UNIVERSITATEA DE TIINTE AGRICOLE I MEDICIN

VETERINAR ION IONESCU DE LA BRAD DIN IAI

FACULTATEA DE MEDICIN VETERINAR
SPECIALIZAREA MEDICIN VETERINAR

EPIDEMILOGIA I DIAGNOSTICUL
RINOTRAHEITEI INFECIOASE BOVINE
VULVOVAGINITA PUSTULOAS (IBR IPV)

Coordonator tiinific,
Prof. dr. Gheorghe Savua

Absolvent,
Dumitria-Roxana Frunz

IAI - 2012

Frunz Dumitria - Roxana

CUPRINS
pag.
Introducere................................

Lista tabelelor, figurilor i a abrevierilor

PARTEA I CONSIDERAII GENERALE
CAPITOLUL 1. DATE BIBLIOGRAFICE PRIVIND RINOTRAHEITA
INFECIOAS BOVIN-VULVOVAGINITA PUSTULAS (IBR-IPV) ................
Definiie. Istoric. Rspndire i importan ....................................................
1.1
Definiie ............................................................................................
1.1.1
Istoric ................................................................................................
1.1.2
Rspndire i importan ..................................................................
1.1.3
Etiologie .........................................................................................................
1.2
Caractere epidemiologice ...............................................................................
1.3
Receptivitate ....................................................................................
1.3.1
Surse de infecie ...............................................................................
1.3.2
Doza infectant .................................................................................
1.3.3
Mod de transmitere
1.3.4
Factori de receptivitate .....................................................................
1.3.5
Patogenez ......................................................................................................
1.4
Replicarea intracelular a BoHV-1 .................................................
1.4.1
Multiplicarea la poarta de intrare .....................................................
1.4.2
Diseminarea n organism ..................................................................
1.4.3
1.4.3.1 Diseminarea local ...........................................................
1.4.3.2 Diseminarea sistemic prin viremie .................................
1.4.3.3 Neuroinvazia ....................................................................
Rspunsul imun ..............................................................................................
1.5
Rolul BoHV-1 n complexul infeciilor respiratorii ale bovinelor .................
1.6
Latena i reactivarea ......................................................................................
1.7
Semne clinice ..................................................................................................
1.8
Modificri anatomopatologice ........................................................................
1.9
1.10 Diagnostic .......................................................................................................
1.10.1 Examenul serologic ..........................................................................
1.10.2 Examenul virusologic .......................................................................
1.10.3 Diagnostic diferenial .......................................................................
1.11 Profilaxie ........................................................................................................
1.12 Combatere .......................................................................................................

12
12
12
12
13
14
18
18
18
18
19
19
19
19
22
22
22
23
23
24
25
25
27
29
30
30
31
32
33
34

Frunz Dumitria - Roxana

CAPITOLUL 2. DESCRIEREA CADRULUI ORGANIZATORIC N CARE S-AU

EFECTUAT INVESTIGAIILE ................

35

PARTEA a II-a CONTRIBUII PROPRII

CAPITOLUL 3. MATERIALE I METODE ............
Scopul lucrrii ................................................................................................
3.1
Metodologia de lucru utilizat n investigaiile serologice .............................
3.2
3.2.1 Descrierea Kitului pentru detecia anticorpilor specifici virusului
rinotraheitei infecioase bovine ( BoHV-1) n ser, plasm sau lapte
bovin prin testul ELISA ......................................................................
3.2.2 Prepararea reactivilor i soluiilor de lucru pentru detecia
anticorpilor serici fa de virusul IBR ................................................
3.2.3 Protocol de testare ...............................................................................
3.2.4 Examinarea i calcularea rezultatelor .....
3.2.5 Interpretarea rezultatelor .........

39
39
40

CAPITOLUL 4. REZULTATE I DISCUII...............................................................

Fermele de bovine de la care s-au recoltat probele pentru detectarea
4.1
anticorpilor specifici anti - virusul rinotraheitei bovine (BoHV-1) ................
Rezultatele obinute la examenul serologic n anul 2007 ...............................
4.2
Rezultatele obinute la examenul serologic n anul 2008 ...............................
4.3
Rezultatele obinute la examenul serologic n anul 2009 ...............................
4.4
Rezultatele obinute la examenul serologic n anul 2010 ...............................
4.5
Rezultatele obinute la examenul serologic n anul 2011 ...............................
4.6

49

CAPITOLUL 5. CONCLUZII I RECOMANDRI....................................................

Concluzii .........................................................................................................
5.1
Recomandri pentru reducerea riscului de introducere a infeciei cu BoHV5.2
1 n efectivele de bovine..................................................................................

72
72

BIBLIOGRAFIE...............................................................................................................

74

40
43
43
47
48

51
55
58
60
62
65

73

Frunz Dumitria - Roxana

Lista tabelelor

Tabelul 1.1:

pag.
Tipurile de herpesvirusuri izolate de la bovine infectate natural .......
14

Tabelul 1.2:

Caracteristicile glicoproteinelor virusului BoHV-1 .......

Tabelul 4.1:

Numrul total de probe recoltate i testate prin metode serologice (ELISA)

17

n perioada 2007-2011 din judeele Iai, Vaslui i Galai ..............................

50

Tabelul 4.2:

Numrul total de bovine pe categorii de vrst din ferma Prute ...

51

Tabelul 4.3:

Componena pe categorii de vrst i sex a bovinelor din ferma Broteni n

perioada Ianuarie Aprilie 2012

Tabelul 4.4:

Situaia strii de sntate n ferma Brotenii n intervalul Ianuarie - Aprilie

2012 ................................................................................................................

Tabelul 4.5:

60

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. pentru detecia anticorpilor

specifici IBR-IPV, obinute n anul 2010 .......................................................

Tabelul 4.9:

58

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. pentru detecia anticorpilor

specifici IBR-IPV, obinute n anul 2009 .......

Tabelul 4.8:

55

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. pentru detecia anticorpilor

specifici IBR-IPV, obinute n anul 2008 .......................................................

Tabelul 4.7:

54

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. pentru detecia anticorpilor

specifici IBR-IPV, obinute n anul 2007 .......................................................

Tabelul 4.6:

54

62

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. pentru detecia anticorpilor

specifici IBR-IPV, obinute n judeul Iai (anul 2011) .................................

65

Tabelul 4.10: Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. pentru detecia anticorpilor

specifici IBR-IPV, obinute n judeul Vaslui (anul 2011) .............

66

Tabelul 4.11: Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. pentru detecia anticorpilor

specifici IBR-IPV, obinute n judeul Galai (anul 2011)..

68

Frunz Dumitria - Roxana

Lista figurilor

pag.
Figura 1.1:

Structura arborelui filogenetic al Familiei Herpesviridae ...............................

15

Figura 1.2:

Morfologia BoHV-1 - reprezentarea schematic a virionului .........................

15

Figura 1.3:

Structura genomic a BoHV-1 ...........

16

Figura 1.4:

Reprezentare schematic a ciclului de multiplicare viral a BoHV-1 ........

21

Figura 1.5:

Secreie nazal seroas pn la mucopurulent ...............................................

28

Figura 1.6:

Eritem la nivelul botului boala botului rou .............................................

28

Figura 1.7:

Celul infectat cu virusul IBR. Virusul se multiplic n nucleul celulei .......

29

Figura 1.8:

Cultur celular MDBK infectat - prezena plajelor de liz .........................

32

Figura 1.9:

Cattlemaster 4 - Vaccin polivalent contra rinotraheitei, diareei virotice,

parainfluenei tip 3 i virusului sinciial respirator la bovine ..........................

Figura 2.1:

Aspecte din laboratorul de serologie al Facultii de Medicin Veterinar,

Iai...................................................................................................................

Figura 2.2:

41

Prezentarea reagenilor utilizai la detectarea anticorpilor specifici virusului

rinotraheitei infecioase bovine ( BoHV-1) (detalii) .......................................

Figura 3.3:

37

Prezentarea general a kitului pentru detecia anticorpilor specifici virusului

rinotraheitei infecioase bovine ( BoHV-1) .....................................................

Figura 3.2:

36

Aspecte din cadrul Laboratorului Sanitar Veterinar (LSV), Iai - laboratorul

de virusologie ..............................................................................................

Figura 3.1:

33

Incubarea n incubatorul cu agitator i termostat pentru microplci,

Heidolph..........................................................................................................

41
44

Figura 3.4:

Splarea cu spltorul automat de microplci .................................................

44

Figura 3.5:

Depunerea soluiei substrat n plac ................................................................

45

Figura 3.6:

Citirea microplcilor la cititorul TECAN ........................................................

46

Figura 4.1:

Numrul total de probe recoltate i testate prin metode serologice (ELISA)

n perioada 2007-2011 .....................................................................................

50

Figura 4.2:

Aspecte din ferma Trzii .................................................................................

52

Figura 4.3:

Aspecte din fermele Bdeana i Pogoneti .....................................................

53

Figura 4.4:

Componena pe categorii de vrst i sex a bovinelor din ferma Broteni n

perioada Ianuarie Aprilie 2012 .....................................................................

54

Frunz Dumitria - Roxana

Figura 4.5:

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. obinute n anul 2007 ...............

Figura 4.6:

Distribuia pe hart a rezultatelor obinute n urma testrilor serologice n

anul 2007 .........................................................................................................

Figura 4.7:

56

57

Reprezentarea general a rezultatelor din 2007 n urma examenului ELISA

pentru depistarea anticorpilor specifici IBR-IPV ............................................

57

Figura 4.8:

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. obinute n anul 2008 ...............

58

Figura 4.9:

Distribuia pe hart a rezultatelor obinute n urma testrilor serologice n

anul 2008 ........................................................................................................

Figura 4.10:

59

Reprezentarea general a rezultatelor din 2008 n urma examenului ELISA

pentru depistarea anticorpilor IBR-IPV ..........................................................

59

Figura 4.11:

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. obinute n anul 2009 ...........

60

Figura 4.12:

Distribuia pe hart a rezultatelor obinute n urma testrilor serologice n

anul 2009 .........................................................................................................

Figura 4.13:

61

Reprezentarea general a rezultatelor din 2008 n urma examenului ELISA

pentru depistarea anticorpilor IBR-IPV ..........................................................

61

Figura 4.14:

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. obinute n anul 2010 ...............

62

Figura 4.15:

Distribuia pe hart a rezultatelor obinute n urma testrilor serologice n

anul 2010 .........................................................................................................

Figura 4.16:

Reprezentarea general a rezultatelor din 2010 n urma examenului ELISA

pentru depistarea anticorpilor IBR-IPV ..........................................................

Figura 4.17:

69

Distribuia pe hart a rezultatelor obinute n urma testrilor serologice n

anul 2011 .........................................................................................................

Figura 4.21:

67

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. obinute n judeul Galai (anul

2011) ................................................................................................................

Figura 4.20:

66

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. obinute n judeul Vaslui (anul

2011) ................................................................................................................

Figura 4.19:

64

Rezultatele examenului serologic E.L.I.S.A. obinute din judeul Iai (anul

2011) ................................................................................................................

Figura 4.18:

63

70

Reprezentarea general a rezultatelor din 2011 n urma examenului ELISA

pentru depistarea anticorpilor IBR-IPV ..........................................................

70

Frunz Dumitria - Roxana

Lista abrevierilor

Apo E gena lipoproteinei E;

BoHV-1 herpesvirus bovin tip 1;
CPE efect citopatic;
Ctcs - rspndirea direct celul la celul;
DICC50 doz infectant 50% pentru culturi celulare
ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay (tehnic cu enzime legate de
imunsorbeni)
GP - gospodriile populaiei
IBR Rinotraheita infecioas bovin;
IFN interferon
IPB Balanopostita pustuloas infecioas;
IPV - Vulvovaginita pustuloas infecioas;
Kpb kilogram perechi de baz;
LRT transcriere legat latent;
LSVSA Laboratorul Sanitar Veterinar i pentru Sigurana Alimentelor
MDV Virusul bolii lui Marek;
PBMC celule mononucleare din sngele periferic proaspt;
PCR polymerase chain reaction
STAT 1 - protein cheie reglatoare a cii antivirale induse de interferonii (IFN) i
;
TK timidinkinaza;
UL - secvena lung;
US - secvena scurt;
Vhs - proteina de nchidere a virionului gazd;
VZV Varicella-Zoster virus;
-TIF - factorul de transinducere de gene alfa;

Frunz Dumitria - Roxana

INTRODUCERE

Rinotraheita infecioas bovin vulvovaginita pustuloas (IBR IPV) este o boal

viral ce aparine familie Herpesviridae, genul Varicellovirus ntlnit i la noi n ar. Apariia
bolii ce ine de mai multe aspecte, care de regul sunt specifice fermelor dar i exploataiilor
nesistematizate, duce la nregistrarea de pierderi economice majore provocate de creteri ale
morbiditii, mortalitii dar i scderii ale produciei de lapte.
Rinotraheita infecioas bovin este o maladie infecioas, nalt contagioas cauzat de
Herpesvirus bovin tip 1 (BoHV-1). n afar de simptomele respiratorii, acest virus cauzeaz
conjunctivit, vulvovaginit, avorturi, encefalit i infecii sistemice generalizate. Dei datele
clinice pot sugera IBR, semnele respiratorii patologice nu sunt limitate la IBR. Astfel, este
necesar confirmarea de laborator (teste ELISA pentru detecia anticorpilor BoHV-1 n ser sau
lapte, examene histopatologice, RT-PCR, izolarea virusului pe culturi celulare, etc).
Unul dintre ultimele rapoarte europene demonstreaz o mare preocupare n acest sens.
Cifrele publicate relev foarte clar rspndirea larg a acestei infecii de-a lungul i de-a latul
ntregului continent european: Anglia, Irlanda, Lituania, Estonia, Germania, Frana, Grecia,
Italia, Cehia, Spania, Romnia fiind doar cteva din rile unde s-a diagnosticat i recunoscut
evoluia IBR.
n toate aceste ri este certificat evoluia IBR i n efectivele de vaci de lapte, punnduse astfel n practic diverse strategii de control, chiar eradicarea infeciei. Aceasta, deoarece
impactul acestei infecii asupra eficienei activitii fermei, precum i asupra sntii animalelor
este evident, ceea ce a dus n mod logic la iniierea unor programe care s duc la limitarea
pierderilor i la optimizarea gradului de sntate a efectivelor.
Marea problem cu care ne confruntm n controlul acestei infecii este aceea c virusul
IBR este un herpesvirus (BoHV-1), care determin infecii ce evolueaz de regul (atunci cnd
nu sunt letale), n infecii latente. Situaiile de stres (ftri dificile, balana energetic negativ,
condiiile improprii de microclimat), pot conduce la reactivarea infeciilor latente, animalele
purttoare infectnd celelalte animale din turm, meninnd astfel ciclul infecios din ferm.
Contactul direct ntre animale este cel mai frecvent ntlnit mecanism de transmitere a infeciei
9

Frunz Dumitria - Roxana

(mucozitile nazale provenind de la animalele infectate conin un mare numr de vibrioni).

Transmiterea indirect prin vizitatori i vehicule, dei posibil, este mai puin periculoas.
Aceste afeciuni cunosc n prezent o cretere a incidenei n sistemul intensiv, fiind alturi
de gastroenteropatii, principalele boli ntlnite la bovine i n special la tineretul taurin. n acelai
timp reprezint cauzele cele mai nsemnate ale pierderilor economice nregistrate n creterea
taurinelor.
Pierderile economice sunt realizate prin mortalitate, sacrificri precoce, scderea sporului
de cretere, cheltuieli cu tratamente, profilaxie i combatere. La aceste pierderi se adaug i
faptul c vindecarea clinic a animalelor nu echivaleaz i cu recuperarea economic, animalele
trecute prin boal rmnnd subdezvoltate i predispuse la recidive, constituind, n acelai timp,
surse de infecie permanente n adposturi.
Monitorizarea i controlul bolilor respiratorii de origine viral, limitarea sau prevenirea
rspndirii lor i eforturile de eradicare trebuie s fie prioriti sanitar-veterinare naionale.
innd cont de gradul seroprevalenei fa de BoHV-1, programele de eradicare sunt
bazate fie pe detecia i eliminarea animalelor seropozitive, fie pe vaccinarea repetat a
efectivelor infectate. Datorit imposibiliti vaccinului de a preveni infecia cu BoHV-1 i
instalarea strii de laten, programele de control fa de BoHV-1 vor dura o perioad lung de
timp pn se va ajunge la o complet eradicare a acestui virus bovin foarte bine adaptat la
bovine.

10

Frunz Dumitria - Roxana

PARTEA I CONSIDERAII GENERALE

[Type a quote from the document or

Text Box Tools tab to change the
11
formatting of the pull quote text box.]

Frunz Dumitria - Roxana

CAPITOLUL 1.
DATE BIBLIOGRAFICE PRIVIND RINOTRAHEITA INFECIOAS
BOVIN VULVOVAGINITA PUSTULOAS (IBR - IPV)
1.1 Definiie. Istoric. Rspndire geografic i importan
1.1.1 Definiie
Rinotraheita infecioas bovin-vulvovaginita pustuloas (IBR-IPV) este o boal
infectocontagioas, specific bovinelor, cu caracter epidemic i evoluie acut, caracterizat
clinic prin febr i tulburri dominant respiratorii, (inflamaia cilor respiratorii anterioare i a
mucoasei traheale), sau genitale (avorturi, infertilitate) i conjunctivite, produs de un virus
(Bovine herpesvirus 1) ncadrat n familia Herpesviridae, genul Varicellovirus. (Pop M. i colab.,
2011)
1.1.2 Istoric
n timpul secolului al XIX-lea, Buchner i Trommsdorf descriu n Germania exantemul
coital vezicular (Blaschenausschlag), o boal a bovinelor probabil cauzat de ctre
herpesvirusul bovin tip 1 (BoHV-1). Etiologia viral a fost descris n 1928 de ctre Reisinger i
Reimann, care au artat c aceast boal veneric este transmis de ctre un agent filtrabil.
Pn la nceputul anilor 1950 manifestarea infeciei cu BoHV-1 era cunoscut sub numele
de vulvovaginita pustuloas infecioas (IPV) la vaci i de balanopostita pustuloas
infecioas (IPB) la tauri, fiind atribuit doar afeciunilor de la nivelul aparatului genital. n
acest timp, o form respiratorie a aprut n efectivele de bovine din America de Nord. Aceast
boal produs de infecia BoHV-1 a fost numit rinotraheita infecioas bovin (IBR).
(Schroeder R.J. i colab., 1954) Rinotraheita infecioas bovin s-a rspndit rapid n Europa,
aceasta datorndu-se importurilor de vaci de lapte din America de Nord cu scopul de a
mbunti producia de lapte din Europa.
n Romnia, boala a fost diagnosticat de Coman (1964) i studiat clinic i
epidemiologic de Ani D. C-tin. (Perianu T. i colab., 2012)
Toate tulpinile de BoHV-1 izolate pn n prezent aparin unei singure specii virale, i
sunt clasificate n trei subtipuri: BoHV-1.1, BoHV-1.2a i BoHV-1.2b. Dei cele mai multe
12

Frunz Dumitria - Roxana

tulpini de BoHV-1.1 au fost izolate din aparatul respirator i avortoni, i tulpinile de BoHV-1.2
au fost izolate din leziunile aparatului genital, singurul criteriu distinctiv dintre cele dou tulpini
fiind analiza acidului dezoxiribonucleic viral utiliznd endonucleazele de restricie.
Subtipurile virale BoHV-1.1 i BoHV-1.2a au fost asociate cu formele severe de boal,
incluznd infectarea fetusului i avortul. Subtipul viral BoHV-1.2b nu a fost asociat cu apariia
avorturilor. (Edwards S. i colab., 1990)
BoHV-1 prezint o importan deosebit datorit pierderilor provocate de ctre boal i
de restriciile de circulaie ale animalelor. Astfel, programele de control au fost rapid dezvoltate
dup apariia IBR n efectivele din nordul Americii.
innd cont de gradul seroprevalenei fa de BoHV-1, programele de eradicare sunt
bazate fie pe detecia i eliminarea animalelor seropozitive, fie pe vaccinarea repetat a
efectivelor infectate. (Ackermann M. i colab., 2006) Datorit imposibiliti vaccinului de a
preveni infecia cu BoHV-1 i instalarea strii de laten, programele de control fa de BoHV-1
vor dura o perioad lung de timp pn se va ajunge la o complet eradicare a acestui virus foarte
bine adaptat la bovine.
1.1.3 Rspndire i importan
Virusul este prezent pe toate cele 5 continente avnd diferite specii de animale drept
gazd. Infecia este prezent peste tot, sub form enzootic, putnd lua un caracter contagios la
nivelul unui efectiv. n Europa, n rile unde IBR evolueaz, prevalena este diferit de la ar la
ar. Astfel exist ri cu prevalen redus, medie i ridicat a infeciilor cu BoHV-1.
rile cu prevalen sczut prezint un nivel de efective seropozitive cuprinse ntre 05%. Aceste ri au stabilit planuri de lupt bazndu-se pe analize serologice sistematice,
eliminarea seropozitivelor i interdicia vaccinrilor.
rile cu prevalen medie au nivel de seropozitivitate a efectivelor cuprins ntre 5-30% a
efectivelor. Este vorba de Germania care a pus n aplicare un program sanitar veterinar, n
Portugalia, Spania i Frana, aceste valori ale seropozitivitii nu sunt omogen rspndite, ele
variind de la o regiune la alta n cadrul unei ri.
rile cu prevalen ridicat au un nivel de seropozitivitate crescut i de aceea strategia de
lupt se bazeaz pe vaccinare. Din aceast categorie face parte Belgia, rile de jos, Croaia
(peste 85% animale au fost gsite seropozitive).

13

Frunz Dumitria - Roxana

1.2. Etiologie
BoHV-1 (Bovine herpesvirus-1) face parte din marea familie Herpesviridae, subfamilia
Alphaherpesvirinae, genul Varicellovirus, (fig. 1.1) care conine virusuri caracterizate printr-o
receptivitate destul de larg n privina speciilor, un ciclu scurt de replicare i abilitatea de a
induce frecvent infecii latente la nivelul neuronilor, dar nu exclusiv.
BoHV-1 este unul din cele opt herpesvirusuri izolate de pn n prezent de la bovinele
infectate natural. (tabelul 1.1).
Tabelul 1.1
Tipurile de herpesvirusuri izolate de la bovine infectate natural
Bovinele gazde
Herpesvirusul bovin tip 1
(BoHV-1)

Rinotraheita infecioas
bovin

Herpesvirusul bovin tip 2

(BoHV-2)

Mamilita infecioas bovin,

pseudo-variola bovin

Herpesvirusul bovin tip 4

(BoHV-4)

Vulvovaginita, infecii
subclinice

Herpesvirusul bovin tip 5

(BoHV-5)

Encefalita bovin

Herpesvirusul limfotrop
bovin (BHLV)

Bovinele gazde intermediare

Alcelaphineherpesvirus 1
(AIHV-1)

Febra cataral malign

Herpesvirusul ovin tip 2

(OHV-2)

Coriza gangrenoas

Herpesvirusul suin tip 1

(SuHV-1)

Boala lui Aujeszky

Toi membrii familiei Herpesviridae mpart aceeai morfologie viral bazat pe o

structur icozaedral a capsidei, n jurul crei se gsete o zon numit tegument, cu structur
globuloas apoi anvelopa care este compus din fosfolipide i glicoproteine. (fig. 1.2).

14

Frunz Dumitria - Roxana

Fig. 1.1 Structura arborelui filogenetic al Familiei Herpesviridae

(dup McGeoch i colab., 2000)
n cadrul genului Varicellovirus, BoHV-1 este nrudit dar distinct de celelalte virusuri ce
infecteaz rumegtoarele. Genomul virusului BoHV-1 este alctuit dintr-o molecul de ADN
dublucatenar structurat pe tipul genomului din clasa D. Mrimea total este de 135,3 kpb i cu
un coninut de 72% n guanin-citozin ce codeaz circa 70 de gene.

Fig. 1.2 Morfologia BoHV-1 - reprezentarea schematic a virionului (Thiry E. 2000)

15

Frunz Dumitria - Roxana

Clasa genomic D cuprinde dou secvene unice, una lung UL de 140 kpb i una scurt
US de 10 kpb, flancate de dou zone repetitive (IR i TR, 11 kpb). n timpul replicrii ADN-ului
ambele regiuni, U L i US, pot s realizeze micri de flip-flop independente una fa de cealalt,
genernd constant 4 forme izomerice ale genomului viral. Totui, un proces de selecie
favorizeaz secvena UL n orientarea iniial la nivelul de clivaj al ADN concatemeric, prin
urmare secvena UL este predominant fix ntr-o singur orientare n cadrul virionului BoHV-1
(fig. 1.3).

Fig. 1.3 Structura genomic a BoHV-1

(dup Muylken B. i colab., 2007)
A. Cele dou secvene unice: UL (secvena lung), US (secvena scurt);
B. Reprezentare schematic a primelor doi promotori implicai n transcripie;
C. Localizarea regiunii virusului BoHV-1 care este transcris activ n perioada de laten.

Proteinele virale codate de BoHV-1 cunoscute pn n prezent sunt n numr de 10

glicoproteine (gB, gC, gD, gE, gI, gH, gL, gG, gK i gM), numeroase enzime (ribonucleotidreductaza, ADN-polimeraza i dATP-aza) i proteine regulatoare. O parte dintre glicoproteine i
anume 6, se gsesc la nivelul UL: gK (UL53), gC (UL44), gB (UL 27), gH (UL22), gH (UL10),
gL (UL1), iar restul de 4 se gsesc la nivelul US: gG (UL4), gD (UL6), gI (US7) i gE (US8).
Glicoproteinele au numeroase funcii, fiind responsabile de ataarea i penetrarea
virusului n celul, de maturarea i ieirea virusului din celula infectat i progresia virusului de
la o celul la alta. Glicoproteinele joac un rol important n rspunsul imunitar (umoral i celular)
al gazdei. Din acest punct de vedere se disting 2 tipuri de glicoproteine: majore i minore.
(tabelul 1.2)
Glicoproteinele majore (gB, gC i gD) prezint proprieti imunogenice fcndu-le
componente eseniale ale vaccinurilor. n condiii selective, funcia gD BoHV-1 n rspndirea
direct de la o celul la celul i intrare, poate fi compensat de ctre mutaiile n alte proteine
virale. (Liang X. i colab., 1995)
16

Frunz Dumitria - Roxana

Glicoproteinele minore sunt considerate ca neeseniale deoarece nu sunt implicate n

multiplicarea viral. Deleia unei gene ce codeaz pentru o glicoprotein minor nu va afecta n
nici un fel ciclul de multiplicare viral. Aceast caracteristic este utilizat la fabricarea
vaccinurilor marcate care permit identificarea animalelor vaccinate de animalele infectate cu un
virus slbatic.
Glicoproteina gD este considerat esenial n BoHV-1, dar nu este codificat de
Varicella-Zoster Virus (VZV), i nu este esenial n virusul bolii lui Marek (MDV). Dimpotriv,
gE este cunoscut ca o protein neesenial n BoHV-1, n timp ce n VZV este esenial
(Mallory S. i colab., 1998).
Tabelul 1.2.
Caracteristicile glicoproteinelor virusului BoHV-1
(dup Thiry E., 2000)
Nume

Gen

Denumire
anterioar

Esenial

Importan

gB

UL27

gI

esenial

major

gC

UL44

gIII

nu

major

gD

US6

gIV

esenial

major

gE

US8

nu

minor

gG

US4

gX

nu

minor

gH

UL22

gII

esenial

minor

gI

US

nu

gK

UL53

esenial

gL

UL1

esenial

gM

UL10

nu

17

Rol
Particip la ptrunderea n celula gazd i
la diseminarea virionului de la o celul la
celul
Rol n mecanismul de ataare la celula
gazd, dar fr influen asupra virulenei
virusului
Particip la ataare i ptrunderea n
celul, dar i la propagarea din celul n
celul
Formeaz un complex cu glicoproteina gI
care ar putea fi implicat n transportul
interneuronal i la propagarea virusului
Particip la propagarea virusului ,
meninnd jonciunea intercelular ,
independent de gE
Particip la penetrarea celulei gazd i la
propagare, la transportul intracelular i
ancorarea gL la membrana celular
Asociat cu gE particip la propagarea
virusului
Intervine n transportul intracelular ctre
suprafaa celulei
Asociat la gH formeaz complexul
gH/gL
Influeneaz fluiditatea membranar i
favorizeaz intrarea i ieirea virusului
din celula gazd.

Frunz Dumitria - Roxana

1.3 Caractere epidemiologice

Studiile epidemiologice au artat c la infecia cu BoHV-1 sunt receptive mai ales
tineretul i animalele adulte din efectivele mari. Sursele de infecie sunt reprezentate de
animalele infectate cu sau fr semne clinice, care elimin virusul prin secreiile respiratorii,
genitale i oculare. Jetajul reprezint sursa major de infecie, virusul fiind prezent n mucusul
nazal la 24 de ore dup infecie. Sunt receptive numai bovinele, mai ales tineretul i animalele
adulte din unitile cu efective mari.
1.3.1 Receptivitate
Sunt receptive toate bovinele, inclusiv cele vaccinate sau aflate sub imunitatea colostral
pot fi infectate cu virusul BoHV-1, ce poate rmne sub form de stare latent sau poate fi
excretat. i alte specii sunt de asemenea susceptibile la infecie.
Caprinele sunt sensibile la infecia cu BoHV-1. Virusul se multiplic i este excretat ntre
a 5-13-a zi de la infecie, animalul producnd anticorpi specifici. Ovinele sunt de asemenea
sensibile la infecia cu BoHV-1. Virusul se multiplic fiind excretat ntre a 8-15-a zi animalul
producnd anticorpi specifici. Se poate instala i starea de laten, virusul putnd fi reexcretat. Se
pare c nu exist contaminare ntre oi deoarece doza infectant trebuie s fie destul de mare. n
acest fel oile pot juca doar rol de rezervor de virus pentru bovine.
Rumegtoarele slbatice: numeroase specii slbatice sunt sensibile la infecia cu BoHV-1
n funcie de continentul luat n considerare. n Europa de exemplu: cervidele (cerb, cprioar,
capr de munte).
Virusul poate s persiste mai multe zile n mediul exterior i poate fi prezent pe diferite
suporturi precum: mbrcmintea ngrijitorilor, n spaiile de furajare, adptori, furaje,
materialul de contenie. Virusul persist mai muli ani n azot lichid de exemplu n sperm i
embrioni congelai. (Van Schaik G. i colab., 2001)
1.3.2 Surse de infecie
n forma respiratorie virusul este prezent din abunden n jetajul nazal, secreiile respiratorii
i oculare, pn la 1010 DICC50/g mucus, la animalele sensibile n timpul fazei de primoinfecie.
n forma genital, virusul este prezent din abunden n secreiile genitale, pn la 1011 DICC50/g
mucus n cazul primoinfeciei. Virusul este prezent de asemenea n sperma taurilor infectai, la
nivelul lichidului seminal n doz de 104 DICC50/g i absorbit la suprafaa celulelor reproductive
i embrionilor.
1.3.3 Doza infectant
Doza minimal infectant este foarte sczut fiind estimat la 3,2 DICC50. Astfel o
excreie slab de virus reprezint un potenial periculos pentru contaminarea altor animale. Doza
necesar pentru producerea unei infecii prin nsmnare artificial este mult mai mare , fiind de
18

Frunz Dumitria - Roxana

aproximativ 200 DICC50.

1.3.4 Mod de transmitere
Transmiterea direct este cea mai frecvent, producndu-se prin contactul direct ntre
dou bovine. Astfel ntr-un adpost contaminarea bovinelor se face din aproape n aproape pe
cale nazal sau conjunctival. Transmiterea bolii ntre dou efective se realizeaz de obicei prin
introducerea unui animal infectat. Contaminarea pe cale genital prin intermediul unui taur
infectat poate avea loc atunci cnd se realizeaz monta natural. Transmiterea direct la fetus
poate avea loc n timpul viremiei tranzitorii care apare la vac n cazul primoinfeciei conducnd
n general la moartea fetusului.
Transmiterea indirect se poate realiza la distan prin aerosoli cu particule infectate
(mucus nazal) n timpul tusei sau a strnutului. Transmiterea se poate face de asemenea prin
contact cu diverse suporturi contaminate cu mucus care conine doze crescute de virus:
mbrcmintea ngrijitorilor, adptori, iesle, material de contenie. Transmiterea indirect mai
poate avea loc fie prin nsmnri artificiale i transfer de embrioni.
1.3.5 Factori de receptivitate
Vrsta nu este un factor de sensibilitate la infecie; totui nou-nscuii fr anticorpi
maternali sunt mai sever afectai. Rasa nu este un factor care influeneaz receptivitatea la
bovine. Stresul unui animal influeneaz rspunsul su fa de infecie: un viel supus unui stres
i apoi infectat cu BoHV-1 prezint semne clinice, o febr mai puin intens i o excreiei viral
mai tardiv. (Thiry E., 2000)

1.4 Patogenez
Poarta natural de ptrundere a virusului BoHV-1 este membrana mucoaselor de la
nivelul segmentelor superioare aparatului respirator i la nivelul aparatului genital. Infecia mai
poate fi transmis i prin inocularea la nivelul epiteliului conjunctival. Calea principal de
transmitere este ns contactul direct dintre animale, totui s-a demonstrat i transmiterea pe cale
aerului prin intermediul aerosolilor, ns doar pe distane mici (Mars M.H. i colab., 2000).
Transmiterea genital a virusului necesit contactul direct din timpul montei naturale. De
asemenea virusul se transmite i prin intermediul spermei de la taurii infectai datorit capaciti
criogenice a virusului.
1.4.1 Replicarea intracelular a BoHV-1
Infecia cu BoHV-1 a celulelor int este iniiat de un proces care conine trei etapei.
Prima interaciune implic o afinitate sczut de ataare a virusului ntre gB i/sau gC la
structurile suprafeei celulare. Aceasta este urmat de stabilirea unei legturi ntre gB a virusului
BoHV-1 i receptorii celulari specifici. O structur aflat n prelungirea receptorilor a fost
19

Frunz Dumitria - Roxana

identificat ca potenial int a interaciunii gD. Cu toate acestea acest proces include cel puin 4
clase de molecule, dar ns doar nectina-1 (un membru al familie imunoglobulinelor), a fost
demonstrat c servete ca receptor pentru ptrunderea lui BoHV-1. Dup aceast interaciune
dintre gD i receptori celulari, penetrarea virusului are loc prin fuziunea anvelopei virale cu
membrana plasmatic. Acest proces important necesit cel puin implicarea a 4 glicoproteine
BoHV-1, gD, gB, i heterodimerul format de gH i gL (Meyer G. i colab., 1998).
Odat ce ei au intrat n citosolul celulei, particula viral trebuie transportat utiliznd un
complex motor dinein asociat microtubulilor ctre porii nucleului pentru a se permite eliberarea
ADN-ului viral. Acest transport citoplasmic centripet n asociaie cu microtubulii, a fost
demonstrat n celulele infectate HSV-1 i este aproape n totalitate conservat la
alfaherpesvirusuri.(fig. 1.5)
n timp ce particulele virale sunt transportate ctre nucleu, proteinele din tegumentul
virusului sunt mprtiate n citosolul celulei unde pot avea un rol important n primele momente
ale infeciei virale, deoarece ele sunt primele care interacioneaz cu mediul intracelular. Dintre
cele mai importante proteine ale tegumentului viral sunt: VP8, VP16. (fig. 1.4)
VP8 este proteina nveliului cea mai mare a BoHV-1. Ea este localizat n nucleu
imediat dup infecie datorit unui semnal al localizrii nucleare. Cu toate acestea, rolul exact al
VP8 n infecia viral este nc neclar. Proteina nveliului codificat de UL41 este cunoscut
sub numele de proteina de nchidere a virionului gazd (vhs) a BoHV-1. (Hinkley S. i colab.,
2000)
Alt protein de nveli important este VP16 (virion protein 16) cunoscut sub numele
de -TIF BoHV-1 (factorul de transinducere de gene alfa). Este responsabil de iniierea
expresiei genei BoHV-1 prin transactivarea genelor (gene alfa) imediat. Expresia genelor BoHV1 este reglat temporar n timpul infeciei.
Cascada expresiei genice includ trei expresii cinetice de gene, care dau natere succesiv
ARN-ului (IE), precoce (E) i tardiv (L). (Wirth U.V. i colab, 1989) Ele codific proteinele
implicate n principal n reglarea ciclului viral, n replicarea ADN-ului viral i n morfogeneza de
noi virioni.
ADN viral este eliberat n nucleul celulei unde debuteaz transcripia sa, de ctre ARN
polimeraza celular sub controlul factorilor virali. Expresia genelor virale se face n cascad ca i
la celelalte herpesvirusuri.

20

Frunz Dumitria - Roxana

Fig. 1.4 Reprezentare schematic a ciclului de multiplicare viral a BoHV-1

(dup Thiry E., 2000)
Legend:
np - porul nucleului; im - faa intern a membranei nucleare; om - faa extern a membranei
nucleare; npc- por nucleara complet; dl - protein antifusion; sp - spikes, te - tegument.
Prima faz, care nu necesit nici o sintez proteic de nuovo se efectueaz imediat dup
eliberarea genomului viral. Se produc proteine precoce-imediate (IE-immediate earley) numite
de asemenea proteine alfa. Proteinele IE au rol strict esenial de proteine regulatoare. n cadrul
acestei grupri au fost puse n eviden 7 proteine cu greutate molecular cuprins ntre 35 i 180
kDa.
A doua faz are loc dup sinteza proteinelor IE i generarea de proteine precoce (Eearly) numite i proteine beta. n cadrul grupului de proteine E se gsesc proteine regulatoare, dar
mai ales proteine implicate n replicarea genomului, timidinkinaza (TK) i ADN polimeraza. TK
nu este o protein esenial pentru multiplicarea viral dar deleia genei care codeaz TK reduce
virulena virusului BoHV-1 n vivo. Gena care codeaz ADN polimeraza este localizat n
regiunea UL a genomului viral.
A treia faza nu se efectueaz dect n prezena ADN viral. Pe parcursul acestei faze sunt
produse proteinele tardive (L-late) care sunt denumite i proteinele gamma. Proteinele L sunt
proteine structurale precum proteinele structurale ale tegumentului (VP-8, VP-16) sau
glicoproteina (gB). Componentele structurale produse de gena L sunt necesare pentru sinteza
unei noi particule virale.
21

Frunz Dumitria - Roxana

Asamblarea virionului este un proces complicat. Iniial proteinele tegumentului formeaz

un schelet pentru a crea o particul intermediar n interiorul nucleului. n timpul maturrii
proteina intern a scheletului este clivat i deplasat din interiorul capsidei n timp ce genomul
ADN este plisat. Concatemerii cu greutate molecular mare sunt clivai n uniti de lanuri
genomice printr-un mecanism complex, care este n strns legtur cu inseria ADN-ului n
capsida abia format.
Virionul anvelopat iese din celula infectat prin exocitoz (utiliznd vezicule ale
aparatului Golgi ale celulei).

1.4.2 Multiplicarea la poarta de intrare

Odat ptruns la nivelul epiteliului celular, BoHV-1 pune n funciune ciclul litic de
replicare viral. Acesta corespunde expresiei genelor virale i duce att la producerea de noi
particule virale ct i la moartea celulei. Efectul citopatic al virusului BoHV-1 (CPE) se
caracterizeaz prin balonizarea celulei infectate i apariia de incluzii intracelulare. Moartea
celular rezult n urma a celor dou procese i anume: necroza i apoptoza, procese rezultate n
urma ciclului de multiplicare viral. n cazul celulelor infectate cu BoHV-1, sinteza proteinelor
celulare este oprit parial de ctre proteinele din tegumentul viral.
Dup producerea efectului citopatic, BoHV-1 duce i la scderea capacitii reparatorii a
epiteliului respirator prin inhibarea migrrii celulelor epiteliale n zonele lezate. n cadrul unui
model in vitro, infecia BoHV-1 a avut efecte marcante asupra interaciunii celulelor epiteliale
bronice cu matricea extracelular, scznd astfel migrarea celulei. (Spurzem J.R. i colab.,
1995)
1.4.3 Diseminarea n organism
Infecia BoHV-1 la poarta natural de intrare rezult n producia masiv de virus. Noi
virui descendeni se desprind n mucusul nazal la titruri de excreie ridicate i sunt responsabili
pentru difuzarea rapid a infeciei n cadrul unei turme de vite.
Raportul reproducie de baz (R0) este o valoare de prag care descrie dinamica infeciilor
ntr-o populaie. Acest parametru este definit ca numrul mediu de cazuri secundare generate de
ctre un caz primar ntr-o ntreag populaie susceptibil de densitate diferit. n condiii
experimentale, R0 a fost estimat s fie de cel puin 7 ntr-o turm de vite de lapte. Noii
descendeni, de asemenea, se rspndesc n animalul infectat folosind diseminarea local,
rspndirea sistemic prin viremie i eventual neuroinvazia. (Engels M., Ackermann M., 1996)
1.4.3.1 Diseminarea local
Rspndirea noii generaii de BoHV-1 n mucoasa infectat se poate realiza prin dou
moduri diferite. n primul rnd, virusurile eliberate n mediul extracelular sunt particule complet
22

Frunz Dumitria - Roxana

ncapsulate capabile s interacioneze cu receptorii celulelor sensibile. n caz contrar, particulele

virale se pot rspndi direct de la o celul infectat la celulele nvecinate neinfectate (rspndirea
direct celul la celul, ctcs). Glicoproteinele gB, gD i gH/gL sunt necesare pentru ctcs, ntruct
gG i heterodimerul format de gI/gE promoveaz ctcs-urile directe n prototipul herpesvirusurilor
HSV-1. (Trapp S. i colab., 2003)
1.4.3.2 Rspndirea sistemic prin viremie
BoHV-1 se poate rspndi n gazd prin viremie, dobndind acces la o gam mai larg de
esuturi i organe i cauznd alte manifestri clinice, ca de exemplu avort la vacile gestante i
infecii sistemice la vieii seronegativi foarte tineri. n urma unei inoculri intranazale a unei
tulpini BoHV-1 foarte virulent, virusul a fost izolat dup cteva zile din serurile de viei
infectai.
Dup citoliza celulelor infectate virioni trec n mediul interstiial i de aici n snge. Se
declaneaz o stare de viremie care explic localizarea secundar a infeciei la nivelul organelor
int, precum tubul digestiv, ovare, glanda mamar, fetus, i o infecie generalizat la vieii noi
nscui. Virioni pot s fie transportai n snge cu ajutorul limfocitelor, absorbii la suprafaa
acestora, i cu ajutorul monocitelor n care pot efectua o replicare limitat dup care s se
detaeze.
1.4.3.3 Neuroinvazia
Pe parcursul replicrii primare a virusului care are loc pe suprafeele mucoaselor, BoHV1 se consider a infecta neuronii prin intermediul terminaiilor nervoase din mucoase i urc spre
sistemul nervos central (SNC). Mucoasa oronazofaringeal este inervat de ase nervi majori ai
creierului, din care nervul olfactiv i nervul trigemen suplineaz mucoasa nazal. Prile rostrale
ale cavitii nazale sunt inervate doar de ctre nervul trigemen, ntruct epiteliul olfactiv n
prile caudale ale cavitii nazale conine att terminaii nervoase olfactive ct i trigeminale.
(Gerdts V. i colab., 2000) Aceste dou rute (olfactiv i trigemen) reprezint cile majore a
neuroinvaziei virale ctre SNC folosite de dou alphaherpesvirusuri neurotrope referitoare la
BoHV-1: BoHV-5 i PrV. Din contr, BoHV-1 utilizeaz de preferin numai calea trigemenului.
Mai mult dect att, neuroinvazia BoHV-1, de obicei, nu merge mai departe de primul
neuron situat n ganglionul trigemenului unde infecia latent este stabilit. Cu toate acestea
BoHV-1 a fost sporadic izolat de la bovinele cu tulburri ale sistemului nervos central. Unele
dintre aceste tulpini izolate s-au dovedit a fi responsabile de meningoencefalita acut care apare
la bovinele adulte. (Roels S., i colab., 2000)
Aceste cazuri sporadice reflect probabil susceptibilitile individuale ale gazdei la
infecia SNC, mai puin dect modificrile tulpinei BoHV-1 care au dat natere la o neuroinvazie
crescut i/sau neurovirule. O serie de factori ai gazdei pot fi responsabili de sensibilitatea
23

Frunz Dumitria - Roxana

crescut la infecia SNC a BoHV-1, aa cum este sugerat de ctre datele recent obinute privind
cazurile sporadice de encefalit cauzate de HSV la oameni. De exemplu, nou-nscuii care dein
deficiene homozigote n STAT 1, o protein cheie reglatoare a cii antivirale induse de
interferonii (IFN) i , s-au dovedit a fi foarte sensibili la infecia letal a SNC a
herpesvirusului. n caz contrar, gena apolipoproteinei E (Apo E) a fost, de asemenea, legat de
infeciile SNC umane. Trei alele comune ale Apo E exist n populaia uman (Apo E2, E3 i
E4); dintre ele, Apo E4 este mai puin frecvent. Infecia de oricei transgenici care exprim alela
uman ApoE4, a artat o cretere sever a concentraiei de HSV-1 n creier, comparativ cu
oriceii de tip slbatic, oriceii knock-mout n genele Apo E i oriceii transgenici exprim alela
Apo E3. Cu toate acestea, nu au fost diferene semnificative la nivelurile virale gsite n organele
periferice. Apo E4 pare a facilita intrarea i/sau rspndirea HSV-1 n creier, mult mai eficient
dect E3. Se poate postula ntr-un mod rezonabil faptul c astfel de tipuri de alele sensibile poate
explica neuroinvazia i/sau neurovirulena BoHV-1 la bovinele individuale.

1.5 Rspunsul imun

n urma infeciei primare, reaciile inflamatorii nespecifice i reaciile celulare sunt
primele rspunsuri la infecia BoHV-1. Unele din mecanismele non-specifice sunt constitutive,
precum activarea complementului n timp ce altele, precum IFN, sunt induse de replicarea
virusului. Producia de citokine timpurii conduce la recrutarea i activarea de celule diferite, cum
ar fi macrofagele, neutrofilele polimorfonucleare i limfocitele mari granulare (n calitate de
celule Natural Killer la bovine). Aceti efectori consolideaz primul val antiviral de citokine
secretoare n epiteliul infectat i ucid celulele infectate de virus. Activarea nespecific a celulelor
imune sunt, de asemenea, eseniale n iniierea i reglementarea rspunsului specific imun a
BoHV-1.
Imunitatea specific celular este detectat n a cincea zi post infecie (pi) i atinge un
nivel maxim la 7-10 zile pi. n general, coincide cu vindecarea manifestrilor clinice. Limfocitele
T helper specifice mediaz liza celulelor infectate a BoHV-1 prin activarea macrofagelor i
celulelor NK, prin secreia IFN- i IL2, i prin angajarea i promovarea proliferrii limfocitelor
T citotoxice specifice.
Imunitatea umoral specific devine detectabil din ziua 10 pi. Chiar dac anticorpii par a
fi mai puin importani n recuperarea infeciei primare, ei particip probabil la clearance-ul
infeciei BoHV-1 prin neutralizarea particulelor celulei virale libere, prevenind astfel rspndirea
extracelular a infeciei i medierea citotoxicitii celulare dependent de anticorpi. n schimb,
rspunsul anticorpilor este de importan critic n prevenirea infeciilor secundare i pentru
limitarea consecinelor de reactivare. Mai mult, imunitatea pasiv oferit de anticorpii colostrali
24

Frunz Dumitria - Roxana

BoHV-1 de la vacile imune BoHV-1 este pe deplin eficient s protejeze nou-nscutul mpotriva
bolii sistemice i letale. (Mechor G.D. i colab., 1987)

1.6 Rolul BoHV-1 n complexul infeciilor respiratorii ale bovinelor

Complexul infeciilor respiratorii ale bovinelor este o boal polifactorial cauzat de
multiple practici duntoare de management i interaciuni dintre agenii patogeni virali i
bacterieni. Observaiile experimentale ale probelor i domeniului, au sprijinit implicarea infeciei
BoHV-1 n promovarea suprainfeciilor bacteriene conducnd la bronhopneumonie sever.
Modificrile induse de BoHV-1 pot aciona la trei niveluri de rspunsuri fiziologice la
agenii patogeni:
Leziunile epiteliului cauzate de infecia BoHV-1 reduce clearance-ul mucoasei datorit
secreiei de mucus i a activitii ciliare.
Infeciile BoHV-1 pot diminua activitile macrofagelor alveolare i neutrofilelor
polimorfonucleare. Acestea pot provoca, de asemenea, o scdere selectiv a populaiilor
de limfocite CD4+, modificnd astfel traficul de limfocite. (Warren L.M. i colab., 1996)
Un alt posibil mecanism care ar putea explica BoHV-1/sinergism bacterian este
reprezentat de expunerea leucocitelor la citokinele inflamatorii eliberate ca rspuns la
infecia BoHV-1. (Leite F. i colab., 2004)

1.7 Latena i reactivarea

Dup infecia primar cu BoHV-1, bovinele devin purttori lateni. BoHV-1 stabilete pe
tot parcursul vieii latena n neuronii senzoriali ai sistemului nervos central periferic dup
replicarea n epiteliul mucoasei. Prin analogie la omologii herpesvirusului HSV i PrV, BoH-1 se
consider c penetreaz extremitatea nervilor senzitivi distribuii la nivelul epiteliul infectat. Este
apoi transportat de-a lungul microtubulilor axonilor pentru a ajunge la corpul neuronului n
ganglionul nervos. Dei locul principal de laten este n neuronii ganglionari, exist dovada c
latena i reactivarea au loc n cadrul centrelor germinale a amigdalelor faringiene. (Winkler
M.T. i colab., 2000)
Cascada de transcriere bine organizat a genelor alfa, beta i gamma a virusului duce la
activarea caspazelor i p53 rezultate n moartea programat a celulelor i eliberarea eficient a
virionului n celulele permisive. Gena BICP0 IE joac un rol esenial n aceast faz litic. Din
contr, n neuronii infectai latent, numai regiunea BoHV-1 care conine transcrierea legat
latent (LRT) este exprimat, conducnd la inhibarea ciclului litic al virusului i inducerea unui
strat antiapoptotic al celulelor infectate. Aceast observaie sugereaz c secvenele de ADN n
promotorul LR sunt reglementate n mod pozitiv de factorii tip ai celulelor neuronale. Acest
25

Frunz Dumitria - Roxana

lucru este evideniat de ctre o localizare diferit a locului de start pentru ARN-ul LR n infecia
litic i infecia latent, n ganglionul trigeminal. O fraciune din transcrierea LR a BoHV-1 este
polimerizat i mbinat alterativ n celulele infectate latent, sugernd c aceste transcrieri sunt
traduse n mai multe produse LR (LRP).
Diferite funcii au fost atribuite LRT: inhibarea apoptozei, inhibarea intrrii n faza S i
inhibarea expresiei BICP0. Expresia LRP este necesar pentru inhibarea apoptozei, dar expresia
de proteine nu pare s fie necesar pentru inhibarea creterii celulelor sau expresiei BICP0. Mai
multe studii in vivo au fost efectuate pentru a investiga rolul LRT i LRP n cursul infeciilor
productive i latente. Infecia vieilor cu mutante non sens LRT, a artat o imagine clinic mai
puin sever, n comparaie cu infecia cu BoHV-1 de tip slbatic sau salvat LRT. Mutantele LRT
au fost revrsate la rate similare din cavitatea nazal n timpul infeciei primare. n neuronii
infectai latent, nivelurile reduse ale ADN-ului viral au fost depistate, dar nivelurile mai ridicate
ale apoptozei au avut loc n ganglionul trigeminal, la sfritul infeciei acute. Mutantele LRT ale
BoHV-1 nu au fost reexcretate n urma tratamentului de reactivare cu dexametazon, ceea ce a
indus reactivarea i reexcreia n toate infeciile de tip slbatic a vieilor sau LRT virusului salvat.
Aceste rezultate indic faptul c gena LR este necesar pentru ciclul laten-reactivare al
BoHV-1. Este evident demonstrat c, gena LR protejeaz neuronii de la moartea celulelor n
timpul instituirii latenei. Inhibarea morii celulelor ar fi, de asemenea, necesar pentru a menine
latena prin meninerea n via a neuronilor infectai latent. Nici un mecanism explic n prezent
rolul genei LR n reactivarea i/sau reexcreia BoHV-1.
Prin analogie cu observaiile obinute n latenta i reactivarea HSV, sistemul imunitar se
crede c ar juca un rol n reglementarea ciclului laten-reactivare al BoHV-1. n modelul
oarecelui, latena HSV i limfocitele citotoxice T productoare de IFN- s-au dovedit a fi
capabile de a preveni reactivarea latenei n neuronii senzoriali. Un alt studiu a concluzionat c
IFN- i - acioneaz ca factori de control ale leziunilor herpetice recurente.
Reactivarea latenei poate aprea dup o expunere la stimulente naturale sau tratamentul
cu corticoizi culminnd cu transmiterea virusului recurent la animalele neinfectate, n general
fr semne clinice. Odat reactivat n neuronii din ganglionul trigeminal, BoHV-1 iniiaz un nou
ciclu de replicare. Reactivarea indus cu Dexametazon, efectuat pe iepurii infectai latent, a
artat c doar o mic parte din neuronii infectai latent au trecut cu succes de reactivare i acel
AND viral specific al infeciei productive BoHV-1 a fost detectat mai devreme de 18 ore post
tratament. Viruii descendeni, se crede c, ajung la locul primar de intrare prin intermediul cii
axonale. La nivelul acestui epiteliu mucozal, amplificarea virusului va da sau nu natere la
reexcreia BoHV-1.

26

Frunz Dumitria - Roxana

Reexcreia virusului este influenat de doi factori: statusul preimun i fenotipul viruilor
descendeni. Rspunsul imun primar dobndit n urma expunerii naturale la BoHV-1 sau la o
schem de vaccinare este n msur s controleze cu succes reexcreia oricrui transportor latent.
Rspunsul imun secundar potenat de stimuli de reactivare succesivi este de asemenea eficient la
inhibarea reexcreiei virusului. Prin urmare, stimulii de reactivare care apar n primele dou luni
de la infecia primar nu pot s activeze reexcreia virusului.
Fenotipul viruilor descendeni influeneaz asupra capacitii unui virus de fi reexcretat
sau nu. Experimentele recente au demonstrat c mutanta gC-gE- nul a BoHV-1 stabilete
latena, dar nu este reexcretat n urma unui tratament de reactivare. (Whetstone C.A. i colab.,
1992)

1.8 Semnele clinice

Severitatea bolii este influenat de mai muli factori cum ar fi virulena tulpinii BoHV-1,
factori de rezisten a gazdei, n special vrsta i potenialul de infecii bacteriene curente.
Infeciile subclinice BoHV-1 sunt obinuite. Mai multe tulpini BoHV-1 afieaz o capacitate
slab de a induce semne clinice i au fost clasificate ca tulpini slab virulente ntr-un experiment
comparativ al virulenei.
n caz contrar, aceste tablouri clinice discrete pot fi, de asemenea, explicate de ctre
infecia primar a vieilor imuni pasivi n rile n care BoHV-1 este endemic. Imunitatea
colostral este cunoscut s protejeze n mod eficient animalele infectate de la semnele clinice.
(Lemaire M. i colab., 2000)
Dup inocularea intranazal a vieilor seronegativi, febra mare se msoar pentru 4-5 zile
(maxim 41C) i poate fi nsoit de apatie i anorexie.
Vacile de lapte prezint o scdere semnificativ a laptelui n aceast perioad. Dup 2-3
zile de incubaie, semnele respiratorii i oculare sunt observate. Acestea corespund cu rspunsul
inflamator i daunele epiteliului cauzate de BoHV-1 la locul de replicare primar. Ele constau n
aspectul rou al mucoasei nazale, secreie nazal seroas pn la mucopurulent, (fig. 1.5, fig.
1.6) i n cazurile severe, respiraie grea la inspiraie (obstrucie traheal cauzat de resturile
necrotice n lumenul traheal) i tuse.
Examinarea endoscopic a relevat un aspect rou al epiteliului mucoaselor faringeale i
traheale, prezena mai multor focare necrotice, cu celule moarte ale epiteliului mucoaselor
nglobate n exsudat fibrinos.
Semnele oculare, cum ar fi conjunctivita i secreia ocular mucopurulent nu sunt
neobinuite.

27

Frunz Dumitria - Roxana

Fig.1.5 Secreie nazal seroas pn la

mucopurulent
(http://www.bva.co.uk/public/documents/0
7congress_IBR_graham_pp.pdf)

Fig. 1.6 Eritem la nivelul botului boala

botului rou.
(http://quizlet.com/2914298/)

Avortul este o consecin a infeciei respiratorii BoHV-1 a vacilor seronegative. n mod

natural avorturile BoHV-1 sunt de obicei observate la 4-8 luni de gestaie, dei inocularea
parental a virusului experimental la juninci nainte de 3 luni induce moartea embrionar.
Utiliznd rspndirea sistemic prin viremie, BoHV-1 trebuie s traverseze bariera maternofetal pentru a produce infecii letale la fetui. Traseul BoHV-1 de la placent la ft nu este
cunoscut, dar, din moment ce leziunile virale sunt observate n mod constant n ficatul fetal,
rspndirea hematogen apare cel mai probabil prin intermediul venei ombilicale.
Perioada de incubare dintre inocularea BoHV-1 i avort este de 15 - 65 zile. Dei
leziunile sunt observate att n placent ct i la nivelul mai multor organe fetale, s-a sugerat c
degenerescena placentar ar fi secundar morii fetale indus de BoHV-1. Aa cum s-a artat
anterior, numai tulpinile BoHV-1.1 i BoHV-1.2a au fost pn acum asociate cu potenial
abortigen. (Miller J.M. i colab, 1991)
Vieii neonatali pot prezenta infecie multisistemic n urma infeciei congenitale nainte
de natere sau infeciei timpurii postnatale a BoHV-1. Vieii privai de colostru sunt mai expui
riscului. Salivaia excesiv i diareea sunt consecutive replicrii BoHV-1 n epiteliul organelor
digestive care nu sunt inte comune pentru BoHV-1. Mai multe leziuni sunt observate n tractusul
digestiv, precum glosit, esofagit, i ruminit necrozant acut. Rezultatul este fatal n decurs de
4- 5 zile; vieii mor ntr-o stare muribund.
Forma genital a BoHV-1 se transmite de obicei la mperechere. Denumirile date bolilor
care afecteaz vaca (vulvovaginita pustuloas infecioas, IPV) i taurul (balanopostita
pustuloas infecioas, IPB) descriu clar tablourile clinice observate n urma infeciei primare.
Dei infecia este limitat la organele genitale, infeciile severe care produc orhit la taur i
endometrite la vac au fost raportate ocazional.
28

Frunz Dumitria - Roxana

1.9 Modificri anatomopatologice

n localizarea respiratorie se constat prezena de peteii, necroze, exsudat fibrinopurulent
i ulcere la nivelul mucoaselor tractusului respirator anterior, rinotraheit purulent la nceput,
apoi pseudomembranoas, laringit pseudomembranoas, congestia zonei epidermice a botului,
uneori bronhopneumonie fibrinoas cu zone de emfizem sau chiar bronhopneumonie
gangrenoas datorit implicrii florei secundare.
n forma genital (I.P.V.) macroscopic la masculi se constat balanopostit pustuloas
iniial, ce devine eroziv, iar n final necrotic. La femele este prezent vulvovaginita pustuloas.
n celelalte forme ale bolii apar focare eroziv-ulcerative ale mucoasei esofagului,
faringelui, laringelui, cheagului i intestinului, exsudate seromucoase sau mucopurulente la
nivelul sinusurilor, limforeticulit hemoragic retrofaringian, iar organele parenchimatoase
(ficat, cord, rinichi) sunt degenerate sau prezint focare de necroz. .
Fetuii sunt parial autolizai, prezint edem subcutanat i pulmonar, colecii roiatice n
marile caviti, uneori hemoragii subepicardice i subendocardice, pleurale i pulmonare.
La examenul histologic se evideniaz procese congestiv-hemoragice, necrotice,
ulcerative i infiltrative, meningoencefalit limfomonocitar i prezena de incluzii intranucleare
acidofile de tip Cowdry A n celulele epiteliilor mucoaselor respiratorii i digestive. (fig. 1.7)

Fig. 1.7 Celul infectat cu virusul IBR.

Virusul se multiplic n nucleul celulei
( dup Muylken B. i colab., 2007)

29

Frunz Dumitria - Roxana

1.10 Diagnosticul
Pentru a stabili un diagnostic de certitudine se va recurge obligatoriu la examene de
laborator (examen histopatologic i virusologic), iar n acest scop se recurge la izolarea virusului
din cazurile de rinotraheit infecioas (I.B.R.), vulvovaginit pustuloas (I.P.V.) i de
balanopostit infecioas.
De la animalele vii se recolteaz n vederea izolrii virusului secreii nazale i oculare. De
la animalele moarte se recolteaz: limfonodurile bronhice, esut traheal, poriuni de piele cu
leziuni de dermatit, fragmente de derm din spaiul interdigital, poriuni de encefal cu leziuni de
encefalomielit, poriuni de intestin cu enterit, mucoasa conjunctival cu leziuni, avortoni,
splina i alte esuturi limfoide. Diagnosticul infeciilor cu BoHV-1 se realizeaz prin examene
serologice, virusologice i alergice.
1.10.1 Examenul serologic const n evidenierea anticorpilor specifici putndu-se
realiza pe probe de ser i lapte individual sau de colectur. Tehnica imunoenzimatic ELISA este
foarte larg utilizat datorit uurinei de utilizare, rapiditii, costului i adaptrii analizrii unui
numr mare de eantioane. Pot fi utilizate 2 metode:
ELISA indirect
ELISA prin competiie sau blocking ELISA.
a) ELISA indirect eantionul de testat este pus n prezenta determinanilor antigenici
specifici ai BoHV-1 absorbii pe un suport solid. Anticorpii eventual fixai sunt revelai cu
ajutorul anticorpilor anti imunoglobulinici bovini conjugai cu o enzim. Dup adugarea unui
substrat cromogen specific enzimei, interpretarea se efectueaz prin spectrofotometrie: densitatea
optic este proporional cu cantitatea de anticorpi prezent n eantion.
b) Blocking ELISA eantionul de testat este pus n prezenta determinanilor antigenici
specifici ai BoHV-1 absorbii pe suport solid. Se adaug apoi imunoser anti BoHV-1 sau
anticorpi monoclonali anti gB asociai cu o enzim care se fixeaz pe situsurile antigenice rmase
libere, n competiie cu anticorpii eventuali prezeni n eantion. Densitatea optic obinut dup
adiia stratului cromogen este cu att mai slab cu ct cantitatea de anticorpi prezeni n eantion
este mai mare.
Testele ELISA efectuate pe ser sanguin sunt utilizate n funcie de sensibilitatea i
specificitatea lor fa de tipul probei recoltate (snge sau lapte, individual sau amestec). Factorii
de variaie sunt numeroi: modul de preparare i fixare a antigenului, diluia eantionului de
testat, durata perioadei de incubare pentru diferite etape.
Testele blocking ELISA prezint o mai mare sensibilitate n particular pentru detectarea
eantioanelor pozitive din amestecuri. n plus ele permit detectarea animalelor infectate recent
adic a purttorilor de imunoglobuline M. Datorit marii sensibiliti tehnica permite detecia
30

Frunz Dumitria - Roxana

anticorpilor maternali la vieii sntoi pe o perioad mult mai lung dect alte teste: de la 9 la 11
luni n loc de 7. Laptele reprezint o prob uor de recoltat inclusiv n amestec, fiind suficient
prelevarea unui singur eantion de lapte de colectur pentru a controla statusul serologic al unei
turme. Laptele de colectur nu permite detectarea cresctoriilor foarte slab infectate, deoarece
diluia face s diminueze sensibilitatea testului. Complementar vaccinurilor deletate au fost
elaborate teste ELISA pentru detectarea anticorpilor specifici ai unei glicoproteine de suprafa a
BoHV-1, n principal gE. Metoda const n utilizarea tehnicii blocking ELISA n care conjugatul
este un anticorp monoclonali anti-gE sau de anticorpi monoclonali anti-gE ce recunosc diferii
epitopi ai gE. Acest test este mult mai sensibil cnd se utilizeaz pentru anti gE dect pentru anti
gB. n cazul unei infecii recente ELISA-gE poate detecta seroconversia mai tardiv dect ELISA
gB, astfel nu putem utiliza aceste teste pentru analiza amestecurilor de ser sau a laptelui de
colectur.
Sensibilitatea se amelioreaz utiliznd anticorpi monoclonali specifici pentru un singur
epitop a gE care este foarte bine conservat la toate suele diferite de BoHV-1. La anumite
animale vaccinate de numeroase ori cu un vaccin deletat se nregistreaz un procent destul de
crescut de fals pozitivi. Legtura dintre anticorpi anti-gE poate fi mpiedicat de prezena unui
numr mare de anticorpi dirijai mpotriva altor glicoproteine. (Muylken B. i colab., 2007)
1.10.2 n cazul examenului virusologic pe animalul n via, recoltarea probelor trebuie
s se realizeze precoce, n faza de hipertermie utiliznd badijonri nazale profunde sau lavaje
bronho-alveolare. De la cadavre prelevrile de probe trebuiesc fcute n primele 3 ore de la
moartea animalului. n aceast situaie se recolteaz fragmente de organe lezate (pulmon i
trahee), organe i esuturi limfoide (splina). n toate cazurile probele recoltate se trimit la
laborator n recipiente, la rece, n maxim 24 ore.
Izolarea virusului pe culturi celulare: efectul citopatic punerea n eviden a virusului
BoHV-1 pe culturi celulare se bazeaz pe proprietatea virusului de a infecta celulele sensibile
cultivate n vitro i evidenierea efectului citopatic caracteristic prin microscopie electronic la
cteva zile de la infecie. Particulele virale izolate sunt apoi identificate prin teste imunologice.
Faza de preparare const n separarea particulelor virale de celelalte elemente care constituie
proba recoltat prin dilacerare sau punerea n suspensie, centrifugare i filtrare. Ele sunt apoi
inoculate pe culturi celulare. Sistemele celulare cel mai frecvent utilizate datorit sensibilitii lor
sunt celulele primare testiculare de viel sau renale de viel. (fig. 1.8) Inoculrile se realizeaz n
stratul de celule confluente cultivate n plci de microtitrare sau flacoane de cultur. Dac virusul
BoHV-1 este prezent n proba recoltat se va observa o rotunjire a celulelor care se vor regrupa
n ciorchine lsnd n jurul lor spaii n stratul celular. n lipsa efectului citopatic la 4-5 zile de la
inocularea pe cultura celular, se realizeaz un al doilea sau un al treilea pasaj pe celule pentru a
31

Frunz Dumitria - Roxana

verifica absena BoHV-1 din proba recoltat. n acest fel se poate facilita multiplicarea
particulelor virale eventual prezente n mici cantiti.
Aceast izolare a virusului pe culturi celulare nu se poate realiza dect dac particulele
virale prezente i-au pstrat puterea infecioas. De aceea este esenial de a urmri calitatea
probelor recoltate i transportul lor ct mai rapid la laborator. (Muylken B. i colab.,2007)

Fig. 1.8 Cultur celular MDBK infectat - prezena plajelor de liz

( dup Muylken B. i colab., 2007)
Seroneutralizarea const n punerea n contact de diluii descresctoare de suspensie
viral cu cantiti constante de imunoser monospecific neutralizant anti-BoHV-1 pe de o parte i
o cantitate constant dintr-un ser negativ fa de BoHV-1 de alt parte. Se calculeaz titrurile
obinute pentru cele dou serii, iar prin diferena lor se calculeaz indicele de neutralizare care
dac este superior lui 2, permite concluzionarea c virusul BoHV-1 se gsete n celulele
inoculate.
Tehnica PCR este utilizat pentru detecia BoHV-1 n sperma taurilor n centrele de
nsmnri artificiale. De asemenea se poate utiliza pentru izolarea ADN-ului viral din probe de
snge la nivelul limfocitelor i pentru detectarea unei infecii subclinice. PCR-ul permite
confirmarea rezultatelor serologice dubioase, identificarea animalelor purttoare latente
seronegative, decelarea unei infecii recente nainte de apariia anticorpilor i diferenierea unei
infecii de o vaccinare cu o sua deletat pentru gE.
1.10.3 Diagnosticul diferenial se impune fa de diareea viral/boala mucoaselor care
afecteaz tineretul i are o evoluie mult mai grav, de febra cataral malign care apare sporadic
- este necontagioas cu mortalitate crescut, de pesta bovin care evolueaz enzootico-epizootic
cu evoluie grav i mortalitate mare, de rinite alergice ce evolueaz mai ales n perioada
punatului, de theilerioz, de difteria vieilor, de pneumonia viral a vieilor, sau de
pasteureloz. Vulvovaginita pustuloas (I.P.V.) trebuie difereniat de diareea viral/boala
mucoaselor, bruceloz, listerioz, leptospiroz sau febra Q.

32

Frunz Dumitria - Roxana

1.9 Profilaxie
a) Profilaxia nespecific
Prevenirea bolii n unitile de cretere se realizeaz prin msuri generale i msuri
specifice. Msurile generale vizeaz: achiziionarea de animale se va face numai din efective
indemne, animalele nou achiziionate vor fi inute n carantin profilactic, respectarea
tehnologiilor de cretere i exploatare, evitarea factorilor de stres, supravegherea serologic,
folosirea la mont sau la nsmnri artificiale a taurilor serologic negativi, efectuarea
dezinfeciilor curente, evitarea supraaglomerrii adposturilor.
b) Profilaxia specific
Obiectivele n combaterea infeciei BoHV-1 au evaluat de-a lungul ultimelor decenii de la
o reducere obinut cu uurin de ctre un impact clinic ctre o prevenire mai dificil de
transmitere a virusului.
Vaccinurile BoHV-1 sunt clasificate n patru categorii: viu modificat, inert (inactivat i
subunitar), ADN-ul i vaccinuri bazate pe vectori. Vaccinarea mpotriva BoHV-1 a fost revizuit
recent ntr-un mod exhaustiv. Vaccinurile anti IBR-IPV se gsesc sub trei forme de baz:
vaccinuri vii modificate genetic, care nu se administreaz la vacile gestante, vaccinuri inactivate
i vaccinuri intranazale (vii i atenuate). Vaccinurile pot fi monovalente aa cum este vaccinul
traheine ce conine virus viu modificat contra rinotraheitei infecioase bovine, obinut prin
cultivarea pe o linie celular stabil bovin a tulpinii mutante RLB-106, modificat prin
temperatur specific, sau mixte cum este vaccinul Cattlemaster 4 (fig. 1.9) care este un
vaccin polivalent contra rinotraheitei, diareei virale, parainfluenei 3 i virusului sinciial
respirator la bovine sau vaccinul cu virusurile vii modificate contra rinotraheitei infecioase,
adenovirozei i parainfluenei bovine denumit imuresp-RAP care se administreaz pe cale
intranazal.

Fig. 1.9 Cattlemaster 4 - Vaccin polivalent contra rinotraheitei, diareei virotice,

parainfluenei tip 3 i virusului sinciial respirator la bovine.
(www.pfizer.com)
33

Frunz Dumitria - Roxana

Pn n prezent nici un vaccin nu asigur o protecie complet, de aceea se impune

instituirea unui protocol de vaccinri repetate, completate prin msuri stricte sanitar - veterinare
i de igien care s diminueze riscul contaminrii. n perspectiv se sper ca vaccinurile
subunitare, recombinate, sau cele constituite din ADN plasmidic s confere o imunitate
superioar.
c) Strategia DIVA (diferenierea animalelor infectate de cele vaccinate)
Mai multe ri europene au iniiat programe de control care vizeaz eradicarea BoHV-1 i
care sunt bazate pe utilizarea vaccinurilor marker deletate n gena gE. Aceste vaccinuri marker,
inactivate sau viu atenuate, utilizate mpreun cu o detectare serologic a anticorpilor specifici
gE, permite diferenierea animalelor infectate de cele vaccinate. Aceast capacitate de
difereniere este critic pentru restricia de comercializare. (Lehmann D. i colab., 2002)

1.12 Combatere
La apariia bolii n focar animalele bolnave se izoleaz i se trateaz. Pentru tratament n
scopul prevenirii complicaiilor se vor folosi antibiotice i se va institui un tratament simptomatic
i unul igieno-dietetic. De asemenea se poate folosi i serul antiviral - antipasteurelic ca i serul
mixt servipast n doz de 0,5-0,6 ml/kg viu.
n cazul formei genitale de vulvovaginit pustuloas infecioas se va ntrerupe monta pe
toat durata evoluiei bolii n efectiv i se va practica nsmnarea artificial cu material seminal
provenit de la tauri indemni de IBR IPV. Animalele sntoase din focar se vor serumiza
folosind serul mixt n doz de 0,3-0,4 ml/kg viu pe cale subcutanat sau se vor vaccina de
necesitate pe cale intramuscular. Pentru stingerea focarului se recomand eliminarea animalelor
depistate pozitiv la testele de laborator.

34

Frunz Dumitria - Roxana

CAPITOLUL 2.
DESCRIEREA CADRULUI ORGANIZATORIC N CARE S-AU
EFECTUAT INVESTIGAIILE

Rinotraheita infecioas bovin-vulvovaginita pustuloas (IBR-IPV) este o boal infectocontagioas virotic specific bovinelor, cu evoluie acut, caracterizat clinic prin hipertermie i
tulburri dominant respiratorii (rinit, traheit) sau genital (avorturi, infertilitate, balanopostite),
nsoite de conjunctivite.
Sub denumirea de rinotraheit infecioas a bovinelor este cunoscut un complex de
manifestri, aparent dispersate, determinate de acelai virus aparinnd grupului Herpesviridae
(herpesvirus I).
Avnd n vedere prevalena crescut a infeciilor cu virusul rinotraheitei infecioase
bovin la taurine n Europa i faptul c i pentru Romnia investigaiile privind infeciile cu IBRIPV sunt insuficiente, n aceast lucrare am ncercat s depistez bovinele infectate din judeele
Iai, Vaslui i Galai utiliznd tehnici serologice.
Investigaiile au constat n testarea probelor de snge recoltate, n vederea evidenierii
anticorpilor

specifici

anti-virusul

rinotraheitei

infecioase

bovin

utiliznd

metoda

imunoenzimatic E.L.I.S.A..
Prelucrarea, condiionarea i testarea probelor s-a realizat n cadrul laboratorului de
virusologie al Direciei Sanitar Veterinare i pentru Sigurana Alimentelor Iai, i n cadrul
laboratorului de serologie, disciplina Boli Infecioase, din cadrul Facultii de Medicin
Veterinar Iai.
Descrierea laboratorului de serologie din cadrul Facultii de Medicin Veterinar, Iai
Laboratorul de serologie din cadrul Facultii de Medicin Veterinar Iai se gsete n
cadrul pavilionului 6. Aparatura din dotarea laboratorului se ridic la standardele de calitate
specifice unui laborator de serologie, fiind achiziionat prin proiecte de cercetare n perioada

35

Frunz Dumitria - Roxana

2008 - 2010. Astfel condiiile de securitate ale probelor biologice si ale cercettorului sunt
asigurate de Hote cu flux laminar de tip II.
Manipularea probelor se face prin intermediul pipetelor semiautomate i automate
Eppendorf, centrifugarea probelor de snge s-a realizat prin intermediul centrifugii cu rcire de
mare viteza iar incubarea plcilor ELISA s-a fcut n incubatorul cu vibraii i termostat
Heidolph.
Linia de serologie, respectiv cititorul de plcii i spltorul automat, face parte din
prestigiosul brand TECAN, asigurndu-se astfel reproductibilitatea i repetabilitatea rezultatelor
serologice.
n cadrul laboratorului de virusologie, am efectuat investigaiile serologice sub
ndrumarea D-lui Dr. Asist. univ. Ani Drago Constantin.

Fig. 2.1 Aspecte din laboratorul de serologie al Facultii de Medicin Veterinar, Iai

36

Frunz Dumitria - Roxana

Descrierea Laboratorului Sanitar Veterinar (LSVSA), Iai

Funcionnd n incinta Direciei Sanitar Veterinare i pentru Sigurana Alimentelor Iai,
LSV este structurat din mai multe laboratoare de diagnostic, majoritatea deinnd acreditare
RENAR.
n cadrul laboratorului de virusologie, am desfurat investigaii sub ndrumarea D-nei
Dr. Medic Veterinar Merticariu (Anderco) tefania, a crei expertiz n domeniul virusologic
este cunoscut la nivel naional.

Fig. 2.2 Aspecte din cadrul Laboratorului Sanitar Veterinar (LSVSA), Iai - laboratorul de
virusologie

37