Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Curs Energetica 2014
Curs Energetica 2014
Keq reflect compoziia amestecului de reacie ajuns la echilibru, care este aceeai indiferent
de concentraiile iniiale ale reactanilor i produilor (deci Keq are o valoare fix pentru o reacie
dat).
Exist dou forme ale variaiei energiei libere: G i G.
G este diferena de energie liber real, caracteristic pentru condiiile reale din celula
vie (presiune, temperatur, pH i, mai ales, concentraii reale ale participanilor la reacie). G a
reaciei directe (A B) este egal ca mrime i opus ca semn cu cea a reac iei inverse (A B).
Cunoaterea valorii lui G este util din dou puncte de vedere:
- semnul lui G este predictiv pentru sensul de desfurare al unei reacii A
B n
condiiile reale din celula vie;
- mrimea lui G arat ct de departe de echilibru este sistemul reactant n momentul iniial
i, deci, cuantific tendina de atingere a echilibrului (aceasta din urm reprezint o for motrice
care pune n micare reacia biochimic).
Sunt posibile trei situaii:
dac G este negativ (reacie exergonic), reacia are loc spontan de la A ctre B cu pierdere
de energie liber; dac G are valoare mare, reacia are, practic, caracter ireversibil (o cantitate
mare de energie liber este degajat sub form de cldur, iar cldura nu poate fi utilizat pentru a
permite desfurarea reaciei n sens invers);
dac G = 0, reacia este la echilibru;
dac G este pozitiv, reacia poate avea loc de la A ctre B (n sensul endergonic) numai n
condiiile n care exist un aport de energie liber dintr-o alt surs; altfel, sensul spontan al unei
asemenea reacii este de la B ctre A (sensul exergonic).
Cu alte cuvinte, o reacie decurge spontan ntotdeauna n sensul exergonic.
G este diferena de energie liber standard, caracteristic pentru condiii standard
(temperatura de 25C, pH = 7, reactanii i produii prezeni ntr-o concentraie iniial de 1M).
G poate fi calculat cunoscnd valoarea lui G i concentraiile participanilor la reacie,
conform ecuaiei lui Gibbs:
G = G + RT ln [C][D]/[A][B]
R-constanta gazelor = 1,987 cal/molK,temperatura absolut, [A], [B], [C] i [D] sunt
concentraiile reale din celul n momentul respectiv).
G a unei reacii care decurge spontan spre echilibru este ntotdeauna negativ (reacia
poate avea loc numai n sensul exergonic) i variabil (datorit modificrii continue a
concentraiilor reactanilor, pe msur ce reacia se desfoar): G devine din ce n ce mai puin
negativ pe msur ce reacia are loc i este zero n punctul de echilibru, indicnd faptul c nu se
mai poate produce o transformare net n acea reacie.
Deci cnd reacia a atins echilibrul, G = 0 i atunci:
G = RT ln [C]eq[D]eq/[A]eq[B]eq = RT ln Keq
Aadar, valoarea lui G pentru o anumit reacie poate fi calculat cunoscnd valoarea
constantei de echilibru a acelei reacii. K eq fiind o constant, rezult c i G este o constant a
crei valoare este caracteristic pentru fiecare reacie dat.
Dei valoarea lui G indic sensul de desfurare al unei reacii numai n condiii standard,
care n majoritatea cazurilor sunt diferite de cele reale din celula vie, cunoaterea valorii sale este
util deoarece permite compararea diverselor reacii biochimice n privina variaiei energiei libere.
Keq
>1
1
ln Keq
>0
0
G
<0
0
<1
<0
>0
spre stnga (A B)
O reacie cu G > 0 poate avea loc n sensul direct (spre dreapta) dac G < 0, acest
lucru fiind posibil dac termenul RT ln [Produi]/[Reactani] este negativ i are o valoare absolut
mai mare dect G. Aa se ntmpl n celul atunci cnd: (a) produsul de reacie este ndeprtat
imediat pe msur ce se formeaz, prin angajarea ntr-o alt reacie, sau (b) are loc aportul continuu
al unor cantiti mari de reactant provenit din snge sau dintr-o alt reacie. Ambele situaii menin
raportul [P]/[R] mult sub 1, astfel nct termenul RT ln [P]/[R] are o valoare negativ mare.
Caracterul aditiv al valorilor G pentru reacii succesive:
n cazul a dou reacii succesive, valorile lui G se nsumeaz:
(1)
A B G1
(2)
B C G2
Reacia global: A C Gtotal = G1 + G2
Acest principiu explic modul n care o reacie nefavorabil termodinamic (endergonic,
avnd o diferen de energie liber Gen) poate avea loc n sensul direct prin cuplare cu o reacie
exergonic (avnd Gex), cu condiia ca |Gex| > Gen, astfel nct Gtotal s fie < 0; o reacie nu
poate avea loc n mod independent n sensul endergonic. Dou reacii sunt cuplate dac energia
liber degajat n reacia exergonic susine desfurarea reaciei endergonice; cuplarea celor dou
reacii se realizeaz printr-un intermediar chimic comun.
Ex. - formarea glucozo-6-fosfatului:
(1) Glucoz + Pi glucoz-6-fosfat + H2O (G1 = 3,3 kcal/mol) - reacia endergonic
(2) ATP + H2O ADP + Pi
(G2 = 7,3 kcal/mol) - reacia exergonic
----------------------------------------------------------------------------------------------------Reacia global: Glucoz + ATP glucoz-6-fosfat + ADP (G total = 4 kcal/mol)
Cele dou reacii mprtesc intermediarul comun Pi (fosfat anorganic). Reacia global
este exergonic; energia stocat n ATP este utilizat pentru a susine sinteza glucozo-6-fosfatului.
Din punct de vedere chimic, calea pe care are loc formarea G-6-P (prin transferul gruprii fosfat din
ATP pe glucoz, neavnd loc o hidroliz a ATP) este diferit de reaciile 1 i 2, dar rezultatul net
este acelai ca i suma celor dou reacii.
Pentru o cale metabolic ce cuprinde mai multe reacii succesive, fiecare avnd o anumit
valoare a lui G:
diferena de energie liber pentru ntreaga cale este Gtotal = G1 + G2 + G3 + G4 + ..... (datorit
caracterului aditiv al variaiei energiei libere pentru reaciile succesive). Dac Gtotal < 0, calea
metabolic este exergonic n ansamblu i are loc n sensul figurat mai sus, chiar dac unele reacii
individuale au G > 0.
Bioenergetic versus cinetic:
- G are o valoare predictiv pentru fezabilitatea energetic a unei reacii chimice; nu
ofer nici o informaie despre viteza reaciei. Bioenergetica se ocup doar cu starea iniial i cea
final a componenilor reaciei, nu cu mecanismul reaciei sau durata necesar pentru atingerea
echilibrului.
- Viteza unei reacii depinde de mrimea energiei de activare, precum i de cantitatea i
eficiena enzimelor disponibile pentru a cataliza reacia respectiv n celul; aceste aspecte aparin
domeniului cineticii biochimice.
3
Molecula care joac un rol central n transferul energiei libere de la procesele exergonice la
cele endergonice este ATP (adenozin trifosfat).
Donarea energiei din ATP implic participarea covalent a ATP n reacia chimic, cu
scindarea sa n ADP i Pi (fosfat anorganic) sau n AMP i PPi (pirofosfat anorganic), parcurgnduse dou etape:
- mai nti, gruparea fosfat sau AMP din ATP este transferat pe o molecul substrat (X) (sau
pe un rest aminoacidic dintr-o enzim), devenind ataat covalent i crescnd coninutul de energie
liber al moleculei respective;
- ntr-o a doua etap, gruparea Pi sau AMP este dezlocuit de ctre cel de al doilea substrat
(Y). n felul acesta, o parte din energia legturii fosfoanhidridice din ATP este transferat i
conservat n noua legtur covalent format ntre X i Y.
(1) X + Y + ATP XY + ADP + Pi
X + ATP X~P + ADP
X~P + Y XY + Pi
sau
n reacia (2), pirofosfatul anorganic (PPi) este hidrolizat la 2Pi sub aciunea pirofosfatazei
anorganice (enzim prezent n toate celulele), ntr-o reacie exergonic. ndeprtarea PPi din
mediu face ca echilibrul reaciei de sintez s fie i mai mult deplasat spre dreapta.
i ali compui au potenial energetic ridicat (valori negative mari pentru G la hidroliz).
Compuii fosforilai din organism pot fi mprii n dou grupe, n funcie de G pentru reacia de
hidroliz:
- compui nalt energetici (conin legturi de tip macroergic, simbolizate prin ~) - au
G la fel de negativ sau mai negativ dect ATP-ul (la scindarea n ADP i Pi: 7,3 kcal/mol);
- compui cu energie joas (conin legturi de tip microergic) - au G mai puin
negativ dect aceast valoare.
Compuii nalt energetici au un potenial ridicat de transfer de grupare chimic - pot
transfera o grupare fosfat (sau acil) pe un alt compus:
ATP i ali nucleozid trifosfai - GTP, UTP, CTP (2 legturi tip anhidrid acid fosforic)
Fosfoenolpiruvat
(legtur enol-fosfat)
1,3-Difosfoglicerat
(legtur anhidridic
tip carboxil-fosfat)
Acil-CoA
(legtur tiol-esteric)
G (kcal/mol)
14,8
11,8
10,3
10,9
7,5
7,8
7,3
4,6
3,4
5
Fructoz-6-fosfat
Glucoz-6-fosfat
Glicerol-3-fosfat
3,8
3,3
2,2
REACII DE OXIDO-REDUCERE
Energia liber coninut n moleculele combustibililor metabolici este disponibilizat n
urma degradrii acestora pe diverse ci catabolice, n mod particular n reaciile de oxidare. Multe
procese catabolice au natur oxidativ, deoarece atomii de C din moleculele cu rol de combustibil
sunt ntr-o stare redus. Transferul de electroni (e) n reacii de oxido-reducere este responsabil,
direct sau indirect, de majoritatea energiei libere degajate n cursul proceselor catabolice.
Fie reacia de oxido-reducere:
Ared + Box
Aox + Bred
(ex: Fe2+ + Cu2+
Fe3+ + Cu+)
donorul de e (Ared) este agentul reductor pierznd e, el se oxideaz;
acceptorul de e (Box) este agentul oxidant ctignd e, el se reduce.
Reacia de mai sus poate fi scris sub forma a dou jumti de reacie:
Ared Aox + n e
Box + n e Bred
Ared/Aox i Bred/Box formeaz dou cupluri oxido-reductoare. Fiecare cuplu oxido-reductor
este caracterizat de potenialul redox (E), care este o msur a afinitii pentru electroni (a
disponibilitii de a accepta electroni).
ntr-o reacie de oxido-reducere, e se deplaseaz de la cuplul donor de e (cu afinitate mai
mic pentru e, E mai mic) spre cuplul acceptor de e (cu afinitate mai mare pentru e, E mai mare).
Potenialul redox n condiiile reale existente n celul (E) poate fi calculat conform ecuaiei
lui Nernst:
E = E + (RT/nF) ln [Ox]/[Red]
unde E este potenialul redox standard, n - numrul de e transferai, F - constanta Faraday =
96,480 J/Vmol, [Ox] i [Red] - concentraia formei oxidate, respectiv concentraia formei reduse a
cuplului oxido-reductor.
A + BH2
A + NAD(P)H + H+
NAD+
NADH
A + FMNH2/FADH2
FAD
FADH.
FADH2
Coenzimele flavinice, spre deosebire de cele nicotinamidice, sunt legate ferm de apoenzim,
de aceea se mai numesc grupri prostetice. E (potenialul de reducere standard) pentru coenzima
legat de apoenzim are o valoare particular pentru acea flavoprotein, depinznd de proteina cu
care coenzima este asociat, aceast valoare fiind de multe ori diferit de valoarea E pentru flavina
liber.
Coenzimele flavinice pot accepta de la substrat un singur atom de H (transformndu-se n
forma parial redus FADH.) sau 2 atomi de H (transformndu-se n forma complet redus FADH2).
8
Ca urmare, flavoproteinele pot servi ca intermediari ntre reaciile n care sunt cedai 2 e i reaciile
n care este acceptat un singur e.
Prin reducerea celor dou tipuri de coenzime n procesele catabolice, are loc conservarea
unei mari pri a energiei libere degajate prin oxidarea combustibililor metabolici.
Sediul PO este mitocondria. Acest organit celular are dou membrane care nconjoar
matricea mitocondrial:
Membrana extern este permeabil pentru molecule mici i ioni, care trec liber prin canale
proteice transmembranare.
Membrana intern este impermeabil pentru majoritatea moleculelor mici hidrosolubile i
a ionilor; moleculele care o pot strbate o fac cu ajutorul unor transportori specifici. Aceast
membran conine componentele LR i ATP sintaza.
Matricea mitocondrial conine enzimele care intervin n toate cile de degradare oxidativ
a substratelor energogene, cu excepia glicolizei.
PO implic reducerea O2 la H2O cu electronii cedai de ctre NADH i FADH 2, care la
rndul lor au colectat aceti e din cile catabolice. Dac transferul de e de la NADH sau FADH2 la
O2 s-ar face direct, s-ar degaja o cantitate extrem de mare de cldur; ca urmare, acest transfer se
realizeaz n mai multe etape, prin intermediul unor transportori de e care acioneaz secvenial i
9
care constituie lanul respirator (acesta fiind calea final comun prin care electronii provenii de
la diveri combustibili biologici sunt transferai pe oxigen).
Componentele LR cuprind:
Ubiquinona (coenzima Q) este o benzoquinon liposolubil cu o caten lateral
izoprenoid lung. Poate accepta 1 H (devenind radical semiquinonic .QH, forma parial redus) sau
2 H (devenind ubiquinol QH2, forma complet redus) ca i flavoproteinele, poate aciona la
jonciunea dintre un donor de 2 e i un acceptor de 1 e. Avnd o molecul mic i hidrofob, este
uor difuzibil prin bistratul lipidic al membranei mitocondriale interne.
10
- gradient chimic: pe faa extern a membranei mitocondriale interne, pH-ul este mai acid n
comparaie cu faa sa matriceal.
n acest gradient este stocat o energie electro-chimic, ce reprezint o conservare temporar
a unei mari pri a energiei eliberate prin transferul e pn la oxigen (aprox. 90%). Energia stocat
astfel se numete for proton-motoare: atunci cnd H+ curg spontan n sensul gradientului lor
electrochimic, energia stocat n acest gradient devine disponibil pentru a efectua travaliu:
susinerea sintezei ATP din ADP i Pi.
Sinteza ATP
Are loc la nivelul complexului V: ATP sintaza sau complexul Fo-F1. Acest complex are
dou componente (domenii funcionale):
Fo este integrat n membrana mitocondrial intern; este alctuit din 3 tipuri de
subuniti (a, b i c) n proporiile ab2c10. Are un canal (por) central pentru H+ prin care protonii curg
n sensul gradientului de concentraie, din spaiul intermembranar spre matrice.
F1 este localizat pe faa intern a membranei mitocondriale interne (proemin spre
matrice) i este asociat cu F o. Este alctuit din 9 subuniti: Subunitile
ialterneaz, fiind dispuse ca feliile de portocal. Fiecare din cele trei subuniti conine un
centru catalitic pentru sinteza ATP. Subunitatea formeaz un ax central care trece prin F1 i este
asociat cu Fo.
a) F1 izolat de Fo catalizeaz hidroliza ATP (ATP + H2O ADP + Pi, G = 7,3
kcal/mol), motiv pentru care a fost denumit iniial F1 ATP-aza.
b) F1 integrat n membrana mitocondrial intern, asociat cu F o, catalizeaz sinteza ATP:
ADP + Pi ATP + H 2O. Reacia fiind puternic endergonic (G = 7,3 kcal/mol), poate avea loc
doar n condiiile n care att ATP ct i H 2O sunt ndeprtate eficient din mediul de reacie, astfel
nct concentraia lor s fie meninut la valori mult mai mici dect concentraia ADP i Pi (n felul
acesta G real poate fi negativ). Aceste condiii sunt create n centrii catalitici ai ATP sintazei:
- mediul hidrofob menine concentraia moleculelor de H2O la o valoare redus;
- ATP este ndeprtat printr-un mecanism rotativ mobilizat de curentul de protoni care trec
din spaiul intermembranar spre matricea mitocondrial (n sensul gradientului de concentraie),
prin porul existent n componenta Fo.
13
Mecanism de cataliz rotaional la nivelul ATP sintazei, propus de ctre Paul Boyer:
Cei 3 centri catalitici ai subunitilor se pot gsi n 3 conformaii diferite: -ATP (cu
afinitate mare pentru ATP),-ADP (cu afinitate mare pentru ADP) i-empty (cu afinitate foarte
mic pentru ATP i ADP). Fiecare centru catalitic trece succesiv prin fiecare din cele trei stri: mai
nti-ADP (leag ADP i Pi) are loc sinteza ATP, n acelai timp centrul catalitic trecnd la
conformaia -ATP n final, subunitatea trece la conformaia -empty, cu afinitate foarte mic
pentru ATP, care va fi eliberat de pe suprafaa enzimei. Apoi ncepe o nou rund de cataliz.
Aceste modificri conformaionale ciclice sunt determinate de pasajul H+ prin porul Fo: acest
curent de H+ determin rotaia cilindului format din subunitile c i a subunitii ataate. Aceasta
din urm trece prin centrul sferoidului . Cu fiecare rotaie de 120, vine n contact cu o
subunitate diferit, iar contactul foreaz acea subunitate s treac n conformaia -empty,
determinnd eliberarea ATP.
n concluzie:
- prin transferul e de la NADH sau succinat la O2, prin lanul respirator, se degaj o anumit
cantitate de energie liber aceasta este utilizat la pomparea de H + n afara matricei
mitocondriale de ctre complexele I, III i IV se creeaz un gradient de H+;
- energia electro-chimic ce este coninut n gradientul de H+ reprezint o for protonmotoare: aceasta permite sinteza ATP la nivelul componentei F1 a ATP sintazei, pe msur ce H+
curg pasiv (n sensul gradientului lor electrochimic) napoi n matrice prin porul de la nivelul Fo.
Pentru ca fora proton-motoare s poat fi folosit la sinteza ATP, este absolut necesar ca
membrana mitocondrial intern s fie impermeabil pentru H+, astfel nct gradientul de H+ s se
menin i protonii acumulai n spaiul intermembranar s se poat ntoarce n matrice numai prin
porul Fo.
Acest model pentru sinteza ATP se numete modelul chemiosmotic i a fost propus de
ctre Peter Mitchell: termenul chemiosmotic descrie o reacie enzimatic ce implic, simultan, o
reacie chimic i un proces de transport.
ADP + Pi + nH+ext ATP + H2O + nH+int
+
(H ext sunt protonii de pe faa extern a membranei mitocondriale interne; H+int sunt protonii ajuni
pe faa intern a membranei mitocondriale interne).
14
Raportul P/O = numrul de molecule de ATP sintetizate pentru O 2 redus la H2O, sau
pentru fiecare 2 e transferai n LR:
- experimental s-a constatat c numrul de H + necesari pentru sinteza unei molecule de ATP
este 4;
- atunci cnd NADH este oxidat n LR, sunt pompai 10 H+ la nivelul complexelor I, III i IV
(4 + 4 + 2) raportul P/O este 10:4 = 2,5 (prin rotunjire se va considera ca fiind 3);
reacia de oxidare a NADH cuplat cu sinteza ATP este:
NADH + H+ + O2 + 3ADP + 3Pi NAD+ + 3ATP + 4H2O
- atunci cnd succinatul este oxidat n LR, sunt pompai 6 H+ la nivelul complexelor III i
IV (4 + 2) raportul P/O este 6:4 = 1,5 (prin rotunjire se va considera ca fiind 2);
reacia de oxidare a succinatului cuplat cu sinteza ATP este:
succinat + O2 + 2ADP + 2Pi fumarat + 2ATP + 3H2O
Cele 2 procese - lanul respirator i fosforilarea ADP - sunt cuplate n mod
obligatoriu: nici unul nu poate avea loc fr cellalt.
Inhibitorii pasajului electronilor de la NADH sau succinat pn la O 2 blocheaz sinteza
ATP:
Pentru ca transferul de e prin LR s degaje energie liber, care apoi s poat fi utilizat la
sinteza ATP, este necesar ca e s ajung pn la acceptorul final (O 2), astfel nct componentele LR
s se reoxideze i s fie apte de a transfera noi e . Blocarea LR la un anumit nivel face ca
transportorii situai nainte de blocaj s rmn n stare redus, incapabili de a mai transporta noi e
spre oxigen; n consecin, nceteaz degajarea de energie liber sinteza ATP devine imposibil.
- amital (un barbituric) i rotenona (produs din plante utilizat ca insecticid) inhib fluxul e
de la complexul I la coenzima Q;
- malonatul (similitudine structural cu succinatul) inhib competitiv complexul II (succinat
dehidrogenaza);
- antimicina A (un antibiotic toxic) inhib LR ntre cit b i cit c1 (n cadrul complexului III);
- cianurile i monoxidul de carbon inhib citocrom oxidaza (complexul IV).
Inhibarea sintezei de ATP blocheaz transferul e la O2:
Dac sinteza ATP nu poate avea loc sau fluxul H + spre matrice (prin componenta Fo) este
blocat, H+ pompai nu se mai pot ntoarce n matrice. Pe de alt parte, ei continu s fie expulzai
prin activitatea LR, ceea ce duce la crearea unui gradient de H + foarte mare. La un moment dat,
energia eliberat prin transferul e de la NADH la O2 devine mai mic dect energia necesar
pomprii protonilor. n acest moment, transferul e nu mai poate continua, trebuie s se opreasc.
- oligomicina este un antibiotic toxic care inhib ATP sintaza (componenta F o) inhib att
sinteza ATP ct i transferul e la O2.
15