Universitatea Tehnic a Moldovei

Cromatografia
A efectuat :
131

Studenta grupei FFTIoncu Carolina

A verificat:
Universitar,Doctor

Confereniar
Mihail Ghetiu

Chisinau,2014

Scopul lucrrii: A face cunotin cu metoda de identificare i

separare a substanelor - cromatografia. A efectua separarea unui

amestec de substane prin metoda cromatografiei pe hrtie.

Noiuni teoretice
Cromatografia reprezint o metod de separare a unui amestec de
substane, care const n deplasarea acestui amestec (faza mobil) pe o
faz staionar. Pentru a cromatografia un amestec sunt necesare dou
faze n contact, una mobil i alta staionar. Separarea este un proces de
echilibru, moleculele trecnd din faza mobil n cea staionar i invers. n
acest mod are loc micarea moleculelor amestecului de separat odat cu
curentul fazei mobile dc-a lungul fazei staionare. In dependen de modul
interaciunii fizico-chimice dintre faza staionar i componentele de
cromatografiat deosebim urmtoarele tipuri de cromatografie:
Cromatografie de repartiie (se bazeaz pe solubilitatea diferit
a componentelor ntre cele dou faze)
Cromatografie de adsorbie (se bazeaz pe adsorbia selectiv a
componenilor lichidului sau gazului pe suprafaa fazei solide)
Cromatografie cu schimb de ioni (n calitate de faz staionar se
folosesc rini schimbtoare de ioni: cationi sau anionii)
In dependen de starea de agregare a fazei mobile se deosebesc:
Cromatografie lichid (drept faz mobil servete un lichid)
Cromatografie gazoas (drept faz mobil servete un gaz inert) In
dependen de tehnica cromatografiei deosebim:
Cromatografie pe coloan
Cromatografie pe hrtie
Cromatografie n strat subire
Cromatografie cu schimbtori de ioni
Cromatografia pe hrtie este de tipul cromatografiei de repartiie
lichid-lichid, adic implic distribuirea componentelor de cromatografiat
ntre o faz lichid polar, care este de obicei, apa adsorbit puternic pe
fibra de celuloz a hrtiei (aceasta va constitui faza staionar) i o faz
mobil - solventul de eluare. Tehnica cromatografiei pe hrtie este
urmtoarea: pe o hrtie special, la distana de 2-3 cm de la marginea de
jos se traseaz o linie - linia de start, pe care se picur din capilar o
pictur de soluie de cromatografiat. Dac sunt mai multe soluii, atunci
distana dintre picturi trebuie s nu fie mai mic de 3 cm. Hrtia se
introduce ntr-o camer cromatografic, n care se gsete eluantul.
Nivelul solventului trebuie s tic mai jos de linia startului. Camera se
nchide. Solventul se va mica ascendent, purtnd cu sine componentele
amestecului. Componentele care se absorb mai slab pe faza staionar se
vor deplasa cu o vitez mai marc i vor ridicate mai sus de solvent,
eluantul trebuie s umecteze hrtia pn la 1-0,5 cm de la marginea de
2

sus. In acest moment hrtia se scoate din camera cromatografic i se

traseaz linia de fini. Dac substanele sunt colorate atunci pe plac se
vor observa o serie de spoturi (pete), aezate pe o linie perpendicular
pe nivelul solventului; n cazul substanelor incolore, pentru
vizualizarea spoturilor se utilizeaz diferite procedee de developare.
Spoturile developate se vor contura cu un creion simplu imediat ce
sunt detectate. Pentru a determina poziia spoturilor, se msoar
distana de la linia startului pn la centrul fiecrui spot (a) i
distana de la linia startului pn la linia finiului frontului de solvent
(h). Raportul dintre aceste mrimi vor exprima valoarea constantei
cromatografice R f pentru substana dat. R f =a/h
Cromatografia pe hrtie se utilizeaz mai des pentru analiza rapid a
amestecurilor, identificarea compuilor unui amestec, dar nu i
pentru separarea lor la scar preparativ. Pentru cromatografie se
folosete hrtie special Watman, fabricat din bumbac de anumit
compoziie i proprieti. Cel mai des se utilizeaz ei lianii: alcoolii,
acizii carboxilici, fenolii, esterii, bazele heterociclice, eterii i
cetonele.

Cromatografia pe
hrtie
Modul de lucru
In camera cromatografic se introduce cu ajutorul pipetei, fr a
umecta suprafeele camerei solvent - alcool izopropilic. Stratul de
lichid n camer trebuie s ating nlimea de 2 cm. Din hrtie de
filtru se taie o fie mai scurt dect nlimea camerei cu 1 cm i
mai ngust dect diametru cu 0,4 cm. La distana de 3 cm de la
marginea fiei se traseaz cu creionul subire linia de start, pe care
se noteaz 3 puncte. Distana ntre punctele i distanele de la
marginile fiei trebuie s fie maxime. Pe aceste puncte, cu ajutorul
unui capilar de sticl se plaseaz picturi (spoturi) de:
1. Tatrazina
2. Amestec
3. Albastru de metilen
Se evit contopirea spoturilor. Dup uscarea spoturilor, fia se
fixeaz de capacul camerei cromatografice cu o bucat de lipici i se
introduce n camer pe 1 or. Dup aceea, pe cromatogram se
marcheaz linia de fini i se contureaz spoturile care s-au
evideniat. Se calculeaz R f a coloranilor cercetai.
3.Aparatajul necesar (cu explicaii)

1.
2.
3.
4.

Plci de sticl/plci din comer "Silufol"

Capilare
Camera cromatografic
Eluentul, ce const din solveni - heptan, cloroform,
nitrobenzen. (10:5:1)
5. Creion simplu
6. Reactivi

Reactivile folocite :
Tatrazin: Se folosete pentru colorarea buturilor, dulciurilor,
gemurilor, cerealelor, petelui conservat, mutarului, supelor ambalate. De
cele mai multe ori, acest aditiv alimentar este folosit n combinaie cu ali
aditivi alimentari, iar efectul nu poate fi dect unul foarte nociv asupra
sntii consumatorilor.
Albastru de metilen. Formula brut C 16 H 18 ClN 3 S sau n form
de cristalohidrat C 16 H 18 ClN 3 S.3H 2 O
Este o substan cristalin, solubil n ap, alcool, cloroform.
Cristalele au un luciu de bronz. Soluiile ei snt colorate n albastru nchis.
Este un colorant organic bazic tiazinic, care confer esturilor de bumbac,
ln i mtase o culoare albastr intens.

5. Rezultatele msurrilor experimentale

Datele
D. de la linia de
start pn la linia de
fini
D. de la linia de
start pn la primul
spot (Tartrazin)
D. de la linia de
start pn la al 2-lea
spot (Amestec)
D. de la linia de
start pn la al 3-lea
spot (Albastru de
metilen)
D. de la linia de
start pn la 1-ul
centru
D. de la linia de
start pn la al 2-lea
centru
D. de la linia de
start pn la al 3-lea
centru

a, mm
10,8

h, mm
10,8

Rf
1

Culoarea
-

8,1

10,8

0,75

Galben

7,8

10,8

0,7222

Verde

2,2

10,8

0,2037

Albastru

6,9

10,8

0,6388

Verde

6,8; 1

10,8

0,6296;
0,0925

Verde

1,4

10,8

0,1296

Verde

6. Calcule n baza datelor experimentale

Rf=a/h

Rf1=8,1/10,8= 0,75
Rf2= 7,8/10,8= 0,7222
Rf3= 2,2/10,8= 0,2037
Rf3.1= 6,9/10,8= 0,6388
Rf3.2.1= 6,8/10,8= 0,6296
Rf3.2.2= 1/10,8=0,0925
Rf3.2.3= 1,4/10,8=0,1296

(Tartrazina)
(Amestec)
(Albastrul de metilen)
(Centru 1)
(Centru 2.1)
(Centru 2.2)
(Centru 3)

7. Concluzie
n urma efectuarii lucrarii de laborator am facut cunotina cu cromatografia pe hrtie.
Cromatografia pe hrtie este de tipul cromatografiei de repartiie lichid-lichid, adic
implic distribuirea componentelor de cromatografiat ntre o faz lichid polar, care este de
obicei, apa adsorbit puternic pe fibra de celuloz a hrtiei (aceasta va constitui faza
staionar) i o faz mobil - solventul de eluare.
Am rmas convins de faptul c aceast metod e rapid, exact, putem astfel uor
stabili prile componente ale unui amestec, tiind proprietile substanelor amestecate.