RED.

: 01
CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC DATA: 24.01.13
FACULTATEA MEDICINA I, ANUL II
Pag. 1 / 4

Analizat i aprobat la edin a catedrei

din 09.04.2013, proces verbal nr.16
Catedra Biochimie i Biochimie Clinic

eful Catedrei Biochimie i Biochimie Clinic ,

conf. universitar, dr. hab. în medicin
Olga Tagadiuc

Indica ia metodic nr. 14

Tema: Biochimia sângelui. Componen a chimic a plasmei sanguine.
Hemostaza.

Experien a 1. Determinarea proteinelor totale din serul sanguin (metoda biuretic ).

Principiul metodei: Proteinele interac ioneaz în mediul alcalin cu sulfatul de cupru cu formarea
unor compu i de culoare violet . Intensitatea colora iei este direct propor ional cu concentra ia
proteinelor în ser.

Modul de lucru:
Eprubeta
Reagen i
Experimental Control
Ser sangvin, ml 0,1 -
H2O distilat , ml - 0,1
Reactivul biuret, ml 4,9 4,9
Se incubeaz 10 min la temperatura camerei
se m soar extinc ia probei experimentale (E) fa de control la 540 nm
(filtru verde) , în cuva de 1cm.
Calculul se realizeaz dup curba-etalon.

Rezultatul ob inut: E = ________

Concentra ia proteinei = _________ g/L

Valorile normale: 65-85 g/l.

Valoarea diagnostica: Hipoproteinemia apare în nefroze, inani ie, ciroze, la pierderea proteinei în
urma hemoragiilor i form rii exsudatelor. Hiperproteinemia se poate întâlni la pacien i cu mielom,
diabet insipid, vomit ri frecvente, diaree, în cazurile de deshidratare a organismului.

Concluzie: ____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
 RED.: 01
CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC DATA: 24.01.13
FACULTATEA MEDICINA I, ANUL II
Pag. 2 / 4

Experien a 2. Determinarea albuminei în serul sanguin.

Principiul metodei: Albumina seric în mediul slab acid schimb culoarea indicatorului
bromcrezol din verde în galben-verzuie sau verde-albastr .

Reagen i:
Reagent de lucru, care con ine:
Solu ie-tampon citrat, pH 4,2 ……..30 mmol/L
Bromcrezol verde …………………0,26 mmol/L

Reagent de lucru 1,5 ml

se m soar extinc ia ini ial a probei (E0) fa de
ap distilat la 540 nm, în cuva de 0,3 cm.
Ser sanguin 0,05 ml
se amestec , se incubeaz 5 min la temperatura
camerei se m soar extinc ia final a probei (E1)
fa de ap distilat la 540 nm, în cuva de 0,3 cm.

Rezultatul ob inut: E0 = ________ E1 = ________

Calculare: Cantitatea albuminei = (E1 – E0) x 110 g/L =_________________

Not : Coeficientul 110 a fost calculat reie ind din concentra ia i extinc ia standardului.

Valori normale: adul i – 38–55 g/L

Concluzii: ____________________________________________________________________
____________________________________________________________________

Întreb ri pentru autopreg tire:

1. Componen a chimic i func iile sângelui.
2. Substan ele organice azotate ale plasmei sangvine.
a. Proteinele plasmatice. Albumina, globulinele (fibrinogenul, transferina,
ceruloplasmina, haptoglobina, imunoglobulinele). Metodele de dozare i
separare a proteinelor. Varia iile frac iilor proteice în patologie.
b. Enzimele plasmatice. Clasificarea func ional . Mecanismele disenzimiei
plasmatice. Principalele enzime plasmatice cu valoare diagnostic .
c. Compu ii neproteici azota i ai plasmei sangvine. Azotul rezidual, frac iile lui în
norm i în patologie.
3. Compu ii organici neazota i ai plasmei sangvine (glucoza, lipidele, acizii organici,
corpii cetonici). Importan a determin rii lor.
4. Constituen ii minerali ai plasmei. Rolul lor. Ionograma sângelui.
5. Hemostaza. Caracteristica general a fazelor hemostazei (timpul parietal, plasmatic
i fibrinolitic).
6. Coagularea sângelui.
 RED.: 01
CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC DATA: 24.01.13
FACULTATEA MEDICINA I, ANUL II
Pag. 3 / 4

a. Factorii plasmatici i plachetari ai coagul rii. Sediul sintezei, particularit ile

structurale, mecanismul de activare a principalilor factori plasmatici. Rolul
vitaminei K.
b. Mecanismele intrinsec i extrinsec ale coagul rii. Mecanismele moleculare de
formare i stabilizare a cheagului. Coagulopatiile.
7. Sistemele fibrinolitic i anticoagulant: rolul, factorii principali, natura lor chimic ,
mecanismul activ rii. Aplic ri terapeutice.
8. Particularit ile structurale i func ionale ale trombocitelor. Trombocitopatiile.
9. Reglarea st rii fluide a sângelui. Explorarea hemostazei i a fibrinolizei.

Indica ia metodic nr. 15

Tema: Biochimia sângelui. Mecanismele biochimice ale transportului
i schimbului de gaze în sânge. Echilibrul acido-bazic.
Experien a 1. Determinarea hemoglobinei în sânge (metoda hemiglobincianuric ).
Principiul metodei: Hemoglobina la interac iunea cu ferocianura de potasiu se oxideaz la
methemoglobin . Methemoglobina formarez cu acetoncianhidrina un compus colorat în roz,
intensitatea colora iei fiind propor ional cu cantitatea de hemoglobin .
Modul de lucru:
Eprubeta
Reagen i
Experimental Control
1 Sânge, ml 0,02 -
2 Reagent de transformare, ml 5,0 5,0
3 Se incubeaz 15 min la temperatura camerei
4 Determin m extinc ia probei experimentale (E) fa de control,
la lungimea de und 540 nm (filtru verde) în cuve de 1,0 cm.
Calculul se realizeaz dup curba-etalon.

Rezultatul ob inut: E = ________ Concentra ia hemoglobinei = ________ g/L

Valori normale la femei: 115-145 g/L ; la b rba i:130-160 g/L.
Importan a clinico-diagnostic : Con inutul se mic oreaz în anemii ferodificitare, hemoragii,etc.
Se m re te în eritremii, dehidratare.

Concluzie: ____________________________________________________________________
____________________________________________________________________

Întreb ri pentru autopreg tire:

1. Compozi ia chimic a eritrocitelor: hemoglobina, enzimele, componentele
organice nehemoglobinice i componentele minerale.
2. Particularit ile metabolismului eritrocitului matur (glicoliza, untul 2,3-
bisfosfogliceratului, calea pentozo-fosfa ilor, protec ia antioxidant ).
Particularit ile metabolismului energetic. Sinteza ATP. Utilizarea O2 în eritrocite.
 RED.: 01
CATEDRA BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINIC DATA: 24.01.13
FACULTATEA MEDICINA I, ANUL II
Pag. 4 / 4

3. Hemoglobina – model ideal de protein alosteric . Oxigenarea – deoxigenarea

hemoglobinei. Modific rile conforma ionale ale hemoglobinei în aceste procese.
Curba de oxigenare. Efectul Bohr. Variantele de hemoglobine fiziologice.
Hemoglobinopatiile.
4. Transportul O2 i CO2 de c tre sânge. Mecanismul biochimic. Importan a
hemoglobinei în aceste procese i în men inerea constant a pH-ului sangvin.
5. No iune de hipoxemie i hipoxie. Cauzele apari iei lor.
6. Mecanismele fiziologice i biochimice de men inere a echilibrului acido-bazic
(EAB). Sistemele-tampon sangvine. Principalii indici ai EAB. Acidozele i
alcalozele.
7. Compozi ia chimic i particularit ile metabolice ale popula iei leucocitare din
sângele periferic.

Indica ia metodic nr. 16

Totalizare la temele: „Biochimia hormonilor i sângelui”