Lucrarea nr.

6
DETERMINAREA AZOTULUI DIN SOL
Azotul se gsete n sol sub forme organice i forme anorganice.
n cea mai mare parte azotul din sol se afl legat n materia organic ( peste 95 %) i
anume: n resturile organice moarte n substan!ele "umice i microorganisme.
n orizontul superior al solului #$ % &$ % din totalul azotului legat organic se afl sub
form de aminoacizi condensa!i n materia organic i eliberabili prin "idroliz acid' n afar de
acetia solul con!ine i foarte mici cantit!i de aminoacizi liberi care pot fi e(trai n ap alcool
etilic acetat de amoniu.
Alt parte din azotul organic (5 % )$ %) se afl n componen!a aminoza"arurilor care ca
i aminoacizii pot fi elibera!i din sol prin "idroliz acid.
*ormele anorganice ale azotului reprezint 5 % din azotul total cuprins de sol. Acestea
sunt: amoniu (
+
&
NH ) nitri!i (

#
NO ) nitra!i (

+
NO
) i foarte mici cantit!i de compui n stare
gazoas.
,entru nutri!ia plantelor prezint mportan! amoniul adsorbit n form sc"imbabil i din
solu!ia solului i nitra!ii.
,rincipala surs primar a azotului din sol este azotul atmosferic n compozi!ia aerului
atmosferic azotul particip-nd cu cca. .$ % /olum.
0in atmosfer azotul a1unge n sol prin sc"imbul de gaze sol % atmosfer i prin apa
ploilor care aduce n sol cantit!i mici de amoniu i nitra!i. A doua surs primar de azot n sol
este azotul legat cu amoniu n mineralele primare dar acesta este practic inaccesibil.
0in aceste surse primare microorganismele i plantele forma!iilor /egetale care au
populat solul n formare au acumulat treptat azot n materia organic /ie apoi moart a solului.
2ateria organic moart a resturilor de plante a animalelor i microorganismelor moarte a
de/enit sursa principal ca importan! a azotului n sol. *ormele de azot asimilabile pentru
plantele /erzi 3
+
&
NH adsorbit n forma sc"imbabil i dizol/at n apa solului i nitra!ii % pro/in
n cea mai mare parte din materia organic moart prin procesul de mineralizare ( n cadrul
creia au loc succesi/: aminizarea amonificarea nitrificarea azotului).
n solurile de cultur de3a lungul timpului a inter/enit o surs de azot care se poate numi
antropogen gunoiul de gra1d i alte ngrminte gospodreti i apoi tot mai mult
ngrmintele industriale cu azot.
)
Determinarea azotului nitric, azotului amoniacal i azotului soluil total !n "roe
uscate la aer, #olosin$ ca e%tractant solu&ie $e clorur' $e calciu
Azotul solubil se gsete n sol sub form de nitra!i nitri!i amoniu i azot organic.
,rin e(trac!ie cu o solu!ie $$$) mol 4 l de clorur de calciu (5a5l
#
) din probe de sol
uscate la aer sunt e(trase diferite frac!ii ale azotului solubil. 5oncentra!iile compuilor
anorganici ai azotului ( nitra!i nitri!i amoniu) sunt msurate direct n e(tract folosind metode
spectrometrice automate.
,entru determinarea azotului solubil total o parte a e(tractului este mai nt-i
mineralizat dup care amoniul produs este con/ertit n nitrat. Acesta mpreun cu nitratul
nitritul i amoniul e(isten!i n proba ini!ial este apoi msurat folosind o metod spectrometric
automat. 5on!inutul de azot organic solubil este calculat prin scderea con!inutului de azot sub
form de nitra!i nitri!i i de amoniu din con!inutul de azot solubil total.
5on!inutul de azot organic solubil poate fi considerat ca indicator al frac!iei uor
mineralizabile a materiei organice. 5on!inutul de amoniu e(tractibil i de azot organic al solului
se modific n mod frec/ent prin uscare comparati/ cu eantionul de sol proaspt. 2odul de
uscare afecteaz rezultatele analizei.
1. Eantioane de laborator
6rebuie folosit frac!ia din eantioanele de sol uscate la aer care au fost trecute prin sita
cu oc"iuri cu diametrul de # mm. 7 parte din acest eantion se folosete pentru determinarea
con!inutului de umiditate.
2. Extracia
2.1. Principiu
8olul uscat la aer este supus e(trac!iei cu o solu!ie de clorur de calciu $$) mol 4 l
(5a5l
#
) n raport sol : solu!ie de ) : )$ (m 4 /) la #$95 : )95. 0up atingerea ec"ilibrului (# ore)
solu!ia este centrifugat pentru determinarea diferitelor frac!ii de azot.
;(trac!ia se efectueaz la o temperatur constant de #$ 95 deoarece cantit!ile de azot
amoniacal e(tractibil i azot organic solubil sunt afectate de temperatura solu!iei de e(trac!ie.
5entrifugarea este preferat din cauz c "-rtia de filtru fie absoarbe substan!e fie este
contaminat cu amoniu. 0ac nu e(ist posibilitatea centrifugrii i e(tractele urmeaz s fie
filtrate "-rtia de filtru trebuie s fie pstrat cel pu!in o sptm-n nainte de folosire ntr3un
e(sicator peste acid sulfuric concentrat sau ntr3un mediu uscat con!innd acid sulfuric iar primii
#$ de ml de filtrat trebuie arunca!i.
#
2.2 Reactivi
- ap cu o conducti/itate specific sub # m8 4 m la #5 95'
- solu!ie de clorur de calciu' concentra!ia (5a5l
#
) < $$) mol 4 l pentru e(trac!ie.
8e dizol/ )&= g clorur de calciu di"idrat (5a5l
#
(#>
#
7) n ap. 8e dilueaz cu ap
p-n la /olumul de ) l.
3. Aparatur i sticlrie
- balan! analitic cu e(actitate de )$ mg'
- flacoane de polietilen cu capac filetat capacitate nominal de #5$ ml'
- agitator )5$ tura!ii 4 min p-n la #5$ tura!ii 4 min.
- centrifug cu locauri corespunztoare fiolelor utilizate'
- fiole de polietilen pentru centrifug cu capacitate de )$$ ml sau de alt capacitate
corespunztoare.
. !od de lucru
8e cntresc )$$$ g din eantionul de laborator i se introduc ntr3un flacon de
polietilen.
8e adaug )$$$ ml solu!ie de clorur de calciu la o temperatur de #$ 95. 8e agit
mecanic timp de dou ore la #$ 95.
8e decanteaz cantitatea necesar din suspensia e(tractului n fiole de centrifugare i se
centrifug"eaz timp de )$ minute apro(imati/ la +$$$ de tura!ii. 8e decanteaz solu!ia de
supernatant n /asele de msurare i se msoar con!inutul de nitrat (? nitrit) nitrit (dac este
necesar) amoniu i azotul solubil total aa cum este specificat n figurile ) # + &.
8e e(ecut i o prob martor prin adugarea numai a solu!iei de clorur de calciu ntr3o
fiol de polietilen.
*rac!iile de azot solubil trebuie msurate imediat sau nu mai t-rziu de o zi de la e(trac!ie.
0ac acest lucru nu este posibil e(tractele trebuie pstrate n frigider la temperaturi sub & 95
pentru ma(im o sptm-n.
+
a) Determinarea azotului nitric
1. Principiu
n sistemul de analiz n flu( segmentat (8*A) proba este n primul r-nd supus la
dializ. 0ializa ser/ete la separarea ionilor de nitrat de substan!e interferente ca de particule
solide coloizi i compui organici colora!i. @onii nitrat i nitrit din probe trec prin membran i
sunt antrena!i cu un curent de clorur de amoniu. Aitratul este apoi redus la nitrit prin
intermediul cadmiului. Apoi se adaug B3naftiletilendiamina di"idrocloric i sulfanilamida
(reacti/ de culoare cunoscut sub numele de reacti/ Criess % @los/aD) care formeaz n mediu acid
un diazoderi/at de culoare roie. Absorb!ia acestuia este msurat la lungimea de und de 5&+
nm.
n mod normal con!inutul de nitrit n sol este mic practic negli1abil. n aceste cazuri
suma nitratului i nitritului corespunde con!inutului de nitrat. n cazuri speciale c-nd nitrificarea
n soluri pare s fie incomplet se determin separat con!inutul de nitrit.
2. Reactivi
- agent tensioacti/ eter de polio(ietilenlauril'
- solu!ie tampon: se dizol/ ntr3un balon de ) litru #5 g clorur de amoniu (A>
&
5l)
n pu!in ap. 8e adaug )#5 ml solu!ie de "idro(id de amoniu i ) ml agent
tensioacti/. 8e completeaz la semn cu ap i se omogenizeaz.p>3ul acestei solu!ii
trebuie s fie cuprins ntre E i ..
3. A"ent reductor #d $ #u
8e agit apro(imati/ 5 g pulbere de cadmiu (mrimea particulei de la $+ mm p-n la $.
mm) timp de )$ minute cu apro(imati/ +$ ml acid clor"idric de concentra!ie ) mol 4 l. 8e spal
cu ap p-n c-nd pulberea este liber de acid. 8e adaug circa 5$ ml solu!ie de sulfat de cupru
(@@) de concentra!ie #$ g 4 l i se agit timp de + minute. 8e spal cu cantit!i mici de ap cel
pu!in de )$ ori p-n c-nd se ndeprteaz complet cuprul floculat. Agentul reductor 5d 4 5u se
pstreaz n loc ntunecos.
. #oloan reductoare #d $ #u
8e umple o coloan n form de F cu solu!ie tampon n aa fel nc-t s nu se introduc
bule de aer. ,ulberea de cadmiu acti/at se introduce cu a1utorul unei p-lnii pe ambele bra!e ale
coloanei. 8e scutur pentru ca pulberea s se adune. 5oloana se umple p-n la 5 mm de /-rf i se
astup cu un dop mic de /at de sticl. Astfel pregtit coloana poate fi introdus n sistemul
8*A.
&
,entru prelungirea /ie!ii agentului de reducere 5d 4 5u trebuie introdus o s-rm de
cupru la captul tubului reductor 5d 4 5u care se rennoiete dac este necesar.
%. Reactiv de culoare
ntr3un balon de un litru se adaug )5$ ml de acid fosforic concentrat .5 % (>
+
,7
&
) la
$5 l de ap. 8e adaug $5 g de B3naftiletilendiamina di"idrocloric (5
)#
>
)
A
#
5l
#
) i se amestec
p-n la dizol/are. Apoi n acest amestec se dizol/ )$ g sulfanilamid (5.>.A#7#8) i se aduce
la semn cu ap.
&. Aparatur
8istem de analizat n flu( segmentat
8istemul este format dintr3o unitate pentru prele/area probelor pomp unitate de dializ
coloan de reducere unitate pentru nitrat fotometru i nregistrator. 0iagrama flu(ului pentru un
sistem corespunztor de analiz n flu( segmentat (8*A) este redat n fig.)=.
'. #oloan reductoare #d $ #u
Aceasta const dintr3un tub n form de F cu o lungime de )5 cm i cu diametrul interior
de # mm pre/zut cu br!ri pentru a se conecta la tubulatura 8*A. ;a poate fi procurat ca
atare umplut cu cadmiu de la productorul sistemului 8*A sau poat fi confec!ionat n condi!ii
de laborator.
Acest aran1ament 8*A permite determinarea nitritului printr3o simpl eliminare a
coloanei de reducere 3 fig. urmatoare:

*ig. ) ;(emplu de sistem de analiz n flu( segmentat pentru determinarea sumei
azotului nitric i nitros
). ;/acuare solu!ie uzat de reacti/i'
#. ,omp'
+. Geducerea nitratului
5
8: 8olu!ie de e(trac!ie' 6: 5oloan de reducere'
H: 8olu!ie tampon' 0l: 0ializor'
A: Aer pentru segmentare' 2: 2embrana dializorului'
0H: ;liminarea bulelor' 0: 0etector celul n flu(
G): 8erpentina de reac!ie )' filtru 5&$ nm.
G# : 8erpentina de reac!ie #
*ig. # ;(emplu de sistem de analiz n flu( segmentat pentru
determinarea azotului nitros
). ;/acuare solu!ie uzat de reacti/i'
#. ,omp'
8: 8olu!ie de e(trac!ie'
H: 8olu!ie tampon' 0l: 0ializor'
A: Aer pentru segmentare' 2: 2embrana dializorului'
5: Geacti/ de culoare' 0: 0etector celul n flu(
G): 8erpentina de reac!ie )' filtru 5&$ nm.
G# : 8erpentina de reac!ie #
b) Determinarea azotului amoniacal
E
1. Principiu
n sistemul de analiz n flu( segmentat (8*A) proba este mai nt-i supus dializei.
Aceasta deoarece e(tractul de sol poate prezenta turbiditate ca apare n opera!ia de centrifugare.
0eterminarea amoniului se bazeaz pe reac!ia n decursul creia un deri/at al fenolului
(salicilatul) formeaz un indofenol n prezen!a amoniului i "ipocloritului sub ac!iunea catalitic
a nitrofericianurii (nitroprusiat). n mediu alcalin indofenolul astfel format are culoare albastr3
/erde absorb!ia acestuia este msurat la lungimea de und de EE$ nm.
2. Reactivi
- solu!ie tampon p> 5#: se dizo/ ntr3un balon cotat de ) litru #& g de citrat de sodiu
(Aa
+
5
+
>
5
7
=
) i ++ g tartrat de sodiu i potasiu (I
&
Aa5
&
>
&
7
&
). 8e aduce la semn cu
ap. 8e adaug ) ml agent tensioacti/.
- reacti/ de culoare: ntr3un balon cotat de ) litru se pun .$$ ml ap se dizol/ .$ g
salicilat de sodiu (5
=
>
5
7
+
Aa) i #5 g "idro(id de sodiu. 8e aduce la semn cu ap'
- solu!ie de nitrofericianur (nitroprusiat) : se dizol/ )g nitrofericianur de sodiu
di"idrat Aa
#
J*e(5A)
5
A7KL #>
#
7 ntr3un litru de ap'
- solu!ie de izocianurat: se dizol/ # g diclorizocianurat de sodiu (5l
#
5
#
A
+
Aa7
+
(#>
#
7) i #5 g "idro(id de sodiu ntr3un litru de ap.
3. Aparatura
8istem de analiz n flu( segmentat
8istemul este format dintr3o unitate pentru prele/area probelor pomp unitate de dializ
unitate pentru amoniu fotometru i nregistrator. 0iagrama flu(ului pentru un sistem
corespunztor de analiz n flu( segmentat (8*A) este redat n fig.+.
*ig. + ;(emplu de sistem de analiz n flu( segmentat
pentru determinarea azotului amoniacal
). ;/acuare solu!ie uzat de reacti/i'
#. ,omp'
=
8: 8olu!ie de e(trac!ie' 8A: 8olu!ie nitroprusiat
H: 8olu!ie tampon' 0l: 0ializor'
A: Aer pentru segmentare' 2: 2embrana dializorului'
88: Geacti/ de culoare' 0: 0etector celul n flu(
G) G#G+: 8erpentina de reac!ie' filtru 5&$ nm.
G& : 8erpentina de reac!ie &' 80: 8olu!ie izocianurat
5-nd con!inutul de carbon este mai mare de 5$ g 4 l se poate depi capacitatea de
tamponare pentru p> a sistemului. n asemenea cazuri e(tractele trebuie diluate nainte de
msurare.
c)Mineralizarea i determinarea azotului solubil total
ntr3un sistem de analiz n flu( segmentat (8*A) compuii organici din e(tract sunt
mineraliza!i la p><& cu persulfat de potasiu (I
#
8
#
7
.
). 0up care ionii de amoniu ini!ial
prezen!i i cei forma!i prin mineralizare sunt con/erti!i la nitrat prin o(idare cu persulfat de
potasiu catalizat de radia!ii FM. ,roba este supus dializei i n final nitratul este determinat
colorimetric dup reducerea la nitrit.
1. Reactivi
- solu!ie tampon de bora(: ntr3un balon cotat de ) litru ce con!ine apro(imati/ #$$ ml
de ap se dizol/ +. g tetraborat deca"idrat
(Aa
#
H
&
7
=
L)$>
#
7). 8e adaug & g "idro(id de sodiu i se aduce la semn cu ap.
Au se adaug niciodat agent tensioacti/'
- agent de o(idare: se dizol/ cu apro(imati/ 5$$ ml de ap ntr3un balon cotat de )
litru 5# g persulfat de potasiu (I
#
8
.
7
.
) i se aduce la semn cu ap. 8e omogenizeaz
i se las #& " n frigider. Apoi se decanteaz i se folosete supernatantul limpede.
Au se adaug niciodat agent tensioacti/'
- solu!ie tampon: se dizol/ n ap ntr3un balon cotat de ) litru #5 g clorur de
amoniu i se aduce la semn cu ap. 8e adaug ) ml solu!ie de "idro(id de amoniu #5
% i ) ml agent tensioacti/ i se omogenizeaz bine'
- reductor 5d 4 5u'
- reacti/ de culoare: ntr3un balon cotat de ) litru se dilueaz )5$ ml acid fosforic .5 %
n apro(imati/ .$$ ml ap. 8e adaug )$ g sulfanilamid (5
E
>
.
A
#
7
#
8) ) g sare
disodic a acidului etilendiaminotetraacetic (;06A) i $5 g A3()3naftil)etilendiamin
di"idrocloric (5
)#
>
)E
5l
)#
A
#
) i se agit pentru dizol/are. 8e aduce la semn cu ap.
2. Aparatur
.
#.1. (iste) de anali* +n ,lux se")entat
8istemul este format dintr3o unitate pentru prele/area probelor pomp unitate de
dializ coloan de reducere unitate pentru azot solubil total fotometru i nregistrator.
0iagrama flu(ului pentru un sistem corespunztor de analiz n flu( segmentat (8*A)
este redat n fig.+.
2.2. #oloan reductoare
*ig. + ;(emplu de sistem de analiz n flu( segmentat pentru determinarea sumei
azotului solubil total
). ;/acuare solu!ie uzat de reacti/i'
#. ,omp'
+. Geducerea nitratului'
&. 2ineralizare cu FM'
8: 8olu!ie de e(trac!ie' 8A: 8olu!ie nitroprusiat
H: 8olu!ie tampon' 0l: 0ializor'
A: Aer pentru segmentare' 2: 2embrana dializorului'
88: Geacti/ de culoare' 0: 0etector celul n flu(
G) G#G+ G& G5: 8erpentine filtru 5&$ nm'
de reac!ie'
GE : 8erpentina de reac!ie E' 80: 8olu!ie izocianurat
7: Geacti/ de o(idare' HH: 8olu!ie tampon3bora('
G8:Geprele/are prob' 5: Geacti/ de culoare'
0H: ;liminare bule' 6: 5oloan reductoare
+. 8erii de etaloane
+. Reactivi-
9
- solu!ie de clorur de calciu de concentra!ie $) mol 4 l : se dizol/ n ap )&= g
clorur de calciu di"idrat (5a5l
#
L#>
#
7) i se aduce la ) litru cu ap'
- solu!ie de baz mi(t: se c-ntresc #=$.+ g de azotat de potasiu i $9&+ g sulfat de
amoniu. 8e dizol/ n ap n balon cotat de ) litru i se aduce la semn cu ap. 8rurile
trebuie uscate la mas constant la )5$ 9 5 nainte de utilizare.
.!od de lucru
8e pipeteaz $ ml $5 ml ) ml)5ml i # ml din solu!ia mi(t de baz n baloane cotate
de #5$ ml. 8e adug #5 ml solu!ie de clorur de calciu i se aduce la semn cu ap. Aceast serie
de etaloane trebuie proaspt pregtit nainte de fiecare utilizare. 5oncentra!iile sunt cele
prezentate n tabelul 5.
5oncentra!iile seriilor de etalonare 6abelul 5
*rac!ia 5oncentra!ia mg 4 l
A7
+
3 A $ $=5 )5$ ##5 +$
A>
&
3 A $ $&$ $.$ )#$ )E$
A solubil
total
$ ))5 #+$ +&5 &E$
8e folosesc centrifugatele preparate dup instruc!iunile anterioare. ;(tractele de sol
e(tractele probei martor i seriile de etalonare se pun n sistemul automat de prele/are a
probelor. 8e opereaz sistemul de analizat n flu( segmentat conform fig.)= 3 fig.#$.
8e traseaz curbele de etalonare i se determin concentra!iile diferitelor forme ale
azotului
5. 5alculul i e(primarea rezultatelor
5on!inutul diferitelor frac!ii de azot din sol e(primat n miligrame pe Nilogram este
calculat folosind ecua!ia:
O
A
< ( a % b ) P )$ P ( )$$ ? O ) P)$$
n care:
a % con!inutul de A7
+
% A A>
&
% A respecti/ azot solubil total n e(tractul de sol mg 4 l'
b 3 con!inutul de A7
+
% A A>
&
% A respecti/ azot solubil total n proba martor mg 4 l'
O % con!inutul procentual de ap ratortat la solul uscat la aer.
)$