n 1776 omul de tiin italian Lazzaro Spallanzani a ncercat pentru prima dat crioconservarea spermei n zapad i a observat c spermatozoizi

erau mobili dup decongelare.

n 1938 Luyet i Hodapp au realizat vitrificarea spermei de broasca si stocarea n azot lichid.
In Anglia, Polge 1949 a reusit sa inghete cu succes sperma de cocos prin includerea de Glicerina si in scurt timp a realizat ca acest procedeu poate fi folosit si pentru sperma de taur. n 1985 (Luyet i Hodapp )au raportat vitrificarea cu succes a unor embrioni de oarece. Din 1990 vitrificarea a fost aplicat i pentru ovocite i esut ovarian.

Crioconservarea este un proces n cazul n care celule sau esuturi

ntregi sunt conservate prin rcire, sub-zero temperaturi sczute, cum ar fi (de obicei) 77 K sau -196 C (punctul de fierbere de azot lichid). La aceste temperaturi sczute, orice activitate biologic, inclusiv reacii biochimice care ar conduce la moartea celulelor,este efectiv oprit. Cu toate acestea, atunci cand solutiile crioprotector nu sunt utilizate, celulele fiind conservate sunt de multe ori avariate din cauza congelarii n timpul abordarea la temperaturi sczute sau nclzirea la temperatura camerei

Riscuri
Fenomene care pot cauza deteriorarea celulelor n timpul crioconservari au loc n principal n timpul etapei decongelare, i includ: soluie de efecte, formarea extracelulara de ghea, deshidratare i formarea intracelularde ghea. Multe dintre aceste efecte pot fi reduse prin cryoprotectants.Atunci cnd au ajuns n faza de congelate, materialul este relativ conservat n condiii de siguran fata deviitoarele daune(distrugeri). Cu toate acestea, estimri bazate pe acumularea de radiaii induse de deteriorareaADN-ului n timpul depozitrii criogenice au sugerat o perioad maxim de depozitare de 1000 de ani . Crioprotectanii snt substane chimice cu greutate moleculara mai mica de 100 de Daltoni, care le permite penetrarea prin membrana celulara, se dizolva n ap, scaznd punctual de nghe al acesteia. Crioprotectanii cu aplicaie n criobiologie snt etilen glicolul, glicerol, propilen glicol, dimetilsulf oxid (DMSO).

O celula sau un esut care va fi supus procesului de crioconservare, trebuie sa ndeplineasc cteva condiii: sa fie o celula sau esut sntos, s nu fie contaminat cu microorganisme si s fie ntr-un stadiu care s-i permit folosirea dup decongelare ( cu potenial de diviziune). n reproducerea uman asistat se folosesc n mod curent dou metode de congelare
1.

2.

3.

Congelarea lenta ( Slow freezing) dupa cum i spune i numele congelarea se face lent, scaderea punctului de nghe fcndu-se progresiv, volumul intracelular al apei ramnnd n echilibru cu cel extracelular, deshidratarea celulei facndu-se sub 0C ( n timpul congelrii), la sfritul congelrii celula fiind deschidratat sau ramnd un volum foarte mic de apa. Vitrificarea ( congelarea rapida) reprezint o metode de congelare rapid prin introducerea directa n azot lichid. Concentraia crioprotectaniilor pentru vitrificare este mai mare dect n congelarea lenta, iar timpul de expunere este mai mic. Diferena dintre congelarea lent i vitrificare const n faptul c expunerea celulelor sau esutului la o concentraie mai mare de crioprotectani i introducerea directa n azot lichid previne formarea cristalelor de gheata i astfel o supravieuire mai buna dup decongelare. Avantajele vitrificarii comparativ cu congelarea lent provin din faptul c nu necesit dotari speciale, timpul alocat congelrii este mult redus de la 2 ore la 5-15 minute n funcie de materialul congelat i mediul folosit, rata de supravieuire dupa decongelare este superioara fa de congelarea clasic .

CRIOCONSERVAREA EMBRIONILOR
Crioconservarea embrionilor umani se refera la procesul de inghetare si stocare la o temperatura foarte joasa a ovocitelor fecundate artificial, pentru a putea fi reutilizate in acelasi stadiu functional dupa un anumit timp. Embrionii isi pastreaza viabilitatea datorita azotului lichid in care sunt depozitati, la -196 grade Celsius. Orice fel de tesut viu poate sa fie crioconservat pe intervale temporale foarte lungi, ca apoi sa functioneze normal. Multi ani de-a randul, procesul crioconservarii embrionilor a fost folosit cu succes in asistarea reproducerii diverselor specii de animale. Abilitatea de a pastra intr-un mediu sigur embrioni de calitate permite transferul ovulelor fecundate proaspete intr-un ciclu de reproducere, pastrand posibilitatea unei a doua sanse de a purta o sarcina in viitor prin implantarea embrionilor viabili conservati.

CUM SE REALIZEAZA CRIOCONSERVAREA EMBRIONILOR?

Crioconservarea embrionilor umani se realizeaza intr-o maniera similara cu cea a spermei, in recipiente speciale cu azot lichid. Inghetarea lor se face treptat, pana la expunerea temperaturii finale, astfel incat proprietatile celulelor sa ramana intacte. Embrionii umani pot fi crioconservati din prima zi a formarii lor pana in cea de-a cincea, cand inca se afla in stadiul de blastocist. Intr-o eprubeta subtire si lunga numita "stick", asemanatoare unui pai, sunt depozitati aproximativ 3-4 embrioni. Eprubetele sunt introduse apoi intr-un rezervor cu azot lichid, la -198 grade Celsius. In momentul trasferului de embrioni, readucerea lor la temperatura normala a corpului poarta cu sine un risc de deteriorare a 20% dintre specimene.

CRIOCONSERVAREA DE OVOCITE
Crioconservarea ovocitelor (congelarea ovulelor) este o procedura prin care o femeie isi poate prezerva ovule sanatoase pentru o conceptie care are loc in viitor. Este o metoda utila de sporire sau conservare a fertilitatii pe termen lung, asemanatoare criocenservarii spermei la barbati, in cazurile in care exista posibilitatea ca productia de ovule sau functiile ovariene sa fie compromise.
Cum se face crioconservarea si in ce conditii? Medicul va recolta ovulele sau ovocitele dupa ce iti administreaza medicamente pentru stimulare ovariana. Dupa o zi si jumatate de la administrarea medicamentelor, medicul te va ruga sa revii pentru procedura de colectare a ovocitelor ce urmeaza a fi criogenate. Procesul prin care recolteaza ovocitele se numeste punctie foliculara. Se efectueaza prin vagin si necesita anestezie locala. Medicul exploreaza cu acuratete zona prin imaginile oferite de o ecografie, care se face in acelasi timp in care are loc recoltarea. Procedeul dureaza aproximativ 20 de minute. Ovocitele sunt depozitate apoi in azot lichid la -196 grade Celsius. Pot fi tinute pe termen foarte lung, chiar ani de zile, pana cand te hotarasti sa ramai insarcinata. Dupa aceea, ovocitele scoase de la conservare sunt fertilizate in vitro in laborator, cu spermatozoizi de la partenerul pe care-l alegi sa devina taticul bebelusului tau. Rata de succes a acestui procedeu este aproximativ aceeasi ca la fertilizarea in vitro, cam de 20-25%.

CRIOCONSERVAREA SPERMEI
Crioconservarea presupune colectarea si depozitarea spermei la rece, in congelatoare speciale care respecta anumite conditii, in vederea asigurarii viabilitatii ei dupa decongelare. Specialistii sustin ca sperma umana poate fi congelata foarte multi ani la rand, cea mai lunga perioada de conservare a spermatozoizilor prin criogenie fiind de 21 de ani. Sperma era perfect viabila si functionala dupa aceasta perioada. Cel mai comun crioprotector (agent de protejare folosit in prezervarea celulelor reproducatoare) este glicerolul, la care se mai adauga si alte substante aditionale (zaharoza, di sau trizaharide). Mediul crioprotector poate fi suplimentat si cu galbenus de ou sau lecitina de soia. Ambele substante ajuta in prezervarea spermei, fara a pune in vreun fel in pericol motilitatea, morfologia sau integritatea ei. Materialul seminal colectat si testat in prealabil de afectiuni si anomalii este congelat cu ajutorul unei metode de racire lenta si controlat intr-un congelator biologic programabil. In acest fel, se obtine o rata de inghet scazuta. In timpul racirii, celulele se deshidrateaza. Atunci cand inghetarea ajunge la -35 de grade Celsius, specialistii trec la o racire brusca a lichidului seminal prin introducerea in nitrogen lichid la -196 de grade Celsius. Ei raman depozitati in nitrogen pana la momentul la care se doreste dezghetarea si fertilizarea in vitro sau alte tehnici dereproducere umana asistata, prin care sa se conceapa un bebelus.