UNIVERSITATEA DE VEST VASILE GOLDI ARAD FACULTATEA DE TIINE ALE NATURII SPECIALIZAREA ECOLOGIE I PROTECIA MEDIULUI

EVIDENIEREA FENOMENELOR DE CROSSING-OVER I PLEIOTROPIE N DIHIBRIDRI LA

DROSOPHILA MELANOGASTER

COORDONATOR TIINIFIC: Conf.univ.dr. TEFNESCU GRIGORIE ABSOLVENT: KATONA NOEMI ANDREA ARAD 2010

CUPRINS
Capitolul 1. Drosophila melanogaster obiect de studiu n genetic Capitolul 2. Aspecte ale unor studii asupra D. melanogaster implicate n alte domenii ale tiinei Capitolul 3. Evidenierea fenomenelor de crossing-over i pleiotropie n dihibridri la D. melanogaster

Capitolul 1

DROSOPHILA MELANOGASTER - OBIECT DE STUDIU N

GENETIC De la experienele lui Mendel la experienele lui Morgan

Munca efectuat de Mendel a contribuit la atribuirea statutului de tiin a geneticii care se bazeaz pe trei criterii: -S-a delimitat cu precizie domeniul de cercetare -Au aprut i s-au perfecionat metode i tehnici proprii de investigare -Au fost obinute rezultate pe baza crora s-au putut formula legi i teorii fundamentale.

Avantajele oferite de Drosophila melanogaster sunt urmtoarele: Se poate cultiva n laborator pe medii simple i uor de pregtit. Are ciclul de via scurt, o generaie nou putnd fi obinut n numai 14 zile la temperaturi de 20 C. ntr-un interval relativ scurt, de numai 45 zile, se pot studia 3 generaii oferind totodat o bun interpretare a rezultatelor unor hibridri. Prezint un dimorfism sexual accentuat, ceea ce favorizeaz munca de alegere a musculielor perechi a cror descenden se va perpetua n cadrul culturilor de ntreinere sau se va studia n culturile experimentale. Este foarte prolific, o pereche de genitori produce aproape 250 de descendeni, fapt ce permite ca studiile hibridologice s aib acoperire statistic foarte bun. Prezint un numr redus de cromozomi somatici (2n = 8 cromozomi), iar forma i dimensiunile lor permit ca ei s poat fi uor identificai. Dimorfismul sexual al musculiei este corelat cu prezena unor perechi de cromozomi sexuali diferii la femel (XX) fa de mascul (XY). Prezena n glandele salivare a unor cromozomi uriai, de cca. 157 de ori mai mari dect cei normali, a permis ntocmirea hrilor cromozomiale citogenetice. n culturile de laborator au fost identificate numeroase fenotipuri mutante, utilizate n experiene de hibridare cu indivizi slbatici, cu fenotipuri alternative normale, rezultatele acestor experiene evideniind fenomenele genetice de recesivitate sau dominan ale caracterelor, de nlnuirea genelor n cromozomi, de transmitere nlnuit a genelor cu cromozomii de sex, de recombinare genetic prin crossing-over ntre cromozomii omologi.

Morfologia i ciclul vital la Drosophila melanogaster

Musculia de oet este o insect cu metamorfoz complet, n ciclul su vital putndu-se distinge mai multe stadii bine delimitate morfologic i temporal. Aceste stadii sunt: oul, embrionul, larva, pupa i adultul.

Fig.1. Metamorfoza la Drosophila melanogaster

Trebuie s amintim c n cea de a treia perioad larvele sunt folosite pentru studiul cromozomilor uriai care se gsesc n glandele lor salivare.

Fig.2. Cromozomii uriai din glandele salivare ale larvei

Fig.3. Adulii de Drosophila melanogaster: mascul (stnga) i femel (dreapta) vedere dorsal

Fig.4. Adulii de Drosophila melanogaster: mascul (sus) i femel (jos) vedere din profil

Tabelul 1: Clasificarea genelor de la om implicate n determinarea unor boli genetice cu ortologi la Drosophila melanogaster
Tipul de boli Numrul de gene

Boli neurologice
Boli endocrine Boli auditive Boli cardiovasculare Boli oftalmologice Boli pulmonare Boli gastro-intestinale Boli renale Boli imunologice Boli hematologice

74 de gene
50 de gene 13 gene 26 de gene 43 de gene 4 gene 13 gene 13 gene 33 de gene 42 de gene

Boli cu deficiene de coagulare

Boli cu diferite tumori maligne Boli ale scheletului Boli metabolice Boli dermatologice Boli tisulare Boli cu deficiene de dezvoltare Boli complexe de alt natur

28 de gene
79 de gene 26 de gene 181 de gene 25 de gene 20 de gene 35 de gene 9 gene

Capitolul

EVIDENIEREA FENOMENELOR DE CROSSING-OVER I PLEIOTROPIE N DIHIBRIDRI LA DROSOPHILA MELANOGASTER

n lucrarea de licen, prin studiul hibridologic pe care mi l-am propus s-l efectuez i eu la Drosophila melanogaster, am avut posibilitatea s evideniez, n cadrul unor experiene corespunztoare, unele legiti ale geneticii generale i, mai ales, cromozomiale, aa cum sunt fenomenele de transmitere a caracterelor care implic: nlnuirea genelor cu sexul (sex-linkage); Recombinarea intracromozomial a genelor prin de crossing-over Pleiotropia

Material si metode
1. Dihibridarea direct, n care genitori au fost: femele (10 indivizi) din linia simplu-mutant ochi roii (w+) i barai (B), care aveau genotipul (w+, B/ w+, B); masculi (20 indivizi) din linia, simplu-mutant ochi albi (w) i rotunzi (B+), care aveau genotipul hemizigot (w, B+/ Y). 2. Dihibridare reciproc, unde genitori au fost inversai, adic au fost: femele din linia homozigot simplu-mutant ochi albi (w) i rotunzi (B+), avnd genotipul homozigot (w, B+/ w, B+); masculi din linia simplu-mutant ochi roii (w+) i barai (B), avnd genotipul hemizigot (w+, B / Y).

Tabelul 1 Segregarea numeric i procentual a femelelor i masculilor n cele 6 clase fenotipice din generaia F2 a dihibridrii directe

Nr. crt. 1 2 3 4 5

Sexul

Normal

Cros s +

Clasa fenotipic Ochi roii i barai Ochi roii, reniformi

Segregare numeric 191 183 122 71 53

Segregar e % 27,4 26,3 17,5 10,2 7,7

femel

mascul

+ + +

Ochi roii i barai Ochi albi i rotunzi Ochi albi i barai

6
Total

Ochi roii i rotunzi

76
696

10,9
100

Tabelul 2 Segregarea numeric i procentual a femelelor i masculilor n cele 8 clase fenotipice din generaia F3 a dihibridrii directe

Nr. crt. 1 2 3

Sexul

Normal

Cross

Clasa fenotipic Ochi roii i barai Ochi albi i reniformi

Segregar e numeric 93 22 12

Segregare % 25,3 6,1 3,3

femel

+ + +

Ochi albi i barai

4
5 6 7 8 Total mascul + +

Ochi roii i reniformi

Ochi roii i barai Ochi albi i rotunzi

81
60 14 14 71 367

22,1
16,3 3,8 3,8 19,3 100

+ +

Ochi albi i barai Ochi roii i rotunzi

Tabelul 3 Segregarea numeric i procentual a femelelor i masculilor n cele 8 clase fenotipice din generaia F2 a dihibridrii reciproce

Nr. crt.

Sexul

Normal

Cross

Clasa fenotipic

Segregar e numeric

Segregar e %

1
2 3 4 5 6 7 8 Total

femel

+
+ + +

Ochi albi i rotunzi

Ochi roii, reniformi Ochi albi i reniformi Ochi roii i rotunzi Ochi albi i rotunzi Ochi roii i barai + + Ochi albi i barai Ochi roii i rotunzi

27
79 26 63 42 100 39 71 447

6,1
17,6 5,8 14,1 9,4 22,4 8,7 15,9 100

mascul

+ +

Femelele F2 cu ochi albi i reniformi posed genotipul (w, B / w, B+) i produc 2 tipuri de gamei, adic (w, B) i (w, B+). Masculii F2 cu ochi albi i barai posed genotipul (w, B / Y) i produc la rndul lor 2 tipuri de gamei, adic (w, B) i (Y).

Tabelul 4 Segregarea numeric i procentual a femelelor i masculilor n cele 4 clase fenotipice din generaia F2 a dihibridrii reciproce
Nr. crt. Sexul Clasa fenotipic Segregare numeric Segregar e %

1
2 3 4 Total

femel

Ochi albi i reniformi

Ochi albi i barai Ochi albi i rotunzi Ochi albi i barai

118
113 125 119 475

24,8
23,8 26,3 25,1 100

mascul

CONCLUZII Obinerea unei linii homozigote de Drosophila melanogaster cu ochi albi i barai, realizat prin dihibridarea direct ntre femele cu ochi roii i barai (linia mutant Bar) i masculi cu ochi albi i rotunzi (linia mutant white), precum i prin dihibridarea reciproc ntre femele cu ochi albi i rotunzi (linia mutant white) i masculi cu ochi roii i barai (linia mutant Bar) a condus la urmtoarele concluzii: 1. n ambele variate ale dihibridrii, direct i reciproc s-a demonstrat c asocierea celor dou caractere mutante, white (ochi albi) i Bar (ochi barai), nlnuite cu sexul, se poate realiza prin fenomenul de recombinare genetic intracromozomial, mai precis, prin schimbul reciproc de gene ntre cromozomii pereche XX de la femelele heterozigote, bazat pe mecanismul de crossing-over. 2. Diferenele ntre datele segregrilor fenotipice obinute n dihibridarea direct i reciproc n cursul generaiilor F1, F2 i F3 au confirmat faptul c genele white i Bar sunt nlnuite cu sexul, mai precis, sunt localizate n cromozomii X de la D. melanogaster. 3. n generaia F2 a dihibridrii directe a fost obinut clasa fenotipic proiectat, de masculi cu ochi albi i barai, dar proporia ei se abate negativ fa de proporia teoretic ateptat, explicaia fiind efectul pleiotropic detrimental pentru viabilitate al genei white (w), efect ntrit i de prezena genei Bar. 4. n segregarea generaiei F3 a dihibridrii directe s-au obinut att masculi, ct i femele cu ochi albi i barai, ambele clase fenotipice exprimnd proporii cu abateri negative semnificative fa de proporia teoretic ateptat, ipoteza explicativ fiind i n aceste cazuri efectul pleiotropic detrimental pentru viabilitate al genei white, cu o ntrire produs de gena Bar. 5. n dihibridarea reciproc, clasele fenotipice de masculi cu ochi albi i barai care apar n segregarea generaiilor F2 i F3, precum i clasa fenotipic de femele cu ochi albi i barai aprut n generaia F3, prin proporiile lor cu abateri negative fa de proporiile teoretice corespunztoare confirm, o dat n plus, observaiile i explicaia prezenei efectului pleiotropic detrimental pentru viabilitate al genei white, ntrit de gena Bar, ca n cazul acelorai clase fenotipice aprute n dihibridarea direct. 6. Datele menionate permit s se considere c prin experienele efectuate s-a demonstrat realitatea fenomenelor genetic-cromozomiale de nlnuire a caracterelor cu sexul, de schimb reciproc de gene ntre cromozomii omologi prin crossing-over i de efect pleiotropic detrimental fa de viabilitatea femelelor i masculilor de D. melanogaster.