TEORIA CROMOSOMIALA A EREDITATII (MORGANISMUL)

Thomas Hunt Morgan (1866-1945), n laboratorul su de la Universitatea Columbia

Mascul i femel de

Drosophila melanogaster

de tip slbatic (Wild type)

Argumente care recomand aceast specie pentru studii de genetic i anume: a. Rapiditatea succesiunii generaiilor (circa 10-15 zile pentru un ciclu ontogenetic complet, la 24oC). b. Prolificitate crescut (circa 200 ou/femel). c. Pretenii sczute fa de condiiile de cretere (se dezvolt bine n condiii artificiale). d. Numr mic de cromosomi (2n=8) uor identificabili. Astfel, perechea I este alctuit din cromosomi n form de bastonae drepte la femel i unul n form de bastona drept i altul ndoit la un capt, n cazul masculului. A se reine acest aspect, ca argument pentru fundamentarea ipotezei plasrii genelor pe cromosomi i pentru considerarea respectivei perechi ca reprezentnd cromosomii sexului (pentru femel, sunt notai cu XX, iar pentru mascul, cu XY). Cromosomii din perechile II i III sunt de forma literei "V". iar cei ai perechii IV sunt punctiformi. Dac cromosomii sexului mai poart i numele de heterosomi, restul sunt denumii autosomi. Principala caracteristic a drosofilei care, pe lng calitile amintite anterior, o recomand drept un material extrem de adecvat pentru investigaii genetice, o constituie mutabilitatea ei ridicat (rata relativ nalt de apariie a mutaiilor, att n mod spontan, ct i sub impactul anumitor tratamente).

Argumente pentru plasarea genelor (factorilor ereditari) pe cromosomi

P F1

w +w + w +w 50%

x x

wy w +y 50%

+ cu ochi de culoare roie F2 w +w + 25% w +y 25% w +w 25% wy 25%

100% cu ochi roii;

50% ochi roii;50% ochi albi

Incrucisarea reciproca:

ww ww+ 50%

w +Y wY 50%

F1

cu ochi roii; ww 25% w +w 25%

cu ochi albi wY 25% w +Y 25%

F2

50% cu ochi roii;50% cu ochi albi 50% cu ochi roii;50% cu ochi albi

ntruct att masculii ct i femelele au trei perechi identice de autosomi, diferenele constnd n prezena heterosomilor pereche (XX) la femele sau nepereche (XY) la masculi, rezult c respectiva gen este plasat pe unul dintre cromosomii sexului i anume pe cromosomul X, deoarece femelele heterozigote se comport (fenotipic) asemenea celor homozigote dominante, n timp ce masculii (fiind hemizigoi) se manifest recesiv sau dominant, n funcie de tipul cromosomului X pe care l-au primit (cu gena slbatic sau cu alela mutant plasat pe el). Fenomenul, cunoscut i sub numele de sex linkage, se constituie n cauz pentru abaterea de la tipul mendelian de segregare.

Plasarea liniar a genelor pe cromosomi

S-a efectuat o experien de hibridare (tip dihibridare), ntre indivizi de D. melanogaster ce difereau ntre ei prin culoarea ochilor i forma aripilor. Femela era fenotipic normal (pr+pr+vg+vg+), iar masculul dublu mutant - avea ochii purpurii (prpr) i aripile vestigiale (vgvg). n F1 s-au obinut doar indivizi fenotipic normali. Prin ncruciarea lor, n F2, n loc s se obin segregarea de tip mendelian, de 9:3:3:1, s-au obinut doar dou categorii de fenotipuri - 75% de tip parental dominant i 25% de tip parental recesiv. Deci, un raport tipic monohibridrii (adic 3 : 1). Prin urmare, se impune o prim concluzie. Cele dou caractere nu segreg independent. De aici supoziia c ele sunt plasate (genele ce le determin) pe acelai cromosom. Adic, pentru individul normal vom avea pr+ vg+, i pr vg pentru cel mutant. pr+ vg+ pr vg

Pentru a elimina confuziile, precizm c cele dou gene sunt cantonate pe cromosomii perechii a II-a. Deci, nu este vorba de cromosomii sexului i, de aceea, nu am notat masculul mutant prin pr vg.

P G

pr+ vg+ pr+ vg+

pr+ vg+

x x

pr vg pr vg
pr vg

F1
G F2

pr+ vg+ pr vg pr+ vg+ pr vg pr+vg+ pr+vg+ pr+vg+ pr vg

x
x

pr+ vg+ pr vg pr+ pg+ pr vg pr vg pr vg

pr+vg+ pr vg

Segregare genotipic: 25% homozigot dominant + 50% heterozigot, + 25% homozigot, recesiv Segregare fenotipic: 75% dominant + 25% recesiv

Prin urmare cele dou gene sunt localizate pe acelai cromosom i se transmit mpreun. Fenomenul este cunoscut, n genetic, sub numele de linkage (nlnuire, legare). Este, n fond, nu numai o abatere, ci o completare a legii segregrii independente a caracterelor, demonstrat de Mendel.

Transmiterea nlnuit a tuturor genelor plasate pe un cromosom (linkage)

Autenticitatea linkage-ului a fost retroncruciarea de tipul Test-cross (FT). confirmat i prin

Adic, un individ din F1 (un mascul) se ncrucieaz cu unul dublu mutant (o femel). Se obin dou clase fenotipice i anume: 50% indivizi normali i 50% indivizi dublu mutani.

Precizm c este obligatorie respectarea sexelor indicate, deoarece masculul nu prezint fenomenul de crossing-over i, n consecin, rezultatele experimentului sunt constante.

P(F1) G FT

pr+ vg+ pr vg pr+ vg+, pr vg pr+ vg+ pr vg

x x

pr vg pr vg pr vg pr vg pr vg

Heterozigoi cu fenotip normal (dominant) 50%

Homozigoi cu fenotip recesiv(dublu mutant) 50%

Deci, att genotipic (Sg), ct i fenotipic (Sf), segregarea este de 1:1.

Sex-linkage (transmiterea nlnuit a genelor plasate pe heterosomi)

Motenirea culorii ochilor la Drosophila melanogaster, n descendena unei femele normale i a unui mascul cu ochii albi (dup Snustad & co., 1997)

Transmiterea culorii ochilor, la D. melanogaster, prin hibridarea dintre o femel heterozigot i un mascul mutant (sus) i o femel mutant i un mascul normal (jos) (Dup Snustad & co., 1997)

Genele care fac parte din aceeai grup de linkage, sunt gene linkate. Cromosomii reprezentnd substratul (suportul) material al genelor, rezult c n meioz asortarea ntmpltoare a cromosomilor n gamei este, n fapt, asortarea ntmpltoare a grupelor de linkage. Altfel spus, o gen i chiar o grup de linkage, au comportamente identice cromosomilor. n cazul sex-linkage-ului, are importan sexul indivizilor pe care-i folosim n ncruciare. Evident, cnd genele sunt localizate pe autosomi, sexul indivizilor utilizai pentru ncruciare nu ar trebui s aib importan. Dar, aa cum precizam mai sus, la Drosophila melanogaster, ntre autosomii masculului nu are loc fenomenul de crossing-over. Prin urmare, cnd se ateapt o constan a rezultatelor, este bine s se in cont de acest lucru.

Crossing-over (schimbul reciproc de gene)

Nu ntotdeauna genele aparinnd aceluiai grup de linkage, se transmit mpreun. S-au constatat nenumrate excepii. n tentativa de a da explicaii adecvate abaterilor de la regul, Morgan i echipa sa au constatat c ntre cromosomii omologi poate avea loc un schimb reciproc de gene. Fenomenul a primit numele de crossing-over.

Crossing-over ntre cromosomii sexului

Prin ncruciarea unei femele de Drosophila melanogaster, dublu mutant (cu dou mutaii recesive, ale genelor localizate pe cromosomul X, determinnd culoarea galben a corpului i culoarea alb a ochilor), cu un mascul normal, n F1 s-au obinut doar indivizi de dou tipuri - deci, o segregare de 1:1. Femelele erau cu fenotip normal, dar heterozigote i masculii cu fenotipizare mutant, dar hemizigoi genotipic. Fenomenul a primit denumirea de ereditate n cruci (crisscross), deoarece fenotipul mamei se manifest la fii, iar cel al tatlui la fiice. Prin ncruciarea indivizilor femeli i masculi din F1, s-a constatat apariia, n F2, a patru clase de indivizi - dou clase conforme rezultatelor determinate de linkage i alte dou clase cu recombinare de caractere. Proporia era de 49,25% pentru fiecare dintre primele dou clase i de 0,75% pentru fiecare din clasele cu recombinare.

Deci, plecndu-se de la femele dublu mutante i masculi normali, n F1 s-a obinut o segregare fenotipic (Sf) de 1:1 i una genotipic (Sg) tot de 1:1, femelele fiind heterozigote, cu fenotip normal (dominant) i masculii hemizigoi, cu fenotip recesiv (mutant).

P G F1 ne G re F2

XywXyw Xyw XywXy+w+

x x

Xyw, Xy+w+ x Xy+w, Xyw+ XywXyw XywY Xy+w+Xyw Xyw+Y Xy+wXyw Xy+wY 49,75% 49,75% 0,75%

Xy+w+Y Xyw, Y XywY Xyw, Y Xyw+Xyw+ Xyw+Y 0,75%

Teoretic, gameii indivizilor de F1 trebuiau s fie doar de dou tipuri: la femele Xyw i Xy+w+, iar la masculi Xyw i Y. Dar rezultatele ncrucirii indivizilor din F1, dnd un cu totul alt raport de segregare n F2 i, mai ales, dnd o categorie de indivizi cu recombinri de caractere, s-a ajuns la concluzia c a avut loc crossing-overul ntre cromosomii omologi i apariia a dou noi tipuri de gamei n cazul femelelor: Xy+w i Xyw+. Prezena acestor gamei explic apariia indivizilor cu fenotipuri recombinate, n F2. Acetia sunt att masculi, ct i femele, cu corp gri i ochi albi sau cu ochi roii i corp galben. Deci, ntre genele y+ i w+ i alelele lor, situate pe cromosomii X omologi, au avut loc schimburi, rezultnd noi grupe de linkage. Adic, din y+w+ i yw, au rezultat y+w i yw+, alturi de tipurile parentale care s-au meninut.

Crossing-over ntre autosomi

ncrucind o femel de Drosophila melanogaster cu corpul negru (b - de la black) i aripi normale (vg+) cu un mascul cu corpul gri (b+) i aripi vestigiale (vg), n F1 s-au obinut indivizi heterozigoi b+b vg+vg, cu fenotipul normal.

ncrucindu-se indivizii din F1 cu indivizi dublu mutani (ncruciare de analiz genetic), s-a constatat c n FT, fenotipul indivizilor difer n funcie de sexul lor.
Astfel, dac se efectueaz o retroncruciare ntre un mascul din F1, heterozigot (b+bvg+vg) cu o femel mutant (bbvgvg), n FT se obine segregarea de 1:1, ca n experimentele pentru demonstrarea fenomenului linkage (adic reapar indivizii cu fenotip parental - corp negru i aripi normale i corp gri cu aripi vestigiale). Deci, linkage-ul este total.

P G

b vg+ b vg+ b vg+ b vg+ b+ vg

x x

b+ vg b+ vg b+ vg b b vg vg

F1

G
FT Sf Sg

b vg+, b+ vg
b vg+ b vg 1 1(bbvg+vg)

vg

b+ vg b vg 1 1(b+bvgvg)

n ncruciarea reciproc (retroncruciare) dintre o femel hibrid de F1 (b+bvg+vg) i un mascul dublu mutant (bbvgvg), n FT, pe lng tipurile parentale (corp negru i aripi normale; corp gri i aripi vestigiale), mai apar nc dou clase fenotipice (care, n mod normal, nu trebuiau s apar: corp gri i aripi normale; corp negru i aripi vestigiale). ntr-o populaie suficient de mare, proporia indivizilor este de 41,5% pentru fiecare dintre tipurile parentale i cte 8,5% pentru fiecare dintre tipurile recombinante. Deci, linkage-ul genelor b+ i vg+ se deregleaz i respectivele gene "segreg", datorit schimbului reciproc de material cromatic ntre cromosomii omologi. Rezult c femelele din F1 pot forma patru tipuri de gamei - dou normale i dou recombinate, primii fiind numii gamei crossing-overi, ceilali fiind gamei necrossing-overi.

P G F1 GF1 FT

b vg+ b vg+ b vg+

x x x x

b+ vg b+ vg b+ vg

b vg+ b+ vg
b vg+, b+ vg i b+ vg+, b vg

b b

vg vg

b vg

b vg+ b vg
41,5%

b+ vg b vg
41,5%

b+ vg+ b vg
8,5%

b vg b vg
8,5%

segregare

83,0 % indivizi necrossing-overi

17,0% indivizi crossingoveri

Crossing-over simplu la plante

C. Hutchinson a utilizat dou linii homozigote de Zea mays una cu boabe coninnd aleuron colorat i endosperm neted (c+c+sh+sh+), iar cealalt cu aleuron incolor i endosperm zbrcit (ccshsh).
Hibridarea ntre cele dou linii a permis obinerea, n F1, heterozigoilor c+csh+sh, cu expresie fenotipic normal. Prin retroncruciarea unui astfel de hibrid, din F1, cu un printe dublu mutant, n FT nu s-a obinut o segregare de 1:1, cum ar fi fost normal n linkage, ci s-au obinut patru clase fenotipice dou asemntoare cu prinii (adic fr crossing-over) i dou recombinante (cu crossing-over), care nu erau ateptate n mod normal.

P G

F1

FT

c+ sh+ x c+ sh+ c+ sh+ x c+ sh+ x c sh c+ sh+, c sh, gamei necrossingover x c+ sh, c sh+ gamei crossingover c+ sh+ c sh c sh c sh 48,2% 48,2% Indivizi necrossing-overi

c c c c c

sh sh sh sh sh

c sh

c+ sh c sh+ c sh c sh 1,8% 1,8% Indivizi crossing-overi

Crossing-over dublu la plante

M.M. Rhoades a descoperit un crossing-over dublu, tot la Zea mays. ncrucind plante cu fenotip normal verde (v+), avnd nervura central a frunzei de culoare verde (bw+), boabele cu gruncioare de aleuron incolor (pr+) i plante mutante pentru cele trei caractere, adic avnd fenotipul verde deschis (v, de la virescent), nervura central de culoare brun (bw, de la brown) i aleurona purpurie (pr), n F1 a obinut plante heterozigote cu fenotipul normal. Precizm c cele trei gene sunt localizate pe cromosomii din perechea a V-a. Hibrizii din F1, retroncruciai cu indivizi triplu mutani, nu s-au comportat n FT conform legilor mendeliene ale segregrii, adic nu au dat 50% indivizi cu fenotip normal i 50% cu fenotip recesiv (mutant). Rezultatul a fost neateptat, obinndu-se opt tipuri de indivizi: dou tipuri parentale i ase tipuri recombinate.

P
G F1 G

bw+pr+v+ bw+pr+v+ bw+pr+v+ bw+pr+v+ bw pr v bw+pr+v+, bw pr v; bwpr+v+, bw+prv; bw+pr+v, bwprv+; bw+prv+; bwpr+v

x
x x

bw bw bw bw bw

pr pr pr pr pr

v v v v v

bwprv

bw+pr+v+ bw prv

bw+prv+ bw prv

bw+pr+v bw pr v

bwpr+v+ bw pr v

bw+prv bw prv

bwprv+ bw prv

FT

21,05%

21,05%

7,25%

7,25% 17,85% 17,85% 35,70%

3,85%

3,85%

42,10%

14,50%

7,70%

bwpr+v bw prv

bw prv bw prv

Mecanismele crossing-overului
Pentru explicarea modalitilor concrete prin care se realizeaz crossing-overul s-au emis mai multe ipoteze, care pot fi grupate n dou mari categorii, i anume: Cele ce consider c fenomenul se datoreaz ruperii cromatidelor i schimbului reciproc de segmente (breakage theory) (Fig.1).

Cele ce consider drept cauz a fenomenului replicaia selectiv a cromatidelor n timpul dublrii materialului cromosomial (copy-choice theory) (Fig.2).
Schematic, situaia se red astfel:

Schimb reciproc de segmente prin ruperea cromatidelor

Schimb reciproc de segmente cromatidice prin copiere selectiv

INTREBARI DE VERIFICARE
1. Care au fost avantajele folosirii Drosophilei melanogaster in cercetarile de genetica

2. Ce reprezinta linkage-ul
3. Ce reprezinta si cand are loc crossing-overul 4. Intocmiti schemele hibridarilor care sa ilustreze fenomenele de linkage si crossing-over 5. Care sunt mecanismele moleculare care conduc la aparitia crossing-overului