Universitatea POLITEHNICA din Bucuresti

Facultatea de Chimie Aplicata si Stiinta Materialelor

Dep/ Stiinta si Ingineria Materialelor Oxidice si Nanomateriale

Biomateriale compozite
pe baza de colagen si hidroxiapatita

Prof. Habil. Dr. Ing. Anton FICAI

FIM 2017 Sisteme artificiale de DDS 1

Obiectivul general al prezentarii

• De ce substituenti de os?

• De ce sistemul colagen-hidroxiapatita?

• De ce DDS pe baza de COLL/HA?

FIM 2017 Sisteme artificiale de DDS 2

 Metode de obtinere a compozitelor
COLL/HA
1. Mineralizare in vitro a colagenului.
2. Sinteza biomimetica – imersia in SBF
3. Mineralizarea enzimatica a colagenului.
4. Asamblare declansata termic.
5. Infiltrarea colagenului in matrici ceramice.
6. Emulsie apa in ulei.
7. Uscare crioscopica si uscare la punctul critic.
8. Mineralizarea LbL a matricilor colagenice.

Sisteme artificiale
3 de DDS FIM 2017
 Colagen

Sisteme artificiale
4 de DDS FIM 2017
 Compoziţia colagenului

Colagenul are la baza o compoziţie si secvenţa neobişnuita de

aminoacizi
• Glicina (Gly) – se repeta la fiecare ~3 grupări de aminoacizi
• Prolina (Pro) ~ 9% din molecula colagenului
• 2 Aminoacizi necaracteristici, care nu sunt rezultatul
procesului de translaţie ci, se obţin in etapa post-translaţie
prin acţiunea a doua enzime care funcţionează drept oxidaze
si necesita vitamina C drept cofactor
– Hidroxiprolina (Hyp), rezultat prin oxidarea prolinei.
– Hidroxilisina (Hyl), rezultat prin oxidarea lisinei (Lys).

Sisteme artificiale
5 de DDS FIM 2017
 Derma pieii de viţel


Metode de obţinere
Decalcifiere,
exces de apă, 6% sulfat de amoniu, 30 oC, 2 ore

a colagenului Tratament enzimatic:
1,2% Tripsină; 30oC, 1 oră

Neutralizare şi spălare

Reglare pH  3

Tratament enzimatic:
0,2% pepsină, 28-30oC, 12 ore
Colagenul se obţine prin extracţie 
chimico-enzimatica din: Inactivare enzimă
-Placenta (inclusiv umana) Precipitare cu NaCl 1%

-Piele bovina, porcina
Dializă / tampon fosfat pH  7,2
-Peşte 
Solubilizare în mediu acid
20oC, 3% HCl

Omogenizare

Maturare  4oC

Sisteme artificiale
6 de DDSGel de colagen atelopeptidic
FIM 2017
 Forme colagenice comerciale
• Geluri de colagen • Solubile

• Matrici de colagen • insolubile

• Fibre de colagen

Sisteme artificiale
7 de DDS FIM 2017
 Fosfaţii de calciu

Sisteme artificiale
8 de DDS FIM 2017
Caracteristici generale ale fosfaţilor de calciu
 Mineralizare in vitro a colagenului

t=37–400C
pH=8–9
Ca/P
Sisteme artificiale
9 de DDS FIM 2017
Mineralizarea enzimatica a colagenului

Sisteme artificiale
10 de DDS FIM 2017
 Asamblare declanşată termic

• Injectarea precursorilor
compozitului (suspensia acidă
de colagen, ce conţine ionii de
Ca2+ şi fosfat încapsulaţi în
lipozomi) în defectul osos.
• După injectare, temperatura
creşte şi începe procesul de
gelifiere cu formarea reţelei
fibroase de colagen.
• La temperatura corpului uman
(370C) = temperatura de
tranziţie a lipozomilor, ionii
fosfat şi Ca2+ sunt eliberaţi şi
începe procesul de
mineralizare.
Sisteme artificiale
11 de DDS FIM 2017
Infiltrarea colagenului in matrici ceramice

Sisteme artificiale
12 de DDS FIM 2017
Mineralizarea structurilor colagenice

Colagen
Ca2+

Depunere Ca2+
Fosfat

Nucleerea HA
pH = 9–10, t = 35–37 0C

Cresterea particulelor de HA

Osteosinteza naturala Metoda mineralizarii in vitro

Sisteme artificiale
13 de DDS FIM 2017
 Obtinerea compozitelor COL/HA
prin autoasamblare
• Obtinere:
– Gel de colagen AICT (3,21 %)
– Suspensie Ca(OH)2
– Solutie NaH2PO4
– Temperatura 33–35 0C
– pH-ul etapei de precipitare 9 – 9.50

FIM 2017 Sisteme artificiale de DDS 14

 Procesul de
autoasamblare

Reprezentarea schematică
a procesului de autoasamblare indusă
de pH, sub control termodinamic,
în soluţie apoasă
FIM 2017 Sisteme artificiale de DDS 15
Caracterizare:
SEM

Dfibra <20 μm
100 μm <Lfibra < 1000 μm

Imagini de microscopie electronica

inregistrate pentru materialele com-
FIM 2017
pozite obtinute prin autoasamblareSisteme artificiale de DDS 16
 Caracterizare: TEM – HRTEM - SAED

Imagine HRTEM a materialului compozit

COL/HA obţinut prin autoasamblare

FIM 2017 Sisteme

Imagine TEM artificiale de DDS
a materialului 17
compozit COL/HA obţinut prin autoasamblare;
insertul corespunde difractiei de electroni pe suprafaţă selectată
 Caracterizare: ATD–
TG
DrATG
200 100 0.0005

ATG
98
0.0000
96
150 94
-0.0005
92
90 -0.0010
100 88
DTA (uV)

Curba DSC inregistrata pentru un os cranian

-0.0015
86 uman tanar (S-Bone) si respectiv pentru un
84 os radial uman adult (R-Bone)
-0.0020
50 82
80 -0.0025
78
-0.0030
0 76
74
-0.0035
72
-50 70 -0.0040
0 100 200 300 400 500 600 700 800
0
t, C

Analiza termica a compozitului pe baza de

colagen si hidroxiapatita obtinut autoasamblare
FIM 2017 Sisteme artificiale de DDS 18
Curba termogravimetrica inregistrate pentru
cele doua tipuri de oase R si S-bone
 Cuantificarea gradului de orientare
10
2
 α 2 +β 2 +γ 2
N  100
D (%)=    
 N  90 8
i=1
 

Z Axis
6
_
D = 2,54±0.2% 4 




GO = 100-D = 97,46 ± 0.2 % 2

0 10
2 8
4 6
6 4
_ XA is
xi s 8 2 Ax
- D este deviaţia medie a fibrelor de la unidirecţionalitate, 10
Y
- GO este gradul de orientare, % 0
- N este numărul de fibre,
- 100/90 reprezintă un factor de corecţie pentru a se obţine deviaţia medie în pocente,
iar α, β şi γ sunt unghiurile de deviere ale fiecărei fibre, pe cele trei direcţii
- dacă 90 < α`, β` sau γ`≤ 180 atunci α, β sau γ = 180 - α`, β` sau γ`;
- dacă 180 < α`, β` sau γ`≤ 270 atunci α, β sau γ = α`, β` sau γ` - 270;
FIM 2017 Sisteme artificiale de DDS 19
- dacă 270 < α`, β` sau γ`≤ 360 atunci α, β sau γ = α`, β` sau γ` - 360;
- dacă 0 < α`, β` sau γ`≤ 90 atunci α, β sau γ = α`, β` sau γ`.
 Obtinerea compozitelor COL/HA
prin mineralizarea matricilor colagenice
• Obtinere:
– Matrici de colagen 1SO – 7SO
– Suspensie Ca(OH)2
– Solutie NaH2PO4
– Temperatura 33–35 0C
– pH-ul etapei de precipitare 9 – 9.50

Sisteme artificiale
20 de DDS FIM 2017
Compozitia matricilor 1-7SO

Matrice % hidrolizat de colagen % colagen

1SO 5 95
2SO 10 90
3SO 20 80
4SO 30 70
5SO 50 50
6SO 70 30
7SO* 50 50

Sisteme artificiale
21 de DDS FIM 2017
 Caracterizare – SEM

Sisteme artificiale
22 de DDS FIM 2017
Imaginile SEM inregistrate pentru diversele matrici colagenice mineralizate
 Caracterizare –
XRD, SEM si EDS

Sisteme artificiale
23 de DDS FIM 2017
 Structuri orientate obtinute prin
aplicarea campurilor electrice

Mod de lucru
- pH = 9
- t = 37 0C
- Campuri electrice variabile:
- forme variabile
- intensitati variabile

Sisteme artificiale
24 de DDS FIM 2017
 Analiza XRD

Difractogramele de raze X inregistrate pentru compozitele COLL/HA obtinute:

a) in prezenta si respectiv b) in absenta campului electric pulsator de 0,93V/cm
Sisteme artificiale
25 de DDS FIM 2017
 FTIR
a)
3.0

1507.0

1032.6
b)
2.8

2.6

604.2
1457.3
2.4
2.2 3445.6

564.6
2.0

1652.7

1420.9
1.8
Absorbance

1541.6
1.6

1.4

1.2

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

4000 3000 2000 1000

Wavenumbers (cm-1)

Spectrele IR inregistrate pentru

Sisteme compozitele
artificiale
26 de DDS COLL/HA obtinute: FIM 2017
a) in prezenta si respectiv b) in absenta campului electric pulsator de 0,93V/cm
 Microscopie electronica de baleiaj
a b1

b2 c

Imagini SEM reprezentative pentruSisteme

compozitele
artificiale
27
obtinute:
de DDS
a) in absenta campului electric;
FIM 2017
b) in prezenta campului electric pulsator; c) in prezenta campului electric compus
 Mineralizarea matricilor prin procedeul
LbL

Reprezentarea schematica
a procesului de minera-
lizare prin procedeul LbL.

Sisteme artificiale
28 de DDS FIM 2017
 XRD

line - obtained COLL/HA composite

column - HA (ASTM 74-5066)
Difractogramele de
raze X inregistrate
I (CPS)

pentru compozitul
COLL/HA si
respectiv a HA
pure, conform
ASTM 74-5066

10 20 30 40 50 60 70
2Theta
Sisteme artificiale
29 de DDS FIM 2017
 SEM
LbL5; 1000x
LbL1; 1000x

LbL3; 1000x LbL5; 3500x

Imaginile SEM inregistrate pentru

Sisteme artificiale
30 compozitele COLL/HA
de DDS FIM 2017
cu 1,3,5, straturi de HA depuse
 FTIR

Spectrele FT-IR ale matricii colagenice si respectiv a matricilor

Sisteme artificiale
31 de DDS FIM 2017
mineralizate cu 1 sau 3 straturi.
 Analiza termogravimetrica

250 100
95
0.0000
200 90
85
DrTG LbL8
150 80 -0.0005
LbL3 75
DrTG LbL5
70
DTA, uV

100 LbL5 -0.0010

65

TG, %
LbL8 60
DrTG LbL3
50 55 TG LbL8
50 -0.0015
0 45 TG LbL5
40 -0.0020
35 TG LbL3
-50
30
25 -0.0025
-100
20
0 200 400 600 800 1000
100 200 300 400 500 600 700
T, 0C 0
t, C

Analiza ATD-TG inregistrate pentru compozitele COLL/HA cu

Sisteme artificiale
3, 5, 832straturi de DDS FIM 2017
Continut de HA (%) Analiza (termo)gravimetrica
50 y = 4.6529x + 15.458
2
R = 0.9857
40

30

20
1 2 3 4 5 6 7 8
numar de perechi deimersii
■ valori obtinute prin analiza termogravimetrica
♦ valori obtinute prin masuratori gravimetrice
Variatia continutului de HASisteme
depusartificiale
33
functie dede
DDS FIM 2017
numarul de straturi depuse
 Mineralizarea biomimetica a
matricilor colagenice
Concentrația ionilor din SBF și plasma umana
Ionii Concentrația ionilor
SBF Plasma umană
Na+ 142 142
K+ 5 5
Mg2+ 1.5 1.5
Ca2+ 2.5 2.5
Cl- 120 103
HCO3- 27 27
HPO42 2.27 1.0
-

SO42- 0.5 0.5

Anton FICAI, Ecaterina ANDRONESCU, Georgeta VOICU, Madalina Georgiana
ALBU, Andreia ILIE; Biomimetically synthesis
Sisteme artificiale
34 of DDS
de collagen/hydroxyapatite composite
FIM 2017
materials; Mat. Plast. 2010; 47(1); xxx
Metode de caracterizare – SEM

SEM – 1h, în SBF SEM – 4h, în SBF

SEM – 72h, în SBF

Sisteme artificiale
35 de DDS FIM 2017
SEM – 24h, în SBF SEM – 48h, în SBF
SEM – 72h, în
SBF

Sisteme artificiale
36 de DDS FIM 2017
Cinetica reactiei de depunere
24
Continutul de HA, %

23

22

21

20 cinetica exponentiala de ordinul 2

(-x/5.5971) (-x/94.6822)
Ecuatia: y = -4.74199*e -2.76423*e +23.19779
19 2
R = 0.99721

18

17

16
0 100 200 300 400 500
Sisteme artificiale
37 de DDS FIM 2017
timp, min
3
F
I
8 Facultatea de Chimie Aplicata si Stiinta Materialelor
M
2
0 Catedra Stiinta si Ingineria Materialelor Oxidice si Nanomateriale
1
7

Substituenti de os de tip
DDS

Sl.Dr.Ing. Anton FICAI

Sisteme artificiale de DDS
Ianuarie 2014
Recoltare celule

Sisteme artificiale
39 de DDS FIM 2017
Sisteme artificiale
40 de DDS FIM 2017
Sisteme artificiale
41 de DDS FIM 2017
Obtinerea DDS

Sisteme artificiale
42 de DDS FIM 2017
Sisteme artificiale
43 de DDS FIM 2017
Sistem multifunctional de tratare a
cancerului osos

Sisteme artificiale
44 de DDS FIM 2017
CONCLUZII - influenta formei suportului
colagenic asupra porozitatii compozitului

Sisteme artificiale
45 de DDS FIM 2017
CONCLUZII – influenta concentratiei
gelului si a modului de uscare

Sisteme artificiale
46 de DDS FIM 2017
 Concluzii - eliberare
• Porozitate crescuta => eliberare rapida;
• Pori mari => eliberare mai rapida deoarece difuzia este
mai buna;
• Reticularea duce in general la scaderea vitezei de
eliberare;
• Interactii principiu activ-suport puternice => eliberare
lenta;
• Legarea covalenta a medicamentului => scade viteza de
eliberare; substanta activa este disponibila pentru un
timp mai lung
• …
Sisteme artificiale
47 de DDS FIM 2017
VA MULTUMESC

Sisteme artificiale
48 de DDS FIM 2017