Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Biologia Virusurilor
Biologia Virusurilor
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL
VIROZELOR.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Particularitile virusurilor
Reprezint structuri acelulare cu potenial
infecios
Sunt lipsite de metabolism propriu, fiind
parazii obligai intracelulari
Nu cresc pe medii artificiale, numai pe
celule vii
Genomul viral este constituit dintr-un
singur tip de AN (ADN sau ARN)
Nu cresc i nu se divid, ci se reproduc n
celule vii
Dimensiuni de rangul nm (20-400 nm)
CLASIFICAREA VIRUSURILOR
Dup
Virusuri
COMPOZIIA CHIMIC I
STRUCTURA VIRIONULUI
Virusurile simple AN i nveli proteic
capsida (nucleocapsid)
Virusurile complexe nucleocapsid i un
nveli extern, lipoglicoproteic
(supercapsid, peplos)
AN ADN sau ARN, mono- sau bicatenar,
linear, circular sau fragmentat.
ARN monocatenar : ARN+ (caten cu
sens, ARNm) sau ARN- (caten fr
sens)
REPRODUCEREA VIRUSURILOR
I ADSORBIA virusului la celula-gazd
prin intermediul receptorilor specifici
(tropism)
II PENETRAREA virusului n celul
a) Pinocitoz (viropexis)
b) Fuziunea membranelor
c) Translocare
d) Injectarea AN n citoplasm
III DECAPSIDAREA (enzime celulare)
Genome
RNAdependent
RNA
polymerase
(=transcripta
se) in virion
Infectivity of
RNA
Initial event in
cell
RNA +
No
Infectious
Translation
RNA -
Yes
Noninfectious
Transcription
RNAd.c.
Yes
Noninfectious
Transcription
RETROVIRUSES
Genome
RNA +
RNAdependent
RNA
polymerase
(=transcriptas
e) in virion
Yes
Infectivity of
RNA
Non-infectious
Initial event in
cell
Reverse
transcription
CULTIVAREA VIRUSURILOR
Virusurile sunt cultivate pentru:
Stabilirea diagnosticului etiologic
Testarea infeciozitii virusurilor
Testarea preparatelor antivirale
Producerea vaccinurilor
SISTEME DE CULTIVARE
1. Culturi de celule
2. Ou embrionat de gin
3. Animale de laborator
Inocularea CC
- Se aleg tuburi cu monostrat bine
format
- Se nltur mediul de cretere, se spal
cu sol. Hanks
- Se inoculeaz 0,1 0,2 ml de prelevat
- Peste 30-60 min n tuburi se toarn
cte
1 ml mediu de ntreinere
- Se ntroduc n termostat la t adecvat
3-4 zile
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL VIROZELOR
Indicaii:
- Boli cu msuri terapeutice sau profilactice
speciale (SIDA, hepatite, rubeola, etc)
- Elucidarea etiologiei virale a unor
izbucniri epidemice (meningite, gastroenterite, pneumonii, etc)
- Supravegherea epidemiologic
Prelevate: LCR, snge, exsudate, secreii
nazale, rino-faringiene, mase fecale,
urin, vezicule i ulceraii cutaneomucoase, bioptate, etc.
METODELE DE DIAGNOSTIC AL
VIROZELOR
METODE DIRECTE
- Examenul virusoscopic (evidenierea direct
a virionului sau a componentelor lui n
prelevate)
- Examenul virusologic (izolarea i
identificarea virusului)
- Detectarea Ag virale n prelevat
- Identificarea genomului viral (hibridizarea
AN, amplificarea genic PCR)
METODE INDIRECTE
- Serodiagnosticul (creterea de cel puin 4 ori
a titrului Ac n dinamic)
EXAMENUL VIRUSOSCOPIC
1.
2.
3.
4.
EXAMENUL VIRUSOLOGIC
Prelucrarea prealabil a prelevatelor:
- Omogenizarea (dup necesitate)
- nlturarea elementelor celulare, inclusiv
bacteriene (centrifugare, ultrafiltrare)
- Tratarea cu antibiotice pentru prevenirea
creterii bacteriilor i fungilor
contaminani (penicilin - 500 UA/ml,
streptomicin
- 500 UA/ml, nistatin - 20 UA/ml)
INDICAREA VIRUSULUI
n
culturi de celule
1. ECP modificri degenerative i
distrugere celular, rezultat al
multiplicrii virale (rotunjire sau
retracie celular, citoliz, apariia
vacuolelor sau granulelor n citoplasm,
picnoza nucleului, fuziunea
membranelor, etc). ECP poate fi studiat
la microscopul optic pe celule
necolorate sau colorate cu hematoxilineozin, Giemsa, fluorocrom.
2. Incluziuni virale
Reprezint acumulri paracristaline de virioni
sau de componente virale n aria de replicare
i asamblare a virusurilor (citoplasm, nucleu).
Coloraia Giemsa, hem-eozin, fluorocrom.
Localizarea, forma i afinitatea tinctorial
(bazofile, acidofile) sunt particulariti
diagnostice pentru unele viroze.
3. Interferena
Ex.: V.rubeolic nu produce ECP, dar determin
fenomenul de interferen. Pentru detectarea
V.rubeolei se infecteaz CC cu virus
citopatogen. Lipsa multiplicrii acestui virus
confirm prezena V.rubeolei.
5. Hemaglutinarea (RHA)
Pentru virusurile cu HA acumulate n mediul de
ntreinere. n acest caz mediul de ntreinere
aglutineaz eritrocitele unor specii de mamifere
sau psri.
6. Formarea plajelor
Reprezint focare de celule alterate n monostratul
celular acoperit cu agar. Numrarea plajelor
permite cuantificarea virusului infectant.
7. Proba culorii
- Metabolismul celular neafectat virajul culorii
mediului din rou n galben (pH acid)
- Metabolismul celular inhibat culoarea mediului
nu se modific
1.
2.
-
Identificarea virusurilor
Determinarea genului, speciei i serotipului
de virus prin stabilirea structurii antigenice.
Se efectueaz cu ajutorul serurilor imune
specifice antivirale n diferite reacii
serologice:
- RN
- RIHA/RIHAd
- RFC
- RIF
- RIE (ELISA)
- ARI, etc
DIAGNOSTICUL SEROLOGIC
Esena: depistarea Ac sintetizai de
gazd n rspuns la o infecie viral.
Dup o primo-infecie are loc inducerea
formrii Ac, iar dup o reinfecie sau
reactivare titrul Ac crete n dinamic.
n serodiagnosticul virozelor este
obligator de a examina 2 probe de ser
de la bolnav : prima prelevat la
debutul bolii, al doilea prelevat peste 15
zile.
TERAPIA ANTIVIRAL
Dificulti:
- Toxicitate (imposibil de a distruge virusul fr
afectarea celulei!)
- Apariia mutantelor rezistente
- Activitate asupra virusului n faz de multiplicare
- Costul avansat al tratamentului
Primele preparate antivirale anticanceroase.
Preparatele antivirale contemporane:
- Nu manifest activitate virucid, doar inhib
reproducerea viral
- Sunt dirijate contra etapelor reproducerii virale
Adeziunea
virusului la celul
Mecanismul blocarea receptorilor celulari (HIVoligopeptidul T, care reproduce gp120; CD4
solubili)
Dificulti: afinitate redus, degradare rapid
Fuziunea, penetrarea
Reprezint peptide sintetice (pentafuzida-T20,
T1249) blocheaz fuziunea virusului HIV cu
membrana celular (dificultate injecii s/c
zilnice)
Decapsidarea
Amantadina, rimantadina inhib decapsidarea
virusului gripal A
Utilizare limitat dezvoltarea rezistenei
Replicarea
Mecanismul blocheaz activitatea enzimelor virale
de reproducere (transcriptaze, polimeraze,
replicaze)
Avantaj nu influeneaz componentele celulei-gazd
1. Analogi nucleozidici
Se disting de nucleozidele naturale prin modificarea
componentului glucidic sau a bazei purinice sau
pirimidinice. Blocheaz elongarea catenei de ADN
n curs de formare.
Antiherpetice (aciclovir, ganciclovir, penciclovir,
idoxuridin)
Anti-HIV (zidovudin, didanozin, zalcitabin,
stavudin, lamivudin, etc)
Anti-HBV (entecavir, LdT, LdC faz de cercetare)
2. Analogi nucleotidici
- Cidofovir-CMV, HSV
- adefovir- HIV, HBV, HSV, CMV
- tenofovir HIV, HBV
3. Analog al pirofosfatului
- Foscarnet HSV, CMV (HIV, HBV -?)
4. Inhibitori nenucleozidici ai RT
HIV (nevirapin, delavirin, efavirenz )
Asamblarea, eliberarea
- Inhibitori ai proteazei HIV
(sanquinavir, ritonavir, indinavir,
amprenavir, lopinavir, nelfinavir,
etc) toxicitate, rezisten
- Inhibitori ai neuraminidazei
virusurilor gripale (zanamivir,
oseltamivir). Activ contra gripei
A i B (efect preventiv, curativ,
rezisten rar)
INTERFERONII (IFN)
IFN ansamblu de proteine capabile
s confere celulelor o stare de
rezisten la o infecie viral.
IFN tip 1 (clasic, antiviral):
1. IFN-alfa (leucocitar)
2. IFN-beta (fibroblastic)
Inductori: virusuri, LPS, ARN bicatenar
IFN-gama, tip 2, imun, produs de LT
activate, NK. Manifest activitate
imunomodulatoare
TERAPIA