Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
35
VIRUSURI GENERALITI
VIRION: particula matur, infecioas ; reprezint faza extracelular a ciclului infecios al virusului i conine
una sau mai multe molecule de ADN sau ARN.
VIRUS: include pe lng virion i ARNm, proteine virale care pot lipsi din structura virionului. Virusurile sunt
microorganisme strict parazite intracelular, conin un singur tip de acid , fie ADN,fie ARN, protejat de un
nveli proteic. nveliul proteic poate fi dublat de o anvelop (membran lipoproteic care deriv din membrane
ale gazdei, modificate prin insertia de peplomere). Virusurile nu posed enzime productoare de energie i de
capaciti de biosintez. Nu se divid, ci sunt replicate de celulele vii pe care le paraziteaz.
Morfologic: pot fi cilindru sau bastona (Ebola), form sferic (Parvoviridae), sferoidal (gripal), de obuz (V
rabiei Rhabdovirusuri), paralepipedica (Poxvirusurile). Dimensiuni: 20-300(400) nm.
Structur: capisd, genom, nveli.
Capsida este un ansamblu de capsomere aezate ntr-o ordine precis determinat. Capsomerul este unitatea de
baz structural a virusului i este constituit din mai multe protomere (o unitate proteic).
Funciile capsidei: Protejeaz genomul viral de aciunea distructiv a unor factori de mediu. Confer forma
caracteristic virionului. Fixeaz virionul pe receptori celulari specifici i iniiaz astfel penetrarea acestuia n
celul. Conine determinanii antigenici fa de care gazda vertebrat infectat reacioneaz prin rspuns imun,
inclusiv formare de Ac specifici, care n cazul virusurilor nenvelite (nude) au rol protector; Prin reaciile Ag-Ac,
folosind seruri imune cunoscute putem identifica un virus pe baza structurii antigenice a capsidei.
Nucleocapsida = capsida i genomul viral: conine ARN sau ADN , m.c. sau d.c., circular sau linear, unic sau
segmentat. Poate avea polaritate pozitiv (notat +) sau negativ (notata -). Polaritatea (+): genomul are funcie
de ARNm.
Funciile genomului: Purttorul informaiei genetice necesare pentru sinteza unui nou virus; se realizeaz
prin devierea metabolismului gazdei n direcia sintezei de noi genoame i ai celorlali constituieni ai virionilor
progeni. Acizii nucleici snt determinanii infeciozitii virusului; fr acid nucleic capsida rmas goal nu este
infecioas. Genomul viral poate suferi mutaii: n timpul replicrii pot aprea virioni descendeni diferii de cei
parentali; la rndul lor mutanii pot s produc descendeni modificai genetic.
Tipuri de simetrie ale nucleocapsidei: Simetrie icosaedric, pot fi nude sau cu anvelop Picornaviridae;
Simetrie helical capsomerele nconjur spirala de acid nucleic ntr-o teac helical; au anvelop ortho, rhabdo,
paramixovir. Simetrie binar (bacteriofagi cu nucleocapsid icosaedric i coad helicat). Organizare complex
(poxvirus) miez biconcav, 2 corpi laterali i o mb extern din microtubuli dispui lateral
nveliul viral (peplos = manta). Deriv din sistemul membranar al celulei gazd (membrana citoplasmic,
reticul endoplasmic). Poate prezenta spiculi glicoproteici virali ce apar pe suprafa cu: funcie de ligand
(hemaglutinina); funcie enzimatic (neuraminidaz). Lipsit de regiditate apare cu diferite forme n microscopia
electronic: cele mai multe sunt sferice; rhabdovirusurile au form de glon; virusul gripal are form sferic sau
filamentoas. Unitatea structural: PEPLOMERUL
Funciile inveliului viral: Prin proieciile nveliului, au funcia de ataare la receptorii celulei gazd
mijlocind ptrunderea virionului n celul; ex: hemaglutinina v. gripal mijlocete ataarea de receptorii de
suprafa ai hematiilor i produce aglutinarea lor; Activitate enzimatic: neuraminidaza cliveaz acidul
neuraminic din glicoproteinele celulei gazd; lizeaz glicocalixul eucariot i favorizeaz penetrarea barierelor
epiteliale i tisulare; peplomerele sunt imunogene apar Ac specifici care pot inhiba: ataarea la receptorii celulari
(neutralizarea infecivitii), ataarea la receptorii hematiilor (inhibarea hemaglutinrii), si pot anula activitatea
enzimatic (inhibarea neuraminidazei).
Enzime virale: Neuraminidaza: hidrolizeaz legturile galactoz - acid N-acetilneuraminic, cu rol n eliberarea
virionilor din celula care i-a format; ARN polimeraz; ADN polimeraz ARN dependent, numit transcriptaz
revers (reverstrancriptaz RT); o regsim la retrovirusuri (transcrie ARNm.c. n ADNd.c.: ADN transcris se
integreaz n genomul celulei gazd).
Replicarea virusurilor este un proces desfurat numai n celula vie parazitat, prin subordonarea de ctre
genomul viral a metabolismului energetic i a biosintezelor celulei gazd pt sinteza proteinelor virale i replicarea
acidului nucleic viral. Metabolismul celular poate fi subordonat total sau poate continua paralel cu sinteza
componentelor virale. Replicarea parcurge mai multe etape: ataarea (adsorbia), penetrarea n celul,
1
decapsidarea, biosinteza proteinelor virale precoce, replicarea genomului viral, biosinteza proteinelor tardive,
morfogeneza particulei virale, eliberarea din celul
1.ADSROBTIA /ATAAREA este Receptor specific: structuri virale (liganzi) interacioneaz cu receptori
celulari specifici. Specifictatea de receptor explic spectrul de gazde (nu orice virus poate infecta o gazda) i
tropismul de organ, esut sau celul (virusul gripal recunoaste glicoproteine ale mucoasei respiratorii ce conin acid
sialic; virusul rabic recunoate receptorii de acetil colin, virusul polio recunoate enterocitele i neuronii SNC,
HIV se ataeaz pe celule CD4 +).
2. PENETRAREA. Virusurile nude (i rar cele nvelite) ptrund prin pinocitoz (receptor dependent) cu
includerea virionilor n endozomi. Picornavirusurile i papovavirusrile pot intra prin translocarea direct a
membranei citoplasmatice (viropexie). Virusurile nvelite ptrund prin fuziune i eliberarea NC direct n
citoplasm. Virusurile nvelite pot penetra i prin endocitoz, fenomen insoit de decapsidare.
3. DECAPSIDAREA are loc sub ac iunea enzimelor lizozomale sau direct n citoplasm. Genomul ajunge la
sediul replicarii pentru a deveni accesibil transcriptiei (producerea de ARNm sub actiunea transcriptazei virale sau
cea furnizata de catre gazda). Translatia: ataarea ARNm la ribozomii celulei gazd i dirijarea sintezei proteice
specificate de virus, adic proteine funcionale (nestructurale de regul enzime) i proteine structurale.
4. BIOSINTEZA PROTEINELOR PRECOCE
transcripia ARN mesager: la v. ADN d.c. transcrierea unei catene cu participarea ARNpolimerazei celulare; la v. ADN m.c. se sintetizeaz o caten ADN complementar care este transcris n ARNm; la
v. ARN(+) genomul viral funcioneaz ca ARNm; la v. ARN(-) genomul este transcris n ARNm de catre ARNpolimeraza viral; la v. ARN d.c., una din catene este transcris de ctre ARN-polimeraza viral;
atasarea ARNm la ribozomii celulei gazd - sinteza proteinelor precoce implicate n replicarea
acidului nucleic viral.
5. REPLICAREA ACIDULUI NUCLEIC VIRAL
virusuri ARN: la virusuri m.c.(+) este sintetizat o caten ARN (-) cu ajutorul unei polimeraze
virale (proteine precoce) pe care sunt transcrise mai multe catene ARN (+) genomice; la virusuri m.c.(-) polimeraza
viral produce o caten ARN (+) pe care sunt transcrise mai multe catene ARN (-); la virusuri ARN d.c. are loc
sinteza de catene (+) care funcioneaz ca tipar pentru noi catene (-), restaurnd caracterul b.c. (d.c.) al genomului
viral.
Sinteza componentelor virale include replicarea genomului i sinteza de ARNm i sintezele proteice
Sediul replicrii: n citoplasm pentru virusurile ARN (cu exeptia virusului gripal) i n nucleu pentru cele
ADN (cu exceptia poxvirusurilor, care se replic n citoplasm). Replicarea se desfoar diferit, n funcie de tipul
de genom (clasificarea Baltimore).
Morfogeneza: La sfritul perioadei de sintez, ncepe asamblarea intracelular de virioni (asocierea acidului
nucleic la capsomerele sintetizate, pentru a forma nucleocapside).
Eliberarea. Virusurile nude sunt eliberate prin liza celulei gazd. Virusurile nvelite sunt eliberate progresiv,
NC nmuguresc prin zone ale membranei celulare n care au fost inserate glicoprteinele virale. Virusurile care
nmuguresc la nivelul membranelor intracitoplasmatice pot fi eliberate prin liz sau prin exocitoz.
Clasificarea Baltimore (VII clase)
Clasa I: virusuri ADN d.c. (adenovirusuri, papovavirusuri, herpsvirusuri, poxvirusuri). Formarea ARNm se
realizeaz prin transcriere asimetric este transcris o singur caten.
Decapsidarea final are loc n nucleu, nu citoplasm; Sinteza de ARNm controlat de ARN polimeraza II a
gazdei cu participarea de factori virali; faza precoce i tardiv a sintezei proteice sunt bine definite. Transcrierea
genelor proteice n nucleu i traducerea ARNm precoce n citoplasm cu sinteza proteinelor precoce; replicarea
AND viral i transcrierea genelor tardive i sinteza tardiv (prot i gp structurale). Asamblarea virionilor.
Clasa a II-a: virusuri mici, ADNm.c., cu polaritate pozitiv (parvovirusurile). Sinteza ARNm presupune
formarea unei catene ADN complementare (numit i antigenom), cu polaritate (-). Aceast caten va deveni prin
transcriere, ARNm.
2
Clasa a III-a: Virusuri cu genom ARN d.c., nesegmentat (reovirusurile). Ca si la cele ADN, transcrierea este
asimetric (se copiaz o singur caten) pentru a forma ARNm. Prin convenie, catena transcris este cea (-).
Virusuri cu genom ARN d.c. () , segmentat (rotavirus) are loc sinteza de caten pozitiv care intervine ca
matri pentru sinteza de noi catene (-) ; acestea restaureaz catena dubl.
Clasa a IV-a: Virusuri cu genom cu sens (+) m.c., continuu sau segmentat (picornavirusuri, flavivirusuri HVC,
HVA). Genomul ARN are caracter infectant n stare chimic pur. La aceste virusuri, replicarea are loc cnd se
acumuleaz suficient ARN- polimeraz: catena pozitiv este copiat n caten negativ care va servi ca matri
pentru catene pozitive progene. Urmeaz asamblarea virionilor prin ncorporarea ARN n capside iniial goale i
eliberarea exploziv a numeroi virioni prin liza celulei.
Clasa a V-a: Virusurile ARN cu genom m.c. (-), unic sau segmentat (orthomixovirusuri, paramixo-virusuri,
rhabdovirusuri, V. gripale). ARN polimeraza viral transcrie catena ARN (-) n caten ARN (+) (ARNm) sinteza
proteinelor virale asamblarea nucleocapsidelor eliberarea virusului prin nmugurire.
Clasa a VI-a: Virusuri ARN m.c., cu sens (+) dar care se replic diferit comparativ cu virusurile din clasa a IVa; prezint o reverstransciptaz viral. Replicarea retrovirusurilor: Dup decapsidare, genomul viral ARNm.c.
(+) este transcris de RT viral, n caten ADNmc (-) formarea ADNd.c. care poate servi ca matri pentru
transcrierea asimetric de ARNm si ARN viral progen sau se poate integra ca provirus n genomul celulei gazd cu
eventual maturare tardiv extracelular.
Clasa a VII-a: Virusuri ADN cu genom parial d.c. (Hepadnaviridae - VHB). O ADN-polimeraz a virionului
completeaz catena mai scurta chiar din citoplasm (nainte ca genomul sa ajunga n nucleu). n nucleu, genomul
este transcris de catre o transcriptaz celular pentru a sintetiza o molecul intermediar de ARN m.c. O RT viral
va sintetiza una din cele dou catene ADN, ulterior pe a doua. Sinteza catenei (+) este stopat (fenomen legat de
morfogeneza precoce a capsidei virale) i, de aceea, n final catena (+) va fi mai scurt.
CLASIFICAREA VIRUSURILOR
Dup tipul de acid nucleic
- cu genom ADN adenovirusuri: v. variolei, v. herpesului, bacteriofagul T4, v. hepatitei B,
- cu genom ARN ribovirusuri: V. poliomielitei, v. turbrii , HIV, v. gripei, v. Ebola, VMT (v. mozaicului
tutunului)
Dup dimensiuni (mici 20-50 nm, medii 50-150 nm, mari peste 150 nm)
Dup tipul de simetrie a capsidei (helicoidal, cubic, mixt)
Dup compozitia chimic (simple, complexe)
Dup gazd (om, animal, insect, bacterie)
Dup sensibilitatea n mediul extern, substane chimice, etc
Sub. 36
VIRUSURILE HEPATITEI
Hepatitele acute virale sunt inf sistemice cu afectare predominant a ficatului. Aproape toate cazurile de
hepatite virale acute sunt det de unul din cei 5 ageni virali: VHA, VHB, VHC, VHD, VHE. Alte virusuri cu
transmitere transfuzional: VHG, TT, F, SEN.
HVA Familia Picornaviridae genul Hepatovirus.
Structur: virus nud (nenvelit), cu simetrie icosaedric, cu genom ARN monocatenar cu polaritae pozitiv, cu
o singura variant antigenic major.
Rezistena la ageni fizico-chimici: Relativ rezistent la cldur, inactivat n 4 minute la 70C i imediat la 85C
cldur umed; Stabil la pH acid, dar inactivat de ctre un pH alcalin; Rezistent la tratarea cu alcool-eter i
cloroform; Inactivat de acid hipocloros, iod, hipoclorit de Na, KmnO4.
Gazde naturale: om i infecteaz experimental cimpanzeii - surs de Ag pentru diagnostic serologic.
Patogenie: Poarta de intrare: oral. Se replic primar n TG i n 1-2 sptamni infecteaz hepatocitele. Se
elimin n intestin odat cu bila, avnd o incubaie de 2-4 sptmni. Determin leziuni benigne, avnd evoluie
autolimitat i nu se cronicizeaz niciodat. Virusul este prezent n snge i materii fecale 2 sptmni nainte de
debut i 1-2 sptmni dup dispariia icterului. Persoanele asimptomatice sunt surse de virus.
3
Transmiterea este fecal-oral (ap i alimente contaminate). Colectivitile de copii precolari sunt surs de
infecie de cele mai multe ori. Se mai pot transmite sexul (homosexual) sau prin transfuzii de snge (donator aflat
n perioada de viremie cu o form subclinic de boal). Receptivitate general. Fact fav: aglomeraia, igiena deficit.
Tablou clinic: Determin forme clinice de severitate medie sau anicterice i rar hepatite acute fulminante
(necroz acut de ficat cu insuficien hepato-renal cu mortalitate 80-90%). Determin forme subclinice,
inaparente (90% din cazuri) persoane dificil de depistat surs de infecie (import din punct de vedere
epidemiologic). Perioada de incubaie = 2-4 sptmni. Perioada prodromal (preicteric) = 3-10 zile. Perioada de
stare = variabil. Semnele clinice i testele biochimice sugestive pentru o hepatit acut se pot remite n 4-8 spt.
Evoluie: HVA nu cronicizeaz niciodat, dar s-au descris forme colestatice prelungite cu febr, prurit, icter
prelungit, scdere n greutate. Complicaii: Rash cutanat (urticarian), meningoencefalit, sdr. Guillain-Barr,
insuficien renal, coplicaii hematologice i cardio-vasculare i rar forme fulminante. Imunitate este asigurat
de Ac anti-HVA care persist probabil toat viaa.
Diagnostic VHA
Teste nespecifice i specifice. Recoltarea, transportul i conservarea probelor: respectarea normelor de recoltare
i transport contribuie la meninerea nivelului real al Ac anti HVA (IgM sau totali). Conservarea probelor de ser la
4C nu scade titrul Ac timp de 3 spt. Cicluri repetate de nghe-dezghe duc la scderea titrurilor de Ac. Proba de
ser nu se menine mai mult de 5 zile la frigider (truse comerciale). Saliva, urina i bila sunt utile pt eviden de Ac.
Teste nespecifice:
Transaminaze, bilirubin nu difereniaz hepatitele virale ntre ele i nivelul ALAT crete brusc ntre 3003.000 UI/l i nu se coreleaz cu severitatea bolii. Bil total = 5-15 mg%; nivelul transaminazelor se normalizeaz la
4-6 luni; leucopenie, trombocitopenie cu anemie moderat, hipoalbuminemie, creterea timpului de protrombin.
Teste specifice: izolarea HVA si depistarea antigenic rmn de competena cercetrii tiinifice chiar i dup
adaptarea pe culturi de celule nu se obin cantiti mari de virus.
Diagnostic direct: evidenierea virionilor n materii fecale sau pe fragmente tisulare prin imun microscopie
electronic (cost ridicat).
Diagnostic indirect: dgn serologic:
- Ac IgM anti HVA evideniai prin ELISA semnific infecia acut sau recent (apar precoce i se
negativeaz dup 2-4 luni);
- Ac IgG anti HVA evideniai prin ELISA semnific trecerea prin boal; acetia persist toat viaa i sunt
protectori fa de o reinfecie.
IgM + i Ac anti HVA totali + =inf acut. IgM i Ac anti HVA totali + boal n antecedente cu imunizare.
Profilaxie nespecific =msuri de ntrerupere a transmiterii fecal-orale. Specific = administrare de
imunoglobuline numai n primele 2 spt de la expunere scade cu 80% apariia formelor icterice, dar nu i a bolii.
Vaccinarea selectiv (vaccin viu atenuat, inactivat sau obinut prin recombinare genetic) pentru grupe de risc.
HVE Virus cu transmitere fecal-oral (ca i HVA). ncadrat temporar n familia Calciviridae, genul
Herpesvirus.
Structur: virus nenvelit cu simetrie icosaedric cu genom ARN monocatenar cu polaritate pozitiv.
Poarta de intrare: oral Gazde mbolnviri la om; experimental la animale. Transmiterea este fecal-oral.
Clinic determin forme de severitate medie, cu evoluie autolimitat fr cronicizare.Similar cu VHA, mai ales
a adulii tineri i det forme fulminante la gravide. Imunitate: persistent, asigurat de IgG.
Diagnostic direct: posibil, dar inaccesibil n practica curent prin evidenierea ARN HVE prin PCR.
Diagnostic indirect:
evidenierea Ac anti HVE IgM/IgG prin ELISA sau evidenierea prin WB pt IgG, IgM, IgA.
Ac IgM anti HVE apar precoce i dispar dup 8 luni.
Ac IgG anti HVE apar i ei din perioada acut i persist mult timp (se pare c sunt protectori: nu exist
reinfecie la cei cu Ac anti HVE prezeni).
Tratament: nu exist.
Epidemiologie: Poarta de intrare: oral. Transmiterea este fecal-oral. Receptivitate: general. Vaccin nu
exist nc.
4
infecia este mai mica cu att cresc ansele de a rmne purttori sntoi de Ag HBs. Complicaiile tardive ale
hepatitei B sunt grave: ciroze hepatice ca rezultat al hepatitei cronice active; carcinom hepato-celular la 25% din
indivizii Ag HBs pozitivi. Risc de 200-300 de ori mai mar pt purttorii de Ag HBs dect la non-purttori. Factorul
carcinogen este integrarea fragmentelor de ADN n genomul hepatocitului. Integrarea se realizeaz dup circa 2 ani
de infecie cronic, iar transformarea malign dup circa 20-30 de ani de portaj de Ag HBs.
Forme clinice Asimptomatice: 1 caz clinic manifest din 4; Infecie acut autolimitat; Infecie cronic
(persistent sau agresiv); Ciroz hepatic; Cancer hepatocelular primar (CHP); Forme fulminante (0.5 1%);
Purttori sntoi de AgHBs (Ag HBs > 6 luni , clinic, paraclinic normal, evol spre CHP dup 20-30 de ani).
Diagnostic
Nespecific transaminaze crescute, bilirubina crescut, fosfataza alcalin nu crete mai mult de 3 ori dect
normal, albumina seric scade, Fe seric uor crescut. Hematologic: leukopenie, limfopenie, neutropenie, VSH
crescut. Timpul de protrombin este alungit n forme severe.
Specific
Direct: evidenierea virionului prin IME;
evid. genomului VHB prin PCR;
evid. Ag HBs, Ag Hbe prin imunohistochimie;
evid. Ag HBc numai intra-hepatocitar.
Evid Ag HBs, Ag HBe n serse poate face printr-un nou test de tip ELISA care determin Ag HBs, Ag HBe
din sngele total, ser, plasm. Este un test rapid cu sensibilitate i specificitate foarte bune, detecteaz simultan Ag
HBs, Ag HBe n 10 min.
Alt test pt detectarea Ag HBcr precursor al Ag HBc i al Ag Hbe, produs n reg. pre-C/C, marker fidel al
ncrcrii virale, prezena Ag HBcr se coreleaz cu nivelul AND VHB (10 5 10 9 /ml).
Indirect: Ac anti HBc IgM inf acut sau recent
- Ac anti HBc totali dovada trecerii prin boal
- Ac anti Hbe evol favorabil cu potenial infecios redus al sngelui
- Ac anti HBs ultimii care apar singurii protectori mpotriva unei noi infecii.
Ca tehnici de dgn indirect: ELISA, HAPI hemaglutinare pasiv indirect pt urmrirea Ag HBs (indic
infeciozitatea sngelui n boala acut, cronic sau portaj) ; HAP evid. Ac anti HBs (indic imunizare); RIA, IF.
Tratament antiviral eficient nu exist
Epidemiologie Sursa de inf bolnavi cu infecie acut sau cronic aparent sau inaparent. Transmitere
predominant parenteral; sexual, transplacentar sau prin secreii (sperm, saliv, secreii vaginale, lapte matern
risc de 100-1000 de ori mai mic. Grupe de risc: personal medical
Profilaxie nespecific i specific (vaccinarea cu vaccin clonat n levur). n Romnia, vaccinarea este
obligatorie, la natere 3 doze (la natere, la 2 luni i 6 luni). Revaccinri: selective pt personalul medical sau
electice pt pacieni cu hemofilie sau dializai.
VHD Este un ARN virus defectiv, necesit pentru replicare i iniierea infeciei, prezena VHB, mai exact a
AgHBs. Genom ARN m.c. circular i cu o anvelop ce conine Ag delta, codificat de propriul genom.
Forme de boal:
Coinfecia: transmiterea simultan a celor 2 virusuri. De regul, nu se cronicizeaz. n faza acut este posibil
evoluia sever a infeciei.
Suprainfecia pe teren Ag HBs pozitiv (purttor sntos, infecie acut sau cronic). Poate determina forme
fulminante, iar formele cronice sunt frecvente. n hepatita cronic cu VHD, leziunile hepatice sunt severe, ducnd
la ciroz hepatic. Apar Ac anti VHD IgM i Ac anti VHD totali.
Diagnostic numai pt pacienii Ag HBs +. Direct evidenierea ARN sau Ag delta (rar) prin PR. Indirect
Ac anti VHD (IgM, IgG) sau Ac anti Ag Delta.
Profilaxie specific prin vaccin anti VHB
Transmitere parenteral
VHC Familia Flaviviridae, Genul Hepacivirus. Este un virus ARN, nvelit cu genom ARN m.c. pozitiv.
Genomul viral are caracter infectant n stare chmic pur i are funcie de ARN mesager. S-au descris mai multe
tipuri antigenice (6 grupe antigenice). Transmitere parenteral i mai puin probabil sexual sau perinatal
(transplacentar). Perioada de incubaie: 2-4 luni, dup care poate evolua asimptomatic i anicteric, rar existnd un
sindrom preicteric. Transaminazele cresc de 3-50 de ori peste normal. 50% din cazuri se cronicizeaz. 20% din
cazuri ajung la ciroz hepatic i dup o perioad de laten de 20-30 de ani se ajunge la CHP.
Manifestri asociate hepatitei cu VHC: vasculite, artrite, GN, anemie aplastic, fibroz pumonar, limfoame
non-Hodgkiniene ca urmare a unei sensibilizri de tip III prin CIC sau se datoreaz ECP ale replicrii HC n celule
extra-hepatice.
Variabilitatea genetic/antigenic se datoreaz unor gp. de suprafa (E1 i E2 ) se selecteaz noi variante
care perpetueaz infecia dificultatea obinerii unui vaccin.
Diagnostic
Direct: evidenierea ARN VHC prin RT-PCR; evid Ag de miez prin ELISA
Indirect: evid. Ac prin ELISA i confirmare prin RIBA ( Recombinant Immunobinding Assay evideniaz
clasa Ac reactani).
Algoritm de dgn: evidenierea Ac anti HVC prin 2 teste ELISA (repetat serul reactiv). Confirmare prin RIBA
(Recombinant Immunobinding Assay) care poate fi: pozitiv (prezena a 2 categorii de Ac), negativ sau indeterminat
(prezena unei singure categorii de Ac).
Prezena Ac anti VHC poate reprezenta infecie acut sau cronic, trecerea prin boal sau rezultat fals pozitiv.
Tratament: IFN + ribavirin se evalueaz rspunsul la trat. rsp favorabil ARN VHC sczut, Ac sczui,
ALAT sczut, absena leziunilor hepatice; Rsp salb ciroz hepatic, GGT crescute, Fe seric crescut, Ac antinucleari crescui. Contraindicaii ale terapiei cu IFN: ciroz hepatic decompensat, hepatita autoimun, prezena
bolilor cardio-vasculare
Epidemiologie Transmitere parenteral. Nu exist vaccin.
Sub. 37
Diagnosticul de laborator n HIV
Produs patologic: snge integral (ser, plasm), LCR, saliv, urin. Lapte matern, secreii vaginale, probe
biopsice. Probele se pot conserva la -30C pn la -70C. Cultivarea presupune conservarea probelor n azot lichid.
Diagnostic direct. Cultivarea este posibil (dar nu se cultiv) prin cocultivare. Detectarea i determinarea
Ag p24 prin ELISA. Detectarea ADN proviral n limfocite sau ARN viral plasmatic prin PCR utiliznd primeri
specifici.
Diagnostic serologic se folosete pentru diagnosticul infeciei cu HIV sau pentru triajul donatorilor de
snge.
I. Teste de triaj imunoenzimatice
- pe membran tip Immunodot, este uor de realizat, nu necesit personal calificat, aparatur
electronic. Obligatoriu trebuie confirmat prin ELISA.
- Latex aglutinare utilizeaz bile coafate cu Ag obinute sintetic (se testeaz snge integral sau ser).
Rezultatul testului este comparat cu martorul negativ al trusei. i aceste se confirm prin ELISA, este uor de
realizat i nu necesit echipament electronic.
- ELISA cel mai utilizat - metoda indirect/competitiv. Serul trebuie s fie repetat reactiv 5 teste
i cofirmare prin WB/IF. Rezultate fals negative se obin dac testul e efectuat naintea seroconversiei, la pacieni
imunodeprimai, tardiv n stadiul SIDA (scadAc anti p24 sau chiar dispar i este decelabil din nou Ag p24). Testele
pt detectarea Ac anti HIV1 nu pot detecta Ac anti HIV2. Rezultatele eronate mai sunt generate de unele grupe de
pacieni: hemofilici, hemodializai, pacieni cu mielom multiplu, boli autoimune.
ELISA indirect pe suprafa sunt fixate Ag HIV care se vor lega de Ac anti HIV din ser-bv. Se adaug Ac
anti-globulin uman (anti IgG) marcat enzimatic i se urmrete reacia de culoare: absena culorii rezultat
negativ; colorare reacie pozitiv activitatea enzimatic msurat e proporional cu concentraia Ac dozai.
ELISA competitiv pe suprafa sunt Ac anti HIV, respectiv Ig anti p24. Se adaug ser-bv care conine Ag
p24 i Ac anti HIV marcai enzimatic. Activitatea enzimatic msurat este invers proporional
II.
Teste de confirmare WB, IF
WB este un test semicantitativ: intensitatea culorii benzii este proporional cu concentraia de Ac. Proteinele
virale (antigenele) sunt separate prin electroforez n gel de poliacrilamid i apoi transferate pe benzi de
nitroceluloz ce vor reprezenta faza fix la care vor adera anticorpii eventual prezeni n prob. Astfel obinem
profilul serologic complet , pe categorii de anticorpi fa de structuri antigenice diferite (ale genelor : gag, env i
pol) scznd riscul rezultatelor fals pozitive (care se reduce la 0.05%).
Criterii de interpretare WB :
EX: 2 categorii de Ac (env) +/- gag +/- pol
(datorit replicrii virale) edem i infiltrare mononuclear dezorganizarea transportului muco-ciliar deschide
calea complicaiilor prin suprainfecie bacterian cu S. pneumoniae, S. aureus, H. influenzae.
Clinic, posibilitile evolutive sunt variate: de la afeciuni respiratorii moderate la faringite, rinite. Pot evolua i
asimptomatic. Debut brusc cu febr i tuse, dureri musculare generalizate, anorexie, astenie, frisoane, cefalee.
Febra dureaz de obicei 3 zile simptomatologia se remite ntr-o spt dar tusea i astenia pot persista. Aduli
debut cu febr, frison, cefalee, durere n gt, tuse uscat, mialgii, astenie, anorexie. Febra 38-40C la 24 de ore de
la debut. n ultimul timp au evoluat virusurile gripale H1N1, H2N2, H3N2 i B. n general, virusul gripal B
determin inf mai puin severe dect virusul gripal A. La btrni: anorexie, lentoare, febr neexplicat, astenie,
rinit. Copii i nn: virusurile gripale A i B sunt ageni etiologici importani att pt TRS ct i pt TRI.
Simptomatologia este asemntoare cu cea a adultului, dar pot aprea i tulburri gastro-intestinale (durei abd,
vrsturi, diaree), miozite, otita medie. Inf la nn este posibil fatal manif prin febr de etiologie neprecizat.
Complicaii TRS: sinuzite bact, otite medii, exacerbarea unor boli pulm cronice obstructive, ICC, crup,
bronite. Pneumonia este rar determinat de virus gripal i const n suprainf bacterian cu S. pneumoniae, S.
aureus, H. Influenzae. S. aureus are o proteaz care cliveaz hemaglutinina i crete astfel titrul infecios al
virusului gripal din plmni aa se explic mortalitatea mare a pneumoniei cu suprainfecie cu S. aureus.
Sindromul Reye (encefalomielit asociat cu insuficiena hepatic acut) reprezint o posibil complicaie
extrarespiratorie n infecia cu v. gripal B la copii care au primit aspirin sau derivai ai acidului salicilic ( ca
antipiretic).
Diagnostic direct
Prod patologic
exsudat faringian, nazal, lichid de spltur faringian/nazofaringian/bronic,secreii nazale recoltate ct mai precoce (primele 3 zile de boal). Probele sunt transportate ct
mai rapid pt prelucrare imediat, sau, dac nu este posibil, roba se consev la 4C dar nu se congeleaz.
La copil, aspiratul NF este util att pt izolarea virusului ct i pt dgn direct prin evidenierea Ag n prob.
Izolare i identificare:
o cultivare pe ou embrionate (OE): embrionate de 10-11 zile: se inoculeaz produsul patologic n cavitatea
amniotic pt adaptarea la noua gazd, apoi se practic pasaje succesive prin inoculare n cavitatea alantoidian pt a
crete ansele de a se obine cantiti mai mari de Ag. Se incubeaz la 33C, 3-5 zile identificare n lichidul
alantoidian.
o cultivare pe culturi de celule (cc): primare de rinichi de maimu sau de cine, celule Vero se incubeaz
la 33C, apar ECP nespecifici dup 4 zile.
Identificarea Ag izolate pe gazde vii se face prin RFC (pt Ag specifice de grup)sau/i prin RIH cu hematii de
gin, reacia de hemadsorbie, IF, ELISA (Ag de tip).
Metode directe
1. IF identif se face pn la nivel de tip (A/B). Dezavantaje: pre prohibitiv, test laborios care presupune
dotare tehnic i personal calificat.
2. ELISA avantaje: ieftin, automatizat, nu presupune prezena de celule intacte, utilizeaz direct prod
patologic sau separat ELISA dip o inoculare iniial pe cc. Dezavantaj: identific subtipul.
3. Teste imunoenzimatice de tip directigen asemntor cu ELISA recaie de culoare
4. RT-PCR util cnd exist epidemie cu evoluie rapid n populait a unui nou subtop.
Dg serologic: RFC, RIH, IF, RN, ELISA (cea mai sensibil). Se recolteaz seruri ct mai precoce i ser n
convalescen pt a urmri criteriile de valoare diagnostic: seroconversia i dinamica semnificativ.
Tratament: Simptomatic: analgezice, antitusive, antipiretice (la copii acetaminofen i nu salicilai).Antiviral de
elecie amantadina i rimantadin (la cei cu insuficien renal) reduc perioada de boal a jumtate. Pt profilaxia
i terapia suprainfeciilor bacteriene antibiotice.
Epidemiologie:Variabilitatea antigenic duce la apariia de noi subtipuri. Populaia expus: copiii sunt mai
afectai. Epidemiile sunt anuale i au loc n sezonul rece. Variaiile antigenice minore determin izbucniri
epidemice, iar cele majore pandemii.
Profilaxie:Vaccinarea se face n perioada preepidemic la grupe de risc: persoane >65 de ani, gravide dup
trimestrul I, copii prematuri, distrofici, malformaii, persoane cu afec cr pulm, DZ, boli cardio-vasculare.Scopul
vaccinrii este producerea de Ac neutralizani anti-H i anti-N. Tipuri de vaccin: vaccin integral inactivat dac e
obinut de pe embrion de gin CI la cei cu alergii la proteinele din ou; vaccin viu atenuat i corpuscular
(conine numai H i N).
9