nr. 10
Exemple de specificatii microbiene de achizitie pentru miere (Snowdon J.A., Cliver D.O.,
1996)
E.
Test ul'1
Le\ur Levuri si Muc
coft
o-
Compa
nia
NTG Bacte
rii
colifo
muce-
e-
gaiuri
gaiuri
nella
care
determin
rme
COC
C/IS
vascozit
ate
A
B
c,b
D
E
F
G
H
I
R
1000
10
5000
10
10000 <3
10000 10
10000 10
10000 100
1000
10
10000 10
10000 10
5000
10
Neg.
10
<0,3
Neg.
Neg.
Neg.
10
Neg.
Neg.
Neg.
100
100
100
100
100
100
10
200
100
100
100
10
100
100
100
10
Neg.
100
<3
Neg.
Neg.
Neg.
100
Neg.
Neg.
sa
Neg.
Neg.
Neg.
Neg.
Neg.
Neg.
50
50
Atunci cand un anumit microorganism devine o problema, este necesara testarea speciala
suplimentara pentru identificarea si confirmarea lui
Clostridium botulinum si mierea
2.11.
2.12.
Botulismul infantil
2.13.
2.14.
2.15.
2.16.
2.17.
2.18.
Concluzii
Aceste tipuri sunt: A, B, C, D, E, F i G. Ultimele doua tipuri se intalnesc mai rar, iar la tipul C
sunt descrise doua subtipuri: Ca (patogen pentru pasari) si Cp (patogen pentru mamifere). Tipul
G (identificat in 1970 si redenumit ulterior Clostridium argentinense) nu a fost confirmat inca
drept cauza a imbolnavirilor la om sau animale. Toxinele elaborate de diferitele tipuri sunt si ele
diferite antigenic, putandu-se deosebi cu ajutorul reactiei de seroneutralizare.
Proprietatile biochimice ale speciei C. botulinum variaza de la tip la tip. Astfel, unele
sunt intens proteolitice, lichefiaza gelatina, iar altele chiar si albusul de ou fiert. Toate produc
hidrogen sulfurat, nu produc indolsi au activitate inconstanta fata de glucide si polialcooli, cu
exceptia glucozei si maltozei (pe care le ataca constant si puternic). Elaboreaza o hemolizina
activa fata de hematiile de om, dar nu si pentru cele de oaie. Aparitia hemolizinei in mediile de
cultura este favorizata de prezenta glucozei (1 %) sau serului de oaie coagulat (20 %).
Hemolizina produsa de tulpinile de tipul B este mai activa decat cea produsa de cele de tipul A.
Hemolizinele botulinice sunt termolabile i sensibile la lumina i la agitarea mecanica.
Particularitatile celor 4 grupe, ca si ale speciei Clostridium baratii (care provoaca
botulism la copii), sunt prezentate tabelul nr. 11.
Tabelul nr. 11
Principalele caractere ale tulpiniior C botulinum de diferite tipuri subtipuri
(dupa Barzoi D., Apostu S.; 2002)
Caracterul
Grupa (tipuri)
II
III
(A,B',F') ! (B:,E,F2)
Digestia caniii sau proteinelor
coagulate
Hidroliza gelatinei
Digerarea laptehu
Zaharoliza
Lipaza
Lecitinaza
Reducerea nitratilor
Mobilitatea
Acizi grasi volatili1
-h
+
+
-h
+
a. ib. b.
h
(C, D)
+
+
+
+
a.b
+
+ (->
+
+
a. p. b
C.
rv
(G)
+
baratii
+
-f
+
a. ib. b. i
/
+
+
-K
a. u
- minuna/maxima
- optima
pH inlubitor
Concentratia de NaCl mlubitoare
Valoarea axv minima de dezvoltare
Valoarea DlWl pentm spori
Om
Produce
Bo\me. cai. oi.
toxiinfectie
10/50
30/40
4.6
10 %
0.94
25 nun
+
3.3/45
25-37
5.0
5%
0.97
< 10 mm.
+
+
+
/
30/37
/
/i
/i
/
+
/
30/37
/
/
/
/
-
+
-
/
+
/
/
/
/
/
/
uurca.
pastrav
la
Pasari
Produce bof??JisnjJ sugariior
i
i
Trebuie mentionat insa ca, in sensul gruparii de mai sus, proteoliza se refera la digestia
cazeinei, carnii, oului si serului coagulat, dar nu si la hidroliza gelatinei (aceasta hidroliza, ca si
a alt or proteine modificate, de catre aa-zisele tulpini neproteolitice este ceva obinuit, incat
clasificarea actuala in tulpini proteolitice si neproteolitice nu este suficient fundamentata daca
se ia in considerate riumai actiunea lor asupra gelatinei).
In mediul inconjurator, C. botulinum se gaseste in principal sub forma sporulata. Pentru a
determina infectia, sporii trebuie sa gaseasca conditii prielnice pentru germinare, multiplicare si
eliberarea toxinei, cea care de fapt produce boala. Sporii acestei bacterii sunt foarte rezistenti
fata de diferiti factori. in conservele de legume sau fructe raman viabili multi ani. Sunt mai
rezistenti la caldura decat cei ai tuturor bacteriilor anaerobe patogene, motiv pentru care
formulele de sterilizare a conservelor se stabilesc pe baza eficientei lor asupra suspensiilor, de o
anumia densitate, de spori de C. botulinum. Termorezistenta sporilor botulinici, avand mare
importanta pentru problema toxiinfectiei botulinice, a fost atent studiata.
In lumenul intestinal, portiunile legate de BoNT sunt distribute peste suprafata apicala a
celulelor epiteliale intestinale, iar dupa endocitoza toxina este transferata in partea cealalta a
celulei, fiind eliberata pe suprafata bazolaterala, fenomen care dureaza aproximativ 20-30 de
minute.
Patogeneza BoNT este similara indiferent de calea de contaminare. Toxinele sunt
absorbite din tractul intestinal in circulatia sanguina, ajungand in toate partile corpului, cu
exceptia SNC, deoarece nu pot penetra bariera hematoencefalica.
Ele se leaga ireversibil la terminatiile nervoase presinaptice ale sistemului nervos
periferic ale nervilor cranieni, unde inhiba eliberarea acetilcolinei. Mecanismul implica legarea
la un receptor specific de pe membrana celulei nervoase de la jonctiunea neuromusculara,
internalizarea unei portiuni (portiunea catalitica, ce se gaseste pe lantul usor) si scindarea
proteinelor componente ale sistemului de neuroexocistozain interiorul celulei.
Blocarea activitatii acetilcolinei are ca rezultat impiedicarea progresiva a transmiterii
influxului nervos, determinand in final producerea de paralizii flaste simetrice si descendente,
caracteristice botulismului.
Desi multe tulpini de C. botulinum produc un singur tip de BoNT, unele tulpini produc
doua tipuri, denumite Af (litera mare indicand tipul de toxina principal, produsa in cantitate mai
mare - toxina majora, iar litera mica desemnand tipul de toxina generata in cantitate mai mica toxina minora), Ab, Ba i Bf. Unele tulpini ale tipului C produc doar toxina C2 (care nu este
neurotoxice) ori o combinatie intre toxina dominanta Ci si toxina.
Neurotoxinele tuturor tipurilor (de la A la G) au structura, mecanism de actiune si
activitate farmacologica similare. Totusi, ele sunt serologic distincte si sunt diferentiate prin
neutralizarea activitatii lor biologice cu anticorpi specifici.
Toxinele botulinice brute sunt complexe proteice cu greutatea moleculara diferita de la
tip la tip, fiind cuprinsa intre 150 si 900 kilodaltoni (kDa). Letalitatea toxinelor botulinice creste
cu cateva unitati logaritmice in prezenta tripsinei sau a altor enzime proteolitice. Toxina
botulinica este considerata cea mai puternica otrava biologica cunoscuta pana astazi. Este stabilit
ca 1 mg toxina botulinica contine 1.200.000 DLM/kg corp cobai, putand omora 1.200 tone cobai
sau 2.000.000 soareci, iar 1 g de toxina in stare cristalizata, dispersata si inhalata uniform, poate
ucide mai mult de 1 milion de oameni, desi conditiile tehnice fac dificila o asemenea
diseminare. 198,422 g toxina ar fi suficiente pentru a omori toate vietuitoarele sensibile de pe
suprafata pamantului.
Toxina este mai puternica daca se administreaza pe cale parenterala decat pe cale orala.
Doza letala de toxina botulinica pentru om nu este cunoscuta, dar poate fi estimata din studiile
efectuate pe primate. Prin extrapolare, cantitatea letala de toxina cristalizata din tipul A pentru o
persoana de 70 kg este de aproximativ 0,09-0,15 [g pe cale intravenoasa sau intramusculara, de
0,70-0,90 p,g prin inhalare si de 70 p.g pe cale orala. Conform altor autori, dozele letale pentru
om se apreciaza a fi sub 1 meg sau egala cu 5x10 - 1x10 DL5o i.p. soarece pentru toxinele A si B
din grupa I si de lxlO5 - 5x10" DL50 i.p. soarece pentru toxinele B si E din grupa EL .Celelalte
tipuri de toxina par a avea o toxicitate mai redusa pentru om.
In solutie, toxina botulinica este incolora, inodora si, din cate se cunoaste, insipida. In
timp ce sporii sunt rezistenti la caldura, BoNT este termolabila, fiind inactivata cu usurinta prin
incalzire la peste 85 C timp de 5 minute.
Cele 7 tipuri de toxine botulinice se caracterizeaza prin absenta neutralizedi incrucisate
(de ex., antitoxina de tip A nu neutralizeaza toxinele de tipurile B-G). In mod exceptional, unele
toxine (cum ar fi Ci si D sau E si F) au aceleasi caracteristici antigenice, care pot rezulta dintr-o
reactie incrucisata in cadrul testelor serologice.
Cele mai sensibile animale de laborator sunt cobaii si soarecii, animale pe care se
verifica in mod curent, in laboratoare, prezenta toxinei botulinice in alimente si materiale
patologice.
Abilitatea C. Botulinum de a determina imbolnaviri la oameni prin consumul alimentelor
contaminate este in legatura directa cu formarea de spori termorezistenti care supravietuiesc
metodelor de conservare ce distrug microorganismele nesporulate. Asa cum s-a aratat mai sus,
aceasta termorezistenta a sporilor variaza de la tip la tip si chiar de la tulpina la tulpina in cadrul
aceluiasi tip (desi unele tulpini nu supravietuiesc la 80 C, sporii majoritatii tulpinilor necesita
temperaturi peste cea de fierbere pentru a fi sigura distrugerea lor), fiind direct proportionala cu
cresterea aciditatii si scaderea continutului in saruri al mediului in care sunt suspendati sporii.
Toti factori amintiti sunt in corelatie, orice modificare a unuia dintre ei influentandu-i si
pe ceilalti. Interactiunea lor poate avea efect pozitiv sau negativ asupra inhibarii C. botulinum.
Pentru inactivarea sporilor botulinici in alimente se poate utiliza si metoda iradierii, in
cazul mierii fiind necesare valori de 1,91-12,8 kGy (kiloGray) pentru reducerea cu 90 % a
numarului de spori.
Izolarea C. botulinum din alimentele incriminate in toxinfectiile botulinice reuseste in
rare cazuri, deoarece bacteria, dupa multiplicare si elaborarea toxinei, se autolizeaza daca nu
gaseste conditii favorabile sporularii. Izolarea germenilor este si mai problematica daca este
vorba de materiale patologice provenite de la pacienti cu toxiinfectie alimentara, deoarece chiar
in cazurile cand bacteria este ingerata o data cu alimentul, ea nu se multiplica in tubul digestiv,
iar de cele mai multe ori este distrusa la nivelul stomacului datorita aciditatii mari. Daca ajunge
in segmentele mijlociu si posterior ale tubului digestiv este supresata de microflora intestinala
normala. Din contra, la copiii sugari, in primele saptamani de viata, cu hipoaciditate gastricd si
microflora digestive incomplete, bacteria colonizata la nivelul colonului se multiplied si devine
numeroasa in fecale (>108 celule/gram), de unde se izoleazd frecvent .
Pentru a verifica prezenta C. botulinum, materialele suspecte, suspendate in lichid
diluant, se centrifugheaza, depozitul se inoculeaza in mediile de imbogatire, iar lichidul
supernatant al culturilor obtinute se supune testelor de identificare a toxinei, pentru urgentarea
diagnosticului.
Botulismul infantil
Botulismul este o boala toxiinfectioasa neurologica severa, caracterizata printr-un
sindrom neuroparalitic ca urmare a afectarii predominante a nervilor cranieni si a sistemului
neurovegetativ, prin tulburari digestive moderate, uscaciunea mucoasei bucale printr-o evolutie
cu mare risc letal (10-30 %). Ea afecteaza omul si numeroase specii de animale este provocata in
marea majoritate a cazurilor de neurotoxina elaborata de Clostridium botulinum .
La om, se pot intalni 4 forme distincte de botulism: toxiinfectia botulinica, ce rezulta din
ingerarea alimentelor contaminate (in care toxina este preformata), botulismul plagilor, cauzat
de catre microorganismele care se multiplied i produc toxina in plagile contaminate, botulismul
infantil (sau botulismul sugari lor), care se datoreaza producerii endogene a toxinei prin
germinarea sporilor de C. botulinum in intestinul sugarilor, si botulismul intestinal (sau
botulismul copiilor ori adultilor datorita colonizarii intestinale, similar celui infantil), ce se
intalneste rar si se refera la acele cazuri in care nu este identificat nici un vehicul alimentar, nu
este nici o suspiciune de botulism al plagilor i exista posibilitatea colonizarii intestinale la
persoanele cu varsta peste 1 an care prezinta alterari anatomice sau microbiologice la nivelul
tractului gastrointestinal. In ultimii ani a fost descrisa o noua forma de botulism (botulismul
iatrogen sau botulismul accidental), care este rezultatul unei reactii adverse a organismului ca
urmare a injectarii toxinei botulinice in scopuri terapeutice sau cosmetice.
Botulismul infantil a fost descris pentru prima data in 1976, in Statele Unite ale
Americii, ca o entitate clinica distincta care rezulta din colonizarea intestinala si producerea de
toxina de catre C. botulinum la copiii sub 1 an, ulterior fiind descris in numeroase alte state.
Incepand cu anii '80, botulismul infantil a fost cea mai frecventa forma de botulism intalnita in
Statele Unite, ca in tarile dezvoltate. Majoritatea cazurilor sunt produse de tulpinile botulinice
din grupa I, tipurile A si B. Este posibil ca incidenta foarte ridicata a tulpinilor din aceasta grupa
sa se datoreze faptului ca temperatura lor optima de crestere este foarte apropiata de temperatura
corpului uman.
In ceea ce priveste agentul cauzal al botulismului infantil, pare insuficient de fondata
validarea complexului de tulpini apartinand speciei C. botulinum bazata numai pe caracteristicile
neurotoxinelor ce le produc, intrucat s-au constatat tulpini de Clostridium baratii izolate de la
cazuri de botulism la copii (care produceau o toxina de tip F), dar si tulpini de Clostridium
butyricum care produceau toxine de tip E si care s-au izolat tot din cazuri de botulism infantil, un
sistem de clasificare mai recent recunoscand ca si C. baratii si C. butyricum (alaturi de C.
botulinum) sunt agenti cauzali ai botulismului infantil, aceste specii clostridiene non-botulinice
producand neurotoxine de tip botulinic.
Botulismul infantil are un spectru larg de simptome clinice, cele mai importante fiind
constipatia (deseori ca prim simptom, definit ca lipsa de defecatie timp de 3 sau mai multe zile),
apatia, letargia, dificultatea in supt si balonarea, tipatul slab, gura uscata, hipotonia, atonia
musculara generala, pierderea controlului capului, aspectul general de copil (flescait),
oftalmoplegia, reactia pupilara slaba la lumina, disfagia, reflexul slab la inecarea cu hrana,
tonusul sfincterului anal scazut. Gravitatea poate fi de grade diferite, de la cazuri usoare pana la
cele fatale. Cand evolutia bolii este lenta, prognosticul este foarte bun deoarece permite
spitalizarea ingrijirea adecvata, mortalitatea la copiii spitalizati fiind sub 3 %. Botulismul
sugarilor este o boala afebrila si, desi in mod obisnuit evolueaza sters, poate prezenta o gama
larga de semne si grade de paralizie, pana la moarte subita. Deseori se aseamana cu sindromul
Down.
Adultii si copiii mai mari ingera in mod regulat spori botulinici, intr-un numar redus
(acestia fiind in mod normal prezenti atat in hrana preparata, cat si in produsele agroalimentare
proaspete), fara a se imbolnavi. Explicatia pentru acest aparent paradox este aceea ca microflora
intestinala complet dezvoltata si diversificata, prezenta in cazul adultilor si copiilor mai mari
(ajungand la un nivel de 10n-1012 germeni anaerobi/gram de materii fecale), previne germinarea
si cresterea in cazul unui numar mic de spori de C botulinum ingerati. Asadar, este recunoscut
rolul central al microflora intestinale a gazdei in determinarea susceptibilitatii sau rezistentei la
colonizarea cu C. botulinum. Exista, totusi, si unele exceptii: copiii si adultii care sunt sub
tratament indelungat cu substante antibacteriene, ca si cei care sufera de diverse tulburari
gastrointestinale, sunt expusi riscului (destul de scazut) de contaminare.
In comparatie cu microflora adultilor, cea a sugarilor este mult mai simpla, atat calitativ,
cat si cantitativ, cu doar cateva genuri si specii (in principal Bifidobacterium si Bacteroides),
fiind lipsita de microorganismele cu rol protector, neputand astfel preveni eficient colonizarea
intestinului cu spori exogeni de clostridii neurotoxigene. De asemenea, in tractul intestinal al
sugarilor nu se gasesc nici acizi biliari, care au capacitatea de a inhiba clostridiile, iar tranzitul
intestinal incetinit constituie inca un factor de risc. Datorita acestor factori, sporii ajunsi in
intestin pot germina si produce toxina in vivo.
Originea sporilor de C. botulinum din botulismul sugarilor este in multe cazuri
necunoscuta. De cand infectia a fost intalnita la nivelul tractului intestinal, au fost testate
numeroase produse alimentare pentru copii (atat traditionale, cat netraditionale), insa doar
mierea se considera ca este implicata in cea mai mare masura ca sursa de germeni de C.
botulinum pentru copii, sporii fiind prezenti in mod natural in multe probe de miere. Intr-o
masura mult mai mica, un alt aliment asociat cu botulismul infantil este laptele praf pentru copii.
Se presupune totusi ca imbolnavirea in cazurile care nu sunt asociate cu consumul de miere este
rezultatul ingerarii sporilor din surse din mediul inconjurator (cum ar fi particulele microscopice
de praf), deoarece studii extensive ale diverselor categorii de factori, alimentari si nealimentari,
in diverse laboratoare au evidentiat prezenta consistenta a sporilor botulinici doar in miere,
consumul acesteia ramanand singurul factor de risc identificat ce poate fi evitat in cazul
botulismului infantil. Au fost si cazuri de botulism infantil puse pe seama consumului de sirop de
porumb, dar cercetari ulterioare nu au evidentiat prezenta sporilor botulinici in acest aliment.
Nici o investigate efectuata pana acum nu a gasit toxina preformata in miere, ceea ce
inseamna ca nu se poate vorbi despre toxiinfectie alimentara de natura botulinica datorita mierii.
In pofida conditiilor anaerobe, datorita vascozitatii ridicate, continutului mare de zaharuri, pHului scazut, continutului redus de proteine, ca si oxidazelor si altor substante antimicrobiene, in
miere sporii nu pot germina si produce toxina.
Doza minima infectanta de spori botulinici pentru copiii sugari nu este cunoscuta exact,
dar, avand in vedere cazurile de botulism infantil asociate cu consumul mierii ce continea spori
de C botulinum, se estimeaza ca aceasta este intre 10 si 100. Cea mai scazuta evaluare a
numarului minim de celule necesare pentru a cauza boala a fost realizata la o proba de miere din
Canada, care continea 1 spor/g138, pe cand cea mai mare doza estimata a nu cauza botulism
infantil a fost de 7 spori/25 g miere. In ceea ce priveste toxina, s-a calculat ca, pentru a secreta o
cantitate letala pentru un copil de 7 kg, este necesar un numar de 2,6x10b - 2,6x10y celule
vegetative de C. botulinum.
In prezent, singura modalitate pentru a preveni botulismul infantil este aceea de a nu se
da miere in hrana copiilor mai mici de 1 an, toate institutive pediatrice si de sanatate subscriind
la aceasta recomandare. Sunt insa si autori care, negasind spori botulinici in 221 de probe de
miere provenita din diverse tari si in urma chestionarii unui numar de 719 mame, dintre care
peste 75 % introdusesera miere in hrana copiilor lor mai mici de 1 an fara a se constata
manifestari care ar fi putut fi atribuite botulismului infantil, concluzioneaza ca recomandarea de
a nu se introduce miere in alimentatia copiilor mai mici de 1 an ar trebui reevaluata.
De asemenea, nu sunt recomandate nici remediile care contin miere preparate in casa
(pentru constipatie, angine, colici etc.), ca si obiceiurile de a inmuia suzetele in miere ori de a
unge buzele copiilor cu miere pentru a obisnui sugarii sa le foloseasca, deoarece au fost
raportate cazuri de botulism infantil ca urmare a acestor obiceiuri. Pentru a preveni botulismul
infantil asociat cu mierea, una dintre masurile propuse in Uniunea Europeana se refera la
etichetarea corespunzatoare a ambalajelor produselor din/cu miere, in sensul avertizarii asupra
pericolului la care sunt expusi copiii sub 1 an/ .
De la primul caz diagnosticat (in 1976), pana in 2006, 26 de tari de pe 5 continente
(exceptie facand Africa, probabil datorita dificultatilor in diagnosticarea cazurilor, pentru ca
solul din Africa contine spori botulinici si chiar au fost raportate cazuri de toxiinfectie
alimentara botulinica) au raportat prezenta a eel putin 1 caz de botulism infantil, cele mai multe
cazuri fiind raportate de U.S.A., Argentina, Australia, Canada, Italia si Japonia. Numarul anual
al cazurilor de botulism infantil raportate in prezent il depaseste pe cel al cazurilor de
toxiinfectie botulinica si botulism al plagilor, luate impreuna. Totusi, foarte multe tari inca nu au
raportat nici un caz de botulism infantil, ceea ce contrasteaza evident cu raspandirea globala,
cunoscuta, a sporilor botulinici in soluri si in praf sugereaza ca botulismul infantil ar putea sa nu
fie recunoscut sau raportat. Numarul pacientilor de sex masculin a fost aproximativ egal cu cel
al pacientilor de sex feminin. Varsta medie a pacientilor a fost de circa 14 saptamani (cele mai
multe cazuri fiind intre 2 saptamani si 6 luni, dar a fost raportat si un caz intalnit la 38 de ore
dupa nastere).
O statistica mondiala a cazurilor raportate de botulism infantil a fost realizata de catre
Koepke etal. in 2008, rezultatele acesteia fiind prezentate sintetic in tabelul nr. 12.
Asocierea cu consumul de miere a fost mai mica la subiectii din Statele Unite ale
Americii decat la cei din alte tari. Spre exemplu, printre cazurile diagnosticate in California,
proportia celor in care a fost implicata mierea a scazut semnificativ in timp (de la 39,7 % in anii
'70 la 14,7 % in anii '80, apoi la 5,3 % in ami '90 si doar 4,7 % la inceputul secolului actual), pe
cand din cele 106 cazuri din alte tari decat S.U.A. la care informatia a fost disponibila, mai mult
de jumatate (59 %) erau asociate cu consumul de miere.Per total, aproximativ o treime din
cazurile raportate au fost asociate cu consumul de miere .
In Europa, primul caz de botulism infantil datorat consumului de miere a fost descris in
Italia, la o fetita de 9 saptamani, a carei suzeta a fost indulcita cu miere, iar din 49 de cazuri de
botulism infantil (raportate intre 1978 si 2002), un numar de 29 (59,18 %) au fost asociate cu
consumul de miere.
Arnon S.S. (1998) arata ca la toate cazurile in care sporii de C. botulinum au fost gasiti
in mierea care intr-adevar fusese inclusa in hrana bebelusilor inainte ca acestia sa se
imbolnaveasca de botulism infantil, tipul toxigen (A sau B) al sporilor din miere a fost acelasi
cu tipul de toxina care a cauzat imbolnavirea copiilor, probabilitatea ca o asemenea concordanta
perfecta sa se intample fiind mai mica de 1 la 1 miliard.18
Tabelul nr. 12
Cazurile raportate de botulism infantil, pe continente i tari, intre 1976-2006
(Dupa Koepke Ruth, Sobel J. i Arnon S.S., 2008)
Surse de contaminare
Sursele primare de contaminare a mierii cu spori de C. botulinum includ solul, praful,
aerul, nectarul si polenul din flori, tractul digestiv al albinelor, ca si cadavrele celor moarte in
stup.
In plus, substantele indulcitoare destinate hranirii albinelor pot constitui surse primare
de contaminare. Sursele secundare sunt oamenii, echipamentul, recipientele, vantul, praful,
insectele, animalele si apa.
Solul.
Contaminarea albinelor cu spori botulinici este influentata in principal de catre
suprafata solului din stupina, dar si din mediul din jurul acesteia, datorita posibilitatii albinelor
de a se contamina cu spori si a-i introduce in stup. Intr-un centralizator referitor la distributia
sporilor botulinici in solurile din intreaga lume, eel mai contaminat sol este cel din Danemarca
(41 % din probele recoltate din terenurile cultivate au fost pozitive), urmat de cel din Elvetia
(35,2 %) di din Argentina (33,8 %).
Nevas et al. (2005) privesc prevalenta sporilor in miere ca o reflectare a numarului global
de spori din mediu. Autorii mentioneaza cercetari efectuate asupra solului cultivat al fermelor
din Danemarca (41 % probe pozitive, in principal cu tipul B) si prevalenta semnificativa, in
special a sporilor din tipul B, in miere (26 %). Observatii similare au fost facute in Suedia in
ceea ce priveste sporii din tipul E.
In Argentina, din 1982 pana in 1997, la cele 146 de cazuri ce botulism infantile
confirmate in laborator tipul de toxina implicat in imbolnaviri (tipul A) a reflectat predominenta
sporilor din tipul A in sol.
Plantele.
In ceea ce priveste plantele ca sursa de spori, intr-un studiu efectuat pe 200 de probe de
musetel {Matricaria chamomilla), un numar de 15 probe (7,5 %) au fost contaminate cu spori
botulinici. Numarul de spori la toate probele pozitive a fost de 0,3-0,4 spori/gram de musetel. Au
fost identificate tipurile A, B si F.
Fecalele apa.
Datorita prevalentei ridicate in probele de miere provenita din Danemarca, s-a sugerat ca
cresterea extensiva a porcilor in aceasta tara ar putea avea o influenta asupra contaminarii,
aceasta supozitie bazandu-se pe faptul ca C. botulinum, tipul B a fost frecvent detectat in probele
de fecale de la porci in Suedia.
Albinele au tendinta sa prefere sursele murdare de apa in locul celor curate, posibil din
cauza mirosurilor si a continutului in saruri, si astfel pot folosi apa contaminata cu balegar. In
afara de faptul ca este un nutrient, apa este dispersata peste faguri cu rol de regulator al
temperaturii si umiditatii in interiorul stupuiui, putandu-se realiza contaminarea si pe aceasta
cale.
Indulcitorii. In vederea detectarii prezentei sporilor botulinici, in Japonia, Nakano et al.
(1992) au analizat 273 de probe de indulcitori altii decat mierea (de ex., zaharul neramat si
siropul de porumb), unii dintre acestia fiind destinati hranirii albinelor. Din 56 de indulcitori
pentru apicultura, 3 (5,35 %) contineau spori botulinici, in timp ce din ceilalti 217 indulcitori, la
8 dintre ei (3,68 %) s-au detectat sporii de C. botulinum. Autorii sugereaza astfel ca produsele
dulci folosite pentru a hrani albinele pot reprezenta una din sursele provenientei sporilor de C.
botulinum in miere.
Corpul albinelor. Cercetari efectuate pe intestinele albinelor (citate in Snowdon si
Cliver, 1996) au aratat ca acestea contin 29 % bacterii gram-pozitive (incluzand specii din
genurile Clostridium, Bacillus si Streptococcus), 70 % bacterii gram-negative sau gramvariabile si 1 % microorganisme levuliforme.
Pentru a explica contaminarea mare a mierii, care se poate intalni cu spori botulinici, a
fost examinata multiplicarea C. botulinum in albine. Atunci cand albinele moarte au fost
inoculate cu spori de C. botulinum la niveluri de 102-103/gram si incubate in conditii aerobe timp
de 10 zile, nivelul microorganismelor a crescut la 104-103. Atunci cind sporii de C. botulinum au
fost inoculati impreuna cu Bacillus alvei, cresterea majoritatii tulpinilor a fost sporita
semnificativ (10-107). Rezultate similare au fost obtinute si in cazul pupelor de albine, dar nu si
al larvelor. Asadar, contaminarea masiva a mierii cu spori botulinici, care se intalneste uneori, ar
putea fi cauzata de contaminarea din albinele moarte in care s-a multiplicat C. botulinum. S-a
demonstrat asadar ca in albinele si pupele moarte sporii botulinici sunt capabili sa germineze,
formele vegetative ale bacteriei putandu-se multiplica in conditii aerobe. Totusi, albinele moarte
si pupele bolnave sunt indepartate cu eficienta din stup de catre albine si astfel nu constituie un
rise semnificativ pentru sanatatea coloniei. S-a aratat ca nici o alta materie din stup, cu exceptia
albinelor moarte, nu constituie un substrat convenabil pentru germinarea si multiplicarea C.
botulinum .
Cai de contaminare
Intr-un studiu efectuat in Statele Unite de catre Huhtanen et al. (1981), albinele au fost
inoculate experimental cu spori de C. botulinum pentru a se constata daca ele transmit sporii in
miere. Albinele au fost hranite cu o solutie apoasa cu 50 % zahar, solutie care continea spori.
Dupa 2 saptamani, mierea colectata continea 1.100 spori/g, iar dupa 5 saptamani, 50 de spori/g.
Evaluarile cantitative au aratat ca toti sporii au fost transmit in miere. Totusi, microorganismul
nu s-a multiplicat in corpul albinelor, iar 2 saptamani mai tarziu nici n-a mai fost gasit in
continutul intestinal sau rectal, ceea ce sugereaza ca albinele nu adapostesc acest germen.
Asadar, ele pot fi considerate ca fiind un vector pasiv pentru sporii de C. botulinum, Nevas et al.
au evaluat 3 ani consecutiv (2001-2003) factorii care influenteaza contaminarea mierii cu spori
botulinici. Un numar de 1.168 de probe provenind din 100 de stupine (inclusiv instalatiile i
utilajele folosite pentru extragerea mierii) apartinand la 37 de apicultori au fost analizate pentru
prezenta C. botulinum tipurile A, B, E i F, utilizand tehnica PCR. Sporii au fost gasiti in toate
etapele procesului de productie a mierii, cel mai frecvent detectat fiind tipul B din grupa I.
Prevalenta ridicata a sporilor in sol si in probele de ceara si materiale asociate cu aceasta
sugereaza ca ceara joaca un rol in contaminarea mierii prin acumularea in ea a sporilor de
origine telurica, datorita faptului ca este moale si constituie o suprafata adeziva pentru spori.
Contaminarea cerii este posibil sa se petreaca prin praful carat de catre albine din sol. Daca
suprafata solului din preajma stupinei este constituita din muschi de copaci si nisip ori pietris,
create posibilitatea albinelor de a cara spori botulinici.
Determinarea C botulinum din miere
Cultivarea C. botulinum necesita tehnici stricte de anaerobioza, ca si incubare in conditii
stricte anaerobe, ceea ce creeaza diverse provocari in munca de laborator cu acest
microorganism.
Detectarea si izolarea C. botulinum sunt dificile. Nu exista disponibil nici un mediu
selectiv pentru a cultiva atat tulpinile proteolitice, cat si pe cele neproteolitice. Detectarea
microorganismului in mediu si in alimente (atat ca atare, cat si ca materii prime) este complicata
din cauza abundentei sporilor si/sau a toxinelor imposibil de izolat. De asemenea, izolarea C.
botulinum in probele din mediu sau din alimente este subiect de diferite limitari datorita
prezentei tulpinilor netoxigene care se aseamana fenotipic genotipic cu C. botulinum. De altfel,
pentru incubarea tuturor tipurilor toxigene si varietatilor culturale ale microorganismului
respectiv este bine sa se foloseasca nu doar o singura procedura, mediu sau temperatura, ci mai
multe.
Tulpini diferite, tulpinile botulinice proteolitice si neproteolitice necesita conditii
diferite pentru izolarea lor. Tratamentul termic al probelor este folosit frecvent pentru a elimina
bacteriile concurente care se gasesc in forma vegetativa si pentru a activa sporii aflati in stare
dormanda ca sa germineze. Adaugarea de enzime litice termorezistente, cum ar fi lizozimul (5
consumatoare de timp/n
-
1998), procedeul presupunand retinerea sporilor botulinici din solutia de miere pe membrane
filtrante, cultivarea acestora pe medii lichide, analiza culturilor pentru toxine si identificarea
toxinelor folosind antiseruri botulinice specifice;
-
(Hartgen, 1980), mediu cu carne fiarta (Huhtanen et al, 1981; Rail et al, 2003), mediu fluid cu
tioglicolat (Huhtanen et al, 1981), mediu Robertson (Hetland, 1986) sau mediu TPGY (Made et
al., 2000; Rail et al., 2003);
In majoritatea metodelor, detectarea sporilor botulinici s-a realizat prin bioproba pe
soareci, exceptie facand Rail et al. (2003), care au realizat, pe langa testarea biochimica a
coloniilor, si o analiza microscopica a mediului imbogatit, si Made et al. (2000) si Nevas et al.
(2002), care au detectat C. botulinum dupa imbogatire folosind extragerea ADN-ului si tehnica
PCR .
Detectarea toxinelor speciei Clostridium botulinum
In cazul culturilor bacteriene, pentru detectarea neurotoxinelor botulinice se folosesc mai
multe tipuri de teste: bioproba pe soareci, teste imunologice, detectarea genelor neurotoxinelor
prin PCR si examinarea acestor gene, teste pentru activitatea endopeptidazei si folosirea
biosenzorilor (dezvoltati recent si aplicati pe scara larga pentru a examina o multitudine de
potentiate amenintari biologice si de substante chimice; pentru detectarea cantitativa a toxinei
botulinice au fost dezvoltati biosenzori cu fibra optica).
In timp ce testul de letalitate a soarecilor (bioproba pe soareci) a ramas testul standard
pentru detectarea neurotoxinelor botulinice, in ultimii 10-15 ani au fost facute progrese
extraordinare in ceea ce priveste dezvoltarea testelor alternative moleculare/genetice, urmarinduse creterea rapidittii a sensibilitatii lor (astfel ca eel mai rapid test dureaza 20 de minute, iar
sensibilitatea lui o depaete pe cea a bioprobei pe oareci).
Testul de letalitate pe soareci denumit i MBA {mouse bioassay), este procedura
standard de detectare si identificare a toxinei botulinice si singura metoda recunoscuta universal
la ora actuala. Poate fi folosit pentru toate cele 7 tipuri de toxine. El se bazeaza pe injectarea
intraperitoneala la soareci de laborator a probei diluate in solutie tampon-fosfat. Se recomanda
folosirea a 2 soareci pentru test; totusi din considerente etice poate fi folosit si un singur soarece.
Se folosesc soareci albi cu greutatea de 18-25 g. Dupa incubare, culturile din probele suspecte se
centrifugheaza la 4.000 g timp de 20-30 de minute. Supernatantii se dilueaza 1:10 in solutietampon de gelatina-fosfat cu pH=6,2, dupa care 0,5 ml din fiecare dilutie se injecteaza
intraperitoneal, oarecii injectati se tin sub observatie 4 zile pentru a se observa simptome de
botulism (blana zburlita, "abdomenul de viespe", slabiciune musculara, respiratie ingreunata,
paralizii sau moarte). Materialele tripsinizate i duplicatele netripsinizate se supravegheaza in
paralel. Pentru tripsinizare, solutia de tripsina (20 mg tripsina in 10 ml apa demineralizata sterila
pastrata la -20 C) se adauga la supernatantul din cultura, dar nu mai putin de 1 % (v/v),
urmata de incubare la 37 C pentru 30 de minute. Toxicitatea este exprimata in doza letala
medie/ml, corespunzand valorii reciproce a celei mai mari dilutii la care ambii oareci au avut
semne tipice de boala i au murit. Daca proba contine toxina, la oareci se observa semne tipice
de botulism, care apar de obicei in prima zi de dupa injectare (in 98 % din cazurile pozitive), dar
pot sa apara i in zilele urmatoare.
Tipul de toxina se determina prin testul de neutralizare a toxinei cu antitoxina specifica,
numit i testul de protectie a oarecilor {mouse protection test). Amestecurile toxina-antitoxina
sunt injectate intraperitoneal la oareci, care sunt apoi tinuti sub observatie timp de 4 zile. Astfel,
oarecii injectati cu antitoxina neutralizatoare supravietuiesc, pe cand ceilalti fac botulism i
mor. Acelai rezultat se obtine i prin tratarea eluatului din proba cu antitoxine inaintea injectarii.
In testele de neutralizare pot fi folosite atat tipuri de neurotoxine monovalente, cat i polivalente.
Testul de letalitate pe oareci este foarte sensibil. Astfel, DL50 la injectia intraperitoneala
corespunde la 5-10 picograme, limita de detectie fiind de 0,01 nanograme/ml de eluat din proba
(aadar, cantitatea de toxina necesara pentru a realiza intoxicarea este extrem de redusa). Cu
toate acestea, testul este laborios i destul de scump, consuma timp mult, solicita personal
calificat i facilitati corespunzatoare. in plus, prezinta i probleme etice datorita folosirii
animalelor de laborator, doar un numar limitat de laboratoare din intreaga lume folosind acest
test. In cazurile clinice suspecte de botulism, cand este necesar tratament imediat, bioproba pe
oareci se poate dovedi prea lenta pentru un diagnostic eficace. Au fost raportate de asemenea
rezultate fals pozitive datorita formarii in vivo de toxina datorita unui numar mare de spori
botulinici, endotoxinelor de la bacterii gram-negative sau reactiilor incruciate intre toxinele
botulinice i cele tetanice .
Metodele imunologice (cum ar fi testele ELISA sau alte tehnici) au fost folosite pe
scara larga pentru a detecta toxinele i pentru a identifica coloniile de C botulinum. De
asemenea, aceste metode au fost utilizate pentru a detecta neurotoxinele botulinice in probele
clinice sau de alimente. Sensibilitatea sau specificitatea scazute ale acestor metode au fost
observate in teste cum ar fi testul de hemaglutinare pasiva, radioimunotestul i testul de
imunodifuzie. Testul ELISA a fost modificat pentru a-i imbunatati sensibilitatea i specificitatea
(spre exemplu, imunotestul amplificat ELISA-ELCA, ELISA cu captare colorimetrica, ELISA
cu picatura magnetica, teste de imunoafmitate pe coloana i ELISA amplificat). Pentru a realiza
o mai mare sensibilitate a metodelor imunologice folosite pentru detectarea C. botulinum, au fost
dezvoltate metode imuno-PCR in care se utilizeaza la -20 C) se adauga la supernatantul din
cultura, dar nu mai putin de 1 % (v/v), urmata de incubare la 37 C pentru 30 de minute.
Toxicitatea este exprimata in doza letala medie/ml, corespunzand valorii reciproce a celei mai
mari dilutii la care ambii oareci au avut semne tipice de boala i au murit. Daca proba contine
toxina, la oareci se observa semne tipice de botulism, care apar de obicei in prima zi de dupa
injectare (in 98 % din cazurile pozitive), dar pot sa apara i in zilele urmatoare.
Tipul de toxina se determina prin testul de neutralizare a toxinei cu antitoxina specifica,
numit i testul de protectie a oarecilor {mouse protection test). Amestecurile toxina-antitoxina
sunt injectate intraperitoneal la oareci, care sunt apoi tinuti sub observatie timp de 4 zile. Astfel,
oarecii injectati cu antitoxina neutralizatoare supravietuiesc, pe cand ceilalti fac botulism i
mor. Acelai rezmltat se obtine i prin tratarea eluatului din proba cu antitoxine inaintea
injectarii. In testele de neutralizare pot fi folosite atat tipuri de neurotoxine monovalente, cat i
polivalente.
Testul de letalitate pe oareci este foarte sensibil. Astfel, DL50 la injectia intraperitoneala
corespunde la 5-10 picograme, limita de detectie fiind de 0,01 nanograme/ml de eluat din proba
(aadar, cantitatea de toxina necesara pentru a realiza intoxicarea este extrem de redusa). Cu
toate acestea, testul este laborios i destul de scump, consuma timp mult, solicita personal
calificat i facilitati corespunzatoare. In plus, prezinta i probleme etice datorita folosirii
animalelor de laborator, doar un numar limitat de laboratoare din intreaga lume folosind acest
test, in cazurile clinice suspecte de botulism, cand este necesar tratament imediat, bioproba pe
oareci se poate dovedi prea lenta pentru un diagnostic eficace. Au fost raportate de asemenea
rezultate fals pozitive datorita formarii in vivo de toxina datorita unui numar mare de spori
botulinici, endotoxinelor de la bacterii gram-negative sau reactiilor incruciate intre toxinele
botulinice i cele tetanice.
Intr-o trecere in revista a 15 stiidii microbiologice (din toata lumea) asupra mierii,
referitoare la perioada 1978-1991, Snowdon si Cliver (1996) arata ca, dintr-un total de 2.033
probe de miere testate, 104 (5,11 %) contineau niveluri detectabile de spori botulinici. Autorii au
subliniat variatia in tehnica analitica (un studiu a raportat o prevalenta de 62 %) si au
concluzionat ca majoritatea studiilor au detectat spori botulinici in 5 pana la 15 % din probe si
ca, daca sunt prezenti, sporii sunt gasiti in mod obisnuit la niveluri de <1 ufc/g, dar in unele
cazuri pot atinge valori de 60 ufc/g. Comitetul Consultativ privind Siguranta Microbiologica a
Alimentelor (ACMSF - Advisory Committee on the Microbiological Safety of Food, 2005) a
raportat ca, in intreaga lume, prezenta sporilor clostridieni a fost intre 0 % si 20 % din probele
testate, numarul sporilor fiind intre 2,5 si 80.000 MPN (mostprobable number) per kg miere.
Datorita vascozitatii ridicate a mierii, sporii botulinici (care in mod obisnuit se gasesc
intr-un numar mic in mierea extrasa) sunt distribuiti neuniform, ceea ce complica atat recoltarea
probelor, cat si detectarea microorganismelor si face dificila realizarea unei analize cantitative
sigure, putand duce la obtinerea unor rezultate fals-negative. De aceea, un proiect statistic pentru
un plan de recoltare necesita un foarte mare numar de probe, sansele de detectare fiind totusi
destul de scazute. Din aceste motive, rezultatele privind prevalenta si in special cantitatea trebuie
considerate ca estimari in linii mari, iar mierea de la producatori nu trebuie definita ca libera de
spori botulinici pe baza rezultatului negativ de la o singura proba.
Nevas et al. (2002) sugereaza ca prevalenta scazuta a sporilor in studiile mai vechi se
datoreaza probabil concentrarii inadecvate a probelor si metodelor de crestere nepotrivite,
numarului limitat de probe, numarului mic de spori implicat si distributiei neuniforme a sporilor
in miere. O data cu imbunatatirea metodelor de detectie, numarul sporilor in probele aleatorii se
pare ca a crescut.
Din pacate, dupa stiinta noastra, in Romania nu a fost efectuata pana acum nici o
cercetare aprofundata privind prezenta sporilor de C. botulinum in mierea de albine, desi
apicultura este practicata pe scara destul de larga, avand o traditie bogata indelungata, consumul
intern i exportul de miere fiind destul de dezvoltate.
Statele Unite
Prima raportare privind prezenta i numarul sporilor de C. botulinum in miere a fost
facuta de catre Sugiyama, Mills i Kuo (1978), care au folosit metoda dializei si au gasit ca 18
probe din 241 analizate (7,46 %) contineau sporii respectivi.
Midura et al. (1979), in urma unui episod de botulism infantil in California, au
cercetat un numar de 90 de probe de miere (provenind din locuintele pacientilor, locuintele
copiilor sanatosi, magazine alimentare, mici stupine si unitati de prelucrare a mierii) si au gasit 9
probe pozitive (10 %). De asemenea, ei au constatat faptul ca sporii de C. botulinum, cand
sunt prezenti, sunt distribuiti neregulat in probele de miere. Deoarece este dificil de obtinut
o proba uniforma de miere, autorii recomandd examinarea de multiple portiuni (atat prin
prelucrarea probelor incalzite, cat si neincalzite), ceea ce ofera probabil cea mai buna
oportunitate de tree ere din spori in forma vegetativa a C. botulinum in miere. Estimarea
numarului de spori in probele pozitive s-a situat intre 5 si 25 per gram.
Din 80 de probe de miere testate pentru prezenta sporilor de C. botulinum, Huhtanen,
Knox si Shiumanuki (1981) au gasit 7,5 % dintre ele pozitive (6 probe). De asemenea, albinele
au fost inoculate experimental prin hranirea cu solutii zaharoase continand sporii respectivi,
constatandu-se ca acestia au fost transmit in miere.
Analizand 10 tipuri de alimente pentru copii, comercializate in zona Washington D.C.,
Kautter et al. (1982) au gasit spori de C. botulinum la 2 din 100 de probe de miere examinate.
In 2001, Solomon si Lilly au raportat 13 % probe pozitive.
Argentina
De Centorbi et al. (1994) au gasit C. botulinum doar intr-o singura proba de miere din
42 analizate (2,38 %).
Citiva ani mai tarziu, examinand 177 de probe, au detectat spori botulinici la 2 probe
(1,13 %). Numarul de spori a fost de 55/gram de miere.
Un procent mai mare (6,66 %) a fost gasit de catre Monetto et al. (1999), la 3 probe
de miere din 45 analizate detectandu-se C. botulinum, numarul de spori fiind de 15/g la o proba
si de <l/g la celelalte 2 probe.
Brazilia
Recoltand aleatoriu (din magazine, mici stupine, unitati de procesare comerciala a
mierii) un numar de 85 de probe i examinandu-le in vederea prezentei C. botulinum, SchockenIturrino et al. (1999) au gasit 6 probe pozitive (7,05 %), 2 continand toxina de tip A, una de tip
B si 3 de tip D. Probele au fost pozitive doar dupa 10 zile de incubatie, lucru explicabil prin
prezenta unui numar mic de spori de C. botulinum.
In schimb, Rail et al. (2003) au detectat spori botulinici in 3 probe de miere braziliana
din 100 examinate (3 %).
Ferreira Ragazani et al. (2008) au gasit un procent de 7 % probe pozitive (7 din 100
analizate).
ASIA
In Japonia, Nakano et al. (1990) au examinat prin metoda diluarii si centrifiigarii 270 de
probe de miere (autohtona si de import), fiind detectat C. botulinum in 23 de probe (8,5 %): tipul
A in 11 probe, tipul B in 2, tipul C in 10 si tipul F in una. Prevalenta a fost mai mare la probele
recoltate din bidoane (18 %) si din stupine (23 %) decdt la cele recoltate din mierea
comercializata (5 %), fapt care s-ar putea datora procesului de maturare a mierii. S-a estimat
ca majoritatea probelor pozitive contineau spori botulinici in concentratii de 1 germen/gram sau
mai mici. O proba a continut 4 spori de C. botulinum tipul A/g, iar o alta 36-60 spori tipul F/g,
restul avand <l/g.
Tot in Japonia, Nakano Sakaguchi (1991) au detectat un numar mare de spori de C.
botulinum tipul F (60 spori/g) in diferite recipiente cu miere si produse din miere provenite de la
EUROPA
Criseo et al. (1993), studiind 39 de probe de miere italiana prin metoda dilutieicentrifugarii, a gasit 2 probe pozitive (5,12 %) in ceea ce priveste C. botulinum .
In Franta, Delmas, Vidon si Sebald (1994) au analizat pentru prezenta sporilor de C.
botulinum 90 de probe de miere produsa in estul Frantei 26 de probe de miere provenita din
diferite tari. Desi 8 probe au fost pozitive cand s-a utilizat testul de toxicitate pe soareci, niciuna
din tulpinile izolate din probele pozitive nu a fost identificata ca fiind de C. botidinum.
Made et al (2000) au gasit un procent de contaminare de 1,92 % (o proba pozitiva din 52
examinate).
O cercetare mai in amanunt a prezentei sporilor botulinici in miere, folosind tehnica
PCR, a fost facuta in Finlanda de catre Nevas et al (2002). Au fost analizate 190 de probe, 114
fiind de origine interna si 76 din import (din 17 tari), C. botulinum fiind detectat in 8 probe de
provenienta finlandeza (7,01 %) si in 12 din import (15,78 %); per total, procentul probelor
pozitive a fost de 10,5 %. Numarul sporilor (tipurile A i B) a variat de la 18 pana la 140/kg
miere, valoarea medie fiind de 20 spori/kg.
Prevalenta C. botulinum in probele de miere europeana neamestecata a fost de 8 %,
procent mare comparativ cu rezultatele din studiile anterioare pe mierea din Europa, tinand
de
origine
Numar de probe
Numar de
mierii
Total
Danemar ca
Tipuri de C.
Numarul
Miere
izolatelor
tipul
de
11 29(26%)
detectate
botulinum
3 A. 23 B. 1 A. 20 B
3 E
58 14 (24%)
14 B
54 15 (28%)
3 A. 9 B. 31 A. 7B
C.
13 B
extrasa
- faguri
E
Total
Norvegi a
Suedia
miere
12 12 (10%)
7 B. 4 E. 13 B
10
9(9%)
5 B. 4 E
IB
2 B
extrasa
- faguri
22 3 (14 %)
2B. IF
Doar
61
1 E
1 (2 %)
miere
extrasa
* Toate izolatele au fost confirmate ca fiind proteolitice
In cele 3 studii amintite, referitoare la mierea din tarile nordice, au fost examinate in total
un numar de 448 de probe de miere extrasa si 256 de probe de miere in faguri. in probele de
miere extrasa studiate (cele mai multe din Finlanda - 214, apoi 100 din Norvegia, 61 din Suedia
si 58 din Danemarca), prevalenta C. botulinum a fost de 12 %, fiind vorba despre tipurile A (17
probe pozitive), B (40) i E (5), in 9 cazuri tipurile A si B fiind detectate in aceeasi proba. Din
cele 214 probe de miere extrasa de origine finlandeza, 18 % (8 probe) au fost pozitive.
Prevalenta C. botulinum a fost semnificativ mai mare in Danemarca, comparativ cu celelalte tari
nordice. in probele de miere in faguri. prevalenta globala a fost de 24 %; la mierea finlandeza a
fost semnificativ mai mare decat in mierea extrasa, in cazul celorlalte tari neinregistrandu-se
diferente semnificative.
Probele de miere au reprezentat aceeasi perioada de productie ca si probele de faguri cu
miere, astfel ca este mai probabil ca diferenta sa fie datorata fenomenului de diluare decat
invechirii. Atunci cand mierea provenita din stupi diferiti si/sau din stupine diferite este extrasa
si amestecata in containere mari pentru uniformizare, ca sa fie ambalata in vederea desfacerii cu
amanuntul, popufatia de spori este probabil diluata intr-o mare masura.
Rezultatele sintetice ale celor 3 studii efectuate de Nevas et al. sunt prezentate in tabelul
nr. 16.
Tabelul nr. 16
probe
pozitive
Albine
156
14
(9%)
Ceara
176
Miere in faguri
2 56
148
numarul de
detectat
izolate de C.
B( 10). E(2).
botulinum
B(3)
B(43)
F(l)
A(3).B(54).
A(l).
E(3). F(l)
B(52)
A( 17).
A( 14).
B(40>. E(5)
B(27)
61
53
112
%>
Zaliar pentru
C. botulinum
F(2)
(24%)
Miere extrasa
Tipul i
87
6(7%)
B(6)
B(6)
61
4(7%)
B(3).E(1)
B( 1)
26
B( 13).
B(33)
lirana
albinelor
Polen
Pastnra
173
(15
%)
Sol
235
Total
1592
73
E(3)
(31 A(7). B(64).
B{62)
%>
E(6). F(l)
277
A(29).
A( 15).
B(224).
B(227)
(17%)
E(23). F(4)
Nakano et al. (1989) au incercat reducerea sau inactivarea sporilor botulinici din miere
folosindu-se acizi, baze, alcooli, detergenti, enzime, socul termic si ultrasunete. Niciuna din
metode nu a avut efecte semnificative. Autorii au propus depozitarea pe termen lung. Ei au
adaugat in miere spori botulinici din tipurile A si B, intr-un numar de 104/ml, si au pastrat
mierea la 25 C. S-a constatat o scadere a viabilitatii sporilor: numarul lor incepe sa se reduca
dupa 100 de zile, iar dupa un an scade ia mai putin de 1 %. Totusi, la 4 C populatia de spori
ramane aceeasi, chiar si dupa 12 luni. S-a mai observat ca dupa o tratare termica moderata (5
zile la 65 C), nu s-a mai detectat nici un spor, autorii sugerand ca prelucrarea obisnuita si
pastrarea mierii in depozite (care poate dura luni de zile) ar putea explica raspandirea scazuta a
sporilor in mierea din reteaua comerciala de vanzare cu amanuntul si ca exista o matrice
timp/temperatura pentru supravietuirea sporilor.
Tendinta de scadere a numarului de spori a fost confirmata si de catre Nevas et al.
(2005), care au gasit o prevalenta mai mare a sporilor in faguri decat in mierea extrasa sau in
cea ambalata pentru vanzarea cu amanuntul, ceea ce arata ca numarul sporilor a scazut in timpul
procesarii.
Asadar, sporii nu pot germina si produce toxina in miere, dar ei pot fi prezenti pentru o
perioada de timp nedefinita, deoarece, asa cum s-a aratat mai sus, temperaturile eficiente pentru
distrugerea lor nu sunt aplicate pentru ca degradeaza inevitabil gustul, culoarea si compozitia
mierii.
intrerupt prin inlocuirea ramelor vechi cu unele noi, producerea acestora implicand temperaturi
suficient de ridicate pentru a distruge sporii botulinici din grupa I.
Strecurarea mierii ar trebui de asemenea sa se realizeze cu atentie pentru a indeparta
toate particulele de ceara, cu toate ca nu s-a constatat o corelatie semnificativa intre diversele
tehnici de strecurare/filtrare existenta C. botulinum m miere. Asezarea stupinelor in arii
acoperite cu alta vegetatie decat muschiul de copac ar putea de asemenea diminua incarcatura cu
spori a stupilor. Cu toate ca in mod obisnuit albinele nu se asaza pe sol, ele se pot aseza pe
muschiul de copac ud sau jilav pentru a culege apa. Zonele cu pietris pot elibera mai mult praf
decat cele cu vegetatie, rezultand astfel cresterea contaminarii albinelor sau chiar a stupilor.
De asemenea, este foarte importanta igiena productiei in timpul extractiei si strecurarii in
ceea ce priveste contaminarea mierii extrase. Prin mentinerea unui nivel corespunzator de igiena
in dispozitivele de extractie, nivelul sporilor botulinici poate fi redus. Prevalenta sporilor in
miere poate fi diminuata prin utilarea camerei de extractie cu facilitati adecvate de curatate a
mainilor si iluminarea ei corespunzatoare. Prin purtarea de incaltaminte diferita in interiorul si
in afara camerei de extractie, apicultorul poate evita transportarea prafului si a sporilor in
interior. O camera de extractie spatioasa i un extractor de capacitate mare se coreleaza, de
asemenea, cu o prevalenta scazuta a sporilor in miere. Astfel, se pare ca standardele ridicate de
igiena productiei sunt la fel de importante in ceea ce priveste siguranta alimentara in producerea
mierii ca in oricare alt domeniu al productiei alimentelor, chiar daca se considera ca mierea este
un aliment care nu se altereaza usor. Ciclul sporilor poate fi intrerupt si prin inlocuirea ramelor
de ceara vechi cu altele noi, produse prin folosirea temperaturilor suficient de mari pentru a
distruge sporii botulinici.
Totusi, din cauza prezentei largi a sporilor de C. botulinum in mediu, nu este posibila
producerea mierii libera in totalitate de spori, neexistand mijloace acceptabile pentru inactivarea
sau eliminarea totala sporilor din miere
Concluzii
Clostridium botulinum este un germen anaerob prezent peste tot in mediul inconjurator,
in principal sub forma sporulata. Sporii botulinici sunt larg raspanditi in natura, putand fi gasiti
in sol, praf, aer, produsele agroaalimentare neprelucrate si in produsele alimentare fmisate care
au aciditate scazuta daca sunt procesate necorespunzator. Ei sunt foarte rezistenti fata de diferiti
factori.
Pentru a determina infectia, sporii trebuie sa gaseasca conditii prielnice pentru
germinare, multiplicare si eliberarea toxinei, cea care de fapt produce boala. Toxina botulinica
este o neurotoxina, fiind considerata cea mai puternica otrava biologica cunoscuta pana astazi.
198,422 g toxina ar fi suficiente pentru a omori toate vietuitoarele sensibile de pe suprafata
pamantului.
Botulismul infantil (una din cele 5 forme de botulism cunoscute) este o forma de
paralizie ce rezulta din blocarea transmiterii mfluxurilor nervoase de catre neurotoxina
botulinica. Aceasta boala grava afecteaza mai frecvent copiii sugari mai mici de 1 an, deoarece
ei nu au flora intestinala complet dezvoltata. Copiii mai mari si adultii cu microflora intestinala
normala sunt rezistenti la botulismul intestinal si pot ingera spori botulinici fara a se imbolnavi.
Mierea se considera ca este implicata in cea mai mare masura ca sursa de germeni de
C. botulinum pentru copii: sporii sunt prezenti in mod natural in multe probe de miere, iar
consumul acesteia ramane singurul factor de rise identificat ce poate fi evitat in cazul
botulismului infantil.
Doza minima infectanta de spori botulinici pentru copiii sugari este estimata intre 10 si
100.
Contaminarea mierii cu spori botulinici poate avea loc atat la nivelul stupului, cat si in
timpul fazei de extractie. Sursele primare de contaminare includ solul, praful, aerul, nectarul si
polenul din flori, tractul digestiv al albinelor, ca si cadavrele celor moarte in stup. in plus,
substantele indulcitoare destinate hranirii albinelor pot constitui surse primare de contaminare.
Sursele secundare sunt oamenii, echipamentul, recipientele, vantul, praful, insectele, animalele
si apa.
in vederea detectarii C. botulinum, mierea nu poate fi prelucrata in modul obisnuit
pentru detectarea microorganismelor din alimente din cauza vascozitatii sale si a continutului
ridicat de zaharuri. Pentru a obtine rezultate cat mai fidele, s-au folosit mai multe tehnici si
metode (dializa, creeterea directa, dilutia-centrifugarea, filtrarea membranara, tehnica PCR). in
majoritatea cercetarilor, detectarea sporilor botulinici s-a realizat prin bioproba pe soareci.
protectie se anuleaza atunci cand mierea este diluata sau utilizata ca ingredient. Intr-adevar,
formele latente ale microorganismelor care se intalnesc in mod obisnuit in miere sau microbii
care contamineaza mierea dupa extragerea din stupi se pot dezvolta in diversele formule
alimentare care contin miere.
Inainte de extragerea din stupi, nu exista nici un control al expunerii mierii la
contaminarea cu microorganisme sau acest control este foarte scazut. Nu este practic sa se
incerce controlul calitatii aerului, al prafului, al pamantului, al florilor sau al materiilor introduse
in stup de catre albine. Conditiile existente in stupi au o anumita influenta asupra calitatii
microbiologice a mierii. Practicile care ajuta la pastrarea sanatatii albinelor influenteaza, de
asemenea, tipul si numarul microbilor la care mierea este expusa. Fagurii cu mucegai, spre
exemplu, pot fi o importanta sursa a prezentei sporilor de mucegaiuri in miere. Loca americana
este produsa de o specie bacteriana din genul Bacillus si ar putea contribui la prezenta sporilor
de Bacillus in miere. Respectarea reguiiior de buna practica in apicultura pot duce, in mare
masura, la pastrarea unui numar redus de microbi in miere, dar s-a sugerat ca folosirea lui
Bacillus thuringiensis (care este inofensiv pentru albine) pentru controlul moliei de ceara (Tinea
sarcitella) poate avea ca rezultat prezenta sporilor de Bacillus in miere.
Unii microbi care provin de ia mamifere, in special om, pot produce imbolnaviri daca
sunt consumati cu mierea sau alte alimente. Aceste microorganisme sunt transmise prin
infectiile pielii, scurgerile nazale si materiile fecale. Solul contaminat cu aceste tipuri de
microbi poate transmite boala indirect. S-a constatat ca, in mod natural, microorganismele
patogene nu se gasesc niciodata in miere, iar atunci cand ajung, accidental, in miere, nu
supravietuiesc mult la temperatura de 20 C; totusi, este posibila o supravietuire mai
indelungata daca mierea este pastrata la temperaturi mai mici de 10 C. Controlul acestor
microbi se poate realiza prin folosirea practicilor sanitare (spalatul pe maini, evitarea stranutarii
sau tusitului spre sau pe alimente etc.).
Supravegherea microbilor proveniti din alte surse decat omul (aer, aparatura, instalatii
etc.) este la fel de importanta, dar de foarte multe ori mai greu de realizat. Asa cum s-a aratat,
sunt foarte importante limitarea expunerii mierii la aer si aplicarea reguiiior sanitare de buna
practica in stupine si la instalatiile si dispozitivele de procesare a mierii. De asemenea, sunt
necesare uscarea completa a echipamentelor de procesare a mierii dupa spalarea acestora (astfel
termice eficiente pot fi calculate pentru diverse situatii; se recomanda asadar sprijinul unui
specialist in microbiologic alimentara sau al unui inginer specializat in alimente. Ambalarea in
conditii aseptice poate evita aparitia problemelor microbiologice dupa procesarea
corespunzatoare a mierii.
Si alte procese fizice pot omori microorganismele din miere:
- Shimanuki et al. (1984) au distrus sporii viabili de Bacillus din miere prin doua doze
de cate 3 Mrad de electroni accelerati la viteze mari;
- Decontaminarea prin iradiere este un proces care permite obtinerea unui inapt grad de
puritate microbiana a mierii, necesar mai ales cand aceasta este utilizata in tratarea ranilor sau
in hrana copiilor cu deficiente nutritionale. Huhtanen (1991) a determinat nivelurile de radiatii
necesare pentru inactivarea sporilor de C botulinum i B. subtilis din miere, valorile fiind in
intervalul 1,91 - 12,8 kGy (kiloGrey);
- Studiind efectul iradierii mierii ctc o doza de 10 kGy, Migdal et al. (2000) au aratat ca
acest proces reduce numarul bacteriilor i al fungilor cu pana la 98,1 %;
- Pentru a determina efectul radiatiei gamma asupra microorganismelor din miere, Jo et
al. (2005) au studiat iradierea a 4 tipuri de miere (de salcam, poliflora si 2 tipuri indigene) cu 5
si 10 kGy si au constatat ca mierea de salcam si cea poliflora au fost complet sterilizate prin
iradiere cu 5 kGy, iar la cele 2 tipuri de miere indigena numarul de germeni aerobi si anaerobi a
scazut semnificativ prin iradiere cu 5 kGy, dar nu au fost complet sterilizate nici prin iradiere cu
10 kGy;
- Levurile de alterare din miere sunt foarte sensibile la razele UV. Se stie ca 10 minute
la 20 cm sub o lampa germicida inactiveaza microbii in laborator; se poate dezvolta astfel o
tehnica similara pentru a fi folosita in fabricile de prelucrare a mierii pentru dezinfectarea
stratului superior al mierii. S-a incercat inactivarea sporilor clostridieni prin tratarea mierii cu
ultraviolete, dar, cu toate ca aceasta metoda a dus in unele cazuri la inactivarea a aproape 90 %
din spori, nu s-a reuit inactivarea completa a lor din cauza patrunderii insuficiente a razelor
UV in miere; "
- S-a propus si reducerea contaminarii microbiene a mierii folosind membrane
ultrafiltrante, care au avantajul ca reduc turbiditatea si sedimentarea/granulatia produsului, ca si
vascozitatea, ducand la obtinerea unui produs comercial steril si de calitate ridicata. Aceste
Incercand sa reduca sau sa inactiveze sporii botulinici din miere, Nakano et al. (1989)
au studiat efectul socului termic, ultrasunetelor, detergentilor, enzimelor, alcoolului, acizilor si
bazelor; nici una din aceste metode nu a avut efecte semnificative. Pentru a elimina sau reduce
sporii respectivi, ei au propus "pastrarea pe o perioada indelungata"(posibil circa 400 de zile) la
25 C sau "incalzirea moderata" la 65 C timp de 5 zile.
Pentru curatirea echipamentelor i instalatiilor folosite la prelucrarea alimentelor pot fi
folositi dezinfectatii de natura chimica, de exemplu: cuprul, iodul, mercurul, sarurile cuaternare
de amoniu sau hipocloritul de sodiu. In vederea prevenirii dezvoltarii microorganismelor, pot fi
utilizate anumite antibiotice: nistatinul, actidiona (sau cycloheximida) si amphotericina B.
Substantele conservante, ca acidul benzoic, acidul sorbic, sulfitii si CO2, au fost enumerate ca
agenti ce controleaza microorganismele. Substantele conservante cum ar fi acidul sorbic,
sorbatii de potasiu si de sodiu sau benzoatul de potasiu sunt folositi la producerea placintelor,
gemurilor si jeleurilor si ar putea juca un rol in controlul microbilor din miere.
BIBLIOGRAFIE
1.
medicated
dressing:
transformation
(2003)
of
an
Honeyancient
(2005)
Pharmacology
and
Experimental
Therapeutics,
315( 3 ) :
1028-1035.
3.
the
Ocular
Flora
in
Tea r
Deficiency
and
Meibomian
antibacterial
activity
of
(1991)
some
New
survey
Zealand
of
the
honeys,
J o u r n a l o f p h a r m a c y a n d p h a r m a c o l o g y , 43( 1 2 ) : 8 1 7 - 8 2 2 .
6.
- The
sensitivity
of
mastitis-
Zealand
Journal
of
Agricultural
R e s e a r c h , 40( 4 ) :
537-540.
8.
The
potential
for
First
World
Wound
Healing
Congress,
10-13
honey,
Journal
of
the
Royal
Society
of
M e d i c i n e , 87(1): 9-12.
10.
Al-Waili N.S. ( 2 0 0 4 a )
activity
of
natural
Investigating
honey
and
its
the
antimicrobial
effects
on
the
11.
Al-Waili N. S .
(2004b)
Top ica l
honey
application
vs.
of
honey
on
biochemical
and
hematological
Arnon S.S. ( 1 9 8 0 )
- Infant
botulism, Annual
Re\>iew
of
M e d i c i n e , 31: 5 4 1 - 5 6 0 .
16.
Arnon S.S. ( 1 9 9 5 )
Botulism
as
an
Intestinal
Toxem ia .
I n : Blaser M.J., Smith P.D., Ravdin J.I., Greenberg ELB., Guerrant R.L. ( e d i t ) Infections of the Gastrointestinal Tract.
Raven Press,
N e w Yor k , p g . 2 5 7 - 2 7 1 .
17.
Arnon
S.S.
Prevention
(1998)
Program.
Infant
In
Botulism
Treatm ent
(edit.)
&
-
Company,
Philadelphia,
U.S.A.,
pg.
1570-
1577.
18.
A r a & a S . S , . ( 2 0 0 4 } - M m t b o t u l i s m . . I s v . F e v % i o . R.B.,
Diseases.
5th
Ed.,
W.B .
Saunders
Company,
19.
Arnon S.S., Chin J., Damus Karla, Midura T., Snowden S., Taylor P., Thompson B.,
Wood
R. ( 1 9 7 8 ) - H o n e y e x p o s u r e a n d i n f a n t b o t u l i s m ,
Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), 27:
249-255.
2 1 Arnon S. S., Midura T.F., Damus Karla, Thompson Barbara, Wood R.M., Chin J.
(1979) - Honey and other environmental risk factors for
i n f a n t b o t u l i s m , T h e J o u r n a l o f P e d i a t r i c s , 94( 2 ) : 3 3 1 336.
22 Anion S.S., Sehechter R., Inglesby T.V., Henderson D.A., Bartlett J.G., Ascher M.S.,
Eitzen E., Fine D. Anne, Hauer J., Layton Marcelle, Lillibrklge S., Osterholm M.T., O
Toole Tara, Parker G., Perl M. Trish, Russell P.K,, Swerdkm D.L., Tonat K. (2001) Botulinum Toxin as a Biological Weapon: Medical and Public Health Management.
The Journal of the American Medical Association. 285(8): 1059-1070.
23. Aureli P., Ferrini A.M., Negri S. (1983) - Ricerca delle spore di CI. botulinum nel miele
[Clostridium botulinum spores in lioney]. La Rivista della Societd Italiana di Sciema
deUAlimentazione. 12(6): 457-466.
2 4 Aureli P., Franciosa Giovanna, Fenicia Lucia ( 2 0 0 2 ) - I n f a n t b o t u l i s m
and
honey
in
Europe:
commentary.
The
Pediatric
in
Austin J.W. ( 1 9 9 8 ) - D e t e c t i o n o f C l o s t r i d i u m b o t u l i n u m
honey
and
syrups
Health
Protection
Branch.
Government of Canada
,
26.
H.-l-q^.phj;-. 07.10.2010.
peritoneal
operative
Obstetrics,
honey
administration
peritoneal
adhesions.
Gynecology-,
104(2): 152-155.
and
in
preventing
European
post-
Journal
Reproductive
of
Biology.
27.
Ayyiltliz A., Akgiil K.T., Cebeci O., Nuhoglu B., Caydere M., Ustiin H., Germiyanoglu
C. ( 2 0 0 7 ) - I n t r a u r e t l i r a l h o n e y a p p l i c a t i o n f o r u r e t h r a l
injury,
an
experimental
study.
International
Urology
a n d N e p h r o l o g y . 39(3): 8 1 5 - 8 2 1 .
28.
Bakheit
botulism-like
of
syndrome
botulinum
Journal
of
toxin
after
type
Neurology.
A:
(1997)
Generalised
intramuscular
a
report
Neurosurgery
injections
of
two
cases.
&
Psychiatry.
62(2): 198.
29.
botulism.
The
first
culture-
confirmed
Infant
Danish
case..
rediscovered
and
its
therapeutic
Honey
utility.
remedy
Kathmandu
(2005)
Fust
case
of
Journal
of
Clinical
Microbiology.
43( 8 ) :
4280-4282.
32.
Processing
and
of
honey
ultrafiltration
using
polymeric
membranes.
nucrofiltration
Journal
of
Food
Bartoli M. ( 1 9 9 3 )
Microbiological
Researches
o n Honey
isolated
from
skin
wounds.
Vet e r i n a r y
Microbiology.
124(3-4):
375-381.
35.
The
mycoflora
of
Barzoi
B.
(1985)
Microbiologic
produselor
Barzoi
D.,
Meica
S.,
Negut
M.
(1999)
Toxi in f ect n le
B a r z o i D., A p o s t u S . ( 2 0 0 2 ) - M i c r o b i o l o g i c p r o d u s e l o r
The
therapeutic
use
of
honey,
(chamomile)
botulism.
and
its
International
relationship
Journal
of
with
Food
Bogdanov
S.
(2006)
Contaminants
of
bee
products,
Bogdanov S . , Fluri P., Imdorf A., Charrierre J.D., Kiichenmann Verena (2005) -
Nutrition
and
Health:
Review,
Journal
of
the
Bondoc L, Bondoc Diana, indilar E. (1999) - Mierea naturala toxica, Revista Romana
de Medicina Veterinara, 9(3): 289-297, Bucuresti.
45.
of
as
determined
by
aerobic
colony
counts.
46.
Zealand
honeys
for
antibacterial
and
antifungal
a c t i v i t i e s . J o u r n a l o f A p i c u l t u r a l R e s e a r c h , 43(2): 47-52.
47.
Brett M. ( 1 9 9 9 ) - B o t u l i s m i n t h e U n i t e d K i n g d o m , E u r o
Brin
M.F.
(1997)
pharmacology,
Botulinum
toxicity,
and
toxin:
chemistry,
immunology,
Muscle
&
Brown
L.A.
(1979)
Infant
botulism
and
the
honey
c o n n e c t i o n , T h e J o u r n a l o f P e d i a t r i c s , 9 4 ( 2 ) : 337-338.
50.
Effect
of
hydrogen
peroxide
on
Bucio Villalobos C.M., Preciado G.L., Martinez Jaime O.A., Torres Morales J.J. (2008) -
Micoflora Asociada
a Granulos
de Polen
Recolectados
Salud
Publica
Nutricion)
Mexic,
Edition
Rurgett D.M. ( 1 9 9 0 ) - A n t i b i o t i c s y s t e m s i n h o n e y , n e c t a r ,
Predators,
and
Diseases.
Cornell
University
P r e s s , I t h a c a , N e w Yor k , p g . 3 2 7 - 3 4 0 .
53.
Cano R.J. (1994) - Bacillus DNA in fossil bees: a window to ancient symbiotic
relationship?, American Society for Microbiology News (ASM News), 60: 12.9-134.
54.
Cano R.J., Borucki K. Monika, Higby-Schweitzer Mary, Poinar H.N., Poinar Jr. G.O.,
Pollard K.J. (1994) - Bacillus DNA in Fossil Bees: an Ancient Symbiosis?, Applied and
Environmental Microbiology, 60(6): 2164-2167.
55.
b a c t e r i a l s p o r e s i n 25- t o 40- m i l l i o n - y e a r - o l d D o m i n i c a n
a m b e r , S c i e n c e , 2 6 8 (5213): 1060-1064.
56.
Centorbi H.J., Aliendro E. Olga, Demo N.O., Dutto Roxana, Fernandez R,, de
Centorbi Olga N. Puig (1999) - First Case of Infant Botulism Associated with Honey
Feeding in Argentina, Anaerobe, 5(3-4) : 181-183.
57.
Ceyhan
N.,
Ugur
antimicrobial
A.
(2001)
activity
of
Investigation
honey,
Rivista
of
in
vitro
di
Biologia,
94(2): 363-372.
58.
Chen L., Mehta A., Berenbaum M., Zangerl A.R., Engeseth N.J. (2000) - H o n e y s
Clement
H.
(edit.)
(2002)
Le
Traite
Rustica
de
Cooper R. (2005) - The modern use of honey in the treatment of wounds, Bee World,
84(4): 110- 113.
61.
Cooper R. A . ,
(1999)
Antibacterial
Analyse
pollinique,
miels
d'abeilles
africanisees
Apis
mellifera
et
de
M e l i p o n i n e s d u B r e s i l , A p i d o l o g i e , 22(1): 61-73.
64.
Crane Eva
(edit.)
(1979)
Honey:
Comprehensive
Crane Eva ( 1 9 8 0 ) - A b o o k o f h o n e y . O x f o r d
University
P r e s s , N e w Yor k .
66.
Criseo G., Bolignano M.S., De Leo F. (1993) - Isolation of Clostridium botulinum type B
from
Sicilian
honey
samples.
La
Rivista
della
Societa
Italiana
di
Scienza
Deteraaine.
Slaughtered
Prevakc^c
Pigs.
Fecal
Saaapks
and
Environmental
Applied
from
M i c r o b i o l o g y , 67(10): 4781-4788.
70.
Danforth B.N., Sipes Sedonia, Fang Jennifer, Brady S.G. (2006) - The history of early
bee diversification based on five genes plus morphology, Proceedings of the National
Academy of Sciences of the U.SA., 103(41): 15118-15123.
71.
bacteriologico
Clostridium
investigation
botulinum
en
(1994)
de
mieles
Analisis
esporas
de
[Bacteriologic
De Centorbi O.P., Satorres S.E., Alcaraz L.E., Centorbi H.J., Fernandez R. (1997) Detection de esporas de Clostridium botulinum en mieles [Detection of Clostridium
botulinum spores in honey], Revista Argentina de Microbiologia, 29(3): 147-151.
73.
Delmas C., Vidon D.J.-M., Sebald M. (1994) - Survey of honey for Clostridium
botulinum spores in eastern France, Food Microbiology, 11(6): 515-518.
74.
Dodds KX.
(1993a)
environment.
In:
Clostridium
Hauschild
A.H.W,
botulinum
Dodds
K.L.
in
(edit.)
the
-
Dodds K.L. (1993b) - Clostridium botulinum in Foods. In: Hauschild A.H.W, Dodds
KX. (edit.)
-
M a r c e l D e k k e r I n c . , N e w Y o r k , p g . 53-68.
76.
Drimba, Ov. - I s t o r i a l i t e r a t u r i i u n i v e r s a l e . E d . S a e c u l u m
I . O . & E d . V e s t a l a , B u c u r e t i , 1997.
77.
Drimba,
Ov.
Istoria
culturii
civilizafiei.
Ed.
S a e c u l u m I . O . & E d . Ves t a l a , B u c u r e t i , 1 9 9 8 .
78.
dialysis,
cooked
laboratory
botulinum
meat
animal
spores
medium
toxicity
in
honey
for
enrichment
screening
and
infant
and
Clostridium
food,
Chinese
J o u r n a l o f M i c r o b i o l o g y a n d I m m u n o l o g y , 24(2): 240-247.
79.
honey
dressing
for
non-healing
venous
leg
ulcers,
J o u r n a l o f W o u n d C a r e , 13( 5 ) : 193-197.
80.
Dustmaim J.H.
(1979)-
Antibacterial
Effect
of
Honey.
A p i a c t a , 14( 1 ) : 7 - 1 1 .
81.
Top ica l
honey
for
Efem S.E.E. ( 1 9 8 8 ) - C l i n i c a l o b s e r v a t i o n s o n t h e w o u n d
healing
properties
of
honey,
British
Journal
of
Surgery, 75(7):679-681.
83.
Eklund M.W., Poysky F.T., Peterson M.E., Paranjpye R.N., Pelroy G.A. (2004) Competitive inhibition between different Clostridium botulinum types and strains,
Journal of Food Protection, 67(12): 2682-2687.
84.
El-Leithy M.A., El-Sibaei KB. (1972) - External and internal microflora of the honey
bees (Apis mellifera L.), Egyptian Journal of Microbiology, 7: 79-87.
85.
Engel M.S. (1999) - The taxonomy of recent and fossil honey bees (Hymenoptera:
Engel M. S .
(2005)
Family-group
names
for
bees
Engeseth N.H., GheldofN., Wang X., Nickelsen J.D., Husmillo G., Wu C.D. (2002) -
English K.P. Helen, Pack R.C. Angela, Molan P.C. (2004) - The effects of manuka
honey on plaque and gingivitis: a pilot study, Journal of the International Academy of
Periodontology, 6(2): 63-67.
89.
effect
of
honey
on
infected
A study
open
on
the
fracture
healing
wounds,
P a k i s t a n J o u r n a l o f M e d i c a l S c i e n c e s , 23( 3 ) : 3 2 7 - 3 2 9 .
90.
Fenicia Lucia, Ferrini A.M., Aureli P., Pocecco M. (1993) - A case of infant botulism
associated with honey feeding in Italy, European Journal of Epidemiology, 9(6): 671673.
91.
Ferreira MC., Salles Alessandra Grassi, Gimenez R., Soares Maria Fernanda Dematte
(2004)
-
Ferreira Ragazani Adriana Valim, Schoken-Iturrino R.P., Rojas Garcia Gisela, Chioda
Delfino Tammy PrisciUa, Poiatti Maria Luiza, Pelicano Berchielli Silvina (2008) Esporos
de
comercializado
Estados
Clostridium
no
brasileiros
Estado
de
botulinum
Sao
[Clostridium
Paulo
botulinum
em
rnel
em
outros
spores
in
93.
Fox
C.
wounds
(2002)
in
Honey
adults,
as
British
dressing
Journal
for
of
chronic
Community
Fox K. Christine, Keet A Corinne, Strober J.B. (2005) - Recent advances in infant
botulism, Pediatric Neurology, 32(3): 149-154.
96.
Gallardo-Chacon J. Joan, Caselles Montserrat, Izquierdo Maria, Rius Nuria (2008) Inhibitory activity of monofloral and multifloral honeys against bacterial pathogens,
Journal of Apicultural Research, 47(2): 131-136.
97.
Garcia Garcia D., Rojas Mogollon M.A., Sanchez Nieves Jimena (2006)
Contenido
microbiologico
intestinal
polen
(Hymenoptera:
Content
of
almacenado
Apidae)
the
cultivable
de
Apis
[Cultured
Intestinal Tract
del
tracto
mellifera
Microbiological
and
Stored
Pollen
of
Gilliam
Martha
(1971)
intestinal
content
of
mellifera,
Annals
of
Microbial
the
the
sterility
immature
honey
Entomological
of
bee,
the
Apis
Society
of
Gilliam Martha ( 1 9 7 8 )
Bacteria
belonging
to
the
genus
Apis
mellifera,
Journal
of
Invertebrate
Martha ( 1 9 7 9 a )
Microbiology
of
pollen
and
bee
and
bee
b r e a d : t h e y e a s t s , A p i d o l o g i e , 10(1): 4 3 - 5 3 .
101. Gilliam
Martha ( 1 9 7 9 b ) - M i c r o b i o l o g y
of
pollen
102. Gilliam
Martha
(1997)
Identification
and
roles
of
non-
Martha
(1998)
Chalkbrood,
Microbes
Agricultural
Help
Research
Bees
Magazine,
Battle
46(8):
16-17.
104. Gilliam
intestinal
contents
of
Fungi
foraging
isolated
worker
from
honey
the
bees,
A p i s m e l l i f e r a , J o u r n a l o f I n v e r t e b r a t e P a t h o l o g y , 20(1):
101-103.
105. Gilliam
isolated
from
foraging
Enterobacteriaeeae
worker
honey
bees,
Apis
m e l l i f e r a , J o u r n a l o f I n v e r t e b r a t e P a t h o l o g y , 23(1): 3 8 -41.
106. Gilliam Martha,
from
and
Morton H.L. ( 1 9 7 4 ) - E n t e r o b a c t e r i a c e a e i s o l a t e d
honey
bees,
antibiotics,
Apis
mellifera,
Journal
of
treated
Invertebrate
with
2,4-D
Pathology,
23(1): 42-45.
107. Gilliam
from
honey
bees,
Apis
mellifera,
fed
2,4-D
and
isolated
and
from
honey
antibiotics,
bees,
Journal
Apis
of
mellifera,
Invertebrate
fed
2,4-D
Pathology,
illiam
Martha,
Prest
B.
Dorothy
(1977)
The
Journal
of
Invertebrate
Pathology,
29(2):
235-237.
1 1 0 Gilliam Martha, Morton H.L., Prest B. Dorothy, Martin R.D., Wickerham L.J.
(1977)
The
mycoflora
of
adult
worker
honeybees,
Apis
mellifera:
effects
of
2,4,5-T
and
caging
of
bee
genus
Bacillus
isolated
from
honey
bees,
Apis
floral
nectar
of
citrus,
cotton,
and
Arizona
desert
Martha, Buchmann
Trigona
hypogea,
an
Obligate
Necrophage,
B i o t r o p i c a , 17(1): 2 8 - 3 1 .
115. G
illiam
Martha,
Microbiology
mellifera,
of
Prest
feces
Journal
of
of
B.
the
Dorothy
larval
Invertebrate
(1987)
honey
bee,
Pathology,
Apis
49(1):
70-75.
116. Gilliam
enzymes
and
microorganisms
in
honey
Digestive
bees.
Apis
affecting
colonies
development
of
contaminated
honey
bees,
of
chalkbrood
Apis
vAthAscosphaera
mellifera,
apis,
I n v e r t e b r a t e P a t h o l o g y , 52( 2 ) : 3 1 4 - 3 2 5 .
disease
fed
in
pollen
Journal
of
118. Gilliam
and bee bread: taxonomy and enzymology of molds, Apidologie, 20(1): 53-68.
120. Gilliam
nest
of
stingless
bee,
Melipona
fasciata,
A p i d o l o g i e , 21( 2 ) : 89-97.
121. Gilliam
Bacteria
belonging
to
the
genus
Bacillus
associated
w i t h t h r e e s p e c i e s o f s o l i t a r y b e e s , A p i d o l o g i e , 21( 2 ) :
99-105.
122. Gilliam
Martha, Taber
S.
HI
(1991)
Diseases,
pests,
and
colonies,
Journal
of
Invertebrate
Pathology,
58(2): 286-289.
123. Giogia
Marta
(2001a)
Secret
God
Domesticated,
A u r a , Journal Timpul
Marta ( 2 0 0 1 c )
Honey
in
the
Flowers,
"in
the
Marta ( 2 0 0 1 d ) - M o r e A r o u n d B e e s , J o u r n a l T i m p u l
honey
Marta ( 2 0 0 1 e )
was
second,
Notaries
after
could
wheat!...,
not
be
Journal
mistaken:
Timpul
128. GiogiaMarta
(200 If) - U n d e r t h e P e r p e t u a l S e a l o f I n h e r i t a n c e ,
of
Z . , Jarosz J. ( 1 9 9 2 ) - V a r r o a j a c o b s o n i a s a c a r r i e r
bacterial
infections
to
recipient
bee
host,
Lavie P. (1960) - I n f l u e n c e d u c h a u f f a g e s u r l e f a c t e u r
antibiotique
present
dans
les
miels,
Annates
de
Journal
of
Neurology,
Clostridial
Neurosurgery
&
neurotoxins,
Psychiatry,
cause
floppy
infant
syndrome,
Monatsschrift
fur
K i n d e r h e i l k u n d e , 141(1): 33-35 [ E n g l i s h a b s t r a c t ] ,
135. Grimaldi
D.,
Engel
M.S.
(2005)
Evolution
of
the
Insects.
A., Turedi S., Uzun H., Topbas M. (2006) - Mad honey poisoning, The
Clostridia
(1993)
that
Clostridium
produce
botulinum
botulinum
and
neurotoxin.
Clostridium
other
In:
botulinum-.
A . , Hilsheimer R. ( 1 9 8 3 )
Detection
of
Clostridium
filtration,
Journal
of
Canadian
Institute
of
Food
S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y , 16: 2 5 6 - 2 5 8 .
139. Hauschild A.H.W.,
botulinum in honey, syrups and dry infant cereals, Journal of Food Protection, 51(11):
892-894.
140. HenriqucsAna,
Journal
of
Antimicrobial
Chemotherapy,
5 8 ( 4 ) : 773-777.
141. HertzO.
(2002) - B e e k e e p i n g a g a i n s t P o v e r t y , A p i a c t a , 37(3).
142. Hillegas
J. (2003)
mites
Var ro a
The
microorganisms
destructor
pathogenity.
and
XXXVIIl"1
the
isolated
from
verification
of
Apimondia
the
their
International
C.N.
(1991)
Gamma
radiation
resistance
of
from
the
alimentary
Anaerobic
canals
bacteria
of
alfalfa
l e a f c u t t i n g b e e l a r v a e , A p i d o l o g i e , 29(4): 327-332.
148.Irish Julie, Carter A. Dee, Shokohi Tahereh, Blair E. Shona (2006) - Honey has an
antifungal effect against Candida species. Medical Mycology, 44(3): 289-291.
149.1urlina
O.
Miriam,
Fritz
microorganisms
sources,
in
Rosalia
(2005)
Characterization
Argentinean
International
Journal
honeys
of
from
Food
of
different
Microbiology,
105(3): 297-304.
150.1urlina O. Miriam, Saiz I. Amelia, Fuselli R Sandra, Fritz Rosalia (2006) - Prevalence
of Bacillus spp. in different food products collected in Argentina, LWT - Food Science
and Technology, 39(2): 105-110.
151.Jay
J.M.,
Loessner
M.J.,
Golden
D.A.
(2005)
Modern
Food
A., Hoy A. Marjorie, Allsopp M.H. (2003) - Bacterial diversity in worker adults
of Apis mellifera capensis and Apis mellifera scutellata (Insecta: Hymenoptera) assessed
using 16S rRNA sequences. Journal of Invertebrate Pathology, 84(2): 96-103.
153. JimenezMisericordia,
storage
conditions
mycological
on
some
parameters
of
physicochemical
honey,
Journal
of
and
the
S c i e n c e o f F o o d a n d A g r i c u l t u r e , 64(1): 6 1 - 1 A .
154. Jo
C., Kim J.K, Kang H.J., Lee E.Y., Bvun M.W. (2005) - I r r a d i a t i o n E f f e c t s
on
the
Decontamination
International
Food
and
of
Symposium
Non-Food
Microorganisms
"New
Frontier
Products",
22-23
of
in
Honey.
Irradiated
September
2005,
T.S.K, Johansson M.P. (1978) - Providing honeybees with water, Bee World,
Ugeskrift
abstract],
for
Laeger
(Denmark),
163(2): 169
[English
158. Kacaniova
spores in infant foods/, a survey, Journal of Food Protection, 45(1 iy. 1Q2&- 1Q29.
162. Khan
F.R., U1 Abadin Z., Rauf N. (2007) - Honey: nutritional and medicinal value,
A. ( 2 0 0 1 ) - T h e u s e o f h o n e y i n t h e t r e a t m e n t o f
infected
wounds:
case
studies,
British
Journal
of
N u r s i n g , 10( 2 2 S u p p l . ) : S 1 3 - 1 6 , S 1 8 , S 2 0 .
164. Koepke
Ruth, Sobel J., Arnon S.S. (2008) - Global Occurrence of Infant Botulism,
okuho
(1984)
Y.,
-
Jinbo
Prevalence
commercial
honey,
Metropolitan
Research
K.,
Kaneko
of
S.,
Matsumoto
spore-forming
Annual
Report
Laboratory
of
bacteria
M.
in
of
Tok y o
Public
Health,
35: 192-196.
166. Krushna
natural
preservative
of
milk,
Indian
Journal
of
E x p e r i m e n t a l B i o l o g y , 45( 5 ) : 4 5 9 - 4 6 4 .
167. KupIulii
ampeitl
F. ( 2 0 0 2 ) - A l b i n a r i t u l p e n t r u i n c e p a t o r i . E d .
M.A.S.T., Bucureti.
169. Lauro
F.M., Favaretto M., Covolo Loredana, Rassu M., Bertoloni G. (2003) - Rapid
detection of Paenibacillus larvae from honey and hive samples with a novel nested
PCR protocol, International Journal of Food Microbiology, 81(3): 195-201.
170. Lindstrom
Sarah (2001) - Infant botulism, The Pediatric Infectious Disease Journal, 20(7): 707-
709.
173. Loper
G.M.,
Standifer
L.N.,
Thompson
M.J.,
Gilliam
Martha
(1980)
diversity
honey,
of
Bacillus
International
cereus
Journal
isolates
of
recovered
Food
from
Microbiology,
117(2): 175-184.
175. Luquez
Carolina, Bianco Maria L, de Jong Laura I.T., Sagua Maria D., Arenas
Graciela N., Ciccarelli A.S., Fernandez R.A. (2005) - Distribution of Botulinum ToxinProducing Clostridia in Soils of Argentina, Applied and Environmental Microbiology,
71(7): 4137-4139.
176. Lusby
potent agent for wound healing?, Journal of Wound, Ostomy, and Continence Nursing,
29(6): 295-300.
177. Lusby
A.M. (2005)
pancreatitis
Using
(case
bee
study),
honey
Journal
to
of
treat
the
acute
American
A p i t h e r a p y S o c i e t y , 12(1): 6-9.
180. Mamdouh
Marina,
Martins
M.
Ligia,
Bernardo
F.M.A
(2003)
and
antibacterial
scoparium)
of
methylglyoxal
constituent
honeys
of
from
as
Manuka
New
the
dominant
(Leptospermum
Zealand,
Molecular
N u t r i t i o n & F o o d R e s e a r c h , 52(4):483-489.
183. M
a r g h i t a L. A . ( 1 9 9 5 ) - C r e t e r e a a l b i n e l o r . E d . C e r e s ,
Bucureti.
184. M
a r g h i t a L.A. ( 1 9 9 7 )
Albinele
produsele
lor.
Ed.
Ceres, Bucureti.
185. McGovern
D.P., Abbas S.Z., Vivian G., Dalton H.R. (1999) - Manuka honey
against
Helicobacter pylori, Journal of the Royal Society of Medicine, 92(8): 439.
186. McKibben J.,
against
Engeseth N.J. ( 2 0 0 2 ) - H o n e y a s a p r o t e c t i v e a g e n t
lipid
oxidation
in
ground
turkey,
Journal
of
A g r i c u l t u r a l a n d F o o d C h e m i s t r y , 50( 3 ) : 5 9 2 - 5 9 5 .
187. M
ichener
B.C. ( 2 0 0 7 )
The
Bees
of
the
World.
The
188. Midura
119-125.
189. Midura
T.F., Snowden S., Wood R.M., Arnon S.S. (1979) - Isolation of Clostridium
o l a n P.C. ( 1 9 9 9 )
honey.
Bee
The
Informed
unique
(The
properties
Journal
of
of
the
manuka
American
P.C. (2001a) - Potential of honey in the treatment of wounds and hums, American
o l a n P.C.
(2002a)
Management
of
Re-introducing
Wounds
and
Ulcers
Honey
-
in
the
Theory
and
P r a c t i c e . O s t o m y W o u n d M a n a g e m e n t . 48(11): 2 8 - 4 0 .
199. M
o l a n P. C , ( 2 0 0 2 b ) - H o n e y a s a n a n t i m i c r o b i a l a g e n t .
Waikato
Honey
Research
Unit.
University
of
Waikato.
New Zealand
m i p : . n o n e x , i : n o m- h^ tm n . I h w n r c > < n m n .
200. Molan P.
C . , Russell KM. ( 1 9 8 8 )
activity
in
some
New
Non-peroxide
Zealand
antibacterial
honeys.
Journal
of
antibacterial
activity
of
some
New
Zealand
honeys.
Egberts A.C.G. ( 2 0 0 6 )
The
conventional
treatment
induced
toxicity
skin
effect
on
in
of
honey
healing
breast
compared
of
cancer
to
radiotherapypatients.
Acta
O n c o l o g i c a . 45( 5 ) : 6 2 3 - 6 2 4 .
204 Moraru
P. ( 2 0 0 6 )
Nutrifia
si
alunentatia
albinelor.
Eel
orse R.,
Hooper
T.
(1985)
The
Illustrated
inhibition
of
foodborne
pathogens
and
food
Growth
spoilage
Inoue
R.,
Kanamori
Characterization
of
N.,
Suzuki
honey
N.,
from
Nagashima
T.
different
(2006)
floral
2 0 8 Nakano H., Okabe T., Hashimoto H., Yoshikimi Y., Sakaguchi G. ( 1 9 8 9 ) Changes
in
the
population
of
Clostridium
botulinum
Nakano
Nakano
H., Sakaguchi G. ( 1 9 9 1 )
contamination
botulinum
of
honey
type
An
unusually
products
by
and
heavy
Clostridium
Bacillus
alvei.
Clostridium
pupae,
honey.
botulinum
likely
in
source
International
dead
of
Multiplication
honey-bees
heavy
Journal
of
and
contamination
Food
of
bee
of
Microbiology-.
2 1 ( 3 ) : 247-252.
213 Naman
M L , Faid M . , El Adlouni C
Activities
of
Medicinal
Plants
Bacteria.
Natural
(2004)
Honey
on
from
Antimicrobial
Aromatic
Antibio-resistant
International
.Journal
of
Strains
Agriculture
and
of
<<-
Physico-Chemical
Properties
of
Moroccan
Honey.
Neac.su
C. ( c o o r d . )
(2003)-
Apiterapia
in
Romania.
216. Nevas
Mari ( 2 0 0 6 )
production
with
Department
of
Faculty
of
Clostridium
respect
Food
to
and
Vet e r i n a r y
botulinum
in
infant
botulism.
Environmental
Medicine.
honey
Hygiene.
University
of
217.
H. ( 2 0 0 2 ) - H i g h p r e v a l e n c e o f C l o s t r i d i u m b o t u l i n u m
types
and
polymerase
chain
in
honey
reaction.
samples
detected
International
by
.Journal
of
Prevalence
and
diversity
of
Clostridium
botulinum
International
Journal
of
Food
Nevas Mari, Lindstrom Miia, Virtanen A., Hielm S., Kuusi M., Arnon S.S., Vuori E.,
Korkeala H. (2005) - Infant Botulism Acquired from Household Dust Presenting as
Sudden Infant Death Syndrome. Journal of Clinical Microbiology. (43)1: 511-513.
220 Nevas
Contamination
the
honey
routes
production
of
Clostridium
environment.
botulinum
in
Environmental
(2007) - E f f e c t
topical
honey
application
along
with
cutaneous
leishmaniasis.
BMC
Complementaty
and
A l t e r n a t i v e M e d i c i n e . 7( 13).
222 Nzeako
B.C., Hamdi J. ( 2 0 0 0 )
honey
on
some
microbial
Antimicrobial
isolates.
potential
Sultan
of
Oaboos
223 Obi
C.L., Ugoji E.O., Edun S .A., Lawal S .F., Anyhvo C.E. (1994) -
antibacterial
effect
bacterial
agents
.Journal
of
of
honey
isolated
Medicine
in
and
on
diarrhoea
Lagos.
causing
Nigeria.
Medical
The
African
Sciences.
23(3):
257-260.
224 Okany
natural
cell
honey
in
anaemia.
the
The
healing
of
Nigerian
leg
Efficacy
ulcers
in
Postgraduate
of
sickle
Medical
(2005)
for
microorganisms
and
an
inhibitory
agent
for
O.M., Olabanji J.K, Oluwatosin O.A., Tijani L.A., Onyechi H.U. (2000) -
A comparison
of
topical
honey
and
phenytoin
in
the
228.
Apimondia
(2004)
Microbiological
study
of
Guadalajara
honey
"Honey,
quality-
control
and
residues",
Persano Odilo Livia, Piazza Maria Gioia, Pulcini P. (1999) - Invertase activity in honey.
Apidologie. 30(1): 57-65.
Phuapradit
231.
Honey
in
Treatm ent
of
Abdominal
Wound
Disruption,
Piana
Maria Lucia, Poda G., Cesaroni D., Cuetti L., Bucci M.A., Gotti P.
of
Udine
caratteristiche
province
(Indagine
microbiologiche
dei
sulle
mieli
della
the
Piccini
characterization
of
the
honey
bee
hive
bacterial
f l o r a . J o u r n a l o f A p i c u l t u r a l R e s e a r c h , 43(3): 101-104.
234.
Pocol
about
AcadeinicPres,
consumption
Cluj
Napoca,
in
Buletinul
Market
study
Romania.
Ed.
U S A M V - C N , 64:
398-401.
235.
Popescu N. ( c o o r d . ) (1989) - C e r c e t a r i e x p e r i m e n t a l e d e
laborator
pentru
stabilirea
factorilor
care
Popescu
N.,
Meica
S.
(1995)
Bazele
controlului
S.
(1997)
Produsele
apicole
M i c r o b i o l o g y , 141: 2 7 6 3 - 2 7 6 4 .
239.
Rada V . ,
Microflora
the
honeybee
digestive
tract:
(1997)
counts,
characteristics
and
sensitivity
to
veterinary
drugs,
Honey for refractory diabetic foot ulcers, The Journal of Family Practice, 54(10): 863.
Reynaldi F.J., De Giusti M.R., Alippi A.M. (2004) - Inhibition of the growth of
242.
Ascosphaera apis by Bacillus and Paenibacillus strains isolated from honey, Revista
Argentina de Microbiologia, 36(1): 52-55.
Ritter
243.
W. ( 2 0 0 0 )
Bolile
albinelor.
Ed.
M.A.S.T.,
Bucureti.
244.
Root A.I. ( e d i t . ) .
(1983)
The
ABC
and
XYZ
of
Bee
C.A, Lachance M.-A, Silva O.C. Janaina., Teixeira P. Ana Carolina, Marini M.
Marjorie, Antonini Yasmine, Martins R.P. (2003) - Yeast communities associated with
stingless
bees, FEMS Yeast Research, 4(3): 271 -275.
246. Ruiz-Argueso
disease.
Univ.
Col.
St.
Honey
as
Agr.
carrier
Expt.
Sta.,
of
intestinal
Fort
Collins,
Colorado, 18 pag.
2 4 8 .Sakaguchi G.
(1988)
Honey
and
botulism,
Japanese
Yea s t s
associated
with
pathogenesis.
San
Diego,
California:
Academic
Clostridium
Study
of
the
botulinum
presence
in
honey
of
in
the
spores
Brazil,
of
FEATS
(2004)
Use
of
medical
honey
in
of
Honey
Collected
Turkey, Pakistan
from
Var i o u s
Journal of Biological
Regions
of
Sciences, 5(3):
325-328.
254.Sfetcu Ionica (2007) - S a l u b r i t a t e a p r o d u s e l o r a p i c o l e - u n
indicator
doctorat,
al
relatiei
U..
mediu
A. M . V.
consum ator.
Facultatea
de
Teza
de
Medicina
States:
Clinical
and
Epidemiologic
Review,
beams
for
bee
R e s e a r c h , 124( 1 2 ) : 8 6 5 - 8 6 7 .
disease
control,
Apicultural
United
States
Diagnosis
Department
of
Honey
of
Bee
Agriculture
from
different
floral
sources
and
their
toxin
action,
Annual
Review
of
P h a r m a c o l o g y a n d T o x i c o l o g y , 44: 167-193.
261. Snow M.J., Manley-Harris M. (2004) peroxide
antibacterial
On
the
activity
in
nature
New
of
non-
Zealand
m a n u k a h o n e y , F o o d C h e m i s t r y , 84(1): 145-147.
2 6 2 .Snowdon J.A . ( 1 9 9 1 ) - I n f a n t B o t u l i s m . N a t i o n a l H o n e y
Board, Longmont, CO.
2 6 3 .Snowdon J.A. ( 1 9 9 9 )
Meeting
your
The
buyers'
microbiology-
specifications
of
(Why
honey
they
do
w h a t t h e y d o ) , A m e r i c a n B e e J o u r n a l , 139( 1 ) : 5 1 - 6 0 .
264.Snowdon J.A., Cliver D.O. (1996) - Microorganisms in Honey, International Journal
of Food Microbiology, 31(1-3): 1-26.
265.Spika J.S., Shaffer N., Hargrett-Bean N., Collin S., MacDonald K.L., Blake P.A.
(1989) - Risk Factors for Infant Botulism in the United States, American Journal of
Diseases of Children, 143(7): 828-832.
2 6 6 Standifer L.N., McCaughey W.F., Dixon S.E., Gilliam Martha, Loper G.M.
(1980)
collected
Biochemistry
by
honey
and
bees
microbiology
(Apis
of
mellifera
pollen
L.)
from
treatment
of
Fournier's
gangrene,
Indian
Journal
o f S u r g e r y , 66 (2): 75-77.
271.Sugiyama H., Mills D.C., Kuo L-J. Cathy (1978) - Number of Clostridium botulinum
spores in honey, Journal of Food Protection, 41(11): 848-850.
272.
Tanzi
honey
and
Association
infant
between
botulism,
P h a r m a c o t h e r a p y , 22(11): 1479-1483.
273.
Taormina
activity
of
against
foodborne
Inhibitory
pathogens
as
of
antioxidant
pow er.
International
Journal
of
F o o d M i c r o b i o l o g y , 69(3): 217-225.
274. TeixeiraC.P.
Lachance M.-A, Rosa C.A. (2003) - Starmerella meliponinorum sp. nov., a novel
7.
276. Tonks A.,
Cooper R.A., Price A.J., Molan P.C., Jones K.P. (2001) - Stimulation of
Tonks
high-temperature
related
to
short-time
quality,
heating
crystallisation
Effect
on
of
honey
parameters
phenomena
and
components
of
some
Hungarian
The
honeys
volatile
and
their
a n t i m i c r o b i a l e f f e c t s , A m e r i c a n B e e J o u r n a l , 127(7): 496497.
280. Tugnoli
Tvsset
microbisme
(Apis
intestinal
mellifera
groupements
L.).
des
abeilles
l'etude
butineuses
Denombrement
constitutifs
et
(Premier
du
saines
etude
des
memoire)
healthy
foraging
bees:
inventory
of
the
gram-
Tysset
C.,
hygiene
of
Rousseau M. (1981)
commercial
Problem
honey.
of
Revue
microbes
de
and
Medecine
e t e r i n a i r e . 1 3 2 : 591-600.
Ustuuol
284
Z.
The
Effect
of
Honey
on
the
by
the
National
Honey
Board
and
conducted
at
van tier Vorst M.J. Maria, Jamal W., Rotimi V.O., Moosa Alie ( 2 0 0 6 ) - I n f a n t
Botulism
due
to
Consumption
Commercially
Prepared
Arabian
States).
Gulf
Hone}
Medical
of
(First
Contaminated
Report
Principles
from
and
the
Practice.
15( 6 ) : 4 5 6 - 4 5 8 .
286. van
(2000)
-Toxicologia
de
alimentos.
Verastegui C., Lalli G., Bohnert S., Meunier F.A., Schiavo G. (2002) - Clostridial
neurotoxins. Journal of Toxicology: Toxin Reviews. 21(3): 203-227.
2 9 0 . Vu
Thi
Lam
An
botulinum
Spores
Collected
from
Agronomy
and
(2006)
in
Incidence
Honey
Vietnam
Animal
and
and
of
Infant
Germany.
Production
in
the
Clostridium
Food
Samples
Institute
Tropics
of
and
Subtropics
Georg-August-University.
Gottingen.
Germany. 136 pg
291
phenolic
components
of
New
(1999)
Zealand
Antibacterial
manuka
honey.
White
G.F. ( 1 9 0 6 )
The
bacteria
of
the
apian
with
and
its
origin
in
honey
glucose-oxidase
normal bacterial
flora
of
the
bee.
T h e J o u r n a l o f P a t h o l o g y a n d B a c t e r i o l o g y . 2 4 ( 1 ) : 64-78.
2 9 5 Willix D.J., Molan P.C., Harfoot C.G. ( 1 9 9 2 ) - A c o m p a r i s o n o f t h e
sensitivity of wound- infecting species of bacteria to the
antibacterial
activity
of
manuka
honey
and
other
dressing
for
healing
pressure
ulcers.
Journal
of
Honey,
formulation,
and
prospective
stability.
Die
antibiotic:
Pharmazie.
extraction,
56(8):
643-
647. '
298.Zegrea E. (2006) -
Economia
apicola
in
Romania.
Teza
de
299
Zumla
A.,
Lulat
A.
(1989)
Honey
remedy
** -
ACMSF
(2005).
Ad
Hoc
Group
on
Infant
and
Advisory
the
risk
of
infant
Committee
on
the
botulism.
Final
Microbiological
Draft.
Safety
of
301.
**
Biblia
Institutului
sau
Biblic
si
Sfanta
de
Scriptura
Misiune
al
(2001).
Bisericii
Ed
Ortodoxe
Romane. Bucuresti.
303. *
**
Clinicians,
and
Laboratory
Workers
for
Disease
Control
and
Prevention.
Atlanta.
GA:
accesat 14 06.2009.
304. *
** -
(2002)
Caracteristiques
-
CNDA
Infos
microbiologiques
(Bulletin
de
liaison
du
du
nuel
Centre
**
' :
16.03.2009'
306. *
**
China
ameninfa
piata
romaneasca.
Cotidianul
>07.***
Codex
Codex
Standard
Alimentarius
for
Honey
Commission
(Rev.
1987.
Revised
Rev.
" . 16.09.2007.
*** -
European
Commission
(2002)
Council
Official
Journal
of
the
European
Union.
10
from 12.01.2002.
310. *
**
European
Regulation
measures
(EC)
Commission
No
797/2004
improving
production
and
of
general
marketing
(2004)
26
Aprilie
conditions
of
Council
2004
for
apiculture
on
the
products.
**
European
Regulation
(EC)
Commission
No
(2004)
917/2004
of
29
Conumssion
April
2004
on
of
the
European
Union.
No
163
from
30.04.2004
312. *
**
European
Regulation
Comnussion
2073/2005/EC
of
(2005)
15
Conunision
November
2005
on
the
amended
European
by
Union.
Commision
No.
338
Regulation
liom
22.12.2005.
144I/2007/EC
of
313. *
** -
Honey
exposure
and
infant
botulism
(1978).
**
. 16.09.2007.
of
Food
Commodities
2uJ
(2005).
Ed..
International
Khmer
Academic/Plenum
Publishers.
New
York . U. S . A . . p g . 5 3 7 - 5 4 3 .
316. *
**
***
measures
Opinion
related
licrobiological
of
to
Public
Hazards
Conmiission
C2
Health
Directorate-General.
Opinions.
the
Scientific
Committee
Health
Honey
on
SC
WH
(2002).
&
Consumer
Directorate
Management
of
and
on
A
European
Protection
Scientific
scientific
committees,
** -
Opinion
of
the
Scientific
Panel
on
Biological
spp.
in
foodstuffs
(2005).
The
EFSA
** -
apelor
Ordinul
i
ministruhii
mediului.
presedintelui
al
Autoritatii
Consumatorilor
agriculturii.
ministruiui
Rationale
padurilor.
sanatatii
pentru
si
al
Protectia
nr.
522/798/317/11.08.2003/25.08.2003/03.09.2003
aprobarea
Normelor
privind
denumirea.
pentru
descrierea.
**
apicola.
321. *
** -
Patologie
. 03.02.2009.
pH
and
Acids
in
Honev.
The
National
Honey
**
Risk
profile:
Clostridium
botulinum
honey
for
the
New
Zealand
Food
Safety
Authority.
*** -
Scurt
istoric
al
apiculturn
Institutul
de
*** -
Shelf-life
&
stability
of
honey.
The
National