CUPRINS

Introducere ............................................................................................................2
Lista tabelelor i a figurilor
PARTEA I CONSIDERAII GENERALE
CAPITOLUL 1. DATE BIBLIOGRAFICE PRIVIND DIAREEA VIRAL
BOVIN BOALA MUCOASELOR (BVD-MD) ........................................... 3
1.1 Definiie. Istoric. Rspndire geografic i importan .................................................. 3
1.1.1. Definiie: diareea viral bovin boala mucoaselor (BVD-MD) ............. 3
1.1.2. Istoric ...................................................................................................... 3
2.1. Etiologie ........................................................................................................................... 6
2.2. Caractere epizootologice ................................................................................................. 7
2.2.1.Receptivitate ............................................................................................... 7
2.2.2. Rezistena .................................................................................................. 8
2.2.3. Sursa de infecie ....................................................................................... 8
2.3. Patogenez ...................................................................................................................... 10
2.4. Manifestri clinice .. ........................................................................................................ 12
2.5. Leziuni anatomopatologice . ........................................................................................... 13
2.6. Diagnostic ....................................................................................................................... 13
2.6.1. Determinarea direct a antigenului ......................................................... 14
2.6.2. Imunofluorescena . .................................................................................. 14
2.6.3. Imunohistochimia leucocitelor din sngele periferic ................................ 14
2.6.4. Imunohistochimia biopsiilor din piele ....................................................... 15
2.6.5. ELISA direct . ........................................................................................ 15
2.6.6. Izolarea viral . ........................................................................................ 16
2.6.7. Detecia de anticorpi ............................................................................... 17
2.6.8. Testul de neutralizare viral (VN) .......................................................... 17
2.6.9. ELISA indirect ....................................................................................... 18
2.6.10. Imunoperoxidaza i imunofluorescena . ................................................ 19
2.6.11. RT-PCR ................................................................................................. 19
2.6.12. PCR nested ........................................................................................... 21
2.6.13. TaqMan ................................................................................................. 21
2.6.14. Diferenierea tulpinilor ......................................................................... 21
2.6.15. Laptele ca prob de diagnostic . ............................................................. 22
2.6.16. Depistarea animalelor cu infecie persistent (PI) .................................. 23
2.7. Prevenire i combatere .................................................................................................. 25

2.7.1. Msurile generale .................................................................................... 25

2.7.2. Vaccinul viu modificat (MLV) ................................................................. 25
2.7.3. Vaccinurile inactivate ............................................................................. 26
2.7.4. Vaccinarea BVD este o soluie? ............................................................ 26
2.8. Combatere ...................................................................................................................... 27

CAPITOLUL 2. DESCRIEREA CADRULUI ORGANIZATORIC N

CARE S-AU EFECTUAT INVESTIGAIILE ................................................28
PARTEA a II-a CONTRIBUII PROPRII
CAPITOLUL 3. SITUAIA EPIDEMIOLOGIC LA NIVEL MONDIAL
I EUROPEAN A BVD-MD ..............................................................................31
CAPITOLUL 4. MATERIAL I METOD ..................................................... 34
4.1. Metodologia de lucru utilizat n investigaiile serologice .......................................... 34
4.2. Prepararea reagenilor .................................................................................................... 36
4.3. Procedura comun de testare pentru probele de ser, plasm i lapte .......................... 39
4.4. Metodologia de lucru utilizat n investigaiile virusologice ...................................... 40
4.4.1. Punerea n eviden a virusului BVD-MD prin tehnica de imunofluorescen
direct .......................................................................................................................... 40
4.4.2. Punerea n eviden a virusului BVD-MD prin metoda SNAP ............................. 48

CAPITOLUL 5. REZULTATE I DISCUII .................................................. 54

5.1. Rezultatele investigaiilor serologice ........................................................................... 54
5.2. Rezultatele investigaiilor virusologice ........................................................................ 57
5.2.1. Rezultatele investigaiilor virusologice utiliznd tehnica de imunofluorescen
direct .......................................................................................................................... 57

5.3. Studiu de caz: Evaluarea strii de purttor persistent pentru BVDV ntr-o ferm din
judeul Iai ............................................................................................................................ . 61

CAPITOLUL 6. CONCLUZII I RECOMANDRI ..................................... 65

6.1. Concluzii ............................................................................................................... 65
6.2. Recomandri pentru reducerea riscului de introducere a infeciei cu BVDV n
ferm ............................................................................................................................ 65

Lista tabelelor
Tabelul 1.1: Formele clinice ale Diareei virale bovine ___________________________ 12
Tabelul 4.1: Componentele kitului SNAP BVD _______________________________ 48
Tabelul 4.2: Mod de prelucrare i depozitare probe biologice folosite n cadrul testului
SNAP BVD _________________________________________________________________ 49
Tabelul 5.1: Numrul total de seruri recoltate i testate prin metode serologice (ELISA)
n perioada 2008-2010 din Moldova _______________________________________ 54
Tabelul 5.2: Rezultate obinute n urma examenelor serologice ELISA anti-BVDV n
perioada 2008-2010 _________________________________________________ _ 56
Tabelul 5.3: Proveniena animalelor testate prin reacia de imunofluorescen direct
pentru virusul BVD __________________________________________________ 57
Tabelul 5.4: Rezultatele reaciei de imunofluorescen direct pentru virusul BVD _______ 58
Tabelul 5.5: Rezultatele IFD n funcie de tipul de probe de esuturi prelevate de la animale
din gospodriile populaiilor ____________________________________________ 59
Tabelul 5.6: Rezultatele testrii folosind testul SNAP BVD ______________________ 64

Lista figurilor

Figura 1.1: Heterogenitatea genetic a pestivirusurilor n populaia gazd ______________ 6

Figura 1.2: Ciclu de replicare a BVDV _____________________________________ 10
Figura 2.1: Aspect din interiorul adpostului de la ferma Uricani ___________________ 29
Figura 3.1: Distribuia mondial a BVD-MD n perioada ianuarie-iunie 2009 ____________ 31

Figura 3.2: Distribuia mondial a BVD-MD n perioada iulie-decembrie 2009 ___________ 32

Figura 3.3: Distribuia mondial a BVD-MD n anul 2010 ____________________________ 32
Figura 3.4: Distribuia BVD-MD n Europa n anul 2009 ____________________________ 33
Figura 3.5: Distribuia BVD-MD n Europa n anul 2010 _____________________________ 33
Figura 4.1: Pregtirea serurilor _________________________________________________ 36
Figura 4.2: Incubarea i depunerea conjugatului ___________________________________ 37
Figura 4.3: Depunerea serurilor n godeuri _______________________________________ 37
Figura 4.4: Splarea cu spltorul automat TECAN _________________________________ 38
Figura 4.5: Citirea la cititorul TECAN ___________________________________________ 38
Figura 4.6: Conjugatul BVD ___________________________________________________42
Figura 4.7: Lichidul de fixare __________________________________________________ 42
Figura 4.8: Soluia de splare __________________________________________________ 42
Figura 4.9: Alegerea eantioanelor din organe _____________________________________ 43
Figura 4.10: Efectuarea frotiului prin amprentare ___________________________________ 43
Figura 4.11: Fixarea n aceton/metanol __________________________________________ 44
Figura 4.12: Uscarea frotiurilor _________________________________________________ 44
Figura 4.13: Marcarea zonelor de interes _________________________________________45
Figura 4.14: Depunerea conjugatului cu pipeta monocanal _ __________________________ 45
Figura 4.15: Splarea cu soluie tampon ___________________________ _______________ 46
Figura 4.16: Scufundarea n tamponul de splare timp de 10 minute ____ ________________ 46
Figura 4.17: Fixarea preparatelor _______________________________________________ 47
Figura 4.18: Vizualizarea la microscopul cu fluorescen

___________________________ 47

Figura 4.19: Depunerea conjugatului peste esutul auricular __________________________ 49

Figura 4.20: Omogenizarea esutului auricular n conjugat ___________________________ 50
Figura 4.21: Incubarea esutului auricular n conjugat _____ __________________________ 50

Figura 4.22: Dispozitivul SNAP BVD _________________ __________________________ 51

Figura 4.23: Depunerea i migrarea probei _____________ ___________________________ 51
Figura 4.24: Depunerea, migrarea i citirea rezultatului ___ ___________________________ 52
Figura 5.1: Numrul total de seruri recoltate i testate prin metode serologice (ELISA)
n perioada 2008-2010 din Moldova ___________________ ___________________________ 55
Figura 5.2: Rezultatele obinute n urma examenelor serologice ELISA anti-BVDV n
perioada 2008-2010 __________________________________________________________ 56
Figura 5.3: Rezultatele reaciei de imunofluorescen direct pentru virusul BVD _________ 58
Figura 5.4: Prezena de hemoragii la nivelul mucoasei intestinului subire _______________ 59
Figura 5.5: Prezena de hemoragii la nivelul mucoasei intestinului subire _______________ 60
Figura 5.6: Aspecte de la esutul de imunofluorescen direct ________________________ 60
Figura 5.7: Amplasarea geografic a fermei Uricani ________________________________ 61
Figura 5.8: Clete pentru biopsie esut auricular Ear Mark Notch ____________________ 62
Figura 5.9: Prelevare de esut auricular __________________________________________ 62
Figura 5.10: Prelevare snge din vena jugular ____________________________________ 62
Figura 5.11: Kit IDEXX SNAP BVD ____________________________________________ 63
Figura 5.12: Test rapid de diagnostic SNAP BVD __________________________________ 63
Figura 5.13: Rezultatele testrii folosind kitul IDEXX SNAP BVD ____________________ 64
Figura 5.14: Rezultatele testrii folosind testul SNAP BVD __________________________ 64

LISTA ABREVIERILOR

BVD MD: Diareea viral bovin Boala mucoaselor

CP: Citopatogen
DFE: Test direct cu anticorpi fluoresceni
ELISA: Enzyme-Linked Immunosorbent assay
IHC: Imunohistochimia
IIF: Imunofluorescen indirect
IIP: Imunoperoxidaz indirect
IPMA: Imunoperoxidaz n monostrat
IPX: Imunoperoxidaz
SN: Neutralizare seric
NCP: Necitopatogen
PI: Infecie persistent
PCR: Polymerase Chain Reaction
VN: Neutralizare viral
MLV: Vaccin viu modificat