UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN

VETERINAR CLUJ-NAPOCA
UNIVERSITATEA LIEGE
Facultatea de Zootehnie i Biotehnologii
Gembloux Agro BioTech

Ing. MARIANA NICULINA MDA

CERCETRI PRIVIND INDICII DE CALITATE I

AUTENTICITATE AI MIERII DE SALCM
(ROBINIA PSEUDOACACIA)

CONDUCTORI TIINIFICI:
Prof.dr.ing. Liviu Al. Mrghita
Prof.dr. Eric Haubruge

Cluj-Napoca
2013

CUPRINS
INTRODUCERE

I.

MIEREA ORIGINE I AUTENTICITATE.....

II

SCOP, OBIECTIVE I DESIGN EXPERIMENTAL.........................................

II.1.

Motivarea studiilor tiinifice

II.2.

Scopul tezei ..

II.3.

Obiective specifice ale tezei..................................................................................

III

MATERIAL I METODE..

III.1.

PROBE DE MIERE............................................................................................

III.2.

TEHNICI ANALITICE UTILIZATE PENTRU DETERMINAREA

AUTENTICITII MIERII.

IV

REZULTATE I DISCUII..........

IV.1.

CARACTERIZAREA FIZICO-CHIMIC A MIERII DE SALCM

IV.1.1.

Determinarea coninutului de ap................................................................

IV.1.2.

Determinarea activitii apei (aw)..................................................................

10

IV.1. 3

Determinarea culorii mierii...................................................................................

10

IV.1.4.

Determinarea conductivitii electrice..

12

IV.1.5.

Determinarea coninutului de cenu....................................................................

12

IV.1.6.

Determinarea aciditii mierii........................................................................

13

IV.1.7.

Determinarea proteinelor totale.

13

IV.1.8.

Analiza calorimetric difereniat..........................................................................

14

IV.1.9.

Determinarea vscozitaii..............................................................................

16

IV. 2.

DETERMINRI CROMATOGRAFICE........................................................

17

IV.2.1.

Determinarea glucidelor prin HPLC-IR..........................................................

17

IV.2.2.

Identificarea amprentei gaz-cromatografic GC-MS specific a probelor de

18

miere...........................................................................................................
IV.3.

DETERMINRI SPECTROSCOPICE..........................................................

21

IV.3.1.

Spectroscopia n infrarou apropiat (NIR): Analiza calitativ.......................

21

IV.3.2.

Analiza chemometric a bazei de date spectrale...........................................

23

IV.3.3.

Spectroscopia n infrarou mediu (MIR): Analiza calitativ.........................

29

IV.3.4.

Spectroscopia cu raze X ...............................................................................

31

CONCLUZII GENERALE..

32

BIBLIOGRAFIE............................................................................................

33

INTRODUCERE

Evaluarea calitii i a autenticitii mierii este o important arie de cercetare

aplicat cu impact relevant n industrie i n protecia consumatorului. Autenticitatea
mierii este definit de ctre Codex Alimentarius, EU Honey Directive i cteva
legislaii naionale. Termenul de autenticitate are dou aspecte: autenticitatea n
ceea ce privete producia (are ca scop prevenirea falsificrilor) i autenticitatea n
privina originii geografice sau botanice (are ca scop prevenirea etichetrii greite,
tiindu-se c mierea poliflor are preul de vnzare mai sczut dect mierea de
salcm).
Proiectul de cercetare urmrete caracterizarea mierii de salcm prin evaluarea
unor metode analitice fiabile care s permit realizarea unui profil fizico-chimic
specific acesteia.
Teza este structurat n dou pri principale, prima parte incluznd studiul de
literatur, iar cea de a doua parte cercetri proprii, rezultate, discuii, concluzii i
perspective.
Partea I a lucrrii "Studiul de literatur" cuprinde un capitol, n care se prezint
considerente teoretice privind calitatea i autenticitatea mierii. Deasemenea n cadrul
acestui capitol sunt prezentate cadrul legislativ i modaliti de etichetare a mierii care
s ateste calitatea i autenticitatea mierii. n final, se prezint o expunere a literaturii
de specialitate despre parametrii de calitate i metodele analitice actuale utilizate n
controlul calitii mierii.
n partea a II-a Contibuii Originale cuprinde trei capitole. n capitolul II
Scop, obiective i design experimental se prezint etapele, obiectivele i metodele cu
ajutorul crora s-a realizat cercetarea. Capitolul III "Material i metode" se prezint
metodele

de

analiz

utilizate,

metodele

fizico-chimice,

cromatografice

spectroscopice.
Principalele obiective ale tezei sunt :
-

Investigarea i caracterizarea fizico-chimic a parametrilor care s defineasc

optim calitatea i autenticitatea mierii de salcm produs n Romnia

Determinarea amprentei gaz-cromatografice a mierii de salcm produs n

Romnia, prin folosirea metodei de extracie SPME urmat de analiza HS /
GC-MS

Discriminarea mierii pe baza spectrelor, folosind metode de analiz statistic a

datelor

Evaluarea metodelor spectroscopice i de analiza statistic multivariat pentru

creearea de modele matematice utilizate n prezicerea indicilor de calitate ai
mierii

Optimizarea metodei spectroscopice cu raze X

n vederea determinrii

indicelui de cristalizare a mierii

Capitolul al IV-lea cuprinde subcapitole referitoare la evaluarea compoziiei
fizico-chimice, la profilului volatil identificat, la analiza calitativ i cantitativ a
mierii folosind metodele spectrometrice i analiza statistic multivariat. n cadrul
acestor subcapitole sunt prezentate rezultatele obinute n urma identificrii i
cuantificrii celor mai importani parametrii ai mierii precum apa, glucidele,
coninutul de cenu, de proteine i compui volatili. Deasemenea se prezint
indicatori ai prospeimii ( aw , vscozitatea, gradul de cristalizare).
Capitolul I . MIEREA ORIGINE I AUTENTICITATE
Mierea este un produs natural, consumat ca aliment nc din vremuri antice
(Ransome, 2004). Statutul special al mierii pentru consumatori se datoreaz imaginii
ei de produs natural i a beneficiilor legate de sntate (Mrghita, 2008, Bura i col.,
2005). Dup unele scandaluri privind mierea, calitatea acesteia n funcie de origine a
devenit asociat cu ateptrile consumatorilor. Spre exemplu, n cadrul Comunitii
Europene, s-a descoperit miere de provenien chinez falsificat cu sirop de porumb
cu un coninut ridicat de fructoz, alte incidente constnd n descoperirea unui
coninut excesiv de reziduu de antibiotice n miere provenind din ri din lumea a treia
(Ochi, 2005). Prin urmare, standardele de calitate pun accent pe importana calitii
mierii n funcie de origine, iar acest lucru este utilizat n promovarea vnzrilor prin
etichetare specific. Etichete precum monoflor sau poliflor, organic, cu denumire
4

de origine protejat, satisfac cerinele consumatorului, ct i pe cele ale industriei

mierii i ale organele de control. n plus, cercettorilor li se cere s pun la dispoziie
metode i markeri care stabilesc legtura dintre miere i reglementrile existente.
Specificaiile mierii cu indicaie geografic sunt bazate n general pe parametrii
fizio-chimici. Aceti indicatori s-au dovedit ca avnd un potenial limitat n
determinarea originii a mierii. n consecin, descoperirea unor markeri chimici care
s ajute la determinarea calitii mierii n funcie de origine, a fost subiectul multor
studii din ultima perioad. Aici se nscriu i studiile care se ocup de compuii volatili
(Cuevas-Glory i col., 2007), compuii fenolici (Pyrzynska i col., 2009) i coninutul
mineral (Pohl, 2009) din mierea de diferite origini florale i geografice. Cel mai recent
i cuprinztor studiu de acest gen este cel scris de Kaskoniene i col., 2010, studiu
care ofer rezultate excelente ncercnd s defineasc compui tipici care sunt asociai
cel mai bine cu originea mierii. n cadrul proiectului Trace, s-au determinat markerii
naturali ai mierii, precum mineralele (Vanhanen i col., 2011), raportul dintre (bio)
izotopi i markeri genetici, pentru a determina originea geografic, botanic i
originea de producie.
n final, analizele specifice de calitate par a fi mai potrivite pentru a relaiona
mierea de originea ei, dar acestea sunt n general mai complex de realizat i implic
tehnici noi precum spectroscopia de absorbie atomic (AAS), cromatografia de gaze
cu spectrometrie de mas (GC-MS) (Aliferis i col., 2010), spectrometria de mas
electro-spray (ES-MS) (Beretta i col., 2007) spectrometria emisiei optice de plasm
cuplat inductiv (ICP-OES) (Terrab i col., 2004), rezonana magnetic nuclear
(RMN) (Tuberoso i col., 2010), transformarea Fourier Raman (FT-Raman)
(Fernndez Pierna i col., 2011), transformarea infrarou apropiat (NIR) (Woodcock i
col., 2007) i spectroscopia de fluorescen (Karoui i col., 2007).

Capitolul II. SCOP, OBIECTIVE I DESIGN EXPERIMENTAL

II.1 Motivarea studiilor tiinifice
Mierea de salcm reprezint un aliment cu o arom deosebit, cu mare valoare
biologic datorit coninutului de compui biologici activi.
5

Deasemenea , mierea de salcm produs n Romnia este recunoscut ca fiind

de o calitate superioar. n anul 2009 mierea de salcm romneasc a fost medaliat la
concursul internaional Apimondia, Montpellier. Aceast calitate superioar se
ncadreaz perfect n pachetul legislativ de calitate a Uniunii Europene, care prevede
etichetarea i protejarea produselor regionale de calitate. Astfel reprezentanii
industriei mierii romneti i-au exprimat interesul pentru etichetarea de tip IG
(Indicaie Geografic) a mierii din Romnia. Pentru obinerea acestor denumiri de
origine protejat este necesar determinarea indicilor de calitate i autenticitate a mierii
de salcm n vederea redactrii caietului de sarcini.
Acest studiu a aprut ca o necesitate de a gsi rspunsuri la ideile enunate mai
sus, tiut fiind faptul c ara noastr este un productor important de miere monoflor
de salcm. Posibilitatea efecturii unui stagiu la Universitatea din Liege, Facultatea
Gembloux Agro-Bio Tech i la Centrul de cercetare a Regiunii Walone(CRA-W) din
Gembloux , Belgia a fcut posibil ca acest studiu al parametrilor de calitate i a
biomarkerilor s fie aprofundat, verificat i validat cu ajutorul unor metode moderne,
nedistructive i mai puin costisitoare.

II.2 Scopul tezei

Scopul cercetrilor efectuate n cadrul prezentei teze de doctorat l reprezint
determinarea parametrilor de calitate i ai biomarkerilor de autenticitate ai mierii de
salcm produs n Romnia.
II.3 Obiective specifice ale tezei
Un prim obiectiv n vederea elaborrii unei metodologii relevante pentru
analiza calitii i autenticitii mierii a fost prelevarea probelor de miere de
salcm autentice din trei regiuni bioapicole pe parcursul anilor 2009, 2010,
2011.
Evaluarea metodelor fizico-chimice uzuale n vederea determinrii indicilor de
calitate ai probelor de miere de salcm (coninut de ap, activitatea apei,
aciditate, conductivitatea electric, cenua, culoarea, coninutul de proteine
totale)
6

 Evaluarea metodei de analiz calorimetric diferenial, DSC, pentru studiul

parametrilor termici i procesele fizice specifice mierii (Tg , Tf, H, tranziii de
faz )
Caracterizarea reologic a probelor de miere
Determinarea spectrului glucidic din probele de miere de salcm prin
cromatografie lichid de nalt performan (HPLC)
Identificarea profilului compuilor de arom specifici mierii de salcm
romneti prin analiza gaz - cromatografic cuplat cu spectrometrie de mas
(GC-MS)
Analiza spectrometric calitativ i cantitativ n infrarou (NIR i MIR) a
parametrilor de calitate a mierii de salcm n vederea construirii unui model
PLS
Predicia parametrilor de calitate cu ajutorul modelului matematic existent la
Centrul de cercetare CRA-W
Evaluarea metodei spectroscopice cu raze X pentru determinarea indicelui de
cristalizare a probelor de miere
Capitolul III. MATERIALE I METODE
III.1. PROBE DE MIERE
Literatura de specialitate care studieaz calitatea mierii demonstreaz
necesitatea stabilirii unor strategii de colectare a probelor pentru mbuntirea
analizei markerilor mierii. Strategia aplicat n acest studiu a fost colectarea probelor
din diferite zone de producie n ani diferii, cu scopul de a studia tipicitatea mierii de
salcm din Romania. Dup cum se va prezenta ulterior, au fost recoltate cincizeci de
probe de miere de salcm n anii 2009, 2010 i 2011 direct de la apicultori (origine
declarat de productori). Selectarea probelor a fost realizat n trei zone geografice
diferite din punct de vedere pedologic i climatic. Zona 1 a reprezentat o mare parte
din Transilvania, cuprinznd judeele Alba, Cluj, Covasna, Harghita, Mure, Satu
7

Mare, Slaj i Timioara. Zona 2 a cuprins probe din sud-vestul i sudul rii: Clrai,
Dolj, Giurgiu, Teleorman i Vlcea. Zona 3 a reprezentat-o partea de est a Romniei:
judeele Bacu, Botoani, Buzu, Galai, Suceava, Tulcea i Vaslui.

Romnia

Zona 1
2009

S1
S2
S3
S8
S9
S10
S12
S13
S24
S16
S17
S18
S20
S22

Zona 2

2010

2011

2009

2010

S23
S15
S28

S48
S51
S53
S58

S4
S6
S14
S19

S25
S27
S35
S36
S37
S38

Zona 3
2011

S50
S57

2009

2010

2011

S5
S7
S11
S21

S29
S30
S31
S32
S33
S34

S39
S40
S41
S42
S52
S55
S56

Figura 1. Clasificarea probelor n funcie de an i zona de colectare (original)

III.2. TEHNICI ANALITICE UTILIZATE PENTRU DETERMINAREA
AUTENTICITII MIERII
Toate tipurile de miere au fost analizate pentru a determina urmtoarele
caracteristici fizio-chimice influenate de origine: umiditatea (prin metoda
refractometric), activitatea apei (poteniometric), culoarea (metoda colorimetric),
conductivitatea electric (metoda poteniometric), coninutul de cenu (prin
calcinare i analiz gravimetric), coninutul de proteine (analiza azotului total),
vscozitatea, zaharurile (prin cromatografie de lichide de nalt performan cu
detecie a indicelui de refracie HPLC-IR). Pentru a gsi markeri specifici ai mierii n
funcie de origine a fost realizat analiza compuilor volatili prin gaz cromatografie cu
detecie de mas (GC-MS). Analiza spectroscopic n infrarou (FT-IR, FT-NIR) a
fost la rndul su utilizat pentru a determina amprenta spectral specific i pentru a
construi un model capabil s anticipeze parametrii fizio-chimici n funcie de spectrele

obinute. n final a fost utilizat analiza spectroscopic cu raze X pentru a determina

gradul de cristalizare a mierii.

Capitolul IV. REZULTATE I DISCUII

IV.1. CARACTERIZAREA FIZICO-CHIMIC A MIERII DE SALCM
IV.1. 1. Determinarea coninutului de ap
Mierea de salcm n general are un coninut sczut de ap ( Mrghita i col.,
2009; Lazarevic i col., 2012), ceea ce se poate observa i din analizele efectuate.
Valorile obinute se ncadreaz n limitele mierilor din climatul temperat, n special
din Europa.
Dup eliminarea probelor S15 i S25, considerate ca i outlieri (valori
extreme), mediana valorilor este 16.80 (95% interval de ncredere pentru mediana de
16.48 i 17.02) i deviaia standard este de 1.14. Utiliznd nivelul de semnificaie
0.05, testul Darling-Anderson indic faptul c datele au o distribuie normal
(valoarea p=0.069 > 0.05).

Figura 2. Analiza descriptiv a coninutului de ap pentru mierea de salcm

romneasc

IV.1. 2. Determinarea activitii apei (aw)

Activitatea apei este un parametru important pentru desfurarea reaciilor
biochimice i pentru dezvoltarea microbian n miere. n cazul mierii de salcm s-au
determinat valori cuprinse ntre 0.53 i 0.65. Utiliznd nivelul de semnificaie 0.05,
testul Darling-Anderson indic faptul c datele au o distribuie normal (valoarea
p=0.520 > 0.05).

Figura 3. Analiza descriptiv a parametrului aw pentru mierea de salcm romneasc

IV.1. 3. Determinarea culorii mierii
Parametrii determinai pentru culoarea mierii sunt L*, a* i b*. Valoarea L*
indic gradul de luminozitate, valori pozitive ale parametrului a* indic zona rou,
valori negative ale lui a*, componenta verde, valori pozitive ale lui b* indica zona
galben, iar valorile negative ale lui b* indic componenta albastr. n figura 4 este
rezumat analiza statistic descriptiv pentru parametrul L*, astfel au fost msurate
valori cuprinse n intervalul 54.110 i 62.700. Aa cum s-a menionat anterior, axa a*
reprezint nuane de la rou (+a*) la verde (-a*), iar intervalul valorilor mierilor de
salcm pentru aceast ax este de la -1.28 la 5.8. Axa b* reprezint nuanele de la
galben (+b*) la albastru (-b*) i pentru probele de miere s-au obinut valori cuprinse
ntre 6.23 i 30.41.
10

Figura 4. Analiza descriptiv a parametrului L* pentru mierea de salcm romneasc

Figura 5. Analiza descriptiv a parametrului a* pentru mierea de salcm romneasc

11

Figura 6. Analiza descriptiv a parametrului b* pentru mierea de salcm romneasc

IV.1.4. Determinarea conductivitii electrice
n urma analizei, toate probele de miere s-au ncadrat n limitele admisibile ale
conductivitii electrice pentru mierea de salcm . Valoarea medie n lotul de studiu a
fost 0.11 mS/cm, iar valorile minime de 0.07 mS/cm i maxime de 0.17 mS/cm.

Figura 7 . Analiza descriptiv a conductivitii electrice pentru mierea de salcm

romneasc
IV.1.5. Determinarea coninutului de cenu
n urma analizei descriptive a coninutului n cenu a mierii de salcm produs
n Romnia, concluzia este c, datele prezint o distribuie normal (p=0.249) i n
cazul majoritii probelor valorile coninutului de cenu se ncadreaz ntre 0.003 i
0.057 (Figura 8), eliminnd valoarea obinut pentru proba S18, considerat extrem.
12

Figura 8. Analiza descriptiv a coninutului de cenu pentru mierea de salcm

romneasc
IV.1.6. Determinarea aciditii mierii
Aciditatea mierii este un parametru de calitate care ajut la aprecierea gradului
de prospeime a mierii. n cazul mierii de salcm, dup eliminarea valorii extreme
(S18), mediana valorilor este de 12.86.

Figura 9. Analiza descriptiv a aciditatea liber pentru mierea de salcm romneasc

IV.1.7. Determinarea proteinelor totale
Valorile obinute se ncadreaz ntre 0.43

5.36%.

Neexistnd valori

extreme (outlieri), valoarea medie obinut pentru acest parametru a fost de 2.321.2.
13

Figura 10 . Analiza descriptiv a coninutului de proteine pentru mierea de salcm

romneasc
IV.1.8 Analiza calorimetric difereniat
Analiza calorimetric difereniat se bazeaz pe transferul fluxului de cldur
care susine proba n timpul tratamentului termic. Rezultatele sunt obinute prin
msurarea continu a diferenei de temperatur ntre celula unde este plasata proba i
o celul de referin. S-au realizat practic pentru analiza calorimetric difereniat trei
metode n laborator:
Metoda 1: vizualizarea temperaturii la care cristalele dispar din prob
Metoda 2: demonstrarea inexistenei cristalelor la scderea temperaturii i n timpul
necesar pentru efectuarea unor analize, ca de exemplu msurarea vscozitii.
Metoda 3: vizualizarea unei eventuale tranziii vitroase, fuziunea cristalelor i
degradarea produsului (debutul reaciei Maillard).
Termogramele obinute n urma analizei calorimetrice difereniale sunt
specifice mierii. In figura 11 se poate observa tranziia sticloas (Tg) (ntre -44.94oC i
-38.22oC), care este asociat prii amorfe din miere, apoi picul endotermic
corespunztor temperaturii de topire (fuziune) (Tf) (32.92oC i 55oC) cu entalpia (H)
de 8.74 J/g .

14

Figura 11. Termogram specific mierii n care sunt prezentate grafic temperatura de
tranziie sticloas (Tg) i temperatura de topire (fuziune) (Tf)
Rezultatele obinute pentru probele de miere luate n studiu sunt prezentate n
tabelul 1.

Tabel 1.
Valorile determinate pentru temperatura de tranziie sticloas Tg i fuziune (topire) Tf

Temperatura de tranziie vitroas (Tg) i tempratura de fuziune (Tf )

Nr

Proba

Tg (C)

Tf (C)

H (J/g)

S1

-44.61

46.69

18.64

14

S14

-42.71

52.72

21.20

15

S15

-42.20

40.35

0.39

23

S23

-40.9

42.90

8.75

25

S25

None

50.43

18.02

33

S34

None

51.15

13.99

44

S51

-36.17

60.97

0.73

49

S57

-39.83

61.54

4.53

50

S58

-37.03

64.12

0.78

15

IV.1.9 Determinarea vscozitii

Primul experiment efectuat a constat n testarea comportamentului reologic al
mierii de albine analizate. n urma experimentului, s-a observat c toate mierile
analizate au un comportament Newtonian la temperatura de 20C. Al doilea
experiment a constat n testarea influenei temperaturii asupra vscozitii mierii de
salcm romneti (figura 12).

Figura 12. Efectul temperaturii asupra curbelor vscozitii ale diferitelor probe de
miere
Dup ce mierile au fost tratate termic timp de o or i treizeci de minute la
55 C, s-a trecut la msurarea vscozitii (la temperaura de 20C). Valorile
vscozitii specifice mierii au fost cuprinse ntre 4.72 i 62.96 Pas.
o

Figura 13. Analiza descriptiv a vscozitii

16

IV.2. DETERMINRI CROMATOGRAFICE

IV.2.1. Determinarea glucidelor prin HPLC-IR
Profilul glucidic general i valorile obinute la probele de miere din Romnia
analizate, au fost identice sau apropiate cu cele obinute la nivel European pentru acest
tip de miere. n privina coninutului de glucoz, valorile nregistrate la cele 50 de
probe analizate, au fost cuprinse ntre 22.32% i 43.71%. Coninutul de fructoz este
un parametru foarte important n analiza mierii de salcm. Starea fluid a acestui tip
de miere se datoreaz coninutului mare de fructoz, n cazul probelor analizate a fost
ntre 33.80% i 48.16%. Zaharoza este un indicator important al autenticitii mierii,
standardele fixnd un maxim de 5% n mierea autentic. Probele analizate de noi au
avut valori mult mai sczute, neexistnd suspiciuni de falsificare a acestora. Valorile
nregistrate sau ncadrat n intervalul 0.0 i 5.51%, cu o medie de 1.0%. O singur
prob a avut concentraie mai mare de 5% (proba S58, zona 1, anul 2011). Valorile
obinute pentru maltoz la analiza probelor de miere n prezentul studiu a variat ntre
0.68 i 4.16%. Analiza de varian, ANOVA arat c valoarea lui p este mai mic
dect 0.05 (p=0.012177), dar F este mai mare dect Fcrit (F=4.848788 i
Fcrit=3.195056), deci ipoteza se respinge, existnd diferene semnificative ntre probe.
Concentraia isomaltozei pentru mierea de salcm a variat ntre 0.14 i 0.79%.
Dup ce s-a efectuat analiza varianei, ANOVA, s-au constat diferene semnificative
pentru acest glucid. Astfel, pentru zona geografic 1 media valorilor determinat este
de 0.489, iar la celelalte dou zone, aceast medie este mai sczut (0.33 zona 2 i
respectiv 0.31 zona 3). n probele de miere de salcm analizate n acest studiu, s-a
cuantificat turanoza n limitele a 0.38 i 2.77%, cu o medie de 2.08%.

17

50

Concentraie %

40

30

20

10

0
Fructoz

Glucoz

Sucroz

Turanoz

Maltoz

Isomaltoz

Erloz

Figura 14. Variaia concetraiei diferitelor glucide identificate n miere

Erloza este un triglucid prezent n miere n cantiti diferite, n funcie de
originea botanic. Valorile obinute pentru probele de miere analizate s-au ncadrat
ntre 0.09 i 3.19%, media determinrilor pentru cele 50 de probe fiind 1.79%.
Spectrul glucidic analizat prin cromatografie de lichide de nalt performan
cu detecie n infrarou, a evideniat prezena a apte glucide caracteristice pentru
mierea de salcm. Coninutul mare de fructoz, raportul supraunitar fructoz/glucoz,
cantiti reduse de zaharoz i deasemenea cantiti supraunitare de maltoz, fac ca
probele s fie ncadrate n limitele prevzute pentru acest tip de miere (Golob i
Plestenjak, 1999; Sanz i col., 2004; Sabatini i col., 2007).
IV.2.2. Identificarea amprentei gaz-cromatografic GC-MS specific a
probelor de miere.
Metoda de analiz GC/MS este o combinare a dou tehnici analitice
reprezentative: GC pe coloana capilar care separ componenii unui amestec, i
spectrometria de mas (MS) care furnizeaz informaiile necesare pentru determinarea
structural a fiecrui constituent. Rezultatele obinute n urma analizei SPME
GC/MS se prezint sub forma unor cromatograme (Figura 15).

18

S 1
2500000

Intensitate / Intensity

2000000

1500000

1000000

500000

10

20

30

40

50

60

Timp de retentie / Retention time, min

Figura 15 . Cromatograma GC a compuilor volatili din proba S1 (Zona 1, anul 2009)

Aceast parte a studiului analitic are n vedere analiza aromei mierii de salcm,
care este produs n cele trei regiuni ale Romniei: Transilvania (Zona 1), Oltenia
(Zona 2) i Moldova (Zona 3).

Scopul acestui studiu este, pe de-o parte, de a

contribui la studiul calitativ i semi-cantitativ al compuilor volatili prezeni n mierea

de salcm, utiliznd gaz-cromatografia combinat cu spectrometria de mas (GC/MS),
iar pe de alt parte, de a evidenia principalii markeri volatili i proprietile acestora.
n urma analizei SPME GC-MS, au fost identificai 79 constitueni volatili.
Principalii compui volatili ai mierii de salcm identificai ntr-un procent de 100%
sunt : 3-methyl-3-buten-1-ol pentru zona 1, etanolul, acidul acetic, 5-ethenyldihydro5-methyl-2(3H)-Furanone pentru Zona 2, acetona, 3-methyl-3-buten-1-ol, translinalool oxidul, benzemetanol . Printre compui secundari identificai ntr-un procent
de 80-90 % sunt :
-

Dimetil sulfid, acetona, 3-hidroxi-2-butanona, linalool oxidul, acidul acetic, 2furancarboxaldehida, benzaldehida, linalool L, hotrienol, 4-ketoisophorona,
epoxylinalool, benzenmetanol pentru zona 1

Dimetil sulfid, 3-hidroxi-2-butanona, 2-metil-2-buten-1-ol, nonanal, linalool

oxidul, 2-furancarboxaldehida, 5-metil-2-furancarboxaldehida, acidul butanoic,
epoxy-linalool, acidul 3-metilpentanoic, benzenmetanolul pentru zona 2

19

Dimetil sulfid, etanol, isoamil alcool, 2-metil-2-buten-1-ol, cis 3-hexen-1-ol,

linalool oxid, acidul acetic, 2-furancarboxaldehida, benzaldehida, acidul
propanoic, hotrienol, butirolactona, benzenacetaldehida, fenol pentru zona 3.
Compuii majoritari corespunztori probelor din fiecare regiune sunt

Benzenetanol

Benzaldehida

2-furancarboxaldehida

Acid acetic

Linalool oxid

Etanol

Aceton

reprezentai grafic n figura 16.

30
25

Zona 1

20

Zona 2

15

Zona 3

10
5
0

Figura 16. Comparaie ntre valoriile medii obinute pentru compui volatili majori din
mierea colectat din cele trei zone
Urmtoarea etap a constat n clasificarea compuilor identificai n clase
chimice (Figura 17). S-a remarcat astfel o diferen semnificativ ntre diferitele zone
studiate, aa nct acizii carboxilici sunt prezeni n procent mare n probele din
Transilvania, 32.22% i Oltenia 30.36% . Procentajul de aldehide n Zona 1, Zona 2 i
Zona 3 este destul de important, respectiv 27.63%, 22.34% i 13.43%. Alcoolii
constituie o parte important a probelor de miere romneti, atingnd valori de 28.35
% pentru mierea din Zona 3, 23.87% pentru Zona 2, 19.13% pentru Zona1.

20

Eteri
Aromatici

100

Acid carboxilic
Azotai

80

Alcooli

60

Aldehide
Alifatici

40

Esteri

20

Cetone
Sulfuri

0
Z1

Z2

Z3

Figura 17. Variaia concentraiei claselor de compui volatili n funcie de zona de

producie
Cetonele prezint proporii oscilante, ntre 23.05 i 7.43% n probele de miere
din cele trei zone bioapicole. Procentul de compui cu sulf este relativ sczut n
probele de miere, cu valori variind ntre 2.17% i 1.57. Se mai poate observa
deasemenea prezena deloc neglijabil a esterilor, n probele din zona 3, 2.72%. n
cele din urm, s-au luat n considerare hidrocarburile alifatice prezente n toate zonele
aflate n studiu, cu un coninut care nu depete 0.93%.
IV.3. DETERMINRI SPECTROSCOPICE
IV.3.1. Spectroscopia n infrarou apropiat (NIR): Analiza calitativ
Spectrometria infrarou apropiat este o metod rapid utilizat pentru
caracterizarea cantitativ i calitativ a mierii. Analiza calitativ a mierii presupune
determinarea legturilor chimice specifice compuilor chimici caracteristici mierii.
Mierea este constituit n principal din ap i glucide. Din acest motiv, interpretarea
amprentei spectrometrice a mierii este dominat de absorbia legturilor din grupul
funcional XHn. n primul rnd s-a msurat spectrul apei i a standardelor de glucide
(fructoz, glucoz, zaharoz). Apoi au fost msurate spectrele probelor de miere.
Spectrele obinute n urma analizei spectrometrice NIR se ncadrez ntre 400 i 2500
nm. n figura 18 sunt prezentate spectrelor brute pe domeniul 1100-2500, care conine

21

cele mai multe informaii spectrale i s-au identificat lungimile de und unde sunt
diferene de absorie ntre probe.

Figura 18. Amprenta spectrometric NIR al probelor de miere pe domeniul spectral

1100-2500nm, cu evidenierea celor 6 maxime importante
Deasemenea pentru a indentifica eventualele diferene date de ctre originea
botanic sau geografic s-au suprapus spectrele probelor de miere prin combinaiile
prezentate n figura 19 .

Figura 19 . Spectrele comparative ale diferitelor tipuri de mieri

22

IV.3.2. Analiza chemometric a bazei de date spectrale

Pe baza spectrelor colectate n urma analizei NIR s-a aplicat analiza PCA
pentru a evalua variabilitatea probelor de miere de salcm. Pentru a caracteriza
originea geografic s-au introdus i spectre de miere salcm produs n alte ri.
Figura 20 evideniaz componenta principal 1 pe axa X care reprezint 68.39% din
variabilitate, componenta principal 2 pe axa Y reprezint 27.39% din variabilitate i
componenta 3 pe axa Z 0.09%. Astfel se observ c probele din Romnia (Ro) se
difereniaz de probele produse n Frana(F) sau Slovacia(Sk).
Scores on PC 2 (27.39%)
BH
C
CZ
F
I
RO
RW
SK
UKR

Samples/Scores Plot of CLASES

Scores on PC 8 (0.09%)

3
2
1
0
-1
-2

20

Scores on PC 2 (27.39%)

-20

-40

-20

20

40

Scores on PC 1 (68.39%)

Figura 20. Analiza PCA a probelor de miere n funcie de originea geografic

Deasemenea s-a aplicat analiza PCA n sistem neintit pentru a evalua
variabilitatea acestora n funcie de originea botanic. n urma acestei analize se
observ c probele de miere, iarb neagr i poliflor, prezint cele mai semnificative
deosebiri ale compoziiei chimice (Figura 21). n ceea ce privete probele de salcm i
tei au fost grupate mpreun.

23

Figura 21. Reprezentarea variabilitii compoziionale a probelor de miere n funcie

de originea botannic
Regresia Partial leas squares (PLS)
Eficacitatea spectroscopiei infrarou n conjuncie cu regresia Partial least
squares a fost testat n determinarea cantitativ a produselor alimentare, agricole,
farmaceutice (Yang i Irudayaraj, 2002; Cozzolino i Moron, 2004; Cen i He, 2007;
Dale i col., 2009). Analiza chemometric cantitativ s-a desfurat n trei etape:
Calibrare, Validare i Predicie.

VALIDARE

CALIBRARE
Selectarea a n probe

Valori NIR

Valori de referin

Selectarea a n probe

Valori NIR

Valori de referin

PREDICIE
Probe necunoscute

Valori NIR

Creeare model
matematic

Ecuaie de calibrare

Ecuaie de calibrare

Comparare parametrii
sta

Ecuaia de calibrare

Valori prezise

Figura 22 . Reprezentarea grafic a analizei chemometrice cantitative

24

Analiza chemometric cantitativ a datelor spectrale s-a desfurat n dou

etape:
-

construirea de modele matematice PLS bazate pe datele spectrale NIR ale

probelor de miere romneti

- predicia compoziiei chimice pe baza ecuaiei aparinnd centrului de

cerecetare CRA-W
Caracteristicile modelului dezvoltat pe baza probelor de miere romneti
n tabelul sunt prezentate valorile de referin obinute n urma analizelor
fizico-chimice care vor fi utilizate n crearea modelului de predicie PLS
Tabel 2.
Valorile de referin a probelor de miere
Parametru / Parameter
Conductivitatea electric /
Electrical conductivity
Coninut de ap /
Water content
Aciditatea liber /
Free Acidity
Aciditatea lactonelor /
Lactonic acidity
Vscozitate / Viscosity
Fructoz / Fructose
Glucoz / Glucose
Zaharoz / Sucrose
Turanoz / Turanose
Maltoz / Maltose
Izomaltoz / Isomaltose
Erloz / Erlose

Uniti
Units

Media / Mean

Gam / Range

Deviaia standard
Standard deviation

mS/cm

0.12

0.07-0.18

0.02

17.01

14.80-21-30

1.38

meq/Kg

13.76

6.63-53.00

7.16

meq/Kg

1.07

0.15-9.80

1.35

Pas
%
%
%
%
%
%
%

27.47
43.43
30.46
1.00
2.08
3.01
0.39
1.79

4.73-62.96
33.80-48.16
22.32-43.71
0.00-5.51
0.38-2.77
0.68-4.16
0.11-0.90
0.00-3.19

14.51
2.68
3.98
1.05
0.53
0.69
0.18
0.65

Construirea modelului de calibrare PLS (Modelul ptratelor pariale mai mici)

este realizat de ctre programul Unscrambler (CAMO ASA, Oslo, Norvegia). Prima
dat am introdus n program clasele de spectre, n funcie de zonele de producie.
Spectrele introduse n program au fost n format .jdx. Algoritmul PLS consider
datele matrici, astfel pentru datele spectrale s-a creeat matricea X i pentru valorile de
referin matricea Y.
25

Tabel 3.
Modelul de calibrare global pentru principalii indici de caliatate ai mierii: Date statistice referitoare la calibrare i validare

Parametru
Parameter

Zona
Zone

Regiuni
spectrale
Spectral range
(nm)

Valori extreme
Outliers

PLS
factor

Calibrare
Calibration

Validare ncruciat
Cross validation

RMSEC

R2

RMSECV

R2

Coninut de ap / Water content

Conductivitate electric
Electrical Conductivity
Aciditate liber / Free Acidity
Aciditatea lactonelor
Lactonic acidity

Toate zonele

Tot spectrul

S37; S7

0.826

0.635

0.868

0.579

Toate zonele

Tot spectrul

S21

11

0.015

0.656

0.018

0.501

Toate zonele

Tot spectrul

S18

11

2.759

0.604

3.605

0.334

Toate zonele

Tot spectrul

S31; S7; S20; S21

11

0.355

0.483

0.443

0.221

Vscozitate / Viscosity
Fructoz / Fructose
Glucoz/ Glucose
Zaharoz / Sucrose
Turanoz / Turanose
Maltoz / Maltose
Izomaltoz / Isomaltose
Erloz / Erlose

Toate zonele

Tot spectrul
Tot spectrul
Tot spectrul
Tot spectrul
Tot spectrul
Tot spectrul
Tot spectrul
Tot spectrul

S21; S25; S34

5.561

0.840

6.352

0.796

S31; S7; S20

S15
S7; S31
S12; S13
S7; S31
S21; S7

4
12
13
2
4
13
2

1.024
1.656
0.461
0.408
0.388
0.051
0.451

0.839
0.804
0.844
0.964
0.71
0.912
0.946

1.090
1.943
0.681
0.441
0.399
0.128
0.491

0.800
0.769
0.776
0.958
0.823
0.970
0.936

Toate zonele
Toate zonele
Toate zonele
Toate zonele
Toate zonele
Toate zonele
Toate zonele

RMSEC Root Mean Square Error of Calibration

RMSECV - Root Mean Square Error of Cross - Validation

Astfel se constat c cele mai bune rezultate s-au obinut pentru turanoz
(RMSECV=0.441 ; RMSEC=0.408 ; R2=0.96) i erloz (RMSECV=0.491 ;
RMSEC=0.451 ; R2=0.94).

Cele mai sczute valori pentru parametrii statistici

specifici modelului creat s-au obinut pentru aciditatea lactonelor (RMSECV=0.355;

RMSEC=0.335 ; R2=0.22). Rezultatele fiind asemntoare cu cele prezentate n
literatura de specialitate. n ceea ce privete parametrii fizici rezultatele obinute
demonstreaz c spectroscopia NIR nu este util n predicia parametrilor fizici.
Caracteristicile modelului CRA-W
Acest model a fost dezvoltat pornind de la o baz de date format din probe de
miere de diferite origini aparinnd centrului de cercetare CRA-W. Gama de etalonare,
rezultatele etalonrii i validarea sunt descrise n tabelul.
Tabel 4.
Modelul de calibrare pentru principalii indici de caliatate ai mierii CRA-W
Media / Mean

Deviaia
standard
Standard
deviation

SEC

R2

SECV

R2

Coninutul de ap / Water content

Conductivitate electric / Electrical
conductivity
pH / pH

17.25

0.99

0.159

0.974

0.167

0.972

0.36

0.17

0.060

0.871

0.072

0.820

4.33

0.32

0.189

0.642

0.218

0.525

Aciditatea liber / Free acidity

10.84

4.70

2.538

0.698

3.387

0.480

Fructoz / Fructose

37.78

2.25

1.461

0.577

1.582

0.504

Glucoz / Glucose

32.27

3.71

1.307

0.876

1.478

0.841

Maltoz / Maltose

3.83

0.97

0.582

0.641

0.628

0.582

Fructoz/Glucoz / Fructose/Glucose

1.17

0.13

0.046

0.880

0.056

0.824

Zaharoz / Sucrose

0.95

1.41

0.371

0.931

0.571

0.837

Raffinos / Raffinose

0.40

0.23

0.181

0.359

0.190

0.292

Erloz / Erlose

0.52

0.41

0.19

0.781

0.218

0.716

Melebioz / Melibiose

0.68

0.33

0.106

0.899

0.132

0.845

Palatinoz /Palatinose

0.11

0.06

0.034

0.661

0.037

0.590

Panoz / Panose

0.15

0.09

0.062

0.502

0.070

0.373

Turanoz / Turanose

1.32

0.34

0.284

0.305

0.291

0.277

Parametru / Parameter

Rezultatele obinute pentru spectrul glucidic sunt prezentate n figura 23 i

figura 24.

50

Concentraia %

40

30

20

10

0
Fructoz

Glucoz

Maltoz

Figura 23. Graficul Boxplot a variaiei concentraiei glucidelor majoritare

3,0

Concentraia %

2,5

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0
Zaharoz

Raffinos

Erloz

Melibios

Palatinos

Panos

Turanoz

Figura 24. Graficul Boxplot a variaiei concentraiei glucidelor minoritare

28

IV.3.3. Spectroscopia n infrarou mediu (MIR): Analiza calitativ

Spectrele au fost msurate n domeniul spectral 3996 cm-1 i 599 cm-1 .
Semnale intense s-au identificat n zona 3400- 3200 cm-1 i 1500-800. n regiunea
3600-2600 se ntlnesc semnale specifice gruprilor OH din apa i glucide. Domeniile
spectrale utilizate cel mai des n analiza mierii sunt cele cuprinse n domeniul regiunii
fingerprint, 900-1500 cm-1.

Figura 25. Amprentele spectrometrice IR ale probelor de miere S1, S4 i S5

Analiza chemometric efectuat pe spectrele probelor de miere, n duplicat, ne
arat c probele sunt distribuite de-a lungul gradienilor de concentraie n funcie de
compoziia lor de carbohidrai. Astfel se observ tendina mierilor de a se grupa pe
axa ce reprezint fructoza i glucoza, dar se observ c sunt probe care au coninut
ridicat de zaharoz.

Figura 26. Analiza PCA a probelor luate n studiu

29

Tabel 5.
Caracteristici ale modelului PLS pentru diferii parametri ai mierii de salcm realizat pe domeniul spectral 3599-600 cm-1
Parametru
Parameter

Zona
Zone

Regiuni
spectrale
Spectral range
(nm)

Valori extreme
Outliers

25;34;21

PLS
factor

Calibrare
Calibration

Validare ncruciat
Cross validation

RMSEC

R2

RMSECV

R2

0.614

0.549

0.684

0.454

Coninut de ap / Water content

Toate zonele

Tot spectrul

Conductivitate electric/Electrical Conductivity

Toate zonele

Tot spectrul

12

0.007

0.904

0.020

0.630

Aciditate liber / Free Acidity

Toate zonele

Tot spectrul

15

1.878

0.930

4.017

0.687

Fructoz / Fructose

Toate zonele

Tot spectrul

12

0.637

0.940

1.529

0.880

Glucoz/ Glucose

Toate zonele

Tot spectrul

11

1.223

0.904

1.886

0.797

Zaharoz / Sucrose

Toate zonele

Tot spectrul

0.434

0.831

0.485

0.725

Turanoz / Turanose

Toate zonele

Tot spectrul

0.181

0.879

0.556

0.814

Maltoz / Maltose

Toate zonele

Tot spectrul

0.324

0.779

0.378

0.706

Izomaltoz / Isomaltose

Toate zonele

Tot spectrul

15;10;04;13;22

0.061

0.880

0.733

0.823

Erloz / Erlose

Toate zonele

Tot spectrul

15

0.264

0.816

0.307

0.762

13;22
15; 58

Pentru domeniul spectral 3599-600 cm-1 valorile obinute pentru RMSEC sunt
cuprinse ntre 0.007 i 1.878, valorile pentru RMSECV se integreaz n intervalul
0.549 i 0.940, iar valorile coeficientului R2 sunt cuprinse ntre

0.549 0.940

(calibrare) i 0.454 0.823 (validare). Performana modelelor de calibrare pentru

coninutul de ap i glucidele majoritare au prezentatat valori bune, ns inferioare
modelelor de calibrare construite pe baza datelor NIR.

IV.3.4. Spectroscopia cu raze X

n timpul procesului de cristalizare, se tie c glucoza cristalizeaz prima,
deoarece toate gruprile hidroxil interacioneaz cu moleculele de ap. Fructoza are o
solubilitate mai mare, din care cauz rmne n soluie o perioad mai lung. Dup
cristalizarea mierii,

glucoza se regsete ca i glucoz monohidrat i fiecare

molecul de glucoz fixeaz doar o molecul de ap (Gleiter i col., 2006).

n figura 25 se poate observa c toate semnalele nregistrate la proba de miere
se suprapun exact peste semnalele glucozei monohidrat, putnd concluziona c sub
aceast form se regsete glucoza dup ce procesul de cristalizare are loc.

Figura 25. Difractogram obinut la proba de miere S24 (rou) i standardului

de glucoz monohidrat (negru)

Gradul de cristalizare al probelor din prezentul studiu a fost determinat cu

difractometrul cu raze X tip D8 Advance Bruker cu anod de cupru. n figura 26 este
prezentat difractograma probei de miere S37 (proba lichid) (rosu) i difractograma
probei de miere S9 (prob cristalizat)(roz).

Figura 26. Difractogram miere cristalizat (1) i miere lichid (2)

n urma analizei se poate observa c doar 6 probe nu au prezentat deloc cristale
n structura lor: S37-S39, S41 i S58. Celelalte probe au avut valori ale gradului de
cristalizare cuprinse ntre 1.474 i 81.105%.
CONCLUZII GENERALE
n concordan cu motivaia i obiectivele propuse , n prezenta tez s-au
stabilit indicii de calitate i biomarkerii specifici mierii de salcm. Mierea de salcm
pur reprezint ns doar un procent sczut din totalul produciei de miere, deoarece
majoritatea mierilor au o compoziie variat de nectar sau man, fiind astfel
considerate mieri poliflore. n urma studiului bibliografic s-au identificat metodele de
referin, cromatografice i spectrometrice ca fiind utile n determinarea parametrilor
de calitate ai mierii. Valorile obinute pentru indicii de calitate s-au ncadrat n limitele
legale admisibile i n cele specifice mierii de salcm prezentate n literatur. Mai nti
au fost evaluate metodele cromatografice n determinarea spectrului glucidic prin
cromatografie lichid de nalt performan (HPLC) i identificarea profilului volatil
prin gaz-cromatografie cuplat cu spectrometria de mas (GC-MS).

32

Referine bibliografice:
1. Aliferis K. A., Tarantilis P. A., Harizanis P. C., Alissandrakis E., 2010.
Botanical discrimination and classification of honey samples applying gas
chromatography/mass spectrometry fingerprinting of headspace volatile
compounds. Food Chemistry, 121(3), 856-862.
2. Beretta G., Caneva E., Facino R. M., 2007. Kynurenic acid in honey from
arboreal plants: MS and NMR evidence. Planta Medica, 73(15), 1592-1595.
3. Bura M., Ptruic D., Bura V.A., 2005. Tehnologie apicol, Editura Solness.
4. Cuevas-Glory L. F., Pino J. A., Santiago L. S., Sauri-Duch E., 2007. A review
of volatile analytical methods for determining the botanical origin of honey.
Food Chemistry, 103(3), 1032-1043.
5. Fernndez Pierna J. A., Abbas O., Dardenne P.,
Baeten V., 2011.
Discrimination of Corsican honey by FT-Raman spectroscopy and
chemometrics. Biotechnological Agronomic Society, 15(1), 75-84.
6. Golob, T., Plestenjak, A., 1999. Quality of Slovene honey, Food Technology
and Biotechnology, 37(3), 195-201.
7. Karoui R., Dufour E., Bosset J. O., De Baerdemaeker J., 2007. The use of
front face fluorescence spectroscopy to classify the botanical origin of honey
samples produced in Switzerland. Food Chemistry, 101(1), 314-323.
8. Kaskoniene V., Venskutonis P. R., 2010. Floral Markers in Honey of Various
Botanical and Geographic Origins: A Review. Comprehensive Review of Food
Science and Food Safety, 9(6), 620-634.
9. Lazarevic, K.B., Andric, F., Trifkovic J., Tesik, Z., Milojkovic-Opsenica, D.,
2012. Characterization of Serbian unifloral honeys according to their
physicochemical parameters, Food Chemistry, 132, 2060-2064.
10. Mrghita L., 2008. Albinele i produsele lor, Editura Ceres, Bucureti.
11. Mrghitas L.A., Dezmirean, D., Moise, A., Bobis, O., Laslo, L., Bogdanov, S.,
2009. Physicochemical and bioactive properties of different floral origin
honeys from Romania, Food Chemistry, 112, 863-867.
12. Ochi T., 2005. Former Japanese beekeeper speaks out about antibiotics in
Chinese honey [2]. American Bee Journal, 145(12), 937-938.
13. Pohl P., 2009. Determination of metal content in honey by atomic absorption
and emission spectrometries. Trac-Trends in Analitical Chemistry, 28(1), 117128.
14. Pyrzynska I., Biesaga M., 2009. Analysis of phenolic acids and flavonoids in
honey. Trac-Trends in Analitical Chemistry, 28(7), 893-902.
15. Ransome, 2004. The sacred bee in ancient times and folklore. London: Courier
Dover Publications, Dover Books on Antropology and Folklore.
33

16. Sabatini, A.G., Bartolotti, L., Marcazzan, G.L., 2007. Conoscere il miele,
Edizioni Avenue media, Bologna-Milano, Italia.
17. Sanz, M.L., Gonzalez, M., de Lorenzo, C., Sanz, L., Martinez-Castro, I., 2004.
Carbohydrate composition and physic chemical properties of artisanal honeys
from Madrid (Spain):occurrence of Echium sp honey, Journal of the Science of
Food and Agriculture, 84, 1577-1584.
18. Terrab, A., Pontes, A., Heredia, F.J., Diez, M.J., 2004. Palynological and
geographical characterization of avocado honeys in Spain, Grana, 43, 116-121.
19. Tuberoso C. I. G., Bifulco E., Caboni P., Cottiglia F., Cabras P., Floris I.,
2010. Floral Markers of Strawberry Tree (Arbutus unedo L.) Honey. Journal of
Agricultural and Food Chemistry, 58(1), 384-389.
20. Vanhanen L. P., Emmertz A., Savage G. P., 2011. Mineral analysis of monofloral New Zealand honey. Food Chemistry, 128(1), 236-240.
21. Woodcock T., Downey G., Kelly J. D., O'Donnell C., 2007. Geographical
classification of honey samples by near-infrared spectroscopy: A feasibility
study. Journal of Agriculture and Food Chemistry, 55(22), 9128-9134.

34