CARACTERISTICI GENERALE ALE BIOTEHNOLOGIILOR APLICATE N

INDUSTRIA DE MEDICAMENTE
Principalele elemente specifice biotehnologiilor aplicate n industria de medicamente
1. Se bazeaz pe procese biocatalitice, n care rolul de biocatalizator este ndeplinit de ageni
biologici:
Complecsi - celule de microorganisme viabile (intreg sistemul lor enzimatic)
Simpli - enzime izolate, mai mult sau mai putin pure
2. In funcie de tipul de agent biologic utilizat, se disting tehnologii bazate pe:
A. Procese de fermentaie sau biosintez microbian
- agentul biologic (biocatalizatorul) este celula microbiana viabila, respectiv sistemul enzimatic
complex al acesteia
- aceste procese sunt n fond reacii chimice n lan de descompunere i sintez, catalizate
multienzimatic, care au loc practic simultan ntr-un singur reactor (spre deosebire de procesele
chimice cu catalizatori chimici, n care fiecare reacie se desfoar separat ntr-un reactor
adecvat).
B. Procese de sintez enzimatic:
- agentul biologic (biocatalizatorul) este o singura enzima, de obicei de origina microbiana;
- sunt utilizate pentru transformarea unui compus chimic, (substrat al unei reaciei enzimatice)
ntr-un alt compus, cu structur nrudit, biologic activ sau util ca intermediar pentru obinerea
de compui biologic activi;
- se bazeaz pe o singur reacie catalizat de o anumit enzim, ce poate fi utilizat n form
pur sau sub form de mas celular cu activitatea enzimatic necesar;
- fa de procesele de sinteza cu catalizatori chimici, au avantajul de a fi stereoselective
3. Parametrii fizico-chimici de lucru specifici proceselor de fermentaie i sintezelor enzimatice
sunt de regul apropiai de condiiile mediului ambiant (temperaturi cuprinse ntre 270C-370C,
presiune atmosferic, pH apropiat de cel fiziologic)
4. Limitele de variaie a valorilor optime, determinate experimental, ale parametrilor tehnologici,
sunt mai restrnse i mai stricte dect n cazul proceselor chimice.
5. Produsele finale ale biotehnologiilor se obin de regul
n concentraii relativ sczute;
sunt uor degradabile sub aciunea unor factori fizici, chimici sau microbiologici;
izolarea acestora se realizeaz cu ajutorul unor tehnici si metode specifice de:
- filtrare,
- extracie,
- concentrare,
- purificare
6. Performane tehnicilor de izolare si purificare trebuie s corespund necesitii de a recupera
produsul biotehnologic cu randamente ct mai mari i ntr-un grad de puritate ct mai avansat.
Elemente de comparaie a proceselor industriale de sintez chimic cu cele de biosintez
Caracteristici ale procesele industriale de sintez chimic:
reacii chimice clasice desfurate n reactoare special destinate acestui scop;
materiile prime de baz sunt compui C1 C4 sau compui aromatici C6 C8, care, in
general nu se gsesc ca atare n natur sau se gsesc n cantitate insuficient, astfel c sunt
produse tot n industria chimic sau petrochimic, prin descompunerea hidrocarburilor
superioare (fraciuni ale uleiurilor minerale);
reaciile de sintez sunt clar definite ca reacii ce decurg ntr-o singur etap i pentru a se
obine cantiti mari de produs de sintez, se pot realiza n sistem continuu;
1

 in mod obinuit, catalizatorii chimici sunt folosii pentru a crete viteza i selectivitatea
acestor reacii;
dac o materie prim nu poate fi transformat direct ntr-un anumit produs, ci din aproape n
aproape, trecnd prin mai muli produi intermediari, atunci fiecare sintez de intermediari
constituie o etap distinct i se realizeaz separat, n reactoare specifice.
Procesele de fermentatie:
se datoreaza activitatii biochimice a microorgenismelor;
materiile prime prelucrate in cazul acestor procese sunt componente ale mediului nutritiv, de
cultivare;
mediul de cultivare este deseori complex i nu ntotdeauna foarte bine caracterizat (spre
deosebire de materiile prime din procesele chimice)
drept surs de carbon se folosesc compuii C6, polimeri sau oligomeri ai acestora;
compuii C6 sunt metabolizai prin catabolism, transformndu-se n diferii intermediari i
compui cu greutate molecular mic, aceste transformri genernd energie biochimic, sub
form de ATP.
simultan cu procesele catabolice (de degradare) au loc i procese anabolice, adic sinteze de
produi ce intr n constituia materialului celular sau produse extracelulare (ADN, proteine,
enzime, polizaharide, antibiotice, etc.), care se obin cu aport de energie, furnizat de ATP;
produsele utile ale proceselor industriale biochimice sunt fie biomasa ca atare, fie polimeri
intra sau extracelulari, fie alti metabolii primari sau secundari.
n bioprocese, reaciile de descompunere i cele de sintez decurg simultan, n acelai
reactor, n mai multe etape, a cror complexitate este mult mai mare dect a reaciilor de
sintez chimic i conduc la produi deseori inaccesibili prin metode chimice.
din punct de vedere tehnologic, bioprocesele nu au selectivitate foarte mare (avand in vedere
numrul mare de produse obinute simultan n urma activitii metabolice a
microorganismelor).
selectivitatea bioproceselor industriale se exprimat prin productivitate si se realizeaz de
cele mai multe ori prin:
- ameliorarea tulpinilor,
- dirijarea adecvat a fermentaiei,
- utilizarea unor metode eficiente pentru recuperarea din mediul final de fermentaie a
produsului de biosintez urmrit.
selectivitatea, deseori menionat, a proceselor biochimice se refer de fapt la reaciile
simple, catalizate enzimatic.
Etapele tehnologiilor bazate pe procese de fermentaie
1. prepararea mediilor de cultur pentru precultivri (inoculator, intermediar) i cultivarea
principal (regim);
2. sterilizarea mediului, a fermentatoarului i a echipamentelor auxiliare;
3. prepararea inoculului (cultura activ i pur);
4. cultivarea microorganismului i formarea produsului n fermentator (fermentaia propriuzis);
5. prelucrarea mediului de fermentaie n scopul izolrii produsului urmrit
6. neutralizarea i eliminarea efluenilor, a reziduurilor i a deeurilor cu respectarea normelor
de protecie a mediului nconjurtor
.

MATERII PRIME SPECIFICE TEHNOLOGIILOR DE FERMENTATIE DIN INDUSTRIA

DE MEDICAMENTE

furnizeaza agentului biologic substratul nutritiv necesar desfurrii activitii metabolice.

sunt reprezentate de produsele din care se prepar mediile de cultur industriale
Criterii de alegere a materiilor prime pt. tehnologiile de fermentatie

Particularitile fiziologice ale microorganismului;

formularea corect a mediilor de cultura presupune alegerea unor materii prime adecvate
fiecrui microorganism n parte, n funcie de influenele pe care acestea le exercit asupra
creterii biomasei microbiene i de posibilitile de a fi metabolizate de ctre
microorganisme.
Preul de achiziie a materiei prime;
n general, preul materiilor prime fluctueaz destul de mult, i din acest punct de vedere,
materiile prime trebuie astfel alese nct contribuia lor la preul de cost al produsului s fie
ct mai mic, lund n considerare raportul calitate-pre.
Accesibilitatea materiei prime;
se refer la posibilitatea achiziionrii n mod curent a unei materii prime cu caliti
constante
Gradul de standardizare al materiei prime
influeneaz reproductibilitatea rezultatelor: aceeai tulpin, n aceleai condiii de
fermentaie, are o productivitate diferit n funcie de caracteristicile fizico-chimice ale
componetelor mediului de cultur.
este important ca materiile prime folosite ca substrat n bioprocesele din industria de
medicamente se fie caracterizate prin coninutul procentual, mai ales n azot i carbon,
precum i n diverii compui utili (glucide, aminoacizi, proteine, factori de cretere, etc).
Corelarea cu produsul de biosinteza urmarit
Vitamina B12 conine cobalt, astfel c mediul pentru biosinteza ei trebuie s conin acest
element, sub forma srurilor sale.
Clorul este un element care trebuie s fie inclus n mediile folosite pentru producerea
antibioticelor coninnd clor, precum clortetraciclin sau grizeofulvin.
Acidul fenilacetic sau unul din echivalenii si metabolici (de ex. N-feniletanolamina)
trebuie furnizai ca precursori n cazul producerii benzilpenicilinei.
Clasificarea materiilor prime pt. tehnologiile de fermentatie
n funcie de natura i proveniena lor:
organice si anorganice
naturale i artificiale (de sintez)
Materii prime folosite ca surse de energie i carbon
aproximativ 50% din greutatea uscat a celulelor microbiene este reprezentat de carbon
microorganismele ncorporeaz carbonul din substrat, n materialul celular, n proporii
diferite, n funcie de tipul de respiraie:
aproximativ 10% prin metabolism anaerob i
50-55% prin metabolism aerob,
se poate calcula concentraia sursei de carbon din mediu astfel nct aceasta s furnizeze
cantitatea de carbon necesar pentru a obine o anumit cantitate de biomas.
monoglucide (glucoz, xiloz),
diglucide (zaharoz, lactoz, maltoz)
poliglucide (amidon, dextrine)

substane pure, produse sau subproduse agroalimentare cu un coninut ridicat n glucide

(sirop de glucoz, melas, fin de cereale, tre).
acizi carboxilici ca: acid acetic, acid propionic, acid succinic, acid lactic,
grsimi i acizi grai.
n general materiile prime bogate n celuloz au puine aplicaii n industria de medicamente
pentru c puine organisme productoare de substane de interes farmaceutic au activitate
fa de acest substrat
Glucoza
cunoscut i sub denumirea sinonim de dextroz, este folosits ca surs de carbon i
energie pentru obinerea de:
- antibiotice
- intermediari steroidici
- polizaharide microbiene (xantan, dextran, pullulan),
- glicoproteine
Materiile prime comerciale coninnd glucoz sunt:
siropul de glucoz (32-50% glucoz);
glucoza solid brut (65-66% glucoz);
glucoza pur cristalizat ca dihidrat, cu un coninut de 99-100%;
glucoza din amidon de cartofi sau cereale avnd urmtoarea compoziie:
- 65 66% D-glucoz,
- 3% D-fructoz,
- 9 10% maltoz,
- 22% dextrine,
Efectele secundare, cum ar fi inhibiia de substrat, induse n anumite cazuri de prezena
glucozei (de exemplu n cazul producerii unor metabolii secundari, ca penicilinele) pot fi
diminuate pe dou ci:
adugarea glucozei n poriuni, pe ntraga durat de cretere a microorganismelor, astfel
nct concentraia acesteia s se menin sub limita de inhibiie, dar s se asigure viteze
maxime de cretere a biomasei;
utilizarea alternativ (In anumite faze ale bioprocesului) a glucidelor care se metabolizeaz
cu vitez redus, precum lactoza, care prin hidroliz elibereaz galactoz i glucoz n
concentraii mai mici dect valoarea de inhibiie
Melasa
Este un subprodus rezultat de la separarea zahrului brut sau zahrului rafinat (tabelul 2.),
Este materia prim cea mai des utilizat ca surs de diglucide, fiind foarte accesibil
economic.
n industria de medicamente, melasa este utilizat pentru obinerea:
- vitaminelor hidrosolubile
- unii aminoacizi de uz farmaceutic.
Compoziia procentual a melasei
Componente i caracteristici
Sursa de melas
Separare zahr brut Separare zahr rafinat
Substane solide
78,90 86,20
79,50 82,20
Zaharoz
43,80 54,40
50,00 54,60
Zahr invertit
1,19 4,50
0,12 1,56
Rafinoz
0 2,75
1,24 1,54
Azot total
0,82 1,9
1,45 1,65
Cenu
5,30 9,60
11,14 14,33
pH
6,4 8,1
7,5 8,5
5

Lactoza
Este un dizaharid reductor, folosit sub form de substan pur n industria medicamentelor,
ca materie prim pentru biosinteza unor antibiotice (n mod special a penicilinei).
Pentru obinerea acidului citric, a alcoolului etilic sau a proteinelor monocelulare se
utilizeaz o soluie de lactoz tehnic, de concentraie 70 75%, rezultat ca subprodus din
industria brnzeturilor.
Amidonul
Este un polizaharid compus numai din glucoz, care constituie, dup celuloz, principala
rezerv de glucide din materialele vegetale.
In compoziia amidonului intr dou tipuri de polizaharide, difereniate n primul rnd prin
tipul legturii glicozidice dintre moleculele de glucoz, i anume:
20 25% amiloz (legturi 1,4--glicozidice), restul fiind
amilopectin (legturi 1,6--glicozidice, care permit ramificarea catenei).
Cele dou tipuri de polizaharide se mai deosebesc prin:
masa molecular:
- 90.000 200.000 pentru amiloz i
- 1.000.000 6.000.000 pentru amilopectin
prin solubilitate:
- spre deosebire de amilopectin, amiloza este solubil n ap la 700C i este insolubil n nbutanol, n-pentanol, ciclohexanol, acizi grai.
Materii prime folosite ca surse de azot
Azotul reprezint 10% din greutatea uscat a majoritii microorganismelor.
Se poate calcula concentraia minim de azot din mediu pentru a obine o anumit cantitate
de mas celular.
Alegerea sursei de azot se face in functie de:
microorganism
costul sursei de azot ca materie prim
scopul fermentaiei.
Ca surse anorganice de azot se folosesc:
srurile de amoniu
azotaii
Ca surse organice se pot folosi:
uree
extract de porumb
finuri proteice (de soia, mal, orz, orez, bumbac, secar)
extract de drojdie
pepton
Particularitati de utilizare a surselor de azot
n general, creterea microorganismelor este mai rapid pe baza substraturilor coninind azot
organic.
Anumite microorganisme nu pot utiliza dect azotul provenit din compui organici cu
anumite structuri, de la aminoacizi, pn la baze azotate sau vitamine.
Alte microorganisme au necesiti complexe de azot, crora nu le corespund dect extractele
opoterapice sau vegetale.
Atunci cnd se urmrete biosinteza unui compus cu coninut mare de azot, randamentul de
biosintez va fi cu att mai mare, cu ct cantitatea de azot asimilabil de ctre

microorganism este mai mare (cu condiia ca microorganismul s aib potenialul genetic de
producere a respectivului metabolit).
Extractul de porumb
Este o materie prim natural foarte des ntrebuinat n procesele de biosintez din industria
de medicamente.
Extractul de porumb este un subprodus de la prelucrarea porumbului n scopul obinerii
amidonului i a zahrului.
Reprezint unul din cele mai complexe substraturi nutritive pentru dezvoltarea
microorganismelor, constituind sursa cea mai echilibrat de azot, carbon, sulf i sruri
minerale.
Extractul de porumb se prezint sub forma unei suspensii vscoase, cu un coninut
standardizat de 50% substan uscat i un coninut n azot de 4% g/v.
Prin hidroliz, extractul de porumb conduce la un numr mare de aminoacizi, dup cum
rezult din tabelul urmtor.
Poate fi folosit n acelai timp i ca surs de carbon i energie, ntruct, pe lng aminoacizi,
conine i:
acid lactic,
complexe polizaharidice
cantiti mici i variabile de glucide reducatoare
cantitati mici de vitamine ca: riboflavin, niacin, acid pantotenic, biotin i piridoxin
Calciu (1%), fosfor (2,5%), potasiu (1,5%), raportate la substana uscat
Compoziia n aminoacizi a hidrolizatului de extract de porumb
Aminoacid Coninut, raportat la
coninutul de N (%)
Ala
peste 25
Arg
8
Glu
8
Leu
6
Pro
5
Ileu
3,5
Tre
3,5
Val
3,5
Phe
2,0
Met
1,0
Cis
1,0

Materii prime folosite ca surse de oligo i microelemente

Srurile minerale sunt adugate n scopul furnizrii de elemente biologic active, cu rol
structural, precum i de meninere i reglare a proceselor fiziologice.
Ele furnizeaz elemente chimice care ndeplinesc urmtoarele funcii:
intr n componena celuleor microbiene (P,S, Mg, Ca, Fe, Cl);
particip la formarea unor produi organici (P: acizi nucleici, fosfatide, S: aminoacizi, Cl:
anumite antibiotice, etc.)
asigur reglarea presiunii osmotice i a permeabilitii celulare (sub form de sruri minerale
disociate sau libere: MgCl2, KCl, NaCl, etc.)
furnizeaz o astfel de concentraie de ioni n lichide nct menin un pH constant, compatibil
cu cerinele proceselor biochimice (ionii de H, O, Ca, Na, P, S, etc.)
intervin n procesele de oxido-reducere (ionii de Cu, Fe, etc.)
7

 constituie cofactori ai sistemelor enzimatice: Mg2+, Mn2+, Co2+, Fe2+, Fe3+, Zn2+,
Mo2+, etc.)

Compui chimici disponibili ca surse de oligo i microelemente

Element

Surse minerale

NaH2PO4.H2O, Na2HPO4.12H2O, KH2PO4, K2HPO4, Ca(H2PO4)2.H2O,

CaHPO4.H2O, Ca3 (PO4)2, MnHPO4.3H2O

Ca

CaCO3, CaCl2

Mg

MgCO3, MgSO4. 7H2O, MgCl2

Na

NaH2PO4.H2O, Na2HPO4.12H2O, NaCl, Na2SO4

Cl

NaCl, CaCl2, MgCl2, FeCl2, FeCl3. 6H2O, CuCl2.2H2O, ZnCl2.H2O,

MnCl2.3H2O

KH2PO4, K2HPO4

Fe

FeCO3, FeCl2, FeCl3. 6H2O, FeSO4.7H2O

Cu

CuCl2.2H2O, CuSO4.5H2O

Co

CoCl2.6H2O, CoSO4.H2O, CoSO4.7H2O, Co(NO3)2.6H2O

Zn

ZnCO3, ZnCl2.H2O, ZnSO4.7H2O, ZnSO4.H2O

Mn

MnCO3.H2O, MnCl2.3H2O, MnHPO4.3H2O, MnSO4.4H2O,

MnSO4.1H2O

Vitaminele
Constituie o grup de compui organici cu rol de biocatalizatori ai proceselor metabolice
prin care se asigur creterea masei celulare i producerea metaboliilor utili.
Sursele organice naturale de azot precum i melasa, constituie n acelai timp i surse de
vitamine, dar coninutul acestora n vitamine este supus unor variaii largi, datorate
condiiilor de recoltare a materialelor vegetale, de prelucrare, conservare i depozitare, care
pot determina pierderea unor cantiti importante de vitamine, de pn la 95-98%.
Din acest motiv, unele vitamine se adaug n mediul de cultivare i sub form de produse
pure, obinute prin sintez

Vitamine utilizate n formularea mediilor de fermentaie din industria de medicamente

Vitamina
Surse
Importana metabolic
Vitamina B1 (tiamina) Tre de cereale, rot de soia, fin de Component a tiamincarne i pete, drojdii furajere, etc.,
pirofosfatului din
produse de sintez
decarboxilaze i
transaminaze
Vitamina B2
Tre, cereale ncolite, rot de soia,
Component a flavin(riboflavina)
drojdii furajere, etc., produse de
nucleotidelor
sintez sau biosintez
Vitamina B3
Tre de orez i cereale, nutreuri
Precursor al
(acidul pantotenic)
verzi, fnuri, etc., produse de sintez
coenzimei A
Vitamina B4 (colina)
Finuri ptoteice de carne, pete, drojdii Component
furajere, roturi de oleaginoase, tre structural a
de cereale, fin de lucern, produse
fosfolipidelor
de sintez
Vitamina B6
Drojdia de bere, drojdii furajere, tre Coenzim implicat
(piridoxina)
de cereale, roturi de soia, fina de n reacii de
pete
transaminare i
decarboxilare
Vitamina B7
Melasa, fina de carne, drojdii Coenzim implicat
(vitamina H, biotina)
furajere, produse de sintez chimic
n reacii de
carboxilare i de
dezaminare
Vitamina B9
Drojdii furajere, roturi de soia, tre Coenzim implicat
(acidul folic)
de cereale, fin de lucern, produse n sinteza unor
de sintez chimic
aminoacizi i n
reacii de
transmetilare
Vitamina B12
Faina de pete, lichidele reziduale de Coenzim implicat
(ciancobalamina)
la culturile de Streptomyces griseus i n
sinteza
unor
aureofaciens (deeuri de la fabricarea aminoacizi
grizeofulvinei i tetraciclinei), produse
de biosintez
Vitamina K
Fina de pete, fina de lucern, Implicat n procesele
produse de sintez chimic
de fosforilare
oxidativ i n
metabolismul acidului
fumaric
Acidul nicotinic
Drojdia de bere, drojdii furajere, tre Precursor al NAD i
(vitamina PP, niacina) de orez i de gru, finuri proteice de NADP
origin animal, produse de sintez
chimic (niacina i niacinamida)

Precursori
Substante care intervin, ca intermediari, n biosinteza metaboliilor utili sau in dirijjarea
proceselor de biosintez pe o anumit cale.
9

Prezena precursorilor n mediile de fermentaie are un rol deosebit de important pentru

creterea randamentelor de biosintez a anumitor produse.
Materiile prime cu rol de precursori sunt specifice fiecrui metabolit urmrit, cele mai
cunoscute fiind cele prezentate n tabelul 5
Precursorii se adaug de regul n cantiti mici, pentru evitarea efectelor inhibitorii.
Precursori specifici ai unor produse de biosintez
Precursor
Produs de biosintez Microorganism productor
Acid fenilacetic
Penicilina G
Penicillium chrysogenum
Acid fenoxiacetic
Penicilina V
Penicillium chrysogenum
n-propanol
Eritromicin
Streptomyces erythreus
Glicina
L-serina
Sarcina albida
Acid -cetobutiric Alcaloizi din ergot
Claviceps purpurea
Lecitin
Colinesteraza
Pseudomonas spp.
Clorura de cobalt
Vitamina B12
Pseudomonas thermophila

Uleiuri
Grsimile au n general un coninut mai mare n carbon i hidrogen dact hidraii de carbon.
Prin oxidare complet grsimile pot furniza o cantitate aproximativ dubl de energie fa de
cea care rezult dintr-o cantitate echivalent de carbohidrai.
Uleiurile vegetale se pot mpri, n funcie de gradul de nesaturare, n urmtoarele grupe:
uleiuri de tip oleic, care includ uleiul de msline i de nuci;
uleiuri tip linoleic, care conin un procent mrit din acidul gras dublu nesaturat acidul
linoleic, C18H32O2, care se gsete n uleiul de porumb, de floarea soarelui i de semine
de bumbac;
uleiuri tip linolenic coninnd acid linolenic C18H30O2, cu trei duble legturi, care
se gsete n uleiurile de soia i de in;
Uleiurile vegetale comerciale (ca de examplu uleiul de porumb) sunt de regul amestecuri
de esteri ai glicerinei cu acizi grai. Ei pot ndeplini dou funcii n mediile de biosintez:
antispumani (mpreun cu ageni activi de suprafa) i
surs nutritiv de carbon.
Uleiurile minerale (de obicei hidrocarburi cu greutate molecular mare sau uleiurile
siliconice) pot fi de asemenea utilizate uneori ca antispumani, dar ele nu pot fi metabolizate
de microorganisme, fapt pentru care au tendina de a se acumula n mediile de fermentaie.
Folosirea lor trebuie reglat astfel nct acetia s nu interfere n procesele ulterioare de
extracie.

10