Număr proiect: PNII 52-167

Titlu proiect: Evaluarea distribuţiei şi caracterizarea variabilităţii

genetice a salmonidelor din România
Coordonator: Universitatea Bucureşti – Departamentul de
Biochimie şi Biologie Moleculară
Director proiect: Prof. Dr. Marieta Costache

Parteneri în consorţiu
Coordonator: Universitatea din Bucureşti
P1: Institutul de Cercetări şi Amenajări Silvice, Bucureşti (ICAS);
P2: Universitatea Transilvania, Braşov;
P3: Institutul Naţional de Cercetare Dezvoltare “Delta Dunării”, Tulcea;
Buget: 2.000.000 RON (Reactualizat pentru 2011 1234646 lei reprezentand
61,73% din valoarea initiala a proiectului)

Adresa web a proiectului: www. dbbm.bio.unibuc.ro

http://dbbm.bio.unibuc.ro/page.php?id=9
Obiectivul proiectului: realizarea unei cercetări complexe, multi şi
interdisciplinare în vederea evaluării distribuţiei şi caracterizării variabilităţii
genetice a salmonidelor din România cu scopul elaborării unor direcţii de acţiune
utile şi a unui plan de management pentru conservarea biodiversităţii acestora;

Originalitate: implementarea în România a unor metode moleculare

moderne (analiză de microsateliţi şi ADNmt) de identificare,
caracterizare şi evaluare a populaţiilor de salmonide;

Beneficiarii rezultatelor: i) Ministerul Agriculturii şi Dezvoltării Rurale Rurale-

Compania Naţională de Administrare a Fondului Piscicol (C.N.A.F.P); ii)
crescătorii de salmonide/institutele şi staţiunile de cercetare pentru salmonide; iii)
agenţiile guvernamentale cu responsabilităţi în domeniul creşterii, reproducţiei şi
ameliorării fondului piscicol; iv) facultăţile cu profil zootehnic, biologic şi de
medicina veterinară;

Potenţialul de aplicare în economie: implementarea unor metode moleculare de

identificare vor avea o utilitate practică directă în asigurarea trasabilităţii cărnii de
peşte şi a produselor derivate;
 Stadiul de realizare a proiectului în 2010
Buget de stat: 176.989 RON (credite de angajament)
Activităţi efectuate:
Etapa III: Identificarea şi distribuţia salmonidelor pe bazine hidrografice; optimizarea
protocoalelor de amplificare a regiunii D-Loop ADNmt.
III.1. Stabilirea bazinelor hidrografice cu prezenţa permanentă sau sporadică a salmonidelor
(P1, P2, P3);
III.2. Culegerea de date şi recoltarea , transport şi conservare a probelor biologice (CO, P1,
P2, P3);
III. 3. Analize fizico-chimice privind calitatea apei habitatelor studiate (P1, P2, P3);
III.4. Identificarea populaţiilor autohtone de salmonide pe bazine hidrografice (P1, P2, P3);
III.5. Optimizarea protocoalelor PCR, PCR-RFLP şi de secvenţiere pentru regiunea Dloop
ADNmt (CO, P3);
III.6. Secvenţierea şi introducerea în Genome Data Base a secvenţelor noi obţinute;
III.7. Identificarea factorilor limitativi ai habitatelor si implicit ai cresteri salmonidelor (P1,
P2, P3); III.8. Editarea unei hărţi privind distribuţia salmonidelor pe bazine hidrografice (CO,
P1, P2);
III.9. Analiza comparativă cu secvenţele ADN din regiunea D-Loop mitocondrială existente în
Genome Data Base (CO);
III.10. Diseminarea rezultatelor prin publicarea acestora în reviste internaţionale şi
participarea la conferinţe (CO, P1, P2, P3);
III.11. Completare pagina web cu distribuţia salmonidelor pe bazine hidrografice şi informaţii
despre regiunea D-Loop mitocondrială (CO, P1, P2, P3);

Achiziţii: nu au fost efectuate achiziţii de echipamente.

 Indicatori de rezultat realizaţi în cadrul proiectului:
comunicări orale la manifestări ştiinţifice internaţionale recunoscute (1):
Marieta Costache – New molecular aproaches for evaluating biodiversity.Annual
Zoological Congress of “Grigore Antipa” Museum; Bucharest–17-19.11.2010;
comunicări la manifestări ştiinţifice internaţionale/abstracte publicate în volumele
unor manifestări ştiinţifice (2):
- 8th International Symposium of Animal Biology and Nutrition, Bucharest, 24-25 September 2009 – A
PCR-RFLP method to identify fish species of economic importance / poster si abstract
- 9th International Symposium of Animal Biology and Nutrition, Bucharest, 23-24 September 2010 -
Molecular analysis of Romanian salmonid species based on 16S rRNA and 12S rRNA sequences / poster
si abstract
articole publicate în baze de date idexate BDI (2):
-A. Dudu, S.E. Georgescu, A. Dinischiotu, M. Costache (2010) - A PCR-RFLP method to identify fish
species of economic importance; Archiva Zootechnica 13:1, 53-59.
-A. Dudu, O. Popa, S.E. Georgescu, A. Dinischiotu, M. Costache (2010)- Molecular analysis of
Romanian salmonid species based on 16S rRNA and 12S rRNA sequences; Archiva Zootechinca 13: 3,
30-40.
Aarticole trimise spre publicare: Dudu, S.E. Georgescu, O. Popa, A. Dinischiotu, M.
Costache: Mitochondrial 16S and 12S rRNA sequence analysis in four salmonid species from Romania –
phylogenetic aspects; Acta Zoologica Academiae Scientiarum Hungaricae.
secvenţe publicate în baza de date GenBank (6): GU214390, GU214391, GU214392,
GU233801, GU233802, GU233803.
Bilateral Romania-Ungaria 2009 :Caracterizarea distributiei si a variabilitatii genetice a
speciilor de salmonide din Romania si Ungaria, Coordonator Ungaria: Research Institute for
Fisheries Aquaculture and Irrigation, Romania: Universitatea din Bucuresti
 Stabilirea relaţiilor filogenetice la salmonide cu marker-ul D-loop
ETAPE optimizarea PCR
Colectarea probelor
extracţia şi purificarea ADN determinarea purităţii şi concentraţiei ADN
Corectarea secvenţelor (BioEdit) (det Topt anelare la fiecare set de primeri - PCR în
gradient de temperatură) Tm = 51 – 60º C
Aliniere secvenţe proprii cu secvenţe
similare din GenBank (Clustal X) Amplificarea D_loop
Analiza si
Construirea arborilor filogenetici prelucrare Secvenţiere
(MEGA 4.0) date
fragmentarea allopatrica a bazinelor două clade distincte:
Atlantic (linia atlantică), Ponto-Caspic I. Linia atlantică: haplotip tip nord-
(linia danubiană) şi Mediteranean (linia atlantic, sud-atlantic şi Duero; II.
mediteraneană) = cea mai veche separare Liniile adriatică, mediteraneană,
a liniilor evolutive la Salmo trutta danubiană; confirmare date
fragmentare ulterioară în interiorul biogeografice, paleontologice şi de
bazinului Mediteranei = divergenţa liniilor filogenie clasică
mediteraneană şi adriatică;
 in RO există încă populaţii native de păstrăv comun; haplotipul RO apartine
grupului danubian; repopularea bazinelor hidrografice cu indivizi reproduşi artificial
s-a făcut pornind de la genitori aparţinând grupului danubian;
 Analiza profile de restricţie în identificarea speciilor/populaţiilor de
salmonide (PCR-RFLP)
salmonidele hibridizeză cu uşurinţă în mediul lor natural,
DE CE? rezultând hibrizi greu de identificat prin metode
morfometrice, în special în stadiul de juvenil;
 necesitatea trasabilitatii produselor din carne de peşte;
dezvoltarea unor programe de management eficiente de repopluare a
bazinelor naturale cu juvenili obţinuţi în condiţii de acvacultură

scindarea ampliconilor cu
endonucleaze de restricţie si
analiza produşilor rezultaţi în gel de
agaroză poate identifica
diferenţele dintre diferitele specii ;

 tehnica PCR-RFLP poate fi utilizată  detectarea hibrizilor în mediul

cu succes în identificarea moleculară natural reprezinta o realizare
a diferitelor specii de salmonide si in majoră în susţinerea eforturilor de
analizele moleculare ale hibrizilor conservare a fondului salmonicol
dintre diferite specii;
 SITUATIA FINANCIARA A CONTRACTULUI PNII 52-167/2008(CONTRACT INITIAL SI ACTE ADITIONALE)

Modul de implicare a tinerilor cercetători în proiect

La inceputul proiectului - 49 tineri din care 20 sub 35 de ani (2 studenti
,acum master), 4 stud master, 10 doctoranzi (5 au sustinut tezele)
2010 !!!!!!!!!!!!!!!!
finalizarea tezei de disertaţie “Markeri microsateliţi la salmonide”
(masterand Toană Andreea)
-teza doctorat cu tema “Markeri moleculari la acipenseride şi salmonide”
(Dudu Andreea)
-teme de licenţă: “ Metode moleculare de identificare a speciilor de peşti”
-teme de dizertatie: “Filogenie moleculara la Salmonide prin analiza 12S si
16SARNr”, „Studii comparative asupra genelor mitocondriale care codifica
subunitati proteice implicate in metabolismul energetic la Salmonide”.
-doctorand pe domeniul „Cresterea intensiva a salmonidelor, amenajari
piscicole in ape de munte” –Universiatea Transilvania Brasov.
SITUATIA FINANCIARA A CONTRACTULUI PNII 52-167/2008
(CONTRACT INITIAL/ACTE ADITIONALE)
PERIOADA 2008 2009 2010 2011
DERULARE

CONTRACTARE 112.295 456.630 545.000 886.075

( 5,6% ) ( 22,8% ) ( 27,2% ) ( 44,4% )

ACTE 0 - 112.295 176.989-CREDITE 1.651.354

ADITIONALE -59362-CREDITE ( 8,8%) ( 82,6%)
( 8,6%)
 Activităţi prevăzute în 2011 comparativ cu planul de realizare al proiectului
Etape în planul iniţial de realizare pentru 2011:
- Etapa VI (886.075 RON): Caracterizarea salmonidelor din România prin coroborarea
studiilor de distribuţie cu evaluarea la nivel genetic

Etape prevăzute a se realiza în 2011

- Etapa IV: Caracterizarea relaţiilor filogenetice la salmonide determinate pe baza genelor
mitocondriale implicate în metabolismul energetic
- Etapa VI: Caracterizarea salmonidelor din România prin coroborarea studiilor de distribuţie cu
evaluarea la nivel genetic

Obiective de atins/rezultate preconizate

- Optimizarea protocoalelor PCR, PCR-RFLP şi secvenţiere la genele mitocondriale alese
- Construcţia de arbori filogenetici pe baza secvenţelor ADNmt şi analiza comparativă
- Publicarea în GenBank DataBase a secvenţelor obţinute
- Diseminare rezultate: publicare în reviste internaţionale cu impact/ completarea pagina
web proiect
- Elaborare monografie “Evaluarea şi caracterizarea genetică a salmonidelor din România”

Estimare necesarului de finanţare pentru ultimul an de implementare

Buget iniţial prevăzut 2011: 886.075 RON
Necesar 886.000 RON