Biologie i farmacologie celular

Biologia celular ntr-o viziune util studenilor n farmacie

Introducere

PARTEA GENERAL
Lipidele membranare Proteinele membranare Componenta glucidic a membranei Funcionarea membranei ca sistem integrat

Celula unitatea structural i funcional a organismelor vii Cteva motive care s justifice interesul farmacitilor pentru biologia cellular

Organizarea i funcionarea structurilor celulare

Organizarea i rolul membranei celulare

Organizarea i funciile nucleului Organizarea i funcionarea organitelor celulare

Organite nedelimitate de endomembrane
Ribosomul Citoscheletul Microfilamentele Filamentele intermediare Microtubulii Proteasomul Apoptosomul Mitocondria Peroxisomul Reticulul endoplasmic Aparatul Golgi Lizosomul

Organite delimitate de endomembrane

Principii ale funcionrii structurilor celulare i exploatarea lor n farmacologie

PARTEA SPECIAL
Mecanisme celulare de aciune a medicamentelor
Medicamente cu acionare la nivelul membranelor Medicamente cu acionare la nivelul nucleului Medicamente cu acionare la nivelul structurilor citoplasmatice Sngele principalul esut de conducere a medicamentelor la int Endoteliul cale i int farmacologic Epiteliile digestive i implicarea lor n mecanismele farmacologice Tegumentul i accesibilitatea sa pentru medicamente

esuturi de trecere a factorilor terapeutici

ORGANIZAREA MOLECULAR A MEMBRANELOR CELULARE

DE LA MOLECULE LA O STRUCTUR FUNCIONAL

CONSIDERAII GENERALE ASUPRA ORGANIZRII MOLECULARE A MEMBRANELOR

Ap: Rezidiu uscat:

Substane minerale: Substane organice:
Lipide: Proteine: Component glucidic:

20-30% 70-80%
~1% ~99%
40-50% 50-60% 1-10%

Aranjarea componentelor chimice n biomembrane conform modelului mozaic fluid

Funciile membranei celulare 1. Funcie de barier 2. Funcie metabolic

Lipidele membranare
Aspecte generale Definiia lipidelor Problematica:
De ce lipide? Care dintre lipide? De ce bistrat?

Care dintre lipide?

Clasificri ale lipidelor:
1. Funcie de structura chimic global:
- fosfolipide - colesterol - glicolipide 70-75%; 20-25%; 1-10%.

Care dintre lipide?

Clasificarea fosfolipidelor:
1. n funcie de poliolul din structur: - fosfogliceride (glicerofosfatide); - fosfosfingozide (sfingofosfatide). 2. n funcie de X
X - colin fosfatidilcoline (PC); 20-25% X - etanolamin fosfatidiletanolamine (PE); 20-25% 20-25% X - serin fosfatidilserine (PS); X - inozitol fosfatidilinozitoli (PI); ~1% X - hidrogen acizi fosfatidici (PA); ~1%

Alte fosfolipide:
sfingomieline (SM); 20-25% cardiolipine: 1,3-difosfatidil-glicerine.

Asimetria distribuiei lipidelor membranare

PC i SM foia extern a bistratului lipidic PE, PS i PI foia intern a bistratului lipidic Colesterolul echilibrat ntre cele dou foie Glicolipidele foia extern a bistratului lipidic exclusiv

Mai mult eterogenitate

(a) n poziia 1 a glicerinei: un acid gras saturat (C14, C16, C18); ordinea abundenei:C16 > C18 > C14. (b) n poziia 2 a glicerinei: un acid gras nesaturat (C18:1, C18:2, C18:3, C20:4)

De ce bistrat?
Structura cea mai simpl care rezolv problema separrii de mediu; Posibiliti de asamblare spontan; Tenacitate n refacerea structurii; Confer proprieti fizico-chimice diferite celor doua fee ale membranei; Asigur comportament independent, dar i solidar celor dou fee ale membranei

Starea fizic i dinamica bistratului lipidic

- Proprieti fluide manifestate bidimensional

Micrile lipidelor n cadrul bistratului

1. Micri intramoleculare 2. Micri intermoleculare

Micrile intramoleculare
1. Micri de rotaie 109 rotaii/s

2. Micri de flexie

108 flexii/s

Micrile intermoleculare

1. Micri de translaie 107 schimbri direcie/s

2. Micri flip-flop

extrem de rare

Fluiditatea membranelor

Factori de reglare a fluiditii membranelor Fizici

- Presiunea - Temperatura

Chimici
- Intrinseci - Extrinseci

Reglarea fluiditii membranelor prin factori celulari intrinseci

Rolul acizilor grai nesaturai

Rolul colesterolului

Factori chimici extrinseci de reglare a fluiditii membranelor

Fiziologici Patologici Terapeutici

Caracterul mezomorf al bistratului lipidic

Microdomenii de membran
Caveole Plute lipidice

Rolurile lipidelor membranare

1. Rol structural asigur funcia de barier; 2. Roluri metabolice:
(i) Recunoatere i semnalizare intercelular (glicolipide) (ii) Semnalizarea prin aciunea fosfolipazelor
- Fosfolipaza A1 (PLA1) elimin AG din poziia 1 a glicerinei; C A1 A2 B - Fosfolipaza A2 (PLA2) elimin AG din poziia 2 a glicerinei; D - Fosfolipaza B (PLB) elimin ambii AG simultan; - Fosfolipaza C (PLC) taie ntre glicerin i fosfat; - Fosfolipaza D (PLD) scoate componenta X

Acidul arahidonic surs de mesageri secunzi

(i) prostaglandine 1. Calea ciclooxigenazei: (ii) prostacicline (iii) tromboxani

2. Calea lipooxigenazei:

leucotriene

Cascada fosfoinozitidelor
fosfatidilinozitol (PI)
PI kinaz ATP ADP ATP ADP

fosfatidilinozitol-4-fosfat (PIP)
PIP kinaz

fosfatidilinozitol-4,5-bisfosfat (PIP2)
(specific pentru fosfoinozitide PLC-)

fosfolipaz C

diacilglicerol (DAG)

inozitol-1,4,5-trisfosfat (IP3)

PROTEINELE MEMBRANARE

PC

SM

PE

PS

Clasificarea proteinelor membranare

Funcie de poziia fa de bistrat
- periferice (extrinseci ) ~25%; - integrale (intrinseci) ~75%. ectoproteine

Proteinele extrinseci:
- ectoproteine; - endoproteine. ? protein transmembranar endoproteine

Proteinele intrinseci:
- transmembranare; -?

Caracteristicile fizico-chimice ale proteinelor periferice

Extractibile cu soluii saline, sau ageni chelatori; Au caracter hidrofil; Dup extracie nu poart lipide asociate i i pastreaz solubilitatea n ap;

Caracteristicile fizico-chimice ale proteinelor transmembranare

- se pot extrage din structura membranelor numai cu detergeni; - rmn asociate permanent cu lipide; - sunt insolubile n ap; - au caracter amfifil. Definirea domeniilor structurale
ectodomenii domenii transmembranare 1. ectodomeniu; 2. endodomeniu; 3. domeniu transmembranar.

Clasificare n funcie de numrul de treceri prin bistratul lipidic: 1. unipas; 2. multipas. Clasificare n funcie de orientarea lanului polipeptidic fa de bistratul lipidic: 1. tip I NH2 terminal n ectodomeniu; 2. tip II NH2 terminal n endodomeniu.

endodomenii

Modaliti de structurare a domeniului transmembranar

Proteinele membranei eritrocitare

Electroforeza n gel de poliacrilamid i n prezen de dodecilsulfat de sodiu (SDS-PAGE)
-glicoforina: glicoprotein abundent; 30 kD; migrare atipic; 131 aa; protein transmembranar, uipas, tip I; ectodomeniu mare cu 16 lanuri glucidice; endodomeniu mic; domeniu transmembranar cu 26aa; funcie necunoscut.

- banda 3: funcia canal de schimb anionic (HCO3-/Cl-); ~100 kD; ~930 aa; protein transmembranar, multipas, tip II; domeniul transmembranar cel puin 13 treceri n helix prin bistratul lipidic (~50% din masa molecular); endodomeniul mare, ~400 aa, ~40kD, poart gruparea NH2-terminal; ectodomeniu mic, ~20 aa, doar 2 lanuri glucidice.

Proteinele membranei eritrocitare

Citoscheletul asociat membranei reea de endoproteine,
grosime 5-10nm spectrina: protein periferic (endoprotein); heterodimer, form de bastona; echivalent n alte celule - fodrina.
cap coad

ankirina: endoprotein globular ( ~ 8 x 9,5 nm); se leag la spectrin n treimea caudal; echivalente n alte celule nectina, syndeina. banda 4.1: protein globular ( ~ 6 nm) actina: protein globular ( ~ 5 nm); apare ca oligomer n nodurile reelei citoscheletale asociate membranei.

Organizarea spaial a citoscheletului asociat membranei

Mobilitatea proteinelor membranare

Rolul proteinelor membranare

Asigur funciile metabolice ale membranelor, dar au i rol structural.
Transportori prin membran (canale, pompe, conexoni); Transportori cu membran (clatrin, caveolin); Receptori (hormoni, factori de cretere, citokine chemokine); Molecule de adeziune (integrine, aderine); Enzime (metaloproteinaze de matrice extracelular, fosfolipaze); Proteine de semnalizare; Proteine structurale.

Componenta glucidic a membranei

1. glicolipide; 2. glicoproteine; 3. proteoglicani.

Generaliti asupra compoziiei glucidice a glicocalixului

Monozaharide componente: Glc, GlcNAc, Gal, GalNAc, Man, Fuc, acizi sialici (SA) Glicolipidele: 1 lan oligozaharidic, neramificat Glicoproteinele: mai multe lanuri, ramificate, inserate N-, sau O-glicozidic Consideraii structurale asupra secvenei glucidice

Evidenierea glicocalixului
Metode nespecifice: rou de ruteniu

Evidenierea glicocalixului
Metode specifice: citochimie ultrastructural cu lectine

5, 10 ConA; 6, 11 WGA; 7, 12- RCA

Rolul componentei glucidice membranare

Rol de protecie a membranei Particip la sarcina electric negativ a suprafeei celulare Necesare, dar nu neaprat suficiente funcionrii receptorilor Particip la fenomene de recunoatere celular:
Purttoarele antigenelor de grup sanguin Extravazarea leucocitelor Fertilizarea (fuzionarea spermatozoidului cu ovocitul)

Structurile glucidice purttoare ale antigenelor de grup sanguin

Grupa O: Grupa A: Fuc12Gal14Glc NAc Fuc12Gal14Glc NAc 13 GalNAc Fuc12Gal14Glc NAc 13 Gal

Grupa B:

Diapedeza leucocitelor n zonele inflamatorii

Etapele procesului de extravazare a leucocitelor n zonele inflamatorii

REZUMAT

REZUMAT

microdomenii de membran; domenii de membran