Laboratorul 3

Determinarea activitii invertazei

Invertaza (-fructozidaza) este o enzim din clasa hidrolazelor, care catalizeaz
hidroliza zaharozei cu formare de glucoz i fructoz (zahr invertit), atacnd legtura
glicozidic din partea moleculei de fructoz.
CH2OH
H

CH2OH
H

H
OH

OH
HOCH2

OH

+ H2O
O

O
H

OH

OH

H
OH

OH

O H

H
OH

OH
H
-Glucopiranoz
CH2OH
H

H
CH2OH

+
H

O
OH

CH2OH
OH

-fructofuranoz

Invertaza se gsete n special n drojdii. Are temperatura optim de activitate 52C iar
pH-ul 4,5.
Principiul metodei
Metoda se bazeaz pe dozarea glucidelor reductoare care se formeaz ca urmare a
aciunii invertazei asupra unei soluii de zaharoz cu concentraia cunoscut.
-

Reactivi
zaharoz, soluie 2% tamponat la pH 4,5 cu acid acetic;
acetat de sodiu 0,2 M;
reactivi pentru determinarea glucidelor reductoare prin metoda Schoorl;
toluen.

Obinerea preparatului enzimatic

Sursa clasic de obinere a preparatelor de invertaz este drojdia de bere i drojdia de
panificaie. Deoarece invertaza este o enzim intracelular care nu difuzeaz prin
membran, pentru extracia ei se procedeaz astfel: 10 g drojdie se mojareaz cu nisip timp
de 10-15 minute pentru a distruge pereii celulari. Se adaug 30 ml ap distilat i 0,5 ml
toluen n calitate de antiseptic. Amestecul se termostateaz timp de 2 ore la 35-37C n
vederea autolizei celulelor care nu s-au distrus prin mojarare. Se mojareaz din nou, se
aduce la 100 ml cu ap distilat i apoi se centrifugheaz ntreaga prob la 4000 ture/min,
timp de 20 minute.
Soluia obinut conine invertaz activ care se poate pstra 3-4 zile la frigider.
Modul de lucru
Se pipeteaz ntr-un balon Erlenmeyer 1 ml preparat enzimatic de invertaz. n alt
balon se pipeteaz 1 ml preparat enzimatic supus n prealabil fierberii pentru inactivarea
enzimei (proba martor). Se adaug n ambele baloane cte 10 ml soluie de zaharoz 2%, se
omogenizeaz dup care acestea se termostateaz timp de 30 minute la temperatur de
37C, pentru desfurarea reaciei enzimatice.
Dup trecerea acestui timp, se adaug n ambele baloane cte 9 ml ap (pentru ca
volumul final s fie de 20 ml), se omogenizeaz bine i se determin glucidele reductoare
prin metoda Schoorl folosind n acest scop cte 5 ml din fiecare prob.

n proba cu invertaz inactivat se determin glucidele reductoare preexistente n

sistem (proba martor). n proba cu invertaz activ se dozeaz glucidele reductoare
preexistente i glucidele reductoare formate n urma aciunii enzimei.
Modul de calcul
Se face diferena ntre volumul de tiosulfat de sodiu 0,1 N folosit la titrarea probei cu
enzim inactivat (proba martor) i volumul folosit la titrarea probei cu enzim activ. n
funcie de aceast diferen se ia din tabelul Schoorl cantitatea de zahr invertit (z I, n mg)
care corespunde zaharozei hidrolizate din 5 ml prob luat n analiz.
Activitatea invertazei se exprim n:
1) Cantitatea de zahr invertit care rezult prin hidroliza a 100 g zaharoz de ctre 1
ml sau 1 g preparat enzimatic, n condiiile de lucru date:
100 zi
d ,n care:
A=
2c t
c- cantitatea de preparat enzimatic, n ml sau g;
zI cantitatea de zahr invertit produs de enzim, n g;
d diluia;
t timpul de termostatare, n minute.
2) Micromoli de zaharoz hidrolizat ntr-un minut de 1 ml preparat enzimatic, sau 1 g
drojdie sau alt surs, n condiiile de lucru date:
0,95 zi
d ,n care:
A=
342 106 c t
c- cantitatea de preparat enzimatic, n ml sau g;
zI cantitatea de zahr invertit produs de enzim, n g;
d diluia;
t timpul de termostatare, n minute;
0,95 factor de transformare a zahrului invertit n zaharoz;
34210-6 1 micromol zaharoz.

Laboratoru 4
Determinarea activitii enzimelor pectolitice
Enzimele pectolitice acioneaz asupra substanelor pectice i pot fi clasificate n dou
grupe:
- enzime saponifiante-pectin-esteraza (PE)sau pectin-metil-esteraza (PME);
- enzime depolimerizante sau pectin- glicozidaze (PG) (poligalacturonaze).
Pectin esterazele (PE) sau pectin-metil-esteraza (PME) hidrolizeaz esterul metilic
al acidului galacturonic prezent n structura substanelor pectice cu formare de acid
poligalacturonic i alcool metilic.
Pectin- glicozidazele sau poligalacturonaze (PG) care hidrolizeaz legturile -(1-4)
glicozidice n prezena apei producnd fragmentarea macromoleculelor substratului i
scderea vscozitii acestuia se denumesc endo-pectin-glicozidaze sau endo-poligalacturonaze. Cele care elibereaz acid galacturonic molecul cu molecul de la captul
lanurilor pectinice poart denumirea de exo-pectin-glicozidaze sau exo-poligalacturonaze.
Endo-poli-galacturonaza care uneori se mai numete i pectinaz, catalizeaz
hidroliza legturilor glicozidice (1-4) existente n substanele pectice ntre resturile de acid
galacturonic care nu au gruprile carboxilice metoxilate.
Enzimele menionate mai sus acioneaz asupra acidului poligalacturonic metoxilat
liber (pectin sau acid pectinic) sau nu (acid poligalacturonic sau acid pectic) n punctele
figurate n structura urmtoare:
PE- pectin-esteraza sau pectin- metil-esteraza; Endo-PG: endo-poligalacturonaza sau
endo-pectin glicozidaza; Exo-PG :exo-poligalacturonaza sau exo-pectin-glicozidaza.
Preparatele enzimatice pectolitice se obin, n majoritatea cazurilor, din mucegaiuri i
sunt comercializate sub denumirea de: aspergol, pectinol, filtragol, etc. n industria alimentar
se utilizeaz n vinificaie, n industria sucurilor de fructe, etc. Astfel, n vinificaie enzimele
pectolitice se folosesc pentru creterea randamentului de extracie i pentru clarificarea
mustului sau vinului. Ele mai sunt denumite i enzime de filtrare datorit aptitudinii lor de a
ameliora viteza de filtrare a musturilor i vinurilor. n acelai scop se utilizeaz i n industria
sucurilor de fructe.
- Determinarea activitii endo-poligalacturonazei
Principiul metodei
Activitatea endo-poligalacturonazelor se determin cel mai frecvent prin urmrirea
PE

COOH
O H
HO
H

OH H
H

O
H

CO O CH3
O H
O
OH H
H

OH
exo-PG

OH

COOH

COOH
O H

O H
H

OH H
H

OH

OH H
H

OH

O
H

CO O CH3
O H
O
OH H
H

OH

COOH
O H
H

OH H
H

OH

endo-PG

scderii vscozitii unei soluii de pectin sau acid poligalacturonic.

Reactivi
-Hidroxid de sodiu 5%;
-Soluie tampon cu pH=4: acid citric 0,1 M amestec cu Na2HPO4 0,2 M;
-Pectin 1%: 1g pectin se umezete cu 2 ml etanol ntr-un mojar; se adaug apoi
treptat sub mojarare continu 30-35 ml ap distilat i pictur cu pictur hidroxid de sodiu
5% pn la pH=4. Se trece cantitativ coninutul mojarului ntr-un balon cotat de 100 ml,
folosind 50 ml soluie tampon cu pH=4. Se aduce la semn cu ap distilat i se
omogenizeaz.

-Acid poligalacturonic 1% se prepar ca i pectina 1%.

Modul de lucru
ntr-un vscozimetru Oswald plasat ntr-o baie termostat la temperatur de 30C, se
introduc 9 ml substrat (pectin sau acid poligalacturonic) i se menine timp de 10 15
minute (pentru ca substratul s ajung la temperatur de 30C). Se adaug 1 ml extract
enzimatic (diluat corespunztor pentru o scdere a vscozitii cu aproximativ 50% n timp de
10-15 minute), se amestec prin barbotare de aer, se aduce la nivelul superior al poriunii
marcate i se cronometreaz imediat timpul de scurgere ntre cele dou repere ale
vscozimetrului. Operaia se repet la intervale scurte de timp pn cnd timpul de scurgere
al amestecului ntre cele dou repere este egal cu 50 % (T50) fa de timpul de scurgere al
probei martor. Proba martor se efectueaz n aceleai condiii folosind 1 ml de preparat
enzimatic inactivat prin fierbere. Timpul de scurgere al probei martor se consider 100%
(T100).
Modul de calcul
n condiiile artate, numrul invers al timpului (1/T)de scdere a vscozitii cu 50%
(notat T50) este direct proporional cu activitatea enzimei care se exprim n uniti.
O
unitate de endo-poligalacturonaz este cantitatea de enzim care n condiiile menionate (9
ml substrat 1% i 1 ml preparat enzimatic, la pH= 4 i temperatur 30C) determin
reducerea vscozitii pectinei sau acidului poligalacturonic, cu 50% n timp de 10 minute
(T50=10, respectiv 1/T=0,1).
Pentru exprimarea direct n uniti de endo-poligalacturonaz=1/T50, activitatea se
calculeaz n uniti pentru 1 ml extract enzimatic nediluat sau 1 gram preparat enzimatic
uscat.
Determinarea activitii exo-poligalacturonazei
Principiul metodei
Determinarea activitii exo-poligalacturonazei se realizeaz prin urmrirea creterii
puterii reductoare a sistemului de reacie care conine pectin sau acid poligalacturonic
(substrat) i enzime pectolitice. n urma aciunii acestor enzime asupra substratului se
elibereaz molecule de acid galacturonic, produs de reacia care mrete puterea
reductoare a amestecului enzim-substrat. Acidul galacturonic eliberat se dozeaz
iodometric n mediu slab alcalin de carbonat de sodiu.
CHO

COONa

HC OH

HC OH

HO CH
+ I2 + 2 Na2CO3
HO CH
HC OH
COOH

HO CH
+ 2 NaI + 2 CO2 + H2O
HO CH
HC OH
COONa

Acid galacturonic

Sarea de sodiu a
acidului galactozaharic

Excesul de iod se titreaz cu o soluie de tiosulfat de sodiu n mediu acid.

I2 + Na2S2O3

2 NaI + Na2S4O6

Reactivi:
-pectin sau acid poligalacturonic 1%, soluii preparate ca la metoda precedent;
-carbonat de sodiu 1M;
-acid sulfuric 2M;
-tiosulfat de sodiu 0,1N;
-amidon 1%.

Modul de lucru
ntr-un flacon iodometric se pipeteaz 10 ml substrat pectin sau acid poligalacturonic
1% pn la pH 4) i 9 ml ap distilat. Amestecul se menine la termostat la 30C timp de 10
minute, apoi se adaug 1 ml extract enzimatic i se omogenizeaz bine. Imediat se iau 5 ml
din amestec i se introduc n alt flacon iodometric care conine 1ml carbonat de sodiu 1 ml
( proba martor, respectiv timpul zero de aciune al enzimei). Cei 15 ml de amestec enzim
substrat se pun n termostat la 30C. Dup 15, 30 i 45 minut se iau din aceast prob cte 5
ml care se introduc n flacoane iodometrice ce conin cte 1 ml carbonat de sodiu 1 M.
Proba martor i cele trei probe prelevate dup 15, 30 i 45 minute sunt tratate astfel:
se adaug cte 5 ml soluie de iod 0,1N i se in 20 minute la temperatura camerei pentru
reacie. Dup expirarea timpului, se adaug 2,5 ml acid sulfuric 2M, iar excesul de iod se
titreaz cu tiosulfat de sodiu, 0,1N n prezen de amidon ca indicator.
Modul de calcul
Se face diferena dintre volumul de tiosulfat de sodiu folosit pentru titrarea probei
martor i volumul de tiosulfat de sodiu folosit pentru titrarea probelor n care a acionat
enzima timp de 15, 30 i respectiv 45 minute. Aceste valori corespund moleculelor de acid
galacturonic eliberate de enzim n timpul respectiv.
Pentru a urmri activitatea enzimei n timp, se realizeaz o curb n care se trece pe
abscis timpul de aciune al enzimei, iar pe ordonat diferena de volume.

Laboratorul 5
DETERMINAREA ACTIVITII ENZIMELOR PROTEOLITICE
Generaliti
Enzimele proteolitice peptidhidrolaze, peptidaze) fac parte din clasa hidrolazelor i
catalizeaz scindarea hidrolitic a legturilor peptidice din proteide, polipeptide i peptide. n
funcie de regiunea din molecula compuilor amintii la nivelul crei acioneaz, se subdivid
n endo i exopeptidaze. Unele din ele acioneaz n tractul gastrointestinal fiind denumite
enzime digestive (pepsina, tripsina, chimotripsina, carboxipeptidaza, aminopeptidaza etc.).
Endopeptidazele (proteinaze, proteaze) catalizeaz scindarea hidorlitic a legturilor
peptidice din interiorul catenelor polipeptidice a proteinelor cu mas molecular mare,
producnd catene polipeptidice cu mas molecular mai mic. Reprezentani mai importani
ai acestor enzime sunt: de origine vegetal papaina, ficina, bromelina; de origine animal
pepsina, renina, tripsina, chimotripsina, catepsinele i de origine microbian - produse de
diferite specii de Bacillus, Aspergillus, Penicillium etc.
Exopeptidazele catalizeaz scindarea hidrolitic legturilor peptidice de la
extremitile catenelor oligo sau polipeptidice conducnd n general la eliberarea de
aminoacizi. Acioneaz asupra produilor de hidroliz ai endopeptidazelor sa chiar asupra
unor proteine nc nehidrolizate. Sunt metalproteine (conin Zn 2+, Mg2+ sau Mn2+) secretate de
mucoasa intestinal sau sunt prezent n diferite esuturi. Reprezentani ai acestor enzime
sunt: aminopeptidazele i carboxipeptidazele.
Aminopeptidazele catalizeaz desfacerea hidrolitic a aminoacizilor de la capetele Nterminale ale lanurilor peptidice. Sunt exopeptidaze produse de mucoasa intestinal a
mamiferelor i particip la digestia proteinelor. Sunt produse de asemenea de o serie de
microorganisme i alturi de carboxipeptidaze sunt folosite pentru reducerea gustului amar al
hidrolizatelor proteice ( ex. n cazul hidrolizatelor de cazein). Cea mai bine studiat este
leucin-aminopeptidaza (EC 3.4.1.1.) care prezint o larg specificitate de substrat.
Carboxipeptidaza scindeaz hidrolitic legturile peptidice de la extremitatea lanurilor
polipeptidice care posed un aminoacid terminal cu gruparea carboxilic liber, elibernd
acest aminoacid (C-terminal). n urma aciunii acestor enzime rezult oligopeptide i
aminoacizi Sunt secretate de pancreas sub form inactiv de procarboxipeptidaze, care prin
intervenia tripsinei (n intestin) se transform n carboxipeptidaze active. Sunt metal enzime
care conin Zn2+.
Principiul metodei
Metoda se bazeaz pe determinarea produilor de hidroliz rezultai n urma aciunii
preparatului enzimatic asupra unui substrat (cazein, hemoglobin sau alt protein).
Produii de hidroliz pot fi dozai prin metoda titrimetric (metoda Srensen) sau
colorimetric ( cu reactiv Folin-Ciocolteu, ninhidrin).
Metoda titrimetric
Aminoacizii eliberai n urma aciunii enzimelor proteolitice asupra substratului se
dozeaz prin metoda Srensen).

Reactivi:
soluie de cazein 2%. Se cntresc la balana tehnic 20 g cazein i se
solubilizeaz n 200 ml carbonat de sodiu 0,5% prin nclzire la 70C. Se ajusteaz
apoi soluia la pH 7 cu o soluie de acid clorhidric 0,1N. Dup rcirea complet, soluia

se trece cantitativ ntr-un balon cotat de 1000 ml, se aduce la semn cu ap distilat i
se omogenizeaz bine.
soluie de carbonat de sodiu 0,5%;
soluie de acid clorhidric 0,1N;
soluie neutralizat de formol 40%;
soluie de hidroxid de sodiu 0,01N;
soluie alcoolic de fenolftalein 1%;
extract enzimatic.

Modul de lucru
Se iau ntr-un balon Erlenmeyer 10 ml soluie de cazein 25%, 10 ml ap distilat i 5
ml extract enzimatic. Dup omogenizare se preleveaz imediat 10 ml din amestecul de
reactiv (proba martor) se adaug 5 ml formol neutralizat, 3 picturi fenolftalein i se titreaz
cu hidroxid de sodiu 0,01N pn la coloraia slab roz.
Amestecul rmas se termostateaz la temperatura de 37-40C timp de o or. Dup
termostatare se iau 10 ml amestec, se adaug 5 ml formol neutralizat, 3 picturi fenolftalein
i se titreaz cu o soluie de hidroxid de sodiu 0,01N pn la coloraia slab-roz.
Modul de calcul
Fcnd diferena dintre volumul de hidroxid de sodiu folosit pentru titrarea probei
termostatate ( Ve) i volumul de hidroxid de sodiu folosit la titrarea probei netermostatate
(Vm) obinem volumul de hidroxid de sodiu care corespunde aminoacizilor eliberai de
enzim.
Activitatea enzimelor proteolitice se exprim convenional prin:
1) cantitatea de glicocol eliberat de enzim n timp de o or din 100 g cazein, de ctre 1
ml extract enzimatic sau 1 g preparat enzimatic n condiiile de lucru date.
(V Vm ) t 100 d
A e

2
C
2) micromoli glicocol eliberai de 1 ml extract enzimatic sau 1g preparat enzimatic n timp de
1 minut n condiiile de lucru date
(Ve Vm ) t
A
d , n care:
C 75 10 -6 60
t - titrul soluiei de NaOH 0,1N n raport cu glicocolul, gl;
d diluia efectuat;
C cantitatea de preparat enzimatic luat n analiz, n ml sau g;
7510-6 1 micromol glicocol;
60 timpul de termostatare n minute;
2 concentraia procentual a substratului.

Determinarea activitii lipazei

Lipaza face parte din clasa hidrolazelor, grupa esterazelor; ele catalizeaz
descompunerea legturilor esterice dintre glicerin i acizii grai din lipide, dup schema:
CH2 OH
CH2 OOC R1
R COOH
CH OOC R2
CH2 OOC R3

+ 3 H2O

CH OH
CH2 OH

R2 COOH
R3 COOH

Lipazele sunt foarte rspndite n natur. n organismul animal ele se gsesc n: sucul
pancreatic, snge, stomac, plmni, rinichi i n toate esuturile grase. n regnul vegetal ele
se localizeaz mai ale n semine. Cantiti mari de lipaze conin seminele plantelor
oleaginoase ( ricin, soia, floarea-soarelui etc.). Lipazele au fost identificate i la
microorganisme ( Aspergillus niger).
Lipazele de diferite proveniene acioneaz la pH-uri optime diferite, pH-ul optim al
lipazei pancreatice este de 7,5-7,8 al celei stomacale 1,8-2,5, iar la lipazei vegetale este de
4,7-5,0.
Principiul metodei
Activitatea lipazei se determin prin msurarea creterii aciditii unor lipide ca urmare
a aciunii unui preparat enzimatic obinut din semine oleaginoase.
Substratul ideal pentru studiul activitii lipazei dintr-un material oarecare sunt lipidele
provenite din acelai material. Totui, n calitate de substrat al activitii lipazei se pot folosi i
alte lipide de diferite proveniene.
-

Reactivi necesari:
tampon acetat, pH = 4,7;
ulei rafinat;
hidroxid de sodiu sau potasiu, soluie 0,01N;
fenolftalein, soluie alcoolic 1%;
alcool etilic 96%;
eter de petrol.

Obinerea preparatului enzimatic

ntr-un vas de sticl prevzut cu dop, se amestec o parte semine de ricin sau soia fin
mrunite, cu dou pri eter. Se las pentru extracia uleiului timp de 2-3 ore agitnd
periodic. Se separ eterul i se introduc din nou 5 pri eter peste produsul parial degresat.
Se mai extrage proba nc o or, dup care se separ eterul i se usuc produsul degresat,
ntr-o etuv cu ventilator la temperatura de 30C.
Seminele degresate conin lipaz activ.
Modul de lucru
ntr-un mojar se introduc 0,2 g semine de ricin sau soia degresate care se amestec
cu 3 ml ulei rafinat . Se adaug 2 ml soluie tampon pH= 4,7 i se introduce mojarul ntr-un
termostat, la 30C, timp de 30 minute. Dup aceasta se trece cantitativ coninutul mojarului
ntr-un Erlenmeyer, splnd mojarul cu 15 ml alcool 96% (vol) i 15 ml eter de petrol. Se
titreaz apoi acizii grai din prob cu KOH sau NaOH 0,01N n prezena fenolftaleinei ca
indicator.
n paralel se face i o prob martor care difer de proba de analizat prin faptul c nu
se mai ine la termostat i se titreaz imediat cu KOH sau NaOH 0,01N.

Modul de calcul
Activitatea lipazei se exprim prin numrul de micromoli de acizi grai reprezentai de
acid oleic, ce se formeaz n urma aciunii unui gram de preparat enzimatic ntr-un minut.
A

(V V ) 0,00282
m
282 10 6 G t

, n care:

V volumul de hidroxid de sodiu 0,01N folosit la titrarea probei n care a acionat enzima
(corespunztor acizilor grai eliberai de enzim i celor existeni n substrat), n ml;
Vm volumul de hidroxid de sodiu 0,01N folosit la titrarea probei martor (corespunztor
acizilor grai eliberai de enzim i a celor existeni n substrat), n ml;
0,00282 titrul hidroxidului de sodiu n raport cu acidul oleic;
28210-6 1 micromol de acid oleic
G - cantitatea de preparat enzimatic luat n analiz, n g sau ml;
tmin timpul de termostatare n minute.

Laboratorul 6
ENZIME IMOBILIZATE

Enzimele imobilizate prezint un interes tiinific i tehnologic nu numai n domeniul

cercetrii legate de industria alimentar, dar i n alte industrii biochimice, tiine
farmaceutice i tiine medicale. Enzimele imobilizate au implicaii deosebite n procesele
tehnologice i n domeniul analizelor.
n analiza alimentelor, enzimele imobilizate pot aduce avantajele sensibilitii i
specificitii analizei enzimatice. Enzimele imobilizate sunt importante n tiina alimentelor i
fiziologia post-mortem i post-recoltare ca analoage ale enzimelor legate de particula
celular.
Folosirea preparatelor enzimatice imobilizate n industrie prezint urmtoarele
avantaje:
- utilizarea repetat a enzimelor ceea ce permite s se prelucreze o cantitate mai mare de
substrat cu aceeai cantitate de enzim;
- enzima nu rmne n produs;
- posibilitatea utilizrii unor instalaii cu funcionare continu care permite automatizarea
proceselor;
- reacia se poate opri la momentul dorit printr-o simpl operaie mecanic, etc.
Preparatele enzimatice imobilizate sunt constituite din enzime ataate chimic sau fizic
unui suport (matrice) insolubil n ap, cu pstrarea proprietilor catalitice.
Pentru imobilizarea enzimelor se folosesc metode fizice sau chimice.
Metodele fizice se bazeaz pe imobilizarea enzimelor prin interaciuni fizice
(electrostatice, legturi ionice, legturi de hidrogen). Prin legturi fizice se obin preparate
imobilizate sub form de:
- enzime adsorbite pe un suport insolubil n ap ( celuloz, crbune, schimbtori de ioni);
- enzime nchise n structuri macromoleculare, formate prin polimerizarea unor materiale n
prezena moleculei de enzim. Se formeaz o matrice de polimer n care sunt incluse
molecule de enzim active;
- celule de ultrafiltrare care conin enzima imobilizat, etc.
Procedeele chimice constau n formarea de legturi covalente sau semicovalente
ntre gruprile funcionale care nu sunt ns eseniale pentru manifestarea activitii catalitice
i un suport activ chimic insolubil n ap.
Imobilizarea amilazelor pe parafin
Principiul metodei
Preparatul enzimatic se imobilizeaz cu parafin i apoi se urmrete activitatea
amilazei prin reacia de culoare cu iod.
Reactivi necesari
- soluie de iod 0,1N.
Modul de lucru
ntr-un pahar Berzelius de 100 ml se cntresc 4 g parafin i 1 g fin de mal.
Paharul se introduce ntr-o baie cu ap la temperatura de 50-55C i se amestec cele
dou componente prin agitare. Amestecul fluid se distribuie sub forma unui film pe o poriune
din suprafaa paharului ( h= 2-3 cm). Dup rcirea i solidificarea peliculei, paharul se spal
de 3-4 ori cu ap distilat rece. n paharul astfel pregtit se introduce msurnd cu pipeta
un volum de soluie de amidon 0,5% astfel nct s ajung la nivelul filmului de pe suprafaa
paharului.
Se introduce paharul n termostat la 37C i din 15 n 15 minute se face proba de
culoare cu iod combinnd o pictur de soluie de iod cu o pictur de substrat.

Se noteaz durata pn cnd iodul nu mai produce o schimbare a culorii la

combinarea cu o pictur de prob.
Operaia se repet de 3-4 ori.
Modul de calcul
Activitatea enzimatic se exprim prin cantitatea de amidon transformat de 1g fin
de mal ntr-un minut.
AE

V 0,5
, n care:
100 t

V volumul soluiei de amidon 0,5% introdus n pahar;

t durata reaciei enzimatice, minute.
Se determin activitatea enzimatic la fiecare trecere i datele se ntabeleaz:
Trecerea
Activitatea enzimatic
I
II
II
IV