Spectrometria

de masa
Memet Indira
Biochimie, an II

Spectrometria de masa este una dintre cele mai importante

tehnici analitice de identificare si caracterizare a moleculelor.

Principiul acestei tehnici consta in ionizarea substantei de

analizat si masurarea raporturilor masa/sarcina (m/e) ale
fragmentelor ionice rezultate.

Schema generala a unui spectrometru de masa

Un spectrometru de masa cuprinde :
-

injectorul probei
camera de ionizare
analizorul
detectorul de ioni
inregistratorul

Mod de functionare
Moleculele organice aflate in faza de vapori sunt bombardate cu un fascicul de
electroni, pentru a fi transformate in ioni pozitivi cu energie nalta.
Datorita continutului energetic ridicat,
ionul va suferi procese complexe de
fragmentare, ce vor conduce la formarea
de fragmente ionice.
Ionii formati in sursa de ioni sunt accelerati
sub actiunea unei diferente de potential,
realizata intre doi electrozi, si ajung apoi la
analizor, care ii separa n functie de raportul
m/e, dupa deviere intr-un camp magnetic
variabil.
Curentul de ioni ajunge la inregistrator, care
furnizeaza astfel spectrul de masa.

Ecuatiile SM

Energia cinetica a ionului de masa m si sarcina e, accelerat la diferenta de potential V

este egala cu energia sa potentiala :

Ec==eV
Forta centrifuga a ionului (care are o miscare circulara intr-un camp magnetic
perpendicular pe directia sa de deplasare)

F=/r
Camp magnetic aplicat (forta centripeta exercitata de magnet)

F=Be
Din aceste ecuatii rezulta ecuatia fundamentala a SM,

m/e= /2V
care arata ca raportul m/e depinde de 3 parametri : B, r, V
De obicei, B si r sunt constante, de unde rezulta ca separarea ionilor in functie de
raportul m/e se realizeaza prin variatia V.

Camera de ionizare este una dintre cele mai importante

componente ale spectrometrului de masa.
In functie de modul de realizare a ionizarii exista :

surse de ionizare prin bombardament electronic (impact electronic, electronic

impact, EI);

surse de ionizare prin coliziunea probei cu ioni furnizati de sursa (ionizare

chimica, chemical ionization, CI);

surse de ionizare prin bombardament cu un fascicul de ioni sau molecule neutre

(Liquid Secondary Ion Mass Spectrometry, LSIMS si Fast Atom Bombardment,
FAB);

surse de ionizare cu ajutorul laserului (Laser Ionization Mass Analysis, LIMA si

Matrix Assisted Laser Desorption Ionization, MALDI);

ionizare prin dispersarea unor solutii sub forma de picaturi fine (termospray, TSP
si electrospray, ESI);

Analizorul
Ionii produsi de catre sursa de ioni sunt dirijati catre analizor, care are rolul sai separe functie de raportul masa/sarcina.
In prezent sunt utilizate patru tipuri principale de analizoare de masa bazate
pe:

campuri magnetice si electrice;

timp de zbor;
filtre quadripolare;
rezonanta ciclotronica.

Detectorul

Dupa traversarea analizorului de masa, fasciculul de ioni trebuie detectat si

transformat intr-un semnal utilizabil. Detectorul transforma un curent ionic slab
(10-9 A) intr-un curent electric, care este apoi amplificat si inregistrat.

In prezent se utilizeaza detectoarele multiplicatoare de electroni sau de

fotoni si detectoarele cu microcanale. Aceste detectoare prezinta o
sensibilitate foarte ridicata (pot detecta chiar si un singur ion sosit la
detector);

De retinut!
Etape comune tuturor tipurilor de SM :

1.

Incarcarea probei in aparat si vaporizarea acesteia.

2.

Ionizarea componentelor probei

3.

Separarea ionilor in functie de raportul m/e, in analizor

4.

Detectia ionilor

5.

Procesarea semnalului intr-un spectru de masa

Spectre de masa
Spectrul de masa este o caracteristica a
fiecarui compus, iar identificarea ionilor
rezultati in cursul fragmentarii permite, de
multe ori, stabilirea completa a formulei
structurale.

Spectrul de masa al H20

In urma ionizarii H20 (de exemplu, prin
bombardare cu electroni) rezulta ionul
molecular [H20]+
Acest
ion
va
suferi
procese
de
fragmentare. In cazul H20 singurele
fragmente posibile sunt [OH]+, H+, O+.
Astfel fiecare peak din spectru poate fi
asociat unui fragment ionic in functie de
raportul masa/sarcina.

Avantaje
- necesita cantitati mici de proba (sub 1mg); poate analiza probe de ordinul
picogramelor(10-12 g)
- poate fi combinata cu tehnici de cromatografie (GC sau LC)
- are capacitatea de a diferentia izotopii

Dezavantaje
- proba este transformata chimic, devenind irecuperabila
- necesita compusi cu puritate ridicata

Aplicatii
Spectrometria de masa are o gama larga de aplicatii, in domenii variate.
Poate fi utilizata pentru : identificarea unor compusi necunoscuti,
determinarea izotopilor prezenti intr-un compus, cuantificarea unui compus
dintr-o proba, determinarea unor proprietati fizice, chimice, biologice ale
compusilor.
Este utilizata in domeniul :
biologiei
medicinei
arheologiei
astrofizicii
si altele

Aplicatii in biologie (proteomica)

Identificarea proteinelor

Peptide Mass Fingerprinting

In aceasta tehnica, proteina de interes este scindata in peptide mici, a caror masa poate
fi determinata cu ajutorul spectrometrului de masa. Aceste mase moleculare sunt
comparate cu baze de date continand proteine cunoscute. Acest lucru se realizeaza cu
ajutorul unor programe care taie proteinele in peptide si calculeaza masele tuturor
peptidelor rezultate dintr-o proteina. Apoi, se compara masele peptidelor rezultate din
proteina necunoscuta cu masele peptidelor proteinelor din baza de date. Programul
gaseste cea mai buna potrivire din punct de vedere statistic.

Secventierea proteinelor
Spectrometria de masa in tandem poate fi folosita impreuna cu metode de
fragmentare, cum ar fi digestia cu tripsina. Astfel, sunt generate peptide de diferite
lungimi care se suprapun pe anumite portiuni. Diferenta de masa dintre 2 peakuri
suprapuse este folosita pentru determinarea diferentelor in secventa la nivelul
acelor regiuni, folosind tabele cu masele moleculare ale aminoacizilor. Secventele
se determina folosind algoritmi de cautare, conectati la baze de date, cum ar fi,
International Protein Index.

Analiza glicanilor
Datorita sensibilitatii ridicate si cantitatii mici de proba pe care o necesita, spectrometrul
de masa este utilizat si in glicobiologie, pentru caracterizarea si elucidarea structurii
glicanilor. Spectrometria de masa reprezinta, in acest caz, o alternativa la HPLC.

Aplicatii in domeniul medical

Teste antidoping
Spectrometria de masa poate fi utilizata in testele antidoping. O proba de urina este introdusa in aparat, care
testeaza prezenta steroizilor sau a altor compusi rezultati din metabolizarea steroizilor. Aceste substante pot fi
detectate chiar si la saptamani de la ultima doza, in functie de cantitatea ingerata.

Teste toxicologice
Combinarea spectrometriei de masa cu gaz-cromatografia este o metoda foarte buna pentru detectarea unor
cantitati infime de contaminanti sau toxine .

Detectia biomarkerilor tumorali

Tumorile pot determina aparitia unor proteine marker prezente in diverse fluide corporale. Astfel, spectrometria de
masa este folosita pentru detectia timpurie a cancerului, prin analiza acestor fluide. Analiza pe baza spectrometriei
de masa este folosita in prezent pentru detectia cancerului ovarian, de san si de prostata. Organismul afectat
prioduce cascade de amplificare specifice, iar determinarea profilurilor proteice cu ajutorul SM poate indica aparitia
si cresterea celulelor tumorale.

Diagnosticul afectiunilor congenitale

Spectrometria de masa este o tehnica indispensabila pentru diagnosticarea bolilor congenitale, la nou-nascuti. Un
avantaj al acestei tehnici este dat de faptul ca necesita o singura picatura de sange. Afectiunile care pot fi detectate
includ boli metabolice (fenilketonuria), hematologice (anemia falciforma), endocrine (hipotiroidism congenital)

AMS si datarea cu carbon

Spectrometria de masa cu ioni accelerati(AMS) difera de celelalte forme de SM prin faptul ca acceleraza ionii la
viteze foarte mari. O calitate deosebita a acestui tip de SM este capacitatea de a separa un izotop rar dintr-o
masa foarte mare de compusi( de exemplu un atom de 14C din mii de miliarde de atomi 12C).
Aplicatiile acestei tehnici sunt numeroase. Cel mai des, AMS este folosit pentru determinarea concentratiei de
14C de catre arheologi in tehnica numita datare cu carbon. Datarea cu carbon este o metoda radiometrica de
datare ce utilizeaza izotopul natural de carbon, 14C pentru a stabili varsta materialelor organice.
Inainte de dezvoltarea AMS probele erau datate prin numararea dezintegrarilor radioactive. In prezent se
foloseste spectrometria de masa, care are ca avantaj faptul ca necesita cantitati mai mici de proba(mg) si este o
metoda mult mai precisa.

In prezent, spectrometrele de masa sunt o componenta comuna a navetelor spatiale si satelitilor.

Satelitul
SOHO
(Solar
and
Heliospheric
Observatory) foloseste un tip special de
spectrometru de masa pentru a analiza vantul
solar -CELIAS.
Vantul solar contine H si He in proportie de 99.9%,
iar cu ajutorul spectrometrului de masa
performant de la bordul satelitului s-au detectat
izotopi de Si, S, Ca, Fe, Ni, Ne, Cr in compozitia
vantului. Acesti izotopi ofera indicii despre locul
de origine a vantului solar in structura Soarelui.

NASA image of the Sun from the SOHO satellite,

January 12, 2007

Naveta spatiala Cassini are in componenta 12 instrumente

de analiza printre care se regaseste un spectrometru de
masa.
Spectrometrul de masa de tip INMS(Ion and Neutral Mass
Spectrometer ) colecteaza informatii pentru a determina
compozitia si structura ionilor pozitivi si particulelor neutre
de pe Saturn si satelitul sau natural, Titan. Acest instrument
este capabil sa determine compozitia chimica, elementala
si izotopica a componentelor din atmosfera si ionosfera
satelitului Titan si din magnetosfera planetei Saturn.
Cassini a revelat existenta unor vaste lacuri de metan
precum si a unor dune de hidrocarburi pe suprafata
Titanului.