BIOLOGIE ORALĂ / ORAL BIOLOGY
NEUTROPHIL’S DEFICIENCIES IN AGGRESSIVE
PERIODONTITIS
DEFICIENŢE ALE NEUTROFIELLOR ÎN PARODONTITELE
AGRESIVE
Nanescu Sonia Elena1, Silvia Mârţu2, Liliana Constantin3,. Silvia Teslaru4
1mastd.,
2prof., Disciplina de Parodontologie, U.M.F. „Gr. T. Popa”, Iaşi
3,4asist., Disciplina de Parodontologie, U.M.F. „Gr. T. Popa”, Iaşi
REZUMAT
În chemotactismul anormal constatat în parodontitele
agresive, un rol important este cel al afectării căii stimul-
răspuns biologic. Aparţin acestor deficienţe nivele scăzute
ale kinazelor diacilglicerolului şi a protein kineazei C, sau
transducţia anormală a semnalului prin CD38, care iniţiază
răspunsurile citoplasmatice ale calciului. Din nefericire, în
aceste cazuri, neutrofilele nu răspund la tratamentul cu
LXA4 şi generarea intensă de superoxid nu poate fi oprită.
Degranularea şi eliberarea enzimelor proteolitice include
elastaza, care prezintă capacităţi citotoxice şi eliberarea de
citokine poinflamatorii IL-1, TNF-alfa, sistemul
mieloperoxidază-peroxid de hidrogen-clorură amplifică
distrucţia tisulară.
INTRODUCERE
Neutrofilele sunt primele leucocite care ajung în
ţesuturile gingivale ca răspuns la agresiunea
bacteriană. În patogenia bolii parodontale, neutrofilele
sunt întotdeauna tipul celular dominant în cadrul
epiteliului de joncţiune şi a sulcusului gingival. Ele
joacă un rol important în distructiv, iniţiind formarea
pungilor parodontale. Jumătate din leucocitele care
infiltrează epiteliul joncţional şi 90% din leucocitele
izolate din fluidul crevicular sunt neutrofile.
ALTERAREA FUNCŢIEI DE CHEMO-
TACTISM
Deficitul de chemotactism a fost atribuit printre
alţi factori şi oxidului nitric şi enzimei sale, sintaza
oxidului nitric (Shibata K, 2001), deşi părerile în
acest domeniu sunt controversate. Mecanismele
reglatorii care controlează chemotactismul,
adeziunea, fagocitoza şi activitatea oxidativă impică
modificări în PH-ul citoplasmatic şi concentraţia
(Ca2+). Homeostazia calciului pentru PMN depinde
de depozitele subcelulare, nivelul calciului
citoplasmatic şi unele canale membranare.
Herrmann J. M. (2005) constata că aceste disfuncţii
în parodontitele agresive implică semnalele ionilor
de Ca2+ and H+ ca şi redistribuţia consecutivă a
acestor cationi. Autorul a constatat că răspunsurile
precoce la fMLP (formil-Met-Leu-Phe) sau la IL-8
de către PMN în parodontitele agresive sunt
măsurate prin modificări ale Ca2+ citoplsmatic şi
PH, sunt mai mari în PMN din parodontitele
MEDICINA STOMATOLOGICĂ, vol. 9, nr. 4 - 5, 2005
Disciplina de Parodontologie, U.M.F. „Gr. T. Popa”, Iaşi
ABSTRACT
In the abnormal chemotaxis found in the aggressive
periodontitis an important role may belong to the altering
of .different components of the stimulus-biological answer
Diminished levels of diacylglycerol kinases and of protein
kinase C, or an abnormal signal transduction through
CD38 which initiates the cytoplasmic calcium responses,
belong to these deficiencies. Unfortunately in these cases,
neutrophils do not answer to the treatment with LXA4 and
the intense generation of superoxyde cannot be stopped.
Degranulation and release of proteolytic enzymes including
elastase, which present cytotoxic capacities and the release
of proinflammatory cytokines IL-1, TNF-alpha, the myelo-
peroxidase-hydrogen peroxide-chloride amplifies the tissue
distruction.
INTRODUCTION
Neutrophils are the first leukocytes to arrive in
gingival tissues in response to the bacterial aggression.
In pathogenesis of periodontal disease, neutrophils
are always the dominant cell type within the junctional
epithelium and gingival crevice. They may play an
important destructive role initiating the formation of
periodontal pockets. Half the leukocytes infiltrating
the junctional epithelium and 90% of the leukocytes
isolated from crevicular fluid are neutrophils.
THE ALTERING OF THE CHEMOTAC-
TISM FUNCTION
The deficient chemotaxis have been attributed
among other factors to nitric oxide and its enzyme,
nitric oxide synthase (Shibata K, 2001), although
opinions in this field have been controversial. The
regulatory mechanisms that control chemotaxis,
adhesion, phagocytosis, and oxidative activity involve
changes in the cytoplasmic pH and cytoplasmic
calcium concentration ([Ca2+]. The calcium
homeostasis of PMN depends on subcellular stores,
the level of cytoplasmic calcium and some membrane
channels. Herrmann J. M. (2005) found that these
dysfunctions in aggressive periodontitis involve Ca2+
and H+ signaling as well as the subsequent
redistribution of these cations. The author noticed that
the early stimulus responses to fMLP (formyl-Met-Leu-
Phe) or IL-8 by PMN in aggressive periodontitis , as
measured by changes in cytoplasmic [Ca2+] and pH, are
larger in aggressive periodontitis-PMN than in chronic-
11

agresive decât în PMNcronic. În contrast,
redistribuţia Ca2+ rapid eliberat este semnificativ
mai scăzută, implicând un defect al pasajului
Ca2+prin membrană, sau în legarea intracelulară a
calciului. Este cunoscut faptul că două tipuri de
receptori ai calciului, inozitol 1,4,5-trifosfat (IP3) şi
receptorii rianodină reglează eliberarea calciului din
depozitele intracelulare. Recent, o a doua cale, care
acţionează prin receptorul rianodină şi CD38 au
fost identificaţi pentru chemotaxia mediată de
rianodină (Partida-Sanchez S, 2001, 2004).
Diferite componente ale acestei căi stimulus-
răspuns biologic ale PMN sunt compromise în
parodontitele agresive. În plus faţă de o activitatea
a kinazei diacilglicerolului mai scăzută pare a fi
implicată şi o activitate dimunuată a PKC, conform
lui Gronert K (2004), nivele mai scăzute ale ARN-
ului kinazei DAG, acumularea de DAG fiind
posibil asociată cu alterarea metabolismului DAG.
DISTRUGEREA EXCESIVĂ A ŢESUTU-
RILOR PARODONTALE INDUSĂ DE
NEUTROFILE ÎN PARODONTITELE
AGRESIVE
Distrucţia în parodontitele agresive, poate fi
augmentată de generarea crescută de superoxid.
Există câteva căi prin care acest fenomen are loc:
una dintre ele este activarea protein kinazei C de
către DAG, care activează producerea de superoxid
în neutrofile, iar alta este aceea că acidul fosfatidic
promovează activarea complexului de generare a
superoxidului în neutrofile (NADPH oxidaza) atât
prin interacţiunea directă cât şi prin inducerea
fosforilării de către anumite subunităţi ale
complexului enzimatic (Waite KA, 1997 Palicz A,
2001).
Câteva molecule specifice neutrofilelor au fost
implicate ca amplificatori ale răspunsului inflamator.
Degranularea şi eliberarea enzimelor proteolitice
incluzând elastaza, care prezintă capacităţi citotoxice,
urmează activarea graulocitelor neutrofilelor (poza 1 si
poza 2). Granulocitele activate eliberează citokinele
proinflamatorii IL-1, TNF-alfa care augmentează
răspunsul imun inflamator. Sistemul mieloperoxidază-
peroxid de hidrogen-clorură a neutrofilelor ca parte a
apărării gazdei şi posedă o activitate animicrobiană
potentă. (Ihalin and col., 1998). Miloperoxidaza, în
combinaţie cu speciile reactive de oxigen, cum ar fi
O2-, formează acidul hipocloric (HOCl). Acidul
hipocloric (HOCl) inacivează inhibitorul alfa-1
proteinazei, prin oxidarea metioninei din structura sa,
care este esenţială pentru activitatea biologică a
acesteia ) Travis et al., 1994), furnizând codiţii
corespunzătoare pentru acţiunea proteazelor latente
(Yamalik et al., 2000).
12
BIOLOGIE ORALĂ / ORAL BIOLOGY
PMN. In contrast, the redistribution of the rapidly
released Ca2+ is significantly slower, implying a defect in
Ca2+ passage through membrane(s) or in intracellular
Ca2+ binding. It is known that two types of calcium
receptors, inositol 1,4,5-triphosphate (IP3) and
ryanodine receptors, regulate the release of calcium
from intracellular stores. Recently, a second pathway
that acts through the ryanodine receptor and CD38 has
been identified for fMLP (formyl-Met-Leu-Phe)
mediated chemotaxis (Partida-Sanchez S, 2001, 2004).
Various components of these PMN stimulus-
response pathways are compromised in LAP-PMN.
In addition to a lower DAG kinase activity and
diminished PKC activity there seems to be also
involved, according to Gronert K, 2004 a lower DAG
kinase RNA levels, the accumulation of DAG
possibly beeing associated with alterations in DAG
metabolism.
THE EXCESSIVE DISTRUCTION OF
PERIODONTAL TISSUES INDUCED BY
NEUTROPHILS IN AGGRESSIVE PERIO-
DONTITIS
The destruction in aggressive periodontitis, can
be augmented by the increased superoxide
generation. There are several pathways by which
this phenomenon takes place: one of them is the
protein kinase C activation by DAG, which triggers
superoxide production in neutrophils and another
one is that phospatidic acid promotes activation of
the superoxide generating oxidase complex in
neutrophils (NADPHoxidase) by both directly
interacting with and promoting phosphorylation of
certain subunits of this enzyme complex (Waite
KA, 1997 Palicz A, 2001).
Several neutrophil-specific molecules have been
implicated as amplifiers of the inflammatory
response. Degranulation and release of proteolytic
enzymes including elastase, which present cytotoxic
capacities, follow the activation of neutrophil
granulocytes (PMN). The activated granulocytes
release proinflammatory cytokines IL-1, TNF-alpha
that augment the inflammatory immune response.
The myeloperoxidase-hydrogen peroxide-chloride
system of the neutrophils is a part of host defens
and possesses potent antimicrobial activity (Ihalin
et al., 1998). The myeloperoxidase, in combination
with reactive oxygen species, such as O2-, gives rise
to hypochlorous acid (HOCl). Hypochlorous acid
(HOCl) inactivates alpha-1-proteinase inhibitor by
oxidizing the methionine from its structure, that is
essential for its biological activity (Travis et al.,
1994), providing appropriate conditions for the
action of latent proteases (Yamalik et al., 2000).

AFECŢIUNI GENETICE ALE PMN ÎN
PARODNTITELE AGRESIVE
Tulburările genetice ale funcţiei neutrofilelor
sunt asociate cu formele severe ale distrucţiei
parodontale. Sindromul Chediak-Higashi este o
boală rară, transmisă pe cale autozomală recesivă.
Cei afectaţi sunt foarte susceptibili la infecţii
bacteriene şi aceasta pare să fie corelată cu alterările
în capacitatea funcţională a PMN. Pacientul cu
sindrom Chediak-Higashi manifestă gingivită
generalizată, pierdere extensivă de os alveolar şi
pierderea prematură a dinţilor (Temple et al., 1972).
Funcţiile chemotactice şi bactericide sunt
considerate a fi anormale la aceşti pacienţi. Biologia
moleculară a subliniat rolul important al câtorva
receptori în adeziunea de suprafaţa a PMN şi a
evidenţiat faptul că defectele de număr ale
receptorilor ar putea duce la suscetibilitate la boli
infecţioase (Anderson and Springer, 1987).
Câţiva liganzi endogeni, cum ar fi C5a sunt alte
defecte întălnite în parodontitele agresive. Aceştia
persistă după tratamentul agresiv şi sunt observaţi
înainte de apariţia simptomelor clinice (Dennison,
D. K, 1997). N-formilmetionina-leucil-fenilalanina
(fMLP) poate eluda chemotaxia neutrofilelor către
focarul inflamator.
SCĂDEREA MEDIATORILOR ANTIIN-
FLAMATORI PENTRU NEUTROFILE ÎN
PARODONTITELE AGRESIVE
În parodontitele agresive, nu numai mediatorii
proinflamatori sunt crescuţi, dar şi mecanismele
antinflamatorii sunt dereglate. În PMN din
parodontitele agresive, calea de formare a semnalelor
reglate semporar şi care acţionează rapid local cum ar
fi leucotriena eicosanoidă B4 (LTB4) şi lipoxina
antiifnlamatorie A4 ca şi mesagerii secunzi para a fi
alteraţi (Kinane DF 2000, V. Kumar, 2005).
Lipoxinele sunt printre semnalele stop
importante ale inflamaţiei. Una dintre cele mai
importante lipoxine, LXA4, este produsă in vivo în
cadrul inflamaţiei. In leucocitele umane periferice,
LXA4 inhibă chemotactismul atât a neotrofilelor
izolate, cât şi a eozinefilelor in vitro, la concentraţii
nanomolare şi blochează citotoxicitatea celulelor
natural killer. Neutrofilele din parodontitele agresive
nu răspund la tatamentul cu LXA4 şi generarea
crescută de superoxid nu poate fi inhibată de LXA4.
SCĂDEREA METABOLISMULUI ENER-
GETIC CELULAR ALE NEUTROFILELOR
ÎN PARODONTITELE AGRESIVE
Muskelina este o proteină intra-celulară
cunoscută ca având o acţiune de mediator al
răspunsului adeziv celular şi citoscheletal la
MEDICINA STOMATOLOGICĂ, vol. 9, nr. 4 - 5, 2005
BIOLOGIE ORALĂ / ORAL BIOLOGY
GENETIC DISORDERS OF PMN IN
AGGRESSIVE PERIODONTITIS
The genetic disorders of neutrophil function are
associated with severe forms of periodontal
destruction. The Chediak-Higashi syndrome (CHS)
is a rare disease transmitted as an autosomal-rece-
ssive trait. Those affected are very susceptible to
bacterial infections, and this appears to be related to
alterations in the functional capacity of the PMN.
The patient with CHS exhibit generalized, severe
gingivitis, extensive loss of alveolar bone, and
premature loss of teeth (Temple et al., 1972). The
PMN chemotactic and bactericidal functions are
thought to be abnormal in these patients. Molecular
biology has highlighted the important role of several
receptors on the polymorphonuclear leukocyte
(PMN) surface in adhesion, and emphasized that
defects in numbers of these receptors may lead to
increased susceptibility to infectious disease
(Anderson and Springer, 1987).
Several endogenous ligands such as C5a are other
deffects in aggressive periodontitis. They persist
following aggressive treatment and are observed
before the development of clinical symptoms
(Dennison, 1997). N-formyl-methionine leucylphe-
nylalanine (fMLP) can elicit directed neutrophil
chemotaxis to the inflammatory site.
THE DECREASE OF ANTII-INFLA-
MATORY MEDIATORS FOR NEUTRO-
PHILS IN AGGRESSIVE PERIODONTITIS
In aggressive periodontitis not only the pro-
inflammatory mediators are increased, but also the
antiinflamatory mechanisms are disturbed. In PMN
from aggressive periodontitis , pathways for the
formation of temporally regulated and rapid local-
acting lipid-derived signals such as the eicosanoids
leukotriene B4 (LTB4) and the anti-inflammatory
lipoxin A4 as well as the second messengers appear
to be altered (Kinane DF 2000, V. Kumar, 2005).
Lipoxins (LX) are among the important stop
signals for the inflammation. One of the most
important LX, LXA4, is produced in vivo during the
course of inflammation. In human peripheral blood
leukocytes, LXA4 inhibits both isolated neutrophil
and eosinophil chemotaxis in vitro in the nanomolar
range and blocks human natural killer cell cytotoxicity.
Neutrophils in aggressive forms of periodontitis are
unresponsive to LXA4 treatment and increased
superoxide generation cannot be inhibited by LXA4.
THE DECLINE OF THE CELLULAR
ENERGY METABOLISM OF NEUTRO-
PHILS IN AGGRESSIVE PERIODONTITIS
Muskelin is an intra- cellular protein known to act
13

componentele matricii extracelulare (Adams JC,
1999). ARN-ul muskelinei este exprimat la nivele
mai scăzute în neutrofilele din parodontita agresivă
. această reducere a expresiei muskelinei sugerază
declinul metabolismului energiei celulare. Nivelul
expresiei de muskelinei ar putea fi asociată cu
disfuncţia neutrofilelor cunoscută în parodontitele
agresive (De Nardin E, 1996, Agarwal S,
Champagne CM, 1998).
CONCLUZII
Există mecanisme biocelulare variate alterate în
formele agresive de parodontite. Elemente ale
patogenezei sunt chemotaxia deficientă la care pot
contribui si afectiuni genetice, eliberarea excesiva
de mediatori inflamatori si lipsa raspunsului fata de
lipoxinele cu rol antiinflamatoriu, scaderea
metabolismului energetic celular, anormalităţile de
transducţie a semnalului şi stresul oxidativ excesiv.
BIBLIOGRAFIE
1. Adams JC, Zhang L. cDNA cloning of human muskelin
and localisation of the muskelin (MKLN1) gene to human
chromosome 7q32 and mouse chromosome 6 B1/B2 by
physical mapping and FISH. Cytogenet Cell Genet
1999;87:19±21
2. Agarwal S, Huang JP, Piesco NP, Suzuki JB, Riccelli AE,
Johns LP. Altered neutrophil function in localized juvenile
periodontitis: intrinsic or induced? J Periodontol
1996;67:337±344
3. Anderson DC, Springer TA (1987). Leukocyte adhesion
deficiency: an inherited defect in the Mac-1, LFA-1 and
p150-95 glycoproteins. Annu Rev Med 38:175–194
4. Champagne CM, Vaikuntam J, Warbington ML, Rose L,
Daniel MA, Van Dyke TE. Cytoskeletal actin reorganiza-
tion in neutrophils from patients with localized juvenile
periodontitis. J Periodontol 1998;69:209±218.
5. De Nardin E. The molecular basis for neutrophil
dysfunction in early-onset periodontitis. J Periodontol
1996; 67:345±354
6. Dennison, D. K., T. E. Van Dyke. 1997. The acute
inflammatory response and the role of phagocytic cells in
periodontal health and disease. Periodontology 14:54
7. Gronert K, Kantarci A, Levy BD, Clish CB, Odparlik S,
Hasturk H, Badwey JA, Colgan SP, Van Dyke TE, Serhan
CN. A molecular defect in intracellular lipid signaling in
human neutrophils in localized aggressive periodontal
tissue damage. J Immunol. 2004;172:1856–1861.
8. Herrmann Jens Martin,*† Alpdogan Kantarci,* Heidi
Long,† John Bernardo,† Hatice Hasturk,* Lewis V. Wray,
Jr.,† Elizabeth R. Simons,† and Thomas E. Van Dyke*1
Simultaneous measurements of cytoplasmic Ca2+
responses and intracellular pH in neutrophils of localized
aggressive periodontitis (LAP) patients, J Leukoc Biol.
2005 September; 78(3): 612–619.
9. Ihalin R, Loimaranta V, Lenander-Lumikari M, Tenovuo J
(1998). The effects of different (pseudo) halide substrates
on peroxidase-mediated killing of Actinobacillus
actinomycetemcomitans. J Periodontal Res 33:421–427
10. Kinane DF, Lowe GD. How periodontal disease may
contribute to cardiovascular disease. Periodontol 2000.
2000;23:121–126.
14
BIOLOGIE ORALĂ / ORAL BIOLOGY
as a mediator of cell adhesive and cytoskeletal
responses to the extracellular matrix components
(Adams JC, 1999). Muskelin mRNA was expressed at
a lower level in Aggressive-P neutrophils. This
reduction of muskelin expression in aggressive-perio-
dontits neutrophils suggests the decline of cellular
energy metabolism. The level of muskelin expression
might be associated with the neutrophil dysfunction
known to exist in aggressive-periodontitis (De Nardin
E, 1996, Agarwal S, Champagne CM, 1998).
CONCLUSIONS
There are various bio-cellular mechanisms
altered in the aggressive form of periodontitis.
Elements of the pathogenesis are the deficient
chemotaxis, at which it may also contribute genetic
disorders, the release of excessive inflammatory
mediators and the lack of response to the lipoxins
with anti-inflammatory role, the decrease of cellular
energy metabolism that may be signal transduction
abnormalities and the excessive oxidative burst.
11. Kumar V., A.K. Abbas, N. Fausto, in: V. Kumar, A.K.
Abbas, N. Fausto (Eds.), Robbins and Cotran Pathologic
Basis of Disease, seventh ed., Elsevier Saunders,
Philadelphia, PA, 2005, pp. 47–86.
12. Palicz A, Fouchert TR, Jesaitis AJ, Marodi L, McPhail LC.
Phosphatidic acid and diacylglycerol directly activate
NADPH oxidase by interacting with enzyme components.
J Biol Chem 2001; 276:3090–3097.
13. Partida-Sanchez S, Cockayne DA, Monard S, et al. Cyclic
ADP-ribose production by CD38 regulates intracellular
calcium release, extracellular calcium influx and chemotaxis
in neutrophils and is required for bacterial clearance in
vivo. Nat Med. 2001;7:1209–1216.
14. Partida-Sanchez S, Iribarren P, Moreno-Garcia ME, et al.
Chemotaxis and calcium responses of phagocytes to
formyl peptide receptor ligands is differentially regulated
by cyclic ADP ribose. J Immunol. 2004;172:1896–1906
15. Shibata K, Warbington ML, Gordon BJ, Kurihara H, Van
Dyke TE.Nitric oxide synthase activity in neutrophils from
patients with localized aggressive periodontitis. J
Periodontol. 2001 Aug;72(8):1052-8
16. Temple TR, Kimball HR, Kakehashi S, Amen CR (1972).
Host factors in periodontal disease: periodontal
manifestations of Chediak-Higashi syndrome. J
Periodontal Res 7(Suppl):26–27.
17. Travis J, Pike R, Imamura T, Potempa J (1994). The role
of proteolytic enzymes in the development of pulmonary
emphysema and periodontal disease. Am J Respir Crit Care
Med 150:143–146.
18. Waite KA, Wallin R, Qualliotine-Mann D, McPhail LC.
Phosphatidic acid-mediated phosphorylation of the
NADPH oxidase component p47-phox. Evidence that
phosphatidic acid may activate a novel protein kinase. J
Biol Chem 1997; 272:15569–15578.
19. Yamalik N, Caglayan F, Kilinc K, Kilinc A, Tumer C
(2000). The importance of data presentation regarding
gingival crevicular fluid myeloperoxidase and elastase-like
activity in periodontal disease and health status. J
Periodontol 71:460–467