DIAGNOSTIC IN VIROZE RESPIRATORII

VIROZE RESPIRATORII
Sindrom IACRS Virusuri frecvent asociate Rhinovirusuri, Coronavirusuri Orthomixovirusuri V. paragripale Orthomixov, VRS, adenovirusuri VRS Orthomixo-; paragripale; adenovirusuri Orthomixovirusuri Virusuri VRS, paragripale Adenovirusuri v. rujeolos, VZV, CMV Etiologii infrecvente V. paragripale, enterovirusuri, adenovirusuri

Gripa Crup

Bronsiolita

Bronhopneumonie

Diagnostic in infectia cu virusuri gripale

Orientare clinica
febra (3-5 zile), mialgie, cefalee, astenie (>2 saptamani), tuse neproductiva, faringita, rinoree.
Gripa nu se diagnosticheaza clinic.
Simptomatologie asemanatoare cu infectii determinate de:

Mycoplasma pneumoniae, adenovirusuri, virusul respirator sincitial, rhinovirusuri, virusuri paragripale, si Legionella spp.

ORTHOMIXOVIRUSURI-V. GRIPALE A, B, C myxa-mucus

HA - hemaglutinina NA - neuraminidaza Nucleocapsida helicoidala ARNss anvelopa transcriptaza

Matrice tip A, B, C : NP, M subtipuri: HA si NA 15 tipuri de HA si 9 de NA

Produse patologice :
ajutorul unor tampoane cu coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior. b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de plastic. c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale de catre personal calificat Pentru a mari sansa de izolare probele se recolteaza in primele 72 ore de la debutul infectiei.
a) spalatura nazo faringiana se obtine cu

Produse patologice
Exsudat naso-faringian/SNF
Recoltare. tampon steril - recoltare secretii de pe peretele posterior si lateral al orofaringelui si din orice arie adiacenta cu inflamatie, exudat sau ulceratie. Se evita atingerea tamponului de limba, obraji sau buze pentru evitarea contaminarii; recoltarea nazala se obtine cu ajutorul unui tampon cu coada introdus in cornetul nazal inferior. Stocare si transport. Optim se inoculeaza imediat dupa recoltare. Daca aceasta nu este posibil se ingheata la -70 C si se transporta pe zapada carbonica Prelucrare. Tamponul este dispus intr-un tub steril cu circa 15 ml mediu de transport pentru virusuri si 2% SFV minim o ora, timp necesar elutiei virusului. Tubul se centrifugheaza la 2500 g, 15 minute, la 4 C. Supernatantul este indepartat si sedimentul este resuspendat in 3-4 ml TFS sau mediu de cultura. Spalarea celulelor se poate repeta pentru indepartarea urmelor de mucus din secretii. In final depozitul de celule reluat in TFS serveste pentru izolare virala sau pentru efectuarea de frotiuri ce vor fi testate in imunofluorescenta cu intreaga baterie de seruri antivirale disponibile.

Diagnosticul de laborator al gripei

Directii de diagnostic
Izolare virala + identificare
Detectie directa
antigene virale- RIF acid nucleic- PCR

Diagnostic serologic

Izolare virala

diagnostic de electie

1.-culturi primare de rinichi

de maimuta rhesus. -linia continua epiteliala de rinichi de caine (MDCK - Madin-Darby Canine Kidney). 2. pe ou de gaina embrionat, de 9-11 zile, inoculat intraamniotic sau intraalantoidian.

Hemadsorbtia

demonstreaza izolarea v.gripale pe culturi de celule

Virusurile gripale nu sunt citopatogene. La 48 ore dupa inocularea v. gripal se incearca detectia virusului prin hemadsorbtie, obisnuit cu eritrocite de cobai la 4 C. Hemadsorbtia rezulta din incorporarea in membrana plasmatica celulara a HA virale. Hematiile adsorbite specific rozeteaza la periferia celulelor infectate.

Izolare virala

diagnostic de electie

1.-culturi primare de rinichi de

maimuta rhesus. -linia continua epiteliala de rinichi de caine (MDCK Madin-Darby Canine Kidney). 2. pe ou de gaina embrionat, de 9-11 zile, inoculat intraamniotic sau intraalantoidian.

Izolarea pe OGE

Izolarea se dem. prin proprieratea v. gripale de a aglutina hematii

DEMONSTRAREA PREZENTEI VIRUSULUI IN OGE REACTIA DE HEMAGLUTINARE

UHA

Etape: Ag. viral - dilutii binare suspensie de hematii Se incubeaza la temperatura camerei - 60 minute

Rol RHA: Demonstrarea prezentei virusului hemaglutinant Titrarea antigenului hemaglutinant inaintea reactiei de hemagutino-inhibare

CLASIFICAREA V. HEMAGLUTINANTE
I. HA structurala care distruge R
V gripale, paragripale

II. HA structurala care nu distruge R

Arbovirusuri, v rubeolos

III. HA non-structurala
poxvirusuri

IDENTIFICAREA V. GRIPALE R. HEMAGLUTINO-INHIBARE

Tehnica reactiei:
dilutii binare din ser imun de referinta ag. viral hemaglutinant - 60 min la 37C. sistem indicator - suspensia de hematii. Se incubeaza 60 min la temperatura camerei

Reactia de identificare a virusurilor gripale

UHAI

antigenic shift vs antigenic drift

Diagnosticul serologic
Necesita recoltarea de probe de ser pereche de la acelasi pacient. Nu se practica in mod curent decit in caz de epidemii, pentru diagnostic retrospectiv. Diagnosticul necesita demonstrarea unei cresteri semnificative (de peste 4 ori) a titrului Ac specifici antivirali intre proba de faza acuta, recoltata la o saptamana de la debutul bolii si cea din convalescenta, recoltata 2-3 saptamani mai tarziu. Metoda preferata de evidentiere a anticorpilor anti virali specifici este hemaglutinoinhibarea.

DIAGNOSTIC SEROLOGIC RHAI = Tulpini de referinta + ser pacient

diagnostic retrospectiv, recoltarea de probe de ser pereche cresteri semnificative (de peste 4 ori) a titrului Ac specifici