STREPTOCOCCACEAE

MINIDEFINITIE

MicroorganismeledesemnateclasiccaaparinndfamilieiStreptococcaceae,reprezint
unvastansambluheterogendecoci:
sfericisauovali,
gram(+),asezaiinlanuridediferitelungimisaunperechi,
imobilisaurareorimobili,
nesporulai,
pretenioinutritiv,
aerobi,crestereapoatefifavorizatadeatm.deCO2,facultativanaerobi,
catalazosioxidazonegativi,nureducnitraii,
fermenteazglucozacuproduceredeac.lactic,frgaz.

TAXONOMIE
Dupa 1980 noi criterii de taxonomie molecular au determinat i vor determina
modificriimportantenclasificare.
Astfel,dingenulStreptococcussaudesprinsurmtoarelegenuri:
Enterococcusstreptocociienterici
Lactococcusstreptocociidinproduselelactate
Vagococcusstreptocociimobili
Abiotrophiastreptocociisimbioticidependenidegruprilethiol,vitamina
B6saupiridoxal).
Altegenurinruditecustreptocociisunt:
AerococcuscuspeciatipA.viridans
GemellacuspeciatipG.haemolysans
LeuconostoccuspeciatipL.mesenteroides
PediococcuscuspeciatipP.cerevisiae
Globicatella
Helcococcus

CLASIFICARE(1)
1.Dupaaspectulhemolizei:
streptocociihemoliticicoloniilesuntnconjuratedeozonbinedelimitatde
hemoliz complet;diametrulcoloniilor,variabil nfunciedegrupulantigenic,
estede45orimaimicdectdiametrulzoneidehemolizgr.A,C,G
streptococii ` hemolitici coloniile sunt nconjurate de o hemoliz
incomplet,bordatdeozonngustdehemolizgr.B
streptococii hemolitici coloniilesuntnconjuratedeozon denverzirea
mediului,prinhemolizaparialahematiilorasociatcureducereaHb.eritrocitare
streptocociiviridansiS.pneumoniae.
streptococii hemolitici streptococii nehemolitici enterococii i unii
streptocociorali

CASIFICARE(2)
2.Pebazaprezen

eisauabseneiantigenuluispecificdegrup
(poliozidulCdinperetelecelular,cuexcepiagrupuluiDlacareantigenulspecific
esteacidulglicerolteicoic)streptocociisempartn:
StreptococigrupabiliRebecaLancefield:grupeleAW,cuexcepialiterelorI
iJ
Streptococinegrupabililipsiideantigenulspecificdegrup.

CLASIFICARE(3)
3. Pe baza analizei comparative a secvenelor ARNr 16S sau conturat 6 grupri de specii, cu
anumitecorelaiipatogeniceiecologice:
3.1. Grupul piogenic predomin specii patogene pentru om i diferite animale. Au semnificaie
clinicdeosebitpentruom.

SGA,Str.pyogeneshemolitic,patogenprinexcelenpentruom.

SGB,Str.agalactiae`hemolitic,cuimportandeosebitnpatologiamaternofetal.

SGC, hemolitic, determin infecii similare celor post S. pyogenes; specia dysgalactiae cu
subspeciiledysgalactiaesiequisimilis(poateaveaantigendegrA,C,G);speciaequicusubspeciile
equisizooepidemicus,avndcahabitatvariateanimaleiomul.

SGG,Str.canishemolitic,determininfeciisimilarecelorpostS.pyogenes;
avndcahabitatvariateanimale.

3.2.Grupulanginosus,cuspeciile:
Str.anginosus

Str.constellatus
Str.intermedius

Acestespeciipotdetermina:
hemolizacucoloniiminut,carepotexprima
antigenedegrup
A,C,GsiF(VP+)
hemoliza,suntnegrupabili.
Microorganismeledinacestgrupfacpartedin
microfloraoral,
atractuluigastrointestinaligenital;potdetermina
infeciialetractul
respiratorsuperior,alesistemuluinervoscentral,a
tractuluidigesti
igenitourinaretc.

CLASIFICARE(4)
3.3.Grupulmitisspeciicarefacpartedinmicrofloraoralsiatractuluirespiratorsuper
includespeciile:
S.mitis
S.oralis
S.sanguinissiparasanguinis(fostsanguissiparasanguis)
S.pneumoniae(dupstructuramolecularpneumocociisuntmaiapropiaidegr.mitisdectde
gr.piogenic).
3.4.Grupulsalivariusspeciicarefacpartedinmicrofloraoral:
S.thermophilus
S.vestibulis
S.salivarius
3.5. Grupulbovis populeazatractulintestinalalcatorvaspeciianimalesiuneori laom;poate
determinaendocarditaimeningita.
3.6. Grupulmutansspeciicarecolonizeazexclusivsuprafaadinilor(placadentar)laomi
uneleanimale;suntstreptocociicariogeni.

CARACTERE
MORFOTINCTORIALE

Cocigram(+),sfericisauovoizi,dispuinperechi(pneumococii)saunlanurilungi(din
culturinmediullichid)saumaiscurte(dinculturipemediulsolid).
Dinprelevatelepatologicepneumocociiseprezintsubformacocilorgram(+),ovoizisau
lanceolai,dispuindiplo,nconjuraidecapsul.
nculturivechipotdevenicocigram().
nmediiledecultur deficitarestreptocociipotprezentaanomaliimorfologice:coloraia
gramvaputearelevacocigram(+) igram(),celulelepotfigrupate nlanuri ipot
prezentaaspectenormale,cocoideiovalare,precumiformebacilaresauchiarglobuloase.

CARACTEREDECULTURA
1.Aspectulcre

terii:
pemediilesolide:coloniiS(smooth)mucoide,mattiglossydeterminatedetulpininordinea
scderiivirulenei
coloniiR(rough)determinatedetulpinimaipuinvirulente
nmediilelichide:streptocociicresccudepozitisupernatantclar
cudepozititulburareomogenamediului(n
cazultulpinilorf.virulentesaustreptococilordegrupBsiD).
2. Aspectulhemolizei:
2.1. Pegelozasngedeoaiestreptocociidezvolt:
hemoliza(gr.A,C,GsiuneoriD)
hemoliza`(gr.B)
hemoliza(str.viridans,pneumococii,streptocociidingr.D)
hemoliza(str.nehemoliticigr.D)
2.2.Pegelozacusngedecaluniistreptococihemoliticipotdeterminahemoliza.

CARACTEREBIOCHIMICE

Acestecaracteresuntimportantepentruidentificareastreptococilornegrupabiliia
enterococilor,cadeex.:
fermentareazaharurilor
hidrolizaamidonului
hidrolizaargininei
hidrolizaesculinei
crestereapemediucubilesculin(40%bila)
crestereapemediucu6,5%NaCl
dezvoltareapemediucutrifeniltetrazoliumclorid(TTC)
dezvoltareapemediucuteluritdeK

COMPONENTEANTIGENICERASPUNSIMUN(I)
Localizare
A.Endocelular

Determinantantigenic
1.ProteineleM

2.MAPprot.asociat
proteineiM,nespecific
detip

3.ACHOcarbo
hidratulspecificdegrup
4.Proteinacitoplas
matica
5.ESS
6.Celulestrept.integrale

Raspunsimun
Ac.antiMac.
specificidetip,
protectori,apartrziu
iasigur imunitatede
lungdurat
Celular
Ac.antiMAPapar
tardiv,ncomplic.
poststrept.tardivein
inf.strept.repetate
Celular
Ac.antiACHO
semnificaieievoluie
similarcuAc.
antiMAP
Ac.antiprot.
citoplasmatica
Ac.antiESS
Celular

Metodededetectare
Testulbactericidinvitro;
HAP;LxA
ELISA;RIA

invivoIDR
invitroTTL,TIM
LxA
RFC
invivoIDR
invitroTTL,TIM
LxA
HAP
ELISA;RIA
RFC
ELISA
invivoIDR
invitroTTL,TIM

COMPONENTEANTIGENICERASPUNSIMUN(II)
B.Exocelular

1.SLO

AcASLO

R.deneutralizare
LxA;RFC

Celular

invivoIDR
invitroTTL,TIM

2. DNazaB

AcantiDNazaB

R.deneutralizare
testdeculoare
substratADN

3.SK

Ac.antiSK

R.deneutralizare
substratcheagde
fibrina

Celular

invitroTTL

4. Hialuronidaza

Ac.antiH

R.deneutralizare
substratac.
hialuronic

5. Eritrotoxina

Ac.antieritrotoxina

R.deneutralizarein
vivoR.Dick

6. Proteinaza

Celular

invitroTTL

Ac.antiproteinaza

R.deneutralizare
substratcazeina

FACTORIIDEVIRULENTA

1.F.aderen:prot.Mfibrilar
ALT
prot.delegareafibronectinei(prot.F)
2.F.deinvazie:hialuronidaza
proteaza
streptokinaza
3.F.antifagocitari:prot.M
capsuladeac.hialuronic
C5apeptidaza
leucocidineleSLOiSLSproteinesecretatedestreptococ,care
omoarfagocitele

DIAGNOSTICULBACTERIOLOGIC(1)
I.IZOLAREA
A.Prelevareaproduselorpatologice
1. Ininfectiiledeterminatedestreptocociihemoliticiproduselepatologicece
potfirecoltatesuntf.variate:
exsudatfaringiansinazal
sputa
l.c.r.,lichidpleural,pericardic,peritoneal,periarticular
puroi
secreiivaginale,conjunctivalesiauriculare
urina
sngeetc.
2. Prelevareaestedifereniat pentrufiecareproduspatologicnparte,curespectarea
normelordeasepsie.
3. Recoltarea exsudatului faringian se efectueaz cu ajutorul unui tampon de vat
montatpeotijdelemn,sticlsaumetalinoxidabilsteril.
4. Sputa necesit o preparare obligatorie : 23 splri n ser fiziologic steril pentru
ndepartareafloreideasociaieorofaringian.

DIAGNOSTICULBACTERIOLOGIC(2)
B.Transportulproduselorpatologice,candnsmntareanusepoatefaceimediatsauntimp
de24hdup prelevare,serealizeaz cuajutorulunuimediuselectiv idembogire
(bulioncareconineaziddeNaicristalviolet,lacareseadaugnmomentulfolosirii5%
snge).Esteunmediuncareproduselepatologicesepotmeninepnla2zile;naintede
nsmnarepegelozasngeseincubeaz34hla37oC.
C.Examenuldirectalprodusuluipatologic
examenulmacroscopic (ex.:sputa,pentruafiluat nlucru,trebuies prezinteparticule
mucopurulente,fibrinoase,cusaufrstriaiisanghinolenteetc.)
examenulmicroscopic:nuesteobligatoriupentruexs.faringianpentrucnunepoateda
informaii asupra prezenei streptococilor hemolitici, nsa se poate face diagnosticul
diferenialcuanginadifteric,fusospirilarsaucandida.
esteobligatoriupentruproduseleprelevatedinsitusurianatomice,care
nmodnormalsuntsterile(l.c.r.,lichidpleural,lichidarticularetc.),idindiferitelepuroaie.

DIAGNOSTICULBACTERIOLOGIC(3)
D.Cultura
nsmnareasefacedirectpegelozacu5%sngedeberbecsaucalpentrumajoritatea
produselorpatologice,saunbuliondehemoculturpentrusnge.
Incubareasefacenaerobioz;pentruproduselepatologicerecoltatedinsitusurimaiprofundese
preferincubareanatmosferdeCO2;timpuldeincubare:1824h,la3537oC.
Citirea:
prezenaunorcoloniicudiametrulde0,5mm,transparente,nconjuratedeozonbinedelimitat
dehemoliz total (hemoliza),alc reidiametruestede34orimaimaredectdiametrul
coloniei(streptococidegrupA,CsauG)
prezena unor colonii cu diametrul de 12 mm, opace, grilaptoase, bombate, cu o margine
regulat,nconjuratedeohemolizincomplet(flu,estompat)(streptococidegrupB)
E.Izolareanculturpur
Coloniiledescrisemaisusserepic isensamaneazapegelozsngenvedereaobinerii
uneiculturipure,folositmaidepartepentruidentificare

DIAGNOSTICULBACTERIOLOGIC(3)
II.IDENTIFICAREA

Pebazaurmtoarelorcaractere:
1.Caracteredecultur

pegelozsnge:coloniidescrisemaisus
nmediulichid:creterecudepunerelafundultubului,supernatantulrmnndlimpede(pentru
str.degrupA,C iG);streptocociidegrupBcresccutulburareasupernatantului.Tulburarea
mediuluisemaiproduceincazultulpinilordestreptococihemoliticifoarteviruleni.
2. Caractere morfotinctoriale : Coci gram (+), sferici sau ovoizi, dispui n lanuri lungi (din
culturinmediullichid)saumaiscurte(dinculturipemediulsolid).

STREPTOCOCI

DIAGNOSTICULBACTERIOLOGIC(4)
3.Identificareapreliminara
3.1. Testullabacitracinesteuntestscreeningpentrudifereniereaprezumtivastreptococilordegrup
Adeceilalistreptococihemolitici,tiindcstreptocociidegrupAsuntsensibililabacitracin,iar
cei nonA sunt rezisteni. Poate fi detectat sensibilitate la bacitracin i la anumite tulpini de
streptococihemoliticidegrupnonA(CsiG).
3.2. Testul CAMP (dup numele autorilor : Christie, Atkins i MunchPetersen). Majoritatea
streptococilordegrupBproducoproteindifuzibil(factorulCAMP)careacioneazsinergiccu
lizinastafilococic idetermin lizacomplet ahematiilordeberbecsaudeboudinmediulde
cultur.
3.3. TestulPYRidentificstreptocociidegrupAmaispecific itotaadesensibilcaitestulla
bacitracin. Substratul PYR (Lpyrrolidonylnaphtylamida) este hidrolizat de 100% din
streptocociidegrupA,dardeniciunuldinstreptocociinonA.Enterocociidaudeasemeneatestul
PYRpozitiv.
3.4.
TestulSXT(sulfamethoxazoltrimethoprim)esteuntestdesensibilitate,folosit
pentrudifereniereaprezumtivastreptococilordegrupAiBdeceilalistreptococihemolitici.
MajoritateastreptococilordegrupAiBsuntrezistenilaSXTatuncicndculturilesuntincubaten
atmosfernormal.

TESTLABACITRACINA

STREPTOCOCCUS
PNEUMONIAE
Hemoliza

Testlaoptochin

DIAGNOSTICULBACTERIOLOGIC(5)
4.Identificareadefinitiva(pebazacaracterelorantigenice)
4.1.IdentificareadegrupRebeccaLancefieldafcutmprireastreptococilorngrupuri,notatecu
literelealfabetului(delaAlaW,cuexcepialiterelorIiJ),pebazapolizaharidului(poliozidC)
dinpereteleceluleistreptococice,exceptndstreptocociidegrupDalcrorantigenspecificde
grupesteacidulglicerolteicoicicareseaflinprofunzimeacelulei.
Poatefirealizatprinmetodediferite:
4.1.1.Reac
ia de precipitare interfacial ( n inel) se efectueaz cu ajutorul serurilor hiperimune
specificepentrugrupurileA,B,C,Getc.iaextractuluiantigenic.
4.1.2. Reac
ia de aglutinare pe lam este o reac ie rapid i specific pentru serogruparea
streptococilorhemoliticiaparinndgrupurilorA,B,C,D,Fi
G. Pentruaceastapotfiefectuatedoumetodedeaglutinare:
Latexagutinarea(LA)
Coaglutinarea(CoA)
4.2. Identificareadetip
Importanepidemiologic
pentrucunoaterea:
circulaieigermenilorntro
anumitperioad izon
filiaieicazurilorntrunfocarstreptococic.

DIAGNOSTICULBACTERIOLOGIC(6)

4.2.1.SerotipareastreptococilordegrupA
SerotipajulM:serealizeazprinreaciadeprecipitarentuburicapilare,ntreantigenulM
(extrasprinmetodaLancefield),iserulhiperimunspecificantiM(peste80tipuriM).
SerotipajulT :serealizeaz prinreaciadeaglutinarepelam ntreserurilehiperimune
specificeantiT(~30tipuri) iaceeaisuspensiebacterian obinut pentruidentificarea
serogrupuluistreptococic,careadatoreaciepozitivcureactivulCoApentrugrupulA.
4.2.2.SerotipareastreptococilordegrupB(S.agalactiae

)Sepoate
realizaprindoumetode*:
Precipitareninel
CoA

METODEMOLECULAREPENTRUCARACTERIZAREA
STREPTOCOCILORHEMOLITICI(S.pyogenes)
TipareaemmtiparemoleculararealizataprinamplificareaPCRsisecventierearegiuniivariabile
5`ageneloremm,genecarecodificaproteinaM
MLST(MultilocusSequenceTyping)ometodadecaracterizareatulpinilorbacteriene,
utilizandsecventealefragmentelorinterneasaptegenehousekeeping;furnizeazaun
importantmarkerepidemiologic.
PFGE(PulsedFieldGelElectrophoresis)realizeazaanalizaprofiluluiderestrictieaADN
cromozomalprinelectroforezaingeldeagarozasubactiuneaunuicampelectricpulsat.
Instrumentdeinvestigarearelatiilorgeneticeintretulpinibacterieneapartinandaceleiasispecii.
Detectarea factorilor de virulenta la S. pyogenes : detectarea genelor care codifica
eritrotoxinele(speA,B,C,F,G,H,J,K,ssasismeZ)
DetectareagenelorderezistentalaantibioticeprinhibridizareaADNcusondespecifice,PCRcu
amorsespecifice.

DIAGNOSTICULIMUNOLOGIC
1.Investigarear

spunsuluiimunumoral
1.1.Decelareaanticorpilorfadeantigeneleexocelulare:ASLOiAntiDNazB,metodelecelemai
frecventfolosite,careaulabazoreaciedeneutralizare,caracterizateprincapacitateaanticorpilor
dinseruldebolnavdeaneutralizaefectulbiologicactivalantigenuluicorespunztor,carenuvamai
acionaasuprasubstratuluiintrodusnreacie.
Titrarea acestor anticorpi are importan diagnostic n infeciile acute streptococice, ca i n
puseeleacutealecomplicaiilortardivenesupurative,decelareaAc.ASLOavnd i valoareprognostic
ideevaluareaeficacitiitratamentului,iarAc.antiDNaz Bauvaloarediagnostic ninfeciile
streptococicecutanateincomplicaiileacestoraGNA.
Maipuinutilizat estedecelareacelorlaliAc.antiproteineexocelulare: anti Hialuronidaz, anti
Streptokinaz iantiNADaz.
1.2.Decelareaanticorpilorfadeantigenestreptocociceendocelulare:ac.antiM,antiMAP ianti
ACHO.
Metodelecelemaiutilizatepentrutitrareaacestoranticorpisunt:LxAiHAP;nivelecrescuteale
acestoranticorpisuntntlnitenspecialncomplicaiiletardivepoststreptococice,susinndteoriile
privindpatogeniaautoimunaacestorcomplicaii.
2. Decelarear

spunsuluiimuncelular ladiverseantigenestreptocociceendo iexocelulareprin

metodeinvitrosauinvivonuesterealizatdectnscopdecercetaresauncadrulunorcontexte
esenialeclinice(alergiesausindroamecronice).

REACTIAASLO
MetodaRantziRandeallmodificat
Principiu: reaciedeneutralizare,bazat pecapacitateaAcASLOdeaneutralizaactivitatea
hemoliticaSLO
Tehnicadelucru:
Tratareaserurilordecercetatpentru ndeprtareainhibitorilornespecificiaiSLO:0,2mlserde
cercetat +0,7ml rivanol0,4% agitare,10min.la temp.cam.; seadug apoi1,1mlsoluie
cloruratizoton
Centrifugaresupernatantulreprezintdiluia1/10aseruluidecercetat
Serealizeazdiluia1/100:0,5mldindil.1/10+4,5mlsoluiecloruratizoton
serealizeazdiluia1/500:1mldindil.1/100+4mlsoluiecloruratizoton
dindiluiile1/100i1/500serepartizeazntuburi,conformtabelului
Pstrarela+40Cpestenoapte.
Citireaiinterpretarearezultatelor:titrulestedatdediluiaceamaimaredesercareainhibattotal
activitateahemoliticaSLO.Titrulnormalesteconsideratpnla200ui/ml

REACTIAASLO*

1/1
0

Dilutiiser

1/10
0

M
M.
hem. SLO

1/500

Serbolnav
diluat
0,8 0,2

0,8 0,6

0,4

0,3

0,8

0,6

0,4

0,2

Sol.
clorurata 0,2 0,8
izotonica

0,2 0,4

0,6

0,7

0,2

0,4

0,6

0,8

1,5

0,5 0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

625

833

SLO
1uc/ml

Hematii
iepure

0,5 0,5 0,5

Agitare,15
min.la37oC
0,5 0,5 0,5

0,5 0,5

0,5

0,5

0,5

Agitare,45
min.la37oC
Titru
12
uiASLO/ml

50 100 125 166 250 333 500

hemol hemol
1250 2500 iz
iz
a
a

absen
ta

*Pentruscopuriuzualeclinicesepoatefolosioschemaredusa,cu5tuburi,reprezentatadecoloanele
marcatecurosu