Familia Enterobacteriaceae

Dr. Anda Baicus

CURS14
Genuri principale: Escherichia------------specii E. Coli
Klebsiella----------------------K. Pneumoniae
Proteus--------------------------P. Mirabilis; P. Vulgaris
Salmonella ---------------------S. typhi
Shigella--------------------------Sh. Dysenteriae, Sh. Flexneri
Yersinia -------------------------Y. pestis, Y. enterocolitica




Fam. Enterobacteriaceae>40 genuri/150specii,subspecii
Clasificare
: str.ag; proprietati biochimice; hibridizarea acizilor nucleici,
secventiere
< 20 specii implicate in patologia umana->95% din infectii


microorganisme ubicuitare: sol, apa, vegetatie, , flora intestinala
om/animale
> 30-35% din totalul septicemiilor
> 70% din infectiile urinare
infectii intestinale
Salmonella typhi, Shigella sp, Yersinia pestis- patogeni
Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis
oportunisti( comensali)
Bacterii comensale care devin patogene prin achizitia de factori de
virulenta plasmide, bacteriofagi- E.coli asociata cu gastroenterita

Transmiterea infectiei-
- de la animal , Salmonella, Shigella
- purtator uman , Shigella sp, S. typhi
- endogena in organisme susceptibile, E. coli



bacili gram- , dimensiuni (0.3 to 1.0 1.0 to 6.0 m)
ag. comun (enterobacterial common antigen),
imobi capsulati (Klebsiella, Yersinia),
imobili necapsulati( Shigella)
mobili cu cili peritrichi (E.coli, Proteus, Salmonella),
pili comuni adera la receptorii gazdei
pili sexuali- conjugativi- tranferul materialului genetic
nu formeaza spori
aerobi facultativi anaerobi
medii diferentiale- geloza sange; selective
nevoi nutritive minime
fermenteaza glucoza.
catalazo +
oxidazo-
fermenteaza lactoza (e.g., Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter,
Serratia spp.)
nu fermenteaza lactoza/ foarte incet ( Proteus, Salmonella, Shigella, and
Yersinia spp)

Caractere generale
E. coli- cili peritrichi
Salmonella typhi hemocultura , coloratia bipolara caracteristica Enterobacteriilor
LPS- termostabil antigen major de perete : ag.O; core polizaharidic = ag. comun tuturor
Enterobacteriilor ; lipid A
ag. comun prezent ca un glicolipid liber in membrana externa

Clasificarea serologica este bazata pe trei grupuri majore antigenice :
- ag. O somatic polizaharidic (prezent la fiecare gen/ reactii incrucisate ( Salmonella cu
Citrobacter, Escherichia cu Shigella).
-ag. capsular K- termolabil
- ag. flagelar H- termolabil / absent/ variatie antigenica/ prezent in 2 faze
detectarea ag. reactii de aglutinare cu anticorpi specifici

Exista genuri ce poseda ag. comune :
E. coli K1 antigen prezent la Neisseria meningitidis si Haemophilus influenzae
K. pneumoniae reactioneaza incrucisat cu Streptococcus pneumoniae.
Factori de virulenta asociati cu Enterobacteriile
endotoxina/ lipidul A manifestari sistemice ; activarea C, eliberarea de
citokine, leucocitoza, trombocitopenie, CID, soc,
Capsula- antifagocitar- ag hidrofilic respinge suprafata hidrofoba a
fagocitelor
Variatia antigenica- exprimarea sau nu a structurii ag.
Sistem secretor III
Sechestrarea factorilor de crestere producere de chelatori de Fe
(enterobactin)
Rezistenta la efectul bactericid al serului + factori care se leaga de C
Rezistenta antimicrobiana + plasmide transferabile
O varietate de bacterii au un sistem efector comun pentru eliberarea factorilor
de virulenta cand vine in contact cu celula eukariotica tinta cunoscut sub numele
de sistem secretor tip III ca o seringa moleculara formata din aprox 20
proteine (Yersinia, Salmonella, Shigella, enteropatogenic Escherichia,
Pseudomonas, Chlamydia)
Genul Escherichia
5 specii - sepsis, infectii urinare , meningita, gastroenterita
Factori de virulenta
Adezine factori ag. de colonizare (CFA/I, CFA/II, CFA/III); fimbrii
agregative de aderenta (AAF/I, AAF/III), pili , plasmide de invazivitate-
proteine Ipa, fimbrii Dr- se leaga de ag hematice de grup Dr
Exotoxine Shiga toxine- Stx-1, Stx-2, termostabile Sta, STb,
termolabile (LT-I, LT-II), hemolizine (HLYA)- (E. coli uropatogen)

Epidemiologie: septis , ITU, infectii intraspitalicesti, gastroenterite
(EPEC, ETEC, EHEC, EIEC, EAEC)
Colita hemoragica, sindrom uremic hemoragic EHEC
Cele mai multe infectii sunt endogene pacientii cu imunodepresie
Meningita neonatala specia cu K1
Infectii intraabdominale- perforatie intestinala

Locul de actiune
Enteropathogenic E. coli (EPEC) Intestin subtire diaree copii apoasa
fara sange ,
Mediata plasmidic, disruptia structurii
normale a microvililor rezultand
malabsorptie si diaree
Enterotoxigenic E. coli (ETEC) Intestin subtire
Transmitere fecal-orala
Incubatie 1-2 zile
Recuperare in 3-4 zile

Diarea calatorilor,
copiilor, apoasa,,
crampe,
greturi,
subfebrilitate,
varsaturi
- Similara cu holera
dar simptomatologie
redusa
Mediata plasmidic, exotoxina Ts/TL care
stimuleaza hipersecretia de fluide si
electroliti
TLI-similara str si functional cu toxina
holerica
LTII nu este asociata cu boli umane
Sta-creste secretia de ciclic guanosin
monofosfat cGMP
-Fara leziuni sau inflamatie intestinala
-- determinarea toxinei pe culturi celulare
Enterohemorrhagic E. coli (EHEC)
73000 infectii/6o decese/an USA
-Ingestia < 100 bacterii cauzeaza boala
-> 50 serogrupuri deEHEC
-- majoritatea O157:H7

-EHEC care produce ( bacteriofag lizogen)
-toxina Shiga (Stx-1/Stx-2, sau ambele)

Intestinul gros
Simt medie- colita hemoragica
Consum de carne de vita neprelucrata termic ,
lapte nepasteurizat, suc de fructe ( cidru din
fructe contaminate cu fecale de vite)
3-4 zile incubatie
Recuperare in 4- 10 zile dar sdr. HU
complicatie serioasadecesul in 3-5% din pacientii
cu sdr. HU, sechele: afectare renala, HTA, SNC
HU- asociat cu toxina Shiga distruge celulele
endoteliale glomerulare
Initial apoasa apoi
hemoragica (30-65%
din pacienti) ,
crampe abdominale,
subfebrilitate poate
progresa spre
sindromul uremic :
afectare renala,
trombocitopenie ,
anemie hemolitica la
5-10% din copiii
infectati < 10 ani
Mediata de Shiga toxina , afecteaza
sinteza proteica, distruge microvilii
intestinali
Dg. Detectia toxinei, cultura
O157 nu fermenteaza sorbitolul continut in
Mac Conkey

Enteroinvasive E. coli (EIEC)

O124, O143, O168
Genele plnv
Intestinul gros Febra, crampe,
diaree apoasa ,poate
progresa spre
dizenterie , scaune
cu sange
Mediata plasmidic- invadeaza si distruge
epiteliul colonic- ulceratie
Asemanatoare cu Shigella
Enteroaggregative E. coli (EAEC) Intestin subtire Diarea calatorilor,
copiilor, apoasa,
varsaturi ,
subfebrilitate

Plasmid mediata agregarea bacililor si
aderenta , infiltratie , hemoragie , scaderea
absorbtiei fluidelor
E. coli O157:H7 blue/black
colonies: b-galactosidase
producing
E. coli O157:H12 grey
colonies: b-galactosidase
producing
E. coli O127 pink colonies: b-
glucuronidase producing
E. coli O455 magenta colonies:
b-glucuronidase producing
K. granulomatis- granuloma inghinala ( endemica in Noua Guinee, America Sud, India,
Vietnam, Africa, Australia
Transmitere sexuala/ trauma geniala
Incubatie saptamani-luni

Dg: colorarea tesutului recoltat din leziune col Giemsa, Wright- bacili mici in
citoplasma histiocitelor , PMN / 1-25 bacterii/PMN ; tratament tetraciclina,
eritromicina



GENUL KLEBSIELLA
Specii principale:
K. pneumoniae, K oxytoca pneumonie lobara ( alcoolici)- distructii necrotice ale spatiilor alveolare ,
formare de cavitati , sputa sanguinolenta
: K. ozenae: rinita cronica atrofica
:K. rhinoscleromatis- boala granulomatoasa nazala
CHROMagar
Orientation
Klebsiella pn.
Klebsiella
Tube indole = Negative
TSI slant = Acid / acid with some gas production, no
hydrogen disulfide production
LIA slant = Lysine decarboxylase positive, deaminase
negative
MIO agar = Motility negative, ornithine decarboxylase
negative
Urea slant = Urease negative
Citrate slant = Negative
Sorbitol broth = Positive

Deoxycholate Agar (DOC
A. Heavy lactose fermentation
B. Reduced growth of a Gram-
positive organism
C. No lactose fermentation
D. Light lactose fermentation
MacConkey agar plates.
Proteus produces colorless colonies as shown in
the left panel.
E.coli produces bright pink colonies as shown in
the right panel.
E. coli on blood agar plate.
Klebsiella
pneumoniae on a
blood agar plate
Proteus mirabilis on
Blood Agar.
-Cantitati mari de
ureaza

Colonies of Proteus mirabilis
bacteria grown on a Xylose
Lysine Sodium Deoxycholate
(XLD) agar plate.
MacConkey Agar
Contains crystal violet & bile salts to inhibit Gram
+ve bacteria, lactose & a pH indicator (neutral red)
to determine ability to ferment lactose
Salmonella typhi: Shigella sonnei: Proteus vulgaris
- / +
-Ureeaza test
Indole Tube Test: Klebsiella pneumoniae is indole
negative as shown on the left and E. coli is indole
positive as shown on the right.
motilitate
TSI

Simmons citrate agar
UROCULTURA- cantitativa-nr. germeni /ml urina a. Metoda dilutiilor seriate in placi;b. Metoda
ansei calibrate; c. Test Uricult
dilutii zecimale in ser fiziologic:1/10; 1/100; 1/1000; din fiecare dilutie se pun0,1 ml pe
suprafata a 2 placi Petri cu geloza sange si Mac Conkey-incubate 37C 18-20h. A doua zi se numara
coloniile izolate dezvoltate pe mediile de cultura-
nr. germeni/ml urina=nr. colonii x dilutiax10
se face media pentru fiecare tip de mediurezultatul=media cea mai mare obtinuta pe mediul fara
inhibant(geloza-sange)
2 anse volumul incarcat de o ansa=0,01ml urina ce corespunde dilutiei 1/100--intern al
ansei=5mm
- volumul incarcat de a 2 a ansa= 0,001ml ce corespunde dilutiei 1/1000--
intern al ansei =2,5mm
aceeasi placa serveste pentru cele doua dilutii- pe o jumatate se descarca ansa incarcata cu
0,01ml iar in cealalta jumatate ansa cu 0,001ml
nr. germeni/ml urina=nr. coloniix100 sau cu1000; se face media celor doua dilutii
INTERPRETARE: 0-10 000 bacterii/ml-contaminare in timpul recoltarii
10-100 000 bacterii/ml infectie probabila
100 000 bacterii/ml infectie sigura