UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

Semnalizarea celulara raspunsul celulei la un stimul din mediu

Celulele interactioneaza cu mediul,
interpreteaza semnalele extracelulare prin intermediul unor proteine
transmembranare receptori
Receptorii au domenii extracelulare
si intracelulare
Domeniul extracelular primeste
informatia din mediu si-o transmite
domeniului intracelular
Domeniul intracelular interactioneaza cu proteine de semnalizare intracelulare care transmit mesajul
downstream uneia sau mai multor
proteine efector
Proteinele efector mediaza
raspuns celular adecvat

un
3

Etapele semnalizarii
1) Receptia mesajului extracelular
2) Transmiterea semnalului
3) Raspunsuri celulare (citosol)
4) Modificari in expresia genica (nucleu)
Primar hormon, factor de
crestere, neurotransmitatori

Mesageri
Secundar formati intracelular, sub actiunea unei enzime
efector: cAMP, Ca2+, etc

1. Semnal

2. Receptor

extracelular
Hormoni

3. Efector Receptor

Diferite localizari in
membrana plasmatica

Factori de crestere
etc

4. Enzime efector

5. Mesager secund

upstream
downstream
citosol

6. Cascada de fosforilari

7. Raspunsuri metabolice

Citosol/nucleu

2. Receptori de pe suprafata celulara

insulina

Glucagon,
epinefrina

Receptori cuplati cu proteinele G (GPCR)

O superfamilie de proteine compusa din 3

clase majore si mai mult de 30 subfamilii
toti membrii sunt proteine integrale de
membrana cu 7 regiuni transmembranare

Domeniu intracelular

Domeniu extracelular
legare molecula semnal
(ligand)

8
~ 1000 GPCR la vertebrate, activati de liganzi sau semnale senzoriale
extracelulare (adrenalina, noradrenalina, histamina, serotonina, derivati
retinal, bradikinina, h. luteinizant, parathormonul)

Cel mai frecvent, legarea ligandului sau receptionarea unui semnal fizic
(lumina) conduce la activarea GPCR, cand R sufera o modificare
conformationala ce este transmisa pe partea interna a membranei, unde sunt
activate proteine G

Structura
Date de secventa pe un numar mare de GPCR omologie structurala
elemente structurale comune 7 segmente helix TM de 20-25 aa serpentine
receptors, 7-helix pass receptors
adesea glicoproteine situsuri de glicozilare in regiunea extracelulara cu
secventa consensus Asn-X-Ser/Thr pentru N-glicozilare
structuri loop extracelulare contin frecvent resturi Cys conservate, stabilizeaza
acest domeniu prin punti disulfurice
receptorul - si -adrenergic domeniul citosolic palmitoilat la un rest Cys - C
terminal modificare care ancoreaza capatul C la membrana

3. Proteine G

Proteine de legare a GDP/GTP (catalizeaza interschimbul GTP/GDP)

Proteine cu activitate GTPazica intrinseca

Ciclul GDP/GTP activarea proteinelor G

GEF

10

O proteina G inactiva este un heterotrimer

G , G si G , care leaga GDP
Cand GPCR recunoaste hormonul, se produce
o modificare conformationala in structura
receptorului, care activeaza proteina G
producand disocierea subunitatii G care
leaga GTP in schimb la GDP

GAP

G .GTP este proteina G activa apta de a

continua semnalizarea
Schimbul GDP/GTP este accelerat de proteine
GEF (GDP/GTP exchange factor)

Dupa transmiterea semnalului, are loc refacerea structurii heterotrimere ,

cu hidroliza GTP
Activitatea GTPazica intrinseca a proteinei G este exacerbata de proteine
GAP (GTPase activating proteins)

4. Downstream proteine G

11

Proteinele G activate G .GTP initiaza

diferite
variante
de
semnalizare
downstream, urmatoarea molecula de
semnalizare putand fi: adenilat ciclaze
(AC), fosfolipaze, fosfodiesteraze, canale
ionice, etc care permit sinteza unui
mesager secundar

Adenilat ciclaze

12

La activare, domeniile catalitice sunt aduse impreuna

Proteine G stimulatorii (Gs) si inhibitorii (Gi)

Glucagon, epinefrina, ACTH

Proteine G stimulatorii Gs

PGE1, adenozina

Proteine G inhibitorii Gi

adenilat ciclaza
activeaza

adenilat ciclaza
inhiba

canale de Ca2+

canale de Ca2+

13

5. Mesageri secundari
Concentratia cAMP
~ 10-5 M in lipsa semnalului
creste de ~ 5 ori, in cateva secunde,
dupa primirea semnalului
semnalul este stins prin actiunea
fosfodiesterazei
14

Se cunosc multi alti mesageri secundari: compusi hidrofili (cAMP, Ca2+, cGMP,
inozitol trifosfat)
compusi hidrofobi (fosfatidil
inozitoli, diacilgliceroli, acid
arahidonic, acizi fosfatidici,
etc); gaze (NO, CO) care
difuzeaza prin membranele
celulare in citosol
Mesagerii secundari (MS)
- iau nastere printr-o
cascada de reactii;
-concentratia lor
intracelulara este reglata de
semnale extracelulare
-realizeaza
amplificarea mesajului primar
-un MS poate
transmite multiple mesaje,
integrarea efectelor
semnalelor
15

6. Downstream cAMP - PKA

16

Protein kinaza cAMP dependenta

Ser/Thr protein kinaza catalizeaza
fosforilarea unor proteine substrat la
nivelul unor resturi de Ser sau/si Thr
activandu-le sau inhibandu-le

Fosforilarea este reversibila

fosfoprotein fosfataze catalizeaza
defosforilarea fosfo-proteinelor

17
PKA in stare inactiva contine
2 subunitati catalitice C de 38 kDa
2 subunitati reglatoare R de 49 kDa
C2R2
Subunitatile R contin 2 situsuri de
legare ale cAMP
La primirea semnalului, se sintetizeaza cAMP, care se leaga la subunitatile R,
iar subunitatile C disociaza:
C2R2 + 4 cAMP R2(cAMP)4 + 2 C
C este PKA activa Ser/Thr protein kinaza
Hormonii care semnalizeaza prin calea Receptor GPCR proteina Gs
adenilat ciclaza cAMP PKA:
glucagon,
epinefrina (adrenalina), norepinefrina (noradrenalina), vasopresina,
parathormonul, Hormonul adrenocorticotrop (ACTH). Hormonul stimulator
al tiroidei (TSH), Hormonul luteizant (LH)

Protein kinaza A promoveaza o cascada de fosforilari

activatoare
sau
inhibitoare

Kinaza 1
P

Kinaza 2
P

Kinaza 3
Cascada de fosforilari

18

19

Fosforilari activatoare
in liza glicogenului

Glicogen

glucoza

Epinefrina si glucagonului semnalizeaza cresterea glicemiei (au efect

hiperglicemiant)

20

21

cAMP semnalizeaza si
evenimente nucleare
PKA sufera activare
Subunitatile C intra in nucleu,
unde fosforileaza factori de
transcriptie
P300 si CBP (CREB
binding
proteins) sunt co-activatori ai unor
factori
de
transcriptie,
cresc
expresia unor gene tinta
PKA activata interactioneaza cu
factorul de transcriptie CREB (CRE
binding protein) pe care il
fosforileaza
CREB fosforilat + CBP/P300 se leaga la elementul CRE (cAMP response element ) si
stimuleaza transacriptia unor gene (care au in reg promotor elemente CRE)

Multe protein kinaze si fosfoprotein fosfataze

Ser/Thr protein kinaze fosfoprotein fosfataze

Tyr protein kinaze fosfoprotein fosfataze
Ser/Thr/Tyr kinaze fosfoprotein fosfataze

22

Cascada fosfoinozitidei

In locul adenilat ciclazei este implicata fosfolipaza C

23

24

Fosfolipaza C (PLC)
scindeaza PIP2 (un
lipid membranar) cu
formarea a doi
mesageri secundari
DAG si IP3
DAG hidrofob ramane
la nivelul membranei
unde activeaza protein
kinaza C (PKC), o alta
Ser/Thr protein kinaza
IP3 hidrofil migreaza in
citosol unde elibereaza
Ca2+ din rezervele cito
plasmatice (RE, RS)

25
Ionii de Ca2+ - nivelul
citoplasmatic ~ 10-7 M
este mentinut de
pompe de calciu
(Ca2+-ATPaze)
La stimulare hormonala
se deschid canale de
calciu din membr ana
plasmatica si membr
organitelor celulare

TRP (transmembrane
protein) este un canal
de Ca2+ care restaureaza Ca2+ din RE

Frecvent, Ca2+ eliberat

este legat de calmodullina (proteina de 17 kD
cu 2 domenii globulare
unite printr-o secventa
-helix; fiecare
domeniu are 2 motive
EF hand de legare a
Ca2+

Amplificarea semnalului

26

Numai cateva molecule de H pot initia o

cale de semnalizare, mesajul fiind
amplificat treptat
Amplificarea semnalului la nivelul
complexului H-R depinde de:
-viata complexului H-R -controlata de
viteza disocierii H legat;
-frecventa reactiei cu proteina efector
- depinde de concentratia si viteza de
difuzie a ambelor componente;
-dezactivarea complexului H-R.
Semnalizarea prin complexul H-R poate fi inhibata activ prin modificari covalente
(ex. fosforilarea proteinelor) sau prin internalizarea complex H-R. Un receptor
activat poate transmite mai departe semnalul numai daca intalneste o molecula
efector.

27

AGONISTI vs. ANTAGONISTI

Agonist mimeaza un hormon, se leaga la receptor
Antagonist se leaga la receptor neproductiv, si-I inhiba actiunea

mimics a hormone in binding productively to a receptor

Agonist, utilizat in
terapia astmului

Hormon, se leaga la receptorii

2-adrenergici din cord,
creste rata cardiaca

Antagonist,
controleaza
bataile inimii

Semnalizarea insulinei

Insulina are un receptor cu

activitate Tyr kinazica (IR)
cu structura 22
Legarea insulinei la IR
conduce la activarea
receptorului prin
autofosforilarea unor resturi
de Tyr din subunitatile
IR activat fosforileaza o
serie de proteine docking
dintre care cele mai
importante sunt IRS (IR
substrate)
IRS Tyr-fosforilat
fosforileaza alte proteine

ca PI 3-kinaza (fosfatidil inozitol 3-kinaza) care pot fi implicate in translocarea

transportorului GLUT-4 din citosol in membrana favorizand intrarea glucozei in
celula si scaderea glicemiei