L I P I D E L E

Lipidele sunt compui organici naturali larg rspndii n organismele vii. Din punct de
vedere al structurii lor lipidele constituie o clas eterogen de compui, n general, esteri ai
alcoolilor ( trioli, steroli, alcooli, superiori) cu acizi grai superiori.
Lipidele se clasific n:
lipide simple (gliceride, steride, ceride, etolide)!
lipidele comple"e (#eterolipide) su$divizate n: glicerofosfolipide fr azot (acizi
fosfatidici, inositofosfatide) i cu azot (gliceroaminofosfatide: lecitine, cefaline,
serinfosfatide) i lipide derivate.
Lipidele constituie o important surs energetic! au rol plastic, intrnd n structura
diferitelor componente celulare i su$celulare, n structura mem$ranelor celulare (n asociaie cu
proteinele)! au rol de protecie mecanic i termic prevenind uscarea dermei! n diferite procese
meta$olice.
%tructura lor #idrofo$ apolar e"plic insolu$ilitatea n ap i solu$ilitatea lor n solveni
organici (eter, cloroform, $enzen, tetraclorur de car$on, aceton, alcool) i amestecuri ale
acestora.
Extracia i determinarea lipidelor din plante. Metoda Soxhlet
La $aza e"traciei, separrii i determinrii lipidelor se afl solu$ilitatea diferit a
acestora n diferii solveni organici.
&mestecul e"tras, rmas dup ndeprtarea solventului, constituit din lipide, ceruri, rini,
uleiuri eterice, pigmeni vegetali .a. constituie ceea ce se numete grsimi $rute.
'"tracia grsimilor n solveni se realizeaz cu a(utorul e"tractorului %o"#let, iar
determinarea se face prin dou metode:
metoda direct (gravimetric), care const n cntrirea reziduului dup e"tracie i
dup ndeprtarea solventului!
metoda indirect, care const n sta$ilirea su$stanei e"trase ca diferen intre masa
materialului nainte de e"tracie i dup e"tracie.
Determinarea coninutului de grsimi prin metoda direct
fig. 2
%e cntresc la $alana analitic )*+ g (m
*
) din materialul uscat la ,)
+
- i
se introduc n cartuul de #rtie poroas, care se plaseaz n e"tractorul
aparatului %o"#let, dup ce a fost adus n preala$il la pondere constant.
%e cntresc, tot la $alana analitic, $alonul curat i uscat n care sa
introdus o $ucic de porelan poros, pentru reglarea fier$erii.
%e introduce solventul ales pentru e"tracia cu a(utorul unei plnii n
e"tractor, peste cartuul de e"tracie cu ncrctura sa, intro cantitate care
s realizeze o sifonare, i n plus, cu e"ces de .+/+ mL.
%e monteaz refrigerentul ascendent i se ncepe nclzirea pe $aia de ap
electric! 0rin nclzirea $alonului vaporii de solvent a(ung n refrigerent,
unde se condenseaz i cad n cartuul cu material, e"trgnd o parte din
su$stanele solu$ile n solventul ntre$uinat.
1ivelul solventului din e"tractor crescnd mereu, n momentul n care
a(unge la nlimea cotului tur$uorului de sifonare se va scurge, prin
sifonare, atrennd deci i o parte din lipide (plus alte su$stane amintite)
produsului analizat (fig. .2).
%olventul din $alon distilnd, va urma, n continuare, acelai drum (refrigerente"tractor)
transportnd o nou cantitate de su$stan e"tras.
*
Dup *).+ sifonri (/3 ore) se ntrerupe nclzirea! dup rcire se demonteaz $alonul,
se ndeprteaz solventul, prin distilare, se usuc $alonul ntro etuv la *+)
+
- pn la pondere
constant, sta$ilit la $alana analitic, dup preala$ila rcire (cam *4. or) ntrun e"icator cu
-a-l
.
an#.
-alculul:
-oninutul de su$stan e"tras (grosime $rut) se sta$ilete efectund diferena dintre
masa $alonului cu reziduul de e"tracie (m
r
) i masa $alonului gol (m
+
), dinaintea e"traciei.
5aportat la *++ g material analizat:
6 lipide (grsime $rut) 7
*++
m
m m
*
+ r

0entru a verifica dac a fost e"tras ntreaga cantitate de grsimi ar fi necesar repetarea
operaiilor i compararea rezultatelor. Dac nu este cunoscut coninutul apro"imativ de lipide al
materialului analizat i corelarea timpului de e"tracie (numrul de sifonri) cu acest coninut nu
a fost corespunztoare pot aprea diferene.
Lipidele sunt caracterizate, din punct de vedere fizic i c#imic printro serie de constante
(densitatea, punct de solidificare .a.) i indici (indicele de aciditate, saponificare i de iod).
Determinarea indicelui de aciditate
Indicele de aciditate reprezint cantitatea de 89:, n mg, necesar pentru neutralizarea
acizilor grai li$eri dintrun gram de grsime.
;rsimile naturale sunt neutre. &ciditatea lor apare n timpul conservrii sau prelucrri,
cu urmare a aciunii 9
.
, din aer i a vaporilor de ap, proces care poate fi reprezentat, n general,
prin reacia:
C O
H
H
HOOC (CH
2
)
n
CH
2
CH
3
<
O
2
+ H
2
O
C O CO (CH
2
)
n
COOH + HCOOH
H
2
C O CO CH
2
OH
H
2
C OH
H
+
glicerida produse de o"idare si #idroliza
C O H CO (CH
2
)
n
CH
2
CH
3
CH
3
CH
2
(CH
2
)
n
CO O H
2
C
CH
3
CH
2
(CH
2
)
n
CO O H
2
C
=ndicele de aciditate sta$ilit la date diferite d indicaii asupra intensitii procesului de
degradare a grsimii.
Determinarea indicelui de saponificare
Indicele de saponificare e"prim cantitatea de 89:, n mg necesar pentru a saponifica
total, un gram de grsime.
=ndicele de saponificare d indicaii asupra constituiei c#imice a grsimii cercetate, i
anume, cu ct masa molecular a grsimii (lipidelor) respectiv a acizilor grai superiori coninui,
este mai mare, indicele de saponificare este mai mic.
Exemple: trioleina din uleiuri vegetale 7 *,.! untul 7 *.>! nuca de cocos 7 .3).
Principiul metodei:
La $aza metodei de determinare a indicelui de saponificare se afl reacia de saponificare
la cald a acizilor grai li$eri i a celor esterificai cu alcooli, din lipide, cu a(utorul 89:. &ceast
cantitate va fi dat de diferena dintre o cantitate de 89: cunoscut, aleas ar$itrar, i cantitatea
rmas nereacionat, determinat prin titrare cu :-l de concentraie cunoscut.
.
Reacia care are loc:
H
2
C O CO R
HC O CO R
H
2
C O CO R
+ 3 KOH = HC OH
H
2
C OH
H
2
C OH
+ 3 R COOK
glicerida glicerol sarea de potasiu
a acidului gras
continut (un) sapun
Reactivi necesari: soluie alcoolic de 89:, apro". +,) 1 (sau 14.)! soluie de :-l +,)1
(sau 14.)! soluie alcoolic de fenolftalein.
Determinarea indicelui de iod. Metoda !anus
Indicele de iod e"prim cantitatea de iod, e"primat n grame pe carel poate fi"a, prin
adiie, *++ grame lipid.
?aloarea indicelui de iod caracterizeaz gradul de neutralizare al lipidelor, respectiv
proporia de acizi grai superiori nesaturai prezeni n structura lipidelor. 9rientativ grsimile
vegetale au indicele de iod cuprins ntre /+ i >+! grsimile animale au indicele de iod su$ ,+.
@leiurile de in, cnep, nuc (uleiuri sicative) au indicele de iod peste *.+! uleiul de floarea
soarelui (semisicativ) are indicele de saponificare ntre *.A*/>. ?ariaia ntre anumite valori a
indicelui de iod, c#iar peste acelai material analizat, este corelat cu dependena acestui indice
de gradul de maturitate al seminelor sau fructelor din care se e"trage, de modul de pstrare,
vec#ime. Bnvec#irea materialului e"tras (grsime, ulei) nsoit de afectarea numrului de du$le
legturi, prin o"idare, atrage modificarea indicelui de iod.
Principiul metodei:
La $aza metodei se afl reacia de adiie a iodului i $romului din mono$romura de iod
(reactivul :anus) la du$lele legturi cuprinse n structura acizilor grai superiori din materialul
analizat.
=ndicele de iod se determin pe cale iodometric prin msurarea cantitii de iod rezultate
din reacia Cr= nereacionat cu 8=, folosind ca reactiv o soluie de 1a
.
%
.
9
/
(tiosulfat de sodiu),
cu concentraie cunoscut.
Reaciile care au loc:
-: -: -99: < Cr= -: -: -99:
= =
Cr= < 8= 7 =
.
< 8Cr
=
.
< . 1a
.
%
.
9
/
7 . 1a= < 1a
.
%
3
9
>

tetrationatul de sodiu
Reactivi necesari: reactivul :anus! %oluie de 8= *+6! soluie de 1a
.
%
.
9
/
+,* 1! soluie
de amidon *6.
Determinarea indicelui de peroxi"i
Peroxizii sunt compui care se formeaz n faza iniial a procesului de o"idare al
grsimilor, la care se adaug apoi com$inaiuni epo"idice, alde#ide, cetone, conferind miros i
gust caracteristic, neplcut de DrncedD.
/
Indicele de peroxizi se e"prim prin numrul de grame de iod pus n li$ertate de un gram
de lipide, sau avnd n vedere reactivul utilizat pentru dozarea cantitativ a iodului, tiosulfatul de
sodiu, indicele de pero"izi se mai poate definii prin numrul de mL de tiosulfat de sodiu +,+* 1
consumat pentru determinarea (titrare) iodului eli$erat de pero"izii dintrun gram de lipide.
Principiul metodei:
La $aza metodei se afl reacia dintre pero"izi i 8=, n mediu sla$ acid, nsoit de o
cantitate ec#ivalent de iod care se eli$ereaz i se titreaz cu tiosulfatul de sodiu:
CH O
CH O
R
R
R
R
CH
CH
O + I
2
+ H
2
O + 2CH
3
COOH
pero"id epo"id
+ 2KI + 2CH
3
COOH
=
.
< . 1a
.
%
.
9
/
7 . 1a= < 1a
.
%
3
9
>
Reactivi necesari: soluie de 1a
.
%
.
9
/
+,+* 1! soluie saturat de 8=! acid acetic glacial <
-loroform *:.! amidon *6.
P # $ % I D E
0rotidele sunt componente structurale i funcionale cele mai importante ale organismelor vii.
0rezente n toate organismele animale i vegetale, protidele ndeplinesc multiple roluri:
structural (constituent principal al protoplasmei i nucleului celular)! fizicoc#imic (regulator al
ec#ili$rului electrostatic acido$azic)! catalitic (componeni proteici ai $iocatalizatorilor)!
energetic (furnizor de energie).
Bn mod convenional, n grupul protidelor sunt cuprinse toate su$stanele naturale care
prin #idroliz total pun n li$ertate aminoacizi. Einnd seama de comple"itatea structurii,
protidele se clasific n:
monoprotide 7 aminoacizii:
poliprotide: inferioare: oligopeptide (.*+ aminoacizi)!
polipeptide (*+*++ aminoacizi)!
peptone i al$umoze!
superioare 7 059F'=D': #oloproteide 7 059F'=1'
#eteroproteide: glico, lipo, nucleoproteide.
-ele mai simple proteide sunt deci, aminoacizii, reprezentai prin formula general:

H
2
N CN COOH
R
Foate celelalte protide sunt constituite din resturi de aminoacizi legai prin legturi
peptidice: -9 G 1: G
$&inerea extractelor proteice
de origine vegetal: )+ g fin de gru se amestec cu .++ mL ap i se las s stea
/+3+ minute, agitnd din cnd n cnd. %e filtreaz. 0rimele poriuni tul$uri se retoarn pe filtru!
de origine animal: la *++ mL lapte se adaug un volum egal de ap i apoi, su$
agitare, +,)+,> mL acid acetic glacial, pn la formarea unui precipitat floconos. Dup )*+
minute amestecul se filtreaz pintro pnz umezit n preala$il. 0rimele cantiti de filtrat,
3
tul$uri, se refileaz. %oluia limpede puin gl$uie, conine al$umin i o parte din glo$uminele
din lapte. 5eziduul de pe filtru este format din cazein amestecat cu grdimi.
Laptelui proaspt i se adaug un volum egal de soluie saturat de sulfat de amoniu
(1:
3
)
.
%9
3
. 0recipit cazeina i glo$ulinele, antrennd grsimi. %uspensia se filtreaz pe #rtie de
filtru.
&l$uul unui ou de gin se agit $ine cu *++*)+ mL ap distilat. %uspensia
opalescent astfel o$inut se filtreaz pe o pnz udat cu ap, din care sa ndeprtat apretul,
prin splare.
9 soluie concentrat de proteine se o$ine dintrun al$u de ou la care se adaug )> g
1a-l. %e agit puin i se pune ntrun vas de )++ mL agitnduse nc puin. 9 soluie diluat se
o$ine din aceast soluie la care se adaug un volum de ./ ori ap distilat.
'oagularea la punctul i"oelectric
Holeculele su$stanelor proteice au caracter amfoter datorit grupelor funcionale pe care
le conin. La punctul izoelectric, sau p:ului izoelectric, cnd numrul sarcinilor pozitive i
negative devin egale, ca urmare adugrii unui acid sau $aze, are loc precipitarea soluiei
proteice.
H
2
N CH CO NH CH
R R
CO NH CH
R
CO NH CH
R
COO
-
0unctul izoelectric este o constant fizicoc#imic caracteristic fiecrei proteine (e".
gelatina 7 3,>! cazeina 7 3,A).
Determinarea punctului i"oelectric al gelatinei
5eactivi necesari. amestec tampon! soluie de gelatin.
Hodul de lucru
Bn > epru$ete se realizeaz amestecul tampon corespunztor p:ului cuprins ntre 3,* i ),>,
prin amestecarea soluiilor componente n raportul indicat n ta$elul ./.
Fa$elul ./
1r.
epru$.
p:ul -:
/
-99:
+,* 1 mL
-:
/
-991a
+,* 1 mL
ap
distilat.
Fotal volum
*.
..
/.
3.
).
>.
3,*
3,3
3,A
),+
),/
),>
*,.
.
.
.
.
.
3,2
3
.
*
+,)
+,.)


.
/
/,)
/,A)
> mL
> mL
> mL
> mL
> mL
> mL
%e adaug n fiecare epru$et cte . mL soluie de gelatin *6 i apro"imativ 2 mL alcool
(cu o pipet), agitnd puternic pn la apariia unei tul$ureli al$e.
%e las n repaus /+ minute i se noteaz n care epru$et sa format cea mai mare cantitate
precipitat.
?aloarea p:ului corespunztor epru$etei cu cea mai mare cantitate de precipitat reprezint
(punctul izoelectric) p:ul gelatinei.
!idroli"a su&stanelor proteice
0rin #idroliz acid, alcalin sau enzimatic su$stanele proteice se desfac treptat n
compui mai simpli. Bn #idrolizatul complet al su$stanelor proteice se pot gsi, pe lng
)
aminoacizii constitueni i su$stane de natur neproteic reprezentnd grupri prostetice ale
#eteroproteidelor.
!idroli"a acid a gelatinei
5eactivi necesari: gelatin solid sau n soluie! :-l conc.! :
.
%9
3
.)6! 1a9: .+/+6!
-u%9
3
)6, &g19
/
)6.
Hodul de lucru
Bntrun $alon sau flacon 'rlenmaIer cu lif de *)+/++ mL, prevzut cu refrigerent
ascendent se iau .+/+ mL soluie de gelatin (sau /+3+ ggelatin solid) peste care se
adaug .+.) mL :-l conc. sau :
.
%9
3
.)6. %e las un timp, agitnd din cnd n cnd pn
ce gelatina se dizolv complet.
%e nclzete pe $aia de ap, su$ ni! de o$icei soluia se coloreaz n violetviolet intens
sau negru$run, datorit su$stanelor #umice care se separ uneori.
Din cnd n cnd, dup o or de nclzire, se iau cte *. mL din soluie, se fier$ cu cr$une
animal n epru$et, se filtreaz, se precipit

-l cu &g19
/
, se filtreaz din nou iar n filtrat
se e"ecut reacia $iuretului (vezi reaciile de culoare pentru identificarea proteinelor, pag
*3*).
Juncie de cantitatea de su$stane proteice luate, #idroliza poate dura *A ore. :idroliza se
consider complet cnd reacia $iuretului este negativ.
Do"area aminoaci"ilor prin metoda S(#E)SE)
Deoarece aminoacizii au caracter amfoter, gruparea acid nu poate fi titrat cu o $az
dect dup ce gruparea amino a fost $locat printro reacie de condensare cu alde#id formic:
&minoacidul amfoter devine astfel un compus metilenic cu funcie car$o"ilic li$er, care poate
reaciona cu 1a9::
R CH
NH
2
COOH
+ C
O
H
H
R CH
N
COOH
CN
2
+ H
2
O
R CH
N
COOH
CH
2
+ NaOH R CH
N CH
2
COONa
+ H
2
O
5eactivi necesari: soluie de alde#id formic .+6, neutralizat cu 1a9: n prezena unei
picturi de fenolftalein!
soluie de 1a9: +,* 1 cu titru cunoscut! soluie de :-l +,* 1! soluie
alcoolic de fenolftalein.
Separarea aminoaci"ilor dintr*un amestec prin cromatografie pe h+rtie
5eactivi i materiale necesare:
&mestec de ./ amonoacizi (* mg4cm
/
, +,*6)! soluii etalon (de control) de
aminoacizi (*mg4cm
/
)! amestec de developare: n$utanol < acid acetic < ap (3:*:))!
soluie de nin#idrin (+, *+, .6 n n$utanol)! #rtie cromatografic K#atman nr.*!
micropipete.
Hodul de lucru
0e o foaie de #rtie cromatografic se traseaz cu creionul o linie paralel cu unul din
capetele #rtiei la o distan de .+ cm de marginea #rtiei.
>
0e aceast linie (start) se plaseaz, cu a(utorul unei micropipete o pictur din soluia de
cercetat i separat, din soluia etalon, la cca. . cm interval. %e noteaz n preala$il aceste
locuri. Diametrul picturilor tre$uie s fie de ./ mm, iar cantitatea ma"im de aminoacid
ntro pat, n (ur de +,+/ mg.
:rtia cromatografic, cu petele uscate, se introduce n camera cromatografic, care conine
un strat de amestec de developare de ./ mm grosime, astfel nct captul pe care au fost
pui aminoacizii s a(ung n acesta. 0eretele aminoacizilor nu tre$uie s intre n amestecul
de developare.
%e las timp pn cnd frontul solventului a(unge la *. cm de marginea superioar a #rtiei
(developare ascendent)!
%e scoate #rtia, se noteaz cu creionul frontul solventului, se usuc n etuv la *++
+
.
%e pulverizeaz cu soluie de nin#idrin i se introduce timp de*+ minute ntro etuv la ,+
+
.
%e e"amineaz poziia i intensitatea culorii petelor aprute i se calculeaz 5
f
urile.
?alorile 5
f
urilor ctorva aminoacizi n condiia e"perienei:
leucin +,+* alanina +,.3 arginin +,*+
fenilalanin +,)/ ac. glutamic +,*A cisteina +,+2
triptofan +,3/ glicocol +,*A
) u c l e o p r o t e i d e
1ucleotroteidele sunt #eteroproteide constituite dintro component proteic i una
neproteic, reprezentat de acizii nucleici. &cizii nucleici sunt polinucleotide macromoleculare,
care prin #idroliz eli$ereaz acid fosforic :
/
09
3
, o component glucidic (ri$oz sau
dezo"iri$oz) i componente azotate pirimidinice (citozina, uracilul, timina) i purinice (adenina,
guanina).
Datorit coninutului relativ mare de resturi fosforice nucleoproteidele au caracter acid.
De aceea pentru e"tracie din materiale $iologice (vegetale sau animale) se folosesc soluii
diluate de #idro"izi.
Extracia nucleoproteidelor din dro,dia de &ere
5eactivi necesari: dro(die de $ere! soluie de 1a9: +,36! soluie de :-l *+6.
Hodul de lucru
9 cantitate de .) g dro(die de $ere se ma(oreaz cu apro"imativ ) g nisip sau praf de sticl,
) mL eter (pentru dizolvarea grsimilor) i ) mL ap distilat.
Dup ma(orare se adaug o cantitate mic de ap distilat pn se o$ine o past omogen.
%e trece ntro sticl cu dop rodat se adug *++ mL 1a9: +,36, puin toluen (pentru
conservare) i se las s stea cteva zile, agitnduse din cnd n cnd!
Dup acest timp se filtreaz. 5eziduul se arunc iar din filtrat se separ nucleoproteidele prin
precipitare cu o soluie de :-l *+6, adugat cu pictura, su$ continu agitare, n prezena
indicatorului rou de -ongo. %e consider precipitarea complet la virarea culorii
indicatorului n al$astru.
1ucleoproteidele se depun i se separ apoi de supernatant prin decantare.
!idroli"a nucleoproteidelor din dro,dia de &ere
0rin #idroliz acid nucleoproteidele se desfac n componentele lor care pot fi identificate
apoi prin reacii c#imice specifice. %e pot folosi n acest scop fie nucleoproteidele separate din
dro(dia de $ere, fie direct dro(dia de $ere.
Hodul de lucru
A
&. Dac #idroliza se face direct pe dro(dia de $ere, se iau ntrun flacon 'rlenmaIer ) g dro(die
i 3+ mL soluie :
.
%9
3
.)6 i se fier$e timp de o or pe $aia de ap.
Dup rcire se filtreaz. Jiltratul se utilizeaz pentru reacii de identificare a componentelor
nucleoproteidelor.
C. Dac se utilizeaz precipitatul de nucleoproteide o$inut dup dup e"tracie se fier$e,
ntrun 'rlenmaIer cu )+ mL :
.
%9
3
)6, timp de o or.
Dup rcire #idrolizatul astfel o$inut se utilizeaz pentru identificarea componeniilor
rezultai.
Identificarea produselor de hidroli" a nucleoproteidelor
*. pentru identificarea proteinelor se e"ecut reaciile prezentate (pag. */,) ncepnd cu reacia
$iuretului (legturile peptidice).
.. 0entru identificarea componentelor glucidice se e"ecut reaciile corespunztoare (pag. *+>,
respectiv: Holis#, Je#ling, Follens, .a.).
/. 0entru identificarea acidului fosforic :
/
09
3
, se e"ecut reacia cu moli$dat de amoniu
(1:
3
)
.
H
o
9
3
, luat ntro epru$et * mL #idrolizat, . mL :19
/
conc. i . mL soluie de moli$at
de amoniu )6. Dup nclzire se formeaz un precipitat gal$en fin, de fosfomoli$dat de
amoniu.
:
/
09
3
< *.(1:
3
)
.
H
o
9
3
< .*:19
/
7 (1:
3
)
/
:
3
40(H
o
9
3
)
>
4 < .*1:
3
19
/
< *+:
.
9
3. Cazele purinice se pun n eviden adugnd unei cantiti mici de #idrolizat (*. mL),
amoniac concentrat pn la reacia alcalin. 0recipitatul se filtreaz. Bn filtrat se adaug cu
pictura i su$ agitare cca. * mL &g19
/
)6. 5ezult un ppt. gal$en$run.
PI-ME).I )/%0#/LI 1E-E%/LI
0igmenii naturali vegetali sunt su$stane organice cu structur c#imic variat, care
determin culoarea diferitelor organe ale plantelor.
%epararea i identificarea lor se realizeaz prin adsor$ie cromatografic.
0ricipiul metodei
'"tras cu un solvent adecvat, amestecul de pigmeni este trecut printro coloan
cromatografic de material adsor$ant. &dsor$induse diferit, fiecare pigment se plaseaz ntro
anumit zon a coloanei, marcat prin culoarea corespunztoare.
5eactivi necesari
solveni e"tractani: --l
3
< -:
/
9: sau aceton < amestec de eter de petrol < aceton 3:*
coloana de adsor$ie: tu$ de sticl efilat la un capt, loc n care se introduce un dop de vat),
de *3.+ cm, diametrul de * cm n care se introduce material de adsor$ie!
material de adsor$ie:
o &a
.
9
/
ca strat sau Hg n start omogen, omogen de . cm *,). cm!
nlime za#r fin mcinat,
o -a-9
/
uscat, 3 cm n rest.
o za#r fin pulverizat i uscat, > cm!
o vat de sticl.
1 I % / M I ) E
?itaminele sunt su$stane c#imice organice sintetizate i foarte rspndite n regnul
vegetal, ndeplinind rol de coeziune (pri constitutive ale enzimelor). -a su$stane $iologic
active ele influeneaz desfurarea normal a proceselor meta$olice. 9rganismele animale i
procur aceste su$stane, a$solut indispensa$ile funcionrii lor normale, din regnul vegetal fie
ca atare (ca vitamine), fie su$ form de provitamine.
2
;rupate pe criteriul solu$ilitii lor, vitaminele pot fi liposolu$ile (&, D, ', 8) i
#idrosolu$ile.
Din punct de vedere al structurii lor c#imice sunt foarte diferite unele de altele, ceea ce
e"plic lipsa unor reacii comune pentru identificarea i dozarea lor.
*. ?itamina i provitamina &
Determinarea calitativ
Haterialul vegetal (morcov) mo(arat < civa mL soluie alcoolic de 89: )6 se trece
ntro plnie de separare, se adaug *+ mL cloroform i se agit $ine. Dup separarea fazelor,
faza cloroformic se trece ntro epru$rt uscat i se agit cu 1a
.
%9
3
an#. %e las s
sedimenteze dup care se adug cteva picturi pe o #rtie de filtru. %e formeaz o pat gal$en
(caroten, vitamin &). Dup uscarea petei se adaug cteva picturi de soluie cloroformic de
%$-l
/
. %e o$ine o culoare al$astr.
.. vitamina -
Determinri calitative
a. ?itamina - reduce fericeanura de potasiu.
?itamina - (acidul ascor$ic) < 8
/
4Je(-1)
>
4 L acidul de#idroascor$ic < 8
3
4Je(-1)
>
)
$. ?itamina - reduce -u
.<
din reactivul Je#ling L -u
.
9 rou
c. ?itamina - reduce &g
<
(reacia Follens) L &g (oglind de argint)
d. ?itamina - reduce Hn din 8Hn9
3
decolornd astfel soluia apoas, violet, a acestuia.
e. %oluia apoas de vitamin - (*:*++) < . picturi de nitroprusiat de sodiu
1a.4Je(-1)
)M
194 < / picturi de soluie 89: * 1 determin apariia unei culori gal$en
?erdeoliv, care prin tratare cu / picturi de acid acetic diluat devine al$astrverzuie.
Determinarea cantitati2 a 2itaminei '
Din punct de vedere c#imi, vitamina - sau acidul ascor$ic este lactona acidului .ceto
gulonic, avnd structura:
C
C
COOH
C
C
O
OH
OH
H HO
H
H
H
2
C OH
H
2
O
C
C
C
C
C HO
H
HO
HO
O
O
H
2
C OH
-
HO C C OH
CH C
O
O C
OH H
2
C
H
-2H
+2H
C
C
C
C
C
C O
OH - H
2
C
HO
H
O
O
H
O
O
H
2
O
COOH
COOH
COOH
C
C
H
H
OH
HO
H
2
C OH
%e gseste aproape n toate produsele vegetale dintre care amintim:
Hcese uscate *)++ mg4*++ g material vegetal
1uci verzi *.++ D D D zmeur /+ mg4*++g
coacze roii */+*A+ D D fragi /+ D
catin al$ *.+3)+ D D mure /+ D
coacze negre *3+/++ D D mere .+3+ D
greepfruit 3+>) D D afine ) D
lmi 3+>) D D ciree 3*3 D
coarne (fructe) )+ D D
?itamina - care uor solu$il n ap, alcool, glicerin, aceton.
;rupele enolice, legtura du$l la - G - e"plic proprietatea vitaminei - de a fi uor
o"idat n contact cu 9
.
din aer, sau ali o"idani (e". metale).
,
Bn solui acide la p: )>, vitamina - este destul de sta$il, fapt luat n considerare la pregtirea
materialului vegetal n vederea dozrii ei.
Do"area iodometric a 2itaminei '
&re la $az o"idarea ei cu iodul elementar rezultat n urma reaciei dintre iodatul de
potasiu (8=9
/
) i iodura de potasiu (8=), n mediu :-l:
KIO
3
+ 5 HCl + 6 HCl = 3 I
2
+ 6 KCl + 3 H
2
O
O C
C
C
C
C
OH
OH
H
HO
O
H
2
C OH
I
2
2 HI
C
C
C
C
C O
O
O
H
H
HO
O
H
2
C CH
%u$stane necesare: soluie de 8=9
/
+,++3 (14.)+)! soluie de 8= N6, proaspt preparat!
soluie de :-l .6! amidon *6! material vegetal de analizat (cartof, mr,
fructe de mce, ctin, .a.).
Hodul de lucru
a. '"tragerea vitaminei - din materialul vegetal
se face cu o soluie de :-l .6. Bn acest scop.
%e cntrete cu o precizie de +,+* g (la o $alan farmaceutic) o cantitate de *+ g
material vegetal, care se introduce ntrun mo(ar de porelan n care se afl cam .+ mL
soluie de :-l .6 i )*+ g nisip splat n preala$il cu :-l pn la comLeta
ndeprtare a car$onailor (produc efervescen).
%e ma(oreaz (tritureaz) $ine avnd gri(e ca materialul de anlizat s fie permanent
ferit de contactul cu aerul, deci s fie $ine acoperit cu soluie de :-l.
Hasa omogen o$inut se trece cantitativ (fr pierderi) ntrun $alon cotat de *+++
mL, mpreun cu apa (soluie de :-l) de splare a pistidului, mo(arului, plnie.
%e aduce la semn (cot) i se agit din cnd n cnd, timp de *+ minute, dup care se
las s se depun suspensiile grosiere.
%e filtreaz prin vat sau filtru curat ntrun flacon conic uscat.
&. Do"area iodometric a 2itaminei '
Bntrun flacon 'rlenmaIer se iau *+ mL e"act filtrat, se adaug /+ mL ap distilat, )
mL soluie 8= *6 i /3 picturi de soluie de amidon, proaspt preparat, ca
indicator.
Dup omogenizare se titreaz cu soluia de iodat de potasiu (din $iuret) pn la
apariia culorii sla$ al$astrcenuie, persistent cel puin /+ secunde.
Calculul
-onsidernd:
/
8=9
H
7 .*3 i
/
8=9
'
7 .*34) 7 3.,2
H
?it.-
7 *A> '
?it.-
7 *A>4. 7 22,+>
conform legii ec#ivalenilor c#imice (su$stanele reacioneaz n cantiti proporionale cu
ec#ivalenii lor c#imici):
la
/
8=9
'
7 .*34) 7 3.,2 g 8=9
/
coresp. '
?it.-
7 *A>4. 7 22,+> g vit.-
Dac la 3.,24.)+ din *+++ mL soluieD 22,+>4.)+ g vit.- 7 +,/). D
La * mL soluie 8=9
/
(reactiv) corespund +,/). mg vit.-
Deci +,/). reprezint titrul soluiei de 8=9
/
n raport cu vit: -
*+
Dac * mL soluie 8=9
/
corespunde la +,/). mg vitamin -
&tunci ? mL soluie 8=9
/
consumat la titrare corespund la ?.+,/). mg vitamin - cuprins
n cot parte din e"tract utilizat la titrare, adic *+ mL din totalul de *++ mL, cuprini n
$alon.
Bn ntregul $alon cu e"tract se afl deci ?.+,/).M*+ mL mg vit.-
0entru raportarea rezultatului la *++ mg material anlizat:
Dac n m grame materia analizat avem ?.+,/).M*+ mL mg vit.-
&tunci la *++ m grame materia analizat avem "
O 7 6 vitamina - 7
*++
m
*+ +,/). ?

9$s. 0rezena i a altor su$stane o"ida$ile care nsoesc vitamina - reduc gradul de precizie
(cu erori n plus) al determinrii. Fotui pentru determinri n serie, pe acelai produs,
datele analitice o$inute au valoare comparativ.






**