Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure
LP8

Diagnosticul de laborator n infecia HIV

Produs patologic

Snge (pentru examen direct i serologie)

o ser
o plasm pe EDTA
o snge integral

Virusul se poate identifica n secreii genitale, saliv, urin, LCR, lapte de mam.

Anticorpii se mai gsesc n laptele de mam i n saliv.

n cursul diagnosticului infeciei cu HIV se evideniaz:

Antigene virale

ARN viral, ADN proviral

Anticorpi: Ac. anti core, Ac. antienvelope

Dinamica producerii markerilor virali

Antigenul p24

se gsete n serul persoanei infectate

detectabil n infeciile recente, nainte de apariia anticorpilor

dispar dup apariia anticorpilor anti p24

reapar n stadiile tardive de boal (SIDA), semnificnd replicare viral intens i un

prognostic grav

Anticorpii anti p24

apar la 3-12 sptmni de la infecie. Perioada de la infecie pn la apariia lor se

numete fereastr imunologic.

Anticorpii anti gp120

nu au rol protector

sunt folosii ca marker de diagnostic

-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP8

Infecie HIV
SIDA
Fereastr imunologic

ARN-HIV

Ac anti GP120
Ac anti P24

P24

P24

Luni

Ani
Dinamica producerii markerilor virali

Diagnostic
Protocolul standard de diagnostic:

se evideniaz anticorpii prin metoda ELISA

ELISA reprezint prima etap de diagnostic a infeciei HIV (screening), avnd

sensibilitate de aproape 100%
o generaia I: se folosete lizatul total viral de pe culturi de limfocite (whole
virus)
o generaia II: se folosesc antigene clonale
o generaia III: se folosesc antigene recombinate
o generaia IV: metode combinate care testeaz simultan prezena anticorpilor
anti HIV i a antigenului P24

metodele de generaie III i IV au sensibilitate i specificitate ridicat

este posibil apariia rezultatelor false:

o fals negative (fereastra imunologic, diferite tipuri virale (HIV-1, HIV-2) i
subtipuri (HIV-1-N, HIV-1-O, HIV-1-M))
o fals pozitive (probe de snge alterate, incorect etichetate sau schimbate, greeli
de laborator, contaminarea probelor)

rezultatul pozitiv al testrii ELISA se raporteaz ca ser reactiv, i NU confirm

diagnosticul pozitiv de infecie HIV
-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP8

n cazul pozitivrii se face o retestare prin printr-o metod cel puin la fel de sensibil
din aceeai prob de snge (determinare ELISA la centre de referin)

dup retestare, probele reactive trebuie confirmate prin metoda Western-blot

o se detecteaz proteine specifice virale:
-

glicoproteine de nveli (env): gp41, gp120, gp160

proteine nucleare (gag): p18, p24/25, p55

endonucleaze-polimeraze( pol): p34, p40, p52, p68

o se consider pozitive probele care prezint:

-

2 benzi pentru antigene din grupul env (dup World Health Organization
WHO)

1 band (glicoprotein) + 1 band (alt protein specific HIV) (dup

Deutsches Institut fr Normung - DIN)

benzi pentru P24, p34, gp41, gp120/160 (dup Food and Drug Administration)
Interpretarea Western-blot
Proba 1:

HIV+ (control pozitiv)

Proba 2:

HIV- (control negativ)

Proba A: Pacient A
Proba B: Pacient B
Proba C: Pacient C
* pacientul C prezint un pattern sugestiv
pentru infecie HIV
* pacientul B rezultat intermediar dup
WHO, dar pozitiv dup DIN

Teste rapide de diagnostic (point-of-care, bedside tests)

Se bazeaz pe 4 principii: aglutinare, immunodot, immunofiltration sau immune

chromatography

Se poate efectua din snge capilar/venos

Rezultatele se obin n 15-30 min.

Ex: OraQuick, Reveal, Uni-Gold Recombigen

au specificitate i sensibilitate nalt

-3-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP8

Diagnostic direct

nu se face de rutin

detectarea AN virali:

ADN proviral din limfocite sau ARN viral

Reprezint marker de infecie

Se folosete n situaii speciale:

o Calitativ: suspiciune de infecie primar, cnd Ac lipsesc (fereastra
imunologic); nou nscut din mam infectat cu serologie pozitiv (Ac
materni)
o Cantitativ (ncrctura viral): marker de prognostic; monitorizarea
tratamentului. NU se folosete ca metod de diagnostic

PCR (polymerase chain reaction), b-DNA (branched DNA), NASBA (nucleic acid
sequence-based amplification), LCR (ligase chain reaction)

Izolarea virusului

rezervat pentru cazuri speciale, se face n laboratoare specializate

pe culturi de limfocite umane stimulate cu fitohemaglutinin, n prezena

interleukinelor

efect citopatogen n 2-3 sptmni

-4-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP8

Protocol de diagnostic i management al infeciei HIV

Screening
(ELISA generaia 3 sau 4)

Ser nereactiv

Ser reactiv

Retestare prin metode de screening sau

printr-o metod cel puin la fel de sensibil
din aceeai prob de snge

Expunere recent
Semne i simptome
sugestive pentru HIV

Repetarea probei peste

7-10 zile (Ag, Ac din ser
i PCR din snge pe
EDTA)

Fr expunere recent
Fr semne i simptome
sugestive pentru HIV

Infecie absent

Reactiv

Nereactiv

Trimiterea probei
pentru confirmare

Eroare de
lucru

Urmrire prin
recoltare de noi
probe ct mai rapid

Urmrire periodic la
persoanele cu risc

-5-

Calibrarea aparatelor
i reevaluarea
modalitilor de lucru