6.

ENZIME
Enzimele sunt compui macromoleculari de natur proteic, produi i
prezeni numai n organismele vii, cu rol de biocatalizatori ai tuturor
transformrilor biochimice caracteristice metabolismului.
Necesitile plastice i energetice ale organismelor vii sunt acoperite, pe
de o parte, din substanele nutritive, relativ stabile chimic, iar pe de alt parte
de o serie de reacii de ardere la care particip oxigenul. Apariia i evoluia
fiinelor vii organizate a fost nsoit de selecionarea i perfecionarea unor
mecanisme capabile s asigure o vitez mare de desfurare a proceselor
biochimice, n condiii de activitate relativ menajate (soluii apoase, temperaturi
joase, mediu neutru etc.). Aceast problem, a fost rezolvat n decursul
evoluiei, prin apariia catalizatorilor biologici care sunt enzimele.
Enzimele au rol esenial n biosinteza i biodegradarea substanelor din
materia vie. In lipsa enzimelor, majoritatea reaciilor chimice din organism nu sar putea produce i deci nu ar mai exista procese metabolice i nici fenomene
de via.
Bogate n enzime sunt plantulele, frunzele tinere, esuturile meristematice,
seminele n stare de germinaie, fructele. In general, plantele tinere au un
coninut mai ridicat de enzime dect plantele adulte. Activitatea catalitic a
enzimelor din organismele n cretere este mai mare dect a celor din
organismele adulte.
Dup locul unde acioneaz, se pot evidenia:
endoenzime (enzime intracelulare);
exoenzime (enzime extracelulare).
Endoenzimele, acioneaz n celulele n care s-au sintetizat. Ele sunt
lioenzime (legate mai slab n celul) i desmoenzime (legate mai puternic n
celule).
Exoenzimele, dup etapa de formare n celule, sunt eliminate n lichidele
din organism, unde i exercit activitatea catalitic. Astfel, acioneaz de
exemplu, enzimele din lichidele interstiiale, din diferite caviti, din seva
elaborat etc.
Substana asupra creia acioneaz enzimele se numete substrat.
6.1. STRUCTURA CHIMIC GENERAL A ENZIMELOR
Enzimele se pot clasifica, din punct de vedere chimic n dou clase:
enzime monocomponente (holoproteice);

Elemente de biochimie

enzime bicomponente.
a) Enzimele monocomponente (holoproteice, proteine biocatalitice) sunt
constituite numai din proteine. Aciunea lor biocatalitic se datoreaz anumitor
fragmente din catena polipeptidic, care includ grupe funcionale componente
ale catenelor laterale ale aminoacizilor (-OH, -NH2, -SH, -COOH etc.),
constituind centrul activ sau situsul catalitic. Prin acest centru activ enzima
fixeaz substratul (l recunoate) sub forma unui complex enzim-substrat,
simbolizat E-S, i biocatalizeaz transformarea substratului.
Pentru recunoaterea i formarea complexului E-S, geometria centrului
activ trebuie s fie complementar cu cea a substratului. Blocarea sau
inactivarea centrului activ (de exemplu denaturarea proteinei) conduce la
pierderea activitii catalitice a enzimei holoproteice. In schimb, denaturarea
unei pri a proteinei, care nu cuprinde centrul activ, nu modific activitatea
catalitic a enzimei.
b) Enzimele bicomponente (heteroproteice) sunt constituite din:
componenta proteic (apoenzim, apoferment), care determin
specificitatea enzimei (o anumit secven a aminoacizior prin care enzima
recunoate substratul i l fixeaz), este caracterizat prin mas molecular
mare, termolabilitate etc.;
componenta neproteic (prostetic, coenzim, cofactor), care determin
mecanismul i viteza reaciei enzimatice poate fi: o vitamin, un hormon, un
colorant, nucleotide, metale. Ea este caracterizat prin mas molecular mic,
termostabilitate.
n majoritatea cazurilor, aciunea catalitic a enzimelor se manifest
numai n prezena unor substane speciale, denumite cofactori, care se
clasific n trei grupe:
coenzime sau cofermeni specifici, sunt substane organice cu mas
molecular mic, termostabile i care dializeaz uor din soluiile enzimei.
Coenzimele se caracterizeaz prin nsuirea lor de a reaciona reversibil cu
proteina care intr n structura enzimei (apoenzima sau apofermentul);
gruprile prostetice, substane combinate mult mai strns cu apoenzima,
se disociaz greu i, n general, rmn fixate pe o singur apoenzim;
activatorii, denumii uneori i cofactori anorganici, sunt substane
nespecifice (diferite metale, ageni reductori etc.), care mediaz trecerea
enzimei ntr-o stare catalitic activ.
Este greu de precizat o demarcaie clar ntre cele trei grupe de cofactori,
clasificai dup natura i raportul lor fa de apoenzim. Multe dintre coenzime
i grupri prostetice sunt de fapt derivai ai vitaminelor hidrosolubile. O mare
parte dintre coenzime i grupri prostetice identificate n componena unor
enzime sunt nucleotide sau derivai ai acestora. Dei n cazul enzimelor
bicomponente, componenta care particip efectiv la realizarea procesului

Elemente de biochimie

biocatalitic enzimatic este coenzima, totui, pentru manifestarea activitii

enzimatice, prezena apoenzimei de natur proteic este absolut obligatorie,
deoarece gruparea prostetic luat separat are slabe proprieti catalitice. In
complexul format de apoenzim i coenzim (holoenzim) activitatea catalitic
crete de 1000 de ori, comparativ cu activitatea catalitic a coenzimei libere.
6.2. CARACTERISTICI ALE ACTIVITII ENZIMATICE
Enzimele, asemntor catalizatorilor chimici obinuii, biocatalizeaz
numai acele reacii metabolice posibile din punct de vedere termodinamic
(care se desfoar spontan, avnd energia liber G < 0). Rolul enzimelor,
ca i al catalizatorilor chimici, este de a reduce energia de activare (nu
modific echilibrele chimice, dar grbete atingerea lor).
Energia de activare n cazul enzimelor este ns mult mai mic. De
exemplu, energia de activare la descompunerea apei oxigenate conform
reaciei:
2 H2O2 = O2 + 2 H2O
este diferit, n funcie de tipul de catalizator utilizat:
fr catalizator: 18 kcal/mol;
cu catalizatorul chimic FeCI3: 11,7 kcal/mol;
cu biocatalizatorul catalaz: 5,5 kcal/mol
Viteza reaciei enzimatice este mult mai mare dect n cazul reaciei
catalizat de catalizatori chimici. De exemplu, enzima catalaza realizeaz
descompunerea H2O2 de 10 miliarde de ori mai repede dect FeCI 3 (ambii
catalizatori au n structur cationul Fe3+).
Sensibilitatea reaciei enzimatice este foarte mare, astfel o molecul de
catalaz descompune 5 milioane de molecule de H 2O2 ntr-un minut, la 0 0C i
la pH = 6,8.
Enzimele catalizeaz reacii de desfacere i formare de legturi n
condiii fiziologice compatibile cu viaa. Aceleai reacii ar necesita n laborator
condiii de temperatur, presiune, pH, improprii vieii.
Spre deosebire de catalizatorii chimici, enzimele se caracterizeaz prin
specificitate (absolut sau relativ) de substrat sau de aciune.
Specificitatea de substrat absolut este proprietatea enzimelor de a aciona
asupra unui singur substrat (de exemplu, ureaza catalizeaz numai
descompunerea ureei). Acest tip de specificitate este determinat de o anumit
secven a aminoacizilor componeni ai apoenzimei.
Specificitatea de substrat relativ este proprietatea enzimelor de a aciona
asupra unui grup de substraturi cu structur chimic apropiat. De exemplu,

Elemente de biochimie

maltaza catalizeaza hidroliza poliglucidelor n care componentele glucide sunt

legate -glicozidic.
Specificitatea de aciune absolut este caracteristica enzimelor de a
cataliza o singur reacie, dintre multiplele reacii posibile.
Specificitatea de aciune relativ este proprietatea enzimelor de a cataliza
un anumit tip de reacie, dat de un grup de substraturi nrudite. Acest tip de
specificitate a enzimelor este determinat mai ales de natura cofactorilor
(gruparea prostetic, coenzima) i mai rar de natura apoenzimei.
6.3. Mecanismul de aciune a enzimelor. Cinetica reaciilor
enzimatice
Mecanismul de aciune a enzimelor este analog cu cel al catalizatorilor
chimici. Enzimele sunt capabile s accelereze viteza de desfurare a
diferitelor reacii (micoreaz energia de activare), absolut necesare pentru
meninerea i reproducerea materiei vii. Enzimele catalizeaz numai reacii
termodinamic posibile, care se pot produce i fr participarea lor, dar ntr-un
timp mai ndelungat i uneori n condiii incompatibile cu materia vie.
Spre deosebire de catalizatorii nebiologici, enzimele au un randament
mult mai ridicat, care asigur mersul reaciei biochimice, n majoritatea
cazurilor ntr-un singur sens, fr reacii secundare. Ele prentmpin
descompunerea unor substane instabile n anumite condiii i permit realizarea
unor procese chimice complexe, cu o cantitate minim de energie.
Enzimele particip activ la procesele catalitice, parcurgnd urmtoarele
etape:
activarea moleculelor substratului (S), prin scderea energiei de activare
a acestuia, i formarea complexului intermediar disociabil, enzim-substrat
(ES), mai activ dect substratul ca atare;
transformarea complexului enzima-substrat (ES) n produsul de reacie
(procesul catalitic efectiv), mai nti legat de enzim (EP), i n final, prin
eliberarea enzimei, obinerea produsului de reacie, (P).
Schematic, mecanismul catalizei enzimatice, conform teoriei etapelor
intermediare, poate fi reprezentat astfel:
E + S = ES ;

ES

EP ;

EP

P+E

sau considerat ca echilibru:

E+S

k1
k -1

ES

k2
k -2

PE

k3
k -3

P+E

innd cont c transformarea ES EP este practic instantanee iar

reacia de transformare P + E EP este nul (enzima fiind specific pentru

Elemente de biochimie

substrat nu i pentru produs), sistemul de ecuaii de mai sus devine:

E+S

k1

ES

k2

P+E

k-1

i poart denumirea de echilibrul Michaelis-Menten.

6.3.1. Factorii care influeneaz viteza reaciilor enzimatice
Reaciei de formare i de descompunere a compusului enzim-substrat i
se poate aplica legea aciunii maselor i se poate determina astfel constanta
de echilibru.
Viteza reaciilor enzimatice depinde n mare msur de concentraia
enzimei i de concentraia substratului.
a) Influena concentraiei enzimei asupra vitezei reaciei enzimatice
Viteza reaciei enzimatice este direct proporional cu concentraia
enzimei prezente n mediul de reacie.
n unele cazuri, de obicei cnd sunt prezeni n sistem i ali factori, curba
care reprezint dependena vitezei de concentraia enzimei, este deviat fa
de cea normal.
Abaterile de la aceast comportare se pot datora prezenei inhibitorilor,
folosirea unei concentraii de substrat sub limita de saturare a enzimei etc.
b) Influena concentraiei substratului asupra vitezei reaciei
enzimatice
S-a constatat c dac se pleac de la o cantitate fix de enzim i se
mrete treptat concentraia substratului, se va forma o cantitate mai mare de
complex enzim-substrat, viteza reaciei va crete treptat, pn cnd toat
enzima s-a combinat cu substratul. Acest stadiu reprezint momentul de
saturare a enzimei, iar viteza va fi maxim (vmax). Dac se mrete n
continuare concentraia substratului, viteza de reacie nu se va mri, deoarece
nu exist enzim liber care s intre n reacie cu substratul.
n practic, activitatea enzimatic se apreciaz dup concentraia
substratului, cnd jumtate din cantitatea de enzim este combinat cu
substratul sub form de complex enzim-substrat si viteza reaciei este
jumtate din valoarea sa maxim. Acest punct reprezint constanta Michaelis
(KM) i reprezint concentraia substratului pentru care viteza de reacie este
jumtate din viteza maxim. Constanta Michaelis are valorile unor concentraii
i se exprim n moli/L. Constanta Michaelis se poate utiliza pentru a
determina afinitatea enzimei fa de substrat. Cu ct KM va avea o valoare mai
mare, cu att afinitatea enzimei fa de substrat va fi mai mic i invers.

Elemente de biochimie

Relaia cantitativ dintre viteza reaciei enzimatice, concentraia substratului i

valoarea KM, care exprim viteza reaciei enzimatice n fiecare moment, este
dat de ecuaia Michaelis-Menten:
v

v max [S]
K M [S]

Constanta lui Michaelis este o mrime important nu doar din punct de

vedere al cineticii enzimatice ci i pentru msurtorile cantitative ale activitii
enzimatice din esuturi. Cercetri recente au pus n eviden importana
medical a constantei KM. Unele cazuri de leucemie (n care are loc o cretere
enorm a numrului de leucocite) pot fi regresate prin administrarea
intravenoas a enzimei asparaginaza care catalizeaz reacia de hidroliz a
asparaginei la acid aspartic i amoniac. Prin injectarea intravenoas a
asparaginazei (factor de cretere a leucocitelor), fenomenul de cretere a
leucocitelor este stopat. Cercetrile asupra surselor de asparaginaz au
demonstrat ca enzima are valori diferite ale KM n funcie de provenien
(bacterii, plante, animale). Deoarece concentraia de asparagin din snge
este foarte mic, cantitatea de asparaginaz injectat va avea efect terapeutic,
doar dac valoarea KM va fi suficient de mic pentru a hidroliza rapid
asparagina aflat n concentraii mici n snge.
Activitatea enzimatic se exprim prin unitatea enzimatic, respectiv
cantitatea de enzim care poate cataliza transformarea unui micromol de
substrat n timp de un minut. Activitatea enzimatic n cazul enzimelor pure se
determin prin numrul de molecule de substrat care pot fi metabolizate ntr-un
minut de o singur molecul de enzim. Aceast mrime se numete raport de
transformare (turnover number).
c) Influena temperaturii asupra vitezei reaciei enzimatice
Activitatea enzimelor este foarte mult influenat de temperatur.
Asemntor celor mai multe dintre reaciile chimice, viteza reaciei enzimatice
crete cu creterea temperaturii (se dubleaz la creterea temperaturii cu 10
0
C).
Pentru fiecare enzim exist o temperatur la care activitatea enzimatic
este maxim, numit temperatur optim (n general, cuprins ntre 20-40 0C.
Pn la atingerea temperaturii optime, activitatea enzimatic crete
proporional cu creterea temperaturii.
Dup atingerea acestei temperaturi, activitatea enzimatic scade rapid cu
creterea temperaturii, datorit denaturrii prii proteice a enzimei, acelai
fenomen avnd loc la scderea temperaturii sub cea optim (fenomene
utilizate n practic la pstrarea alimentelor prin fierbere sau congelare). Cele
mai multe enzime sunt inactivate la temperaturi peste 55-60 0C, cu excepia
enzimelor din bacteriile termofile (din izvoarele termale), active i peste 85 0C.

Elemente de biochimie

v
mol/s

Temperatura optim

Influena temperaturii asupra vitezei reaciei enzimatice este redat n

figura 6.3.

40

Temperatura 0C

Fig. 6.1. Influena temperaturii asupra vitezei reaciei enzimatice

d) Influena valorii pH asupra activitii enzimatice

v
mol/s

Interval de pH optim

Activitatea enzimelor este influenat n mod accentuat i de concentraia

ionilor de hidrogen din mediul de reacie, deci de pH. Enzimele i manifest
activitatea numai ntre anumite limite de pH (limite inferioare i limite
superioare). Cele mai multe enzime manifest activitate maxim la valori
caracteristice ale pH-ului (pH optim). Valoarea pH-ului optim depinde de natura
enzimei, de mediul de reacie, de proprietile acido-bazice ale enzimei i de
factorii biologici. Influena valorii pH asupra activitii enzimatice este redat n
figura 6.4.

pH
Fig. 6.2. Influena valorii pH asupra activitii
enzimatice

n general, pH-ul optim coincide cu pH-ul lichidelor din organism, unde

enzimele i exercit activitatea. Astfel, pH-ul optim al pepsinei din stomac

Elemente de biochimie

este cuprins ntre 1,4-1,5; pH-ul optim al tripsinei din pancreas ntre 7,8-8,7;
al amilazei din mal ntre 4,7-5,2 etc. Majoritatea enzimelor vegetale au un
pH optim cuprins ntre 5,3-7,6. n afara limitelor de pH stabilite, enzimele
devin inactive. Valori prea mari ale pH-ului (alcalinitate mrit) sau prea mici
(aciditate mrit), afecteaz activitatea enzimatic prin denaturarea prii
proteice sau perturbarea echilibrelor de disociere ale grupelor funcionale
ale centrului activ al enzimei, ca i modificarea geometriei centrilor activi.
Valoarea pH-ului optim este influenat de temperatur, de ionii din soluie,
de natura i de concentraia substratului, de originea enzimei, de factorii
biologici etc.
e) Influena activatorilor enzimatici
Activatorii sunt compui chimici care mresc activitatea enzimelor (intervin
n mecanismul aciunii enzimatice), fie prin stimularea direct a acestora, fie
prin ndeprtarea unor inhibitori din sistem. Activatorii se clasific dup efectul
produs n:
Activatori care acioneaz prin deblocarea centrilor activi din molecula
enzimelor. Unele enzime, denumite proenzime, sunt secretate sub form
inactiv, cu gruprile active blocate (mascate) de polipeptide sau de alte
substane. Proenzimele se transform n enzime active sub influena unor
enzime kinaze, care ndeprteaz substanele inhibitoare.
Activatori care acioneaz asupra enzimei prin nlturarea din sistem a
unor inhibitori ai enzimei. Substanele, adugate unei soluii enzimatice pentru
protejarea enzimei mpotriva factorilor care o inactiveaz sau o denatureaz,
se numesc protectori. De exemplu, proteinele activeaz ureaza prin captarea
ionilor inhibitori din sistem (de exemplu, ionul cianur (CN ) nltur efectul
inhibitor al Cu2+ asupra ureeazei, prin formarea cianurii complexe de cupru,
stabil).
Activatori care sunt componente ale enzimelor sau care stimuleaz
direct activitatea acestora. Sunt activatori specifici pentru anumite enzime o
serie de cationi metalici i anioni, astfel, fosforilaza este activat de Mg 2+,
fosfoglucomutaza de Mg2+, i de Mn2+, fosfataza de Ca2+ i de Mn2+, amilaza
salivar este activ numai n prezena ionilor de clor, proteazele vegetale sunt
activate de glutationul redus etc.
f) Inhibitori ai enzimelor
Inhibitorii sunt substane care acionnd asupra enzimelor, influeneaz
negativ desfurarea activitii enzimatice pn la anularea ei, reversibil sau
ireversibil.
Studiul inhibitorilor furnizeaz informaii utile asupra specificitii de
substrat, tipului de grupe funcionale i mecanismului de aciune enzimatic.

Elemente de biochimie

Inhibitorii ireversibili modific profund structura moleculelor enzimatice,

provocnd denaturarea proteinei i deci anularea activitii catalitice a enzimei.
Astfel de inhibitori ireversibili sunt: compuii cu Pb2+, Hg2+, CN, cu CO,
compuii cu arsen etc.
Inhibitorii reversibili acioneaz asupra cineticii reaciei enzimatice, fr a
produce modificri la nivelul structurii enzimei. Inhibiia produs de aceti
inhibitori poate fi (n funcie de natura i de specificul ei) de tip: competitiv,
necompetitiv i alosteric.
Inhibiia competitiv rezult dintr-o competiie (pentru ocuparea situsului
activ al enzimei), ntre substrat i inhibitorul care are o structur molecular
asemntoare cu a substratului. Inhibiia competitiv se produce i n cazul
vitaminelor de ctre antivitamine, hormoni-antihormoni, enzime-antienzime.
Inhibiia necompetitiv se caracterizeaz prin faptul c inhibitorul nu are o
structuraasemntoare cu substratul. Inhibiia necompetitiv se poate realiza n
mai multe moduri:
Inhibiia prin blocarea sau transformarea grupelor funcionale tiolice (SH), centrii activi ai enzimelor, prin reacii cu metale grele (Hg, Pb, Ag, As etc.)
cu formare de mercaptide, prin reacii de oxidare sau reacii de alchilare.
Inhibiia prin blocarea metalului din componena enzimei sau a
activatorilor din mediul de reacie. De exemplu, fluorurile i oxidanii extrag ionii
de Mg2+ i de Ca2+ din molecula enzimei, iar cianurile, H2S i CO scot fierul din
enzimele feroporfirinice.
Inhibarea enzimelor se produce i prin agitare ndelungat, sub aciunea
diferitelor radiaii ionizante (UV, X etc.), la presiuni ridicate i sub influena
substanelor care determin precipitarea proteinelor (acid tricloracetic, tanin
etc.).
6.4. NOMENCLATURA I CLASIFICAREA ENZIMELOR
Denumirea enzimelor s-a acordat iniial, innd cont de numele
substratului asupra cruia acioneaz, sau de numele reaciei catalizat, la
care se adaug sufixul aza.
De exemplu, enzima care biocatalizeaz descompunerea amidonului se
numete amilaza cea care acioneaz asupra zaharozei se numete zaharaza
etc., enzimele care biocatalizeaz reacii de hidroliz se numesc hidrolaze,
cele care catalizeaz reacii de oxido-reducere se numesc oxido-reductaze
etc.
Odat cu creterea numrului de enzime izolate i caracterizate, pentru
prevenirea confuziilor n stabilirea numelui enzimelor, innd cont c ele pot
manifesta specificitate relativ (pot aciona asupra mai multor substraturi) i c
asupra unui substrat pot aciona enzime diferite, a fost adoptat noua
nomenclatur i sistemul de clasificare (Congresul Internaional de Biochimie,

10

Elemente de biochimie

Moscova, 1961).
Sistemul de clasificare i numerotare a enzimelor, precum i noua
nomenclatur sistematic se bazeaz pe reacia chimic catalizat de enzim,
unicul criteriu care permite deosebirea enzimelor ntre ele. n acest sistem
enzimele sunt mprite n clase, dup tipul reaciei catalizate, iar acestea sunt
mprite n subclase care definesc mai exact caracterul reaciei enzimatice
respective. Numele fiecrei enzime se definete printr-un termen alctuit din
trei pri:
denumirea substratului asupra cruia acioneaz enzima;
denumirea tipului de reacie catalizat de enzim;
sufixul aza.
De exemplu, enzima care catalizeaz dehidrogenarea acidului lactic se
numete lactatdehidrogenaza, cea care catalizeaz decarboxilarea acidului
piruvic se numete piruvatdecarboxilaza. Denumirea transferazelor se
formeaz din prefixul trans, numele substratului i sufixul aza (transaminaze,
transmetilaze, transfosfataze etc.).
Conform acestui sistem zecimal de clasificare, fiecare enzim este
caracterizat printr-un cod format din patru cifre.
Enzimele cunoscute n prezent sunt grupate n 6 clase principale:
1. Oxidoreductaze
2. Transferaze
3. Hidrolaze
4. Liaze
5. Izomeraze
6. Ligaze (Sintetaze).
Prima cifr precizeaz clasa din care face parte enzima.
A doua cifr a codului definete subclasa, furniznd informaii asupra
tipului de grup funcional, respectiv asupra tipului de legtur chimic
implicat n reacie.
Cifra a treia precizeaz subdiviziunile din cadrul unei subclase (de
exemplu, natura unei grupe funcionale transferate, natura acceptorului etc.).
Cifra a patra din cod reprezint numrul de ordine al enzimei n
subdiviziunea din interiorul subclasei. De exemplu: enzima ATP: D-fructozo-6fosfotransferaza, are cifrul 2.7.1.4. dup care se identific drept o transferaz
(2, clasa 2), care transfer reziduul fosfat (cifra 7, subclasa 7), la gruparea
alcoolic (cifra1, subdiviziunea 1 a subclasei 7) i are numrul de ordine 4.
Pentru unele dintre enzime se pstreaz denumirile vechi, conferite
nainte de stabilirea noii nomenclaturi (pepsina, tripsina, papaina, emulsina,
chimozina etc.).

Elemente de biochimie

11

6.5. REPREZENTANI AI PRINCIPALELOR CLASE DE ENZIME

6.5.1. Oxidoreductaze
Oxidoreductazele sunt enzime care biocatalizeaz reaciile de
oxidoreducere din organismele vegetale i animale. Ele au un rol important
deoarece, prin reaciile de oxidoreducere, organismele i procur cea mai
mare parte din energia necesar activitilor fiziologice. Reaciile de
oxidoreducere se realizeaz prin transfer de electroni i prin transfer de atomi
de hidrogen.
Dup mecanismul de aciune, oxidoreductazele se clasific n trei
subgrupe:
dehidrogenaze;
transelectronaze;
oxidaze.
6.5.1.1. Dehidrogenaze
Oxidrile biologice decurg preponderent n absena oxigenului, fiind de
fapt dehidrogenri, care au loc prin transfer de atomi de hidrogen de pe o
molecul (care se oxideaz) pe alt molecul (care se reduce). Enzimele care
catalizeaz transferul atomilor de hidrogen de la un substrat la altul sunt
dehidrogenazele. Coenzimele lor particip continuu la oxidri i reduceri, fr
s se consume n timpul reaciei. Atomii de hidrogen nu rmn legai n mod
permanent pe molecula coenzimei, ci sunt transferai printr-o nou reacie
redox pe o alt molecul.
Dup natura acceptorului de atomi hidrogen, dehidrogenazele pot fi:
dehidrogenaze anaerobe;
dehidrogenaze aerobe.
a) Dehidrogenaze anaerobe
Dehidrogenazele anaerobe sunt oxidoreductaze care transport hidrogenul
n interiorul celulelor, de la un substrat donor la altul acceptor (cu excepia O2
atmosferic). Coenzimele care realizeaz aceast transformare sunt
codehidrazele de natura piridinnucleotidic:
codehidraza I (Co I): NAD nicotinamidadenindinucleotida;
codehidraza II (Co II): NADP nicotinamidadenindinucleotida fosfat.
Structura chimic a NAD
Codehidrazele piridinnucleotidice au o structur dinucleotidic. n
compoziia lor intr nicotinamida (vitamina PP), dou molecule de riboz, acid

12

Elemente de biochimie

pirofosforic i adenin.
NADP-ul are n plus fa de NAD un rest de acid fosforic la atomul C 2 al
ribozei legate de adenin.
O

NH2

C NH2

N
CH2 O P P O CH2

+2H

-2H

O
NAD+

NH2

C NH2

N
CH2 O P P O CH2

O
NADH

n condiii anaerobe mecanismul transferului de hidrogen este urmtorul:

S

H2

substrat
donor
forma
redus

NADH +
coenzima
forma
redus

NAD+

coenzima
forma
oxidat

H+

S'

substrat
acceptor
forma
oxidat

substrat
donor
forma
oxidat

NADH

H+

coenzima
forma
redus

NAD+ +
coenzima
forma
oxidat

S'

H2

substrat
acceptor
forma
redus

Ambele coenzime (NAD i NADP) se pot prezenta n dou forme: o form

redus i o form oxidat.
Mecanismul reaciei de oxidoreducere implic transformarea reversibil a
structurii bazei azotate nicotinamidice (NAD, respectiv NADP) din forma
oxidat n forma redus, prin transferul reversibil al atomilor de hidrogen,
astfel:

Elemente de biochimie

13

H2
C

H2
C

+2 H+ + 2 e-

NAD+

- 2H - 2 e-

NADH + H+

N + H+

n transportul hidrogenului, rolul principal revine nucleului piridinic.

Codehidraza oxidat preia de pe substrat doi atomi de hidrogen, pe care i
fixeaz unul la C4 i unul la atomul de N1 (structur de ion cuaternar de
amoniu). Se formeaz un produs instabil, care prin eliminarea unui proton de
la N1 se transform n forma redus. Deoarece formele oxidate au la atomul de
azot sarcina pozitiv, este corect s se scrie formula acestor coenzime NAD +
i NADP+, iar pentru formele reduse NADH+H+ (nu NADH2 i NADPH2).
Codehidrazele I i II pot suferi reacii de interconversiune n prezena ATPului i sub aciunea fosfatazei:
+

NAD + ATP

NADP + ADP

Exemple de enzime dehidrogenaze anaerobe care au n structur NAD+

sau NADP+: alcooldehidrogenaza (implicat n fermentaia alcoolic),
aldehiddehidrogenaza, izocitricdehidrogenaza (implicat n ciclul Krebs) etc.
b) Dehidrogenaze aerobe
Dehidrogenazele aerobe sunt enzime oxidoreductaze care transport
hidrogenul de la un substrat donor la oxigenul liber (acceptor), formnd apa
oxigenat, care va fi descompus ulterior de peroxidaze sau catalaze.
Coenzimele componente care realizeaz aciunea biocatalitic sunt de
natur flavinnucleotidic:
FMN flavinmononucleotida
FAD flavinadenindinucleotida.
Ambele coenzime au ca i component principal vitamina B 2 cu structur
izoaloxazinic. Componenta proteic (apoenzima) este de obicei o albumin.
Legtura dintre apoenzim i coenzim se desface uor n mediu acid i n
prezena sulfatului de amoniu.
Flavinmononucleotida (FMN) este format dintr-un nucleu izoaloxazinic,
din ribitol i acid fosforic.

14

Elemente de biochimie
O
H3C

H3C

NH
N

CH2
HC OH
HC OH
HC OH O
H2C O

P OH
OH

Legtura dintre FMN i apoenzim se poate realiza la nivelul nucleului

izoloxazinic i la nivelul acidului fosforic. Dintre flavinenzimele
mononucleotidice se pot meniona: fermentul galben respirator, Laminoacidoxidaza etc.
Flavinadenindinucleotida (FAD) este format dintr-un nucleu izoloxazinic,
ribitol, acid pirofosforic i adenin. FAD are o structur de dinucleotid, fiind
format prin unirea a dou mononucleotide: FMA i AMP.
O
H3C

H3C

NH2
N

NH
N

CH2

CH

CH2

HC OH

HC OH

HC OH

HC OH

HC OH O
H2C O

H3C

H3C

H
N

NH2
N

NH
N
H

N
N

CH

+ 2H

HC OH

HC OH

- 2H

HC OH

HC OH

HC OH O

HC

P O P O CH2
OH

H2C O

OH

HC

P O P O CH2
OH

OH

n condiii aerobe mecanismul transferului de hidrogen este urmtorul:

S
substrat
donor
forma
redus

FADH2
coenzima
forma
redus

O2
substrat
acceptor

H2

FAD

coenzima
forma
oxidat

substrat
donor
forma
oxidat

FADH2
coenzima
forma
redus

FAD + H2O2
coenzima
forma
oxidat

catalaza

H2O + 1/2 O2

Mecanismul transferului de atomi de hidrogen n condiii aerobe este posibil

datorit transformrii reversibile a structurii nucleului izoaloxazinic (vitamina B2)
din structura FAD. Nucleul izoaloxazinic se poate prezenta sub o form oxidat,
cu duble legturi conjugate i o form redus, fr legturi duble la atomii de

Elemente de biochimie

15

azot N1 i N10. Forma oxidat a flavinenzimelor este colorat, iar forma redus
este incolor.
O
H3C

H3C

O
NH

+2 H
O

-2 H

H3C

H
N

H3C

NH
N
H

Dintre flavinenzimele cu FAD se pot meniona: xantinoxidaza, Daminoacidoxidaza, succindehidrogenaza, glucozoxidaza, aldehidoxidaza etc.
Glucozoxidaza acioneaz asupra substratului glucoz, pe care o
oxideaz la acid gluconic:
RCOOH + FADH + H+

RCH=O + FAD

FADH + H+ + O2
FAD + H2O + O2
Aldehidoxidaza acioneaz asupra acetaldehidei, pe care o oxideaz la
acid acetic:
CH3CH=O + FAD + H2O

CH3COOH + FADH + H+

FADH + H+ + O2

FAD + H2O + O2

6.5.1.2. Transelectronaze
Transelectronazele sunt enzime care catalizeaz reacii de oxidoreducere care decurg prin transfer de electroni de pe un donor pe un acceptor.
Dac donorul este:
Oxigenul, enzimele sunt transelectronaze aerobe;
Nu este oxigenul, enzimele sunt transelectronaze anaerobe.
Transelectronazele sunt reprezentate prin cromoproteidele citocromi,
constituii dintr-o parte proteic (apoenzima cu caracter bazic) i o coenzim
cu structur feriporfirinic (citocromul propriu-zis).
Transportul de electroni se realizeaz prin modificarea cifrei de oxidare a
fierului:
Fe

2+

-e
+e

Fe

3+

Fierul porfirinic se leag prin dou legturi coordinative de atomul de azot

imidazolic al aminoacidului histidina din catena polipeptidic a enzimei.
Citocromii sunt prezeni numai n celulele aerobe i particip la realizarea

16

Elemente de biochimie

procesului de respiraie. Cantitatea lor n celule depinde de capacitatea

respiratorie a celulei. Se cunosc mai multe tipuri de citocromi care se
deosebesc ntre ei prin substituenii nucleelor pirolice, potenialul redox etc.
Eliberarea i transportul de electroni se realizeaz prin trecerea citocromului
din starea feroas (Cit. Fe2+) n starea feric (Cit. Fe3+), n prezena O2 i a
citocromoxidazei.
Citocromii dein, ca transportori de electroni, un rol important n catena de
respiraie celular (lanul respirator). Ei particip, ca intermediari, la procesul de
formare a apei, produs final al metabolismului glucidic. Energia eliberat n
procesele de oxidare (H - e = H+) este stocat n moleculele de ATP care se
sintetizeaz.
6.5.1.3. Oxidaze
Oxidazele sunt enzime oxidoreductoare care catalizeaz reaciile dintre
diferite substraturi i oxigenul molecular sau cel peroxidic.
Oxidazele se clasific n:
oxigenaze;
hidroxilaze;
oxidaze transportoare de electroni.
a) Oxigenazele determin combinarea direct a substratului cu oxigenul
molecular. Ele catalizeaz reacii de tipul:
AH + O2

AOOH

sau

A + O2

AO2

Exemple de enzime oxigenaze: lipoxidaza, care catalizeaz oxidarea

acizilor nesaturai din esuturilor vegetale, indoloxidaza, triptofanoxidaza etc.
b) Hidroxilazele (monooxigenaze) sunt enzime care catalizeaz oxidarea
substratului cu formarea concomitent a apei. Din oxigenul molecular, un atom
va servi la oxidarea substratului iar cellalt la formarea apei:
AH2 + O2 + S

H2O + SO + A

sau

AH2 + 1/2 O2

A + H2O

Reaciile au loc n prezena unui donor de hidrogen (AH2) care poate fi:
NADH + H+, NADPH + H+, FADH2 etc. Cele mai importante dintre enzimele
hidroxilaze sunt: fenilalaninhidroxilaza, lizinhidroxilaza, steroidhidroxilaza etc.
c) Oxidazele transportoare de electroni conin n molecul ioni metalici
(Cu, Fe) i catalizeaz reacia de oxidare a substratului cu ajutorul oxigenului
atomic foarte reactiv.
Enzimele care conin atomi de cupru se numesc cuproxidaze, cele care
conin atomi de fier se numesc feroxidaze. Dintre cuproxidaze fac parte

Elemente de biochimie

17

fenolazele (fenoloxidaze, rspndite n regnul vegetal), enzime care catalizeaz

oxidarea fenolilor la chinone, ascorbicoxidaza, care catalizeaz oxidarea
acidului ascorbic la acid dehidroascorbic, tirozinaza etc.
Dintre feroxidaze, cele mai importante sunt peroxidazele i catalazele.
Peroxidazele descompun apa oxigenat numai n prezena unui acceptor
de oxigen sau a unui donor de hidrogen:
H2O2 + AH2
H2O2 + A

2 H2O + A
AO + H2O

Catalazele descompun apa oxigenat cu degajare de oxigen:

H2O2

H2O + 1/2 O2

Ca i peroxidazele, catalazele sunt rspndite n celulele vegetale unde

acioneaz prin descompunerea apei oxigenate, substan toxic pentru
organismele vii, care se formeaz sub aciunea unor flavinenzime sau a
radiaiilor. Ca donatori de atomi de hidrogen pot funciona: metanolul, etanolul,
fenolii, aminoacizii etc.