Biosinteza ADN

(replicarea)
Mutatii
Reverstranscriere

Replicarea
Reprezint modalitatea specific de biosintez a ADN
Const n desfacerea duplexului de ADN parental i
construirea pe fiecare dintre cele dou catene a cte
unei catene fiice complementare-replica celei dinti
Ca urmare rezult dou molecule de ADN fiice identice
cu parentala, n fiecare dintre moleculele nou formate
conservndu-se o caten veche, parental; sinteza ADN
se numete de aceea, replicare semiconservativ
Sinteza semiconservativ asigur astfel transferul de
informaie genetic de la ADN parental la ADN nou
sintetizat

Replicarea la procariote
n E.Coli exist o molecul unic de ADN circular , de
mari dimensiuni ce alctuiete un cromozom
Iniierea replicrii se produce n regiuni origine Ori C
care conin secvene foarte bine conservate de-a lungul
timpului, bogate n perechi A-T
Regiunea activ n replicare la un moment dat se numete
bifurcaia de replicare; pe cromozomul bacterian
exist 2 bifurcaii de replicare, una n sens orar i alta n
sens antiorar
Duplexul se replic simultan n ambele direcii; n
timpul replicrii cromozomul bacterian are forma literei
greceti theta
Cnd cele 2 bifurcaii de replicare ajung n regiunea opus
lui Ori C, replicarea este terminat
Replicarea este bidirecional la bacterii i virusuri

Replicarea la procariote

Elementele necesare replicrii la

procariote
Substraturi dATP, dGTP, dCTP, dTTP i ATP,
GTP, CTP, UTP
Matria (template) cele dou catene de ADN
Enzime:
Helicaze enzime care desfac ADN dublu catenar cu
etalarea celor 2 catene complementare, permind
citirea secvenei de ctre ADN polimeraze;
desfacerea catenelor se face treptat pe msur ce
replicarea avanseaz; catenele individuale sunt
mpiedicate s se reasocieze de proteine de
stabilizare a ADN monocatenar; procesul necesit
energie sub form de ATP

Elementele necesare replicrii la

procariote
Enzime:
Topoizomeraze I i II (ADN giraza) relaxeaz
suprarsucirile pozitive aprute ca urmare a aciunii
helicazei, fr consum de ATP -topoizomeraza I sau
cu consum de ATP - ADN giraza
ADN primaza (ARN polimeraza-ADN
dependent) sintetizeaz fragmente scurte de
ARN avnd 4-12 nucleotide (ARN primer); pentru
sinteza catenei leading este nevoie de un
singur ARN primer, n cazul catenei lagging
fiind nevoie de cte un ARN primer pentru
fiecare fragment Okazaki

Elementele necesare replicrii la

procariote
Enzime:
trei ADN polimeraze-ADN dependente:
Caracteristici comune:
Nu iniiaz catene ADN, necesitnd un ARN
primer cu o grupare OH 3 liber
Necesit o caten de ADN matri (template)
Direcia de sintez a catenelor este 53
Catalizeaz adugarea dNTP n timpul elongrii
catenelor n formare; dNTP se adaug unul cte
unul, la captul 3 al catenei n cretere, n
ordinea dictat de matri
Au activitate exonucleazic 35

Elementele necesare replicrii la

procariote
Enzime:
Caracteristici specifice ADN polimeraze-ADN
dependente:
ADN polimeraza I - are activitate polimerazic redus; prin
activitatea exonucleazic 3 5 hidrolizeaz nucleotidul
nemperecheat corespunztor; prezint i activitate
exonucleazic 5 3prin care ndeprteaz ARN primer
i l nlocuiete cu ADN (prin activitatea sa polimerazic)
ADN polimeraza II nu este necesar la replicare; are rol
n repararea ADN prin activitatea exonucleazic 3 5
ADN polimeraza III rol central n procesul de
replicare; are structur de dimer simetric, permind
replicarea n acelai timp i acelai loc a ambelor
catene parentale de ADN

Elementele necesare replicrii la

procariote
ADN polimeraza III :
rol central n procesul de replicare; are
structur de dimer simetric, permind
replicarea n acelai timp i acelai loc a
ambelor catene parentale de ADN
Are procesivitate mare adic leag strns i
elibereaz catena matri numai dup
replicarea complet a acesteia
Are eficien catalitic foarte mare 1000
nucleotide pe secund

Elementele necesare replicrii la

procariote
ADN polimeraza III :
Are rol de corector prin activitatea
exonucleazic 35; ca urmare, frecvena
erorilor n procesul de replicare este de 106-107
perechi de nucleotide (la E.Coli exist i un
sistem enzimatic corector post-replicare a..
frecvena final a erorilor este de 109 perechi
de baze)
Stabilete o legtur fosfat diesteric ntre
captul 3-OH al catenei n cretere i
nucleotidul urmtor, numai dac la captul 3OH se gsete un nucleotid corect
mperecheat cu catena matri

Elementele necesare replicrii la

procariote
Enzime:
ADN ligaza unete fragmentele de
ADN din catena lagging (sintetizat
discontinuu), rezultate n urma replicrii.
ADN polimeraza I cu rol de exonucleaz
5 3, elimin ribonucleotidele din ARN
primer, din captul 5 al fragmentelor
Okazaki i le nlocuiete cu
deoziribonucleotidele corespunztoare;

Replicarea
Catenele ADN sunt citite n direcia 3 5
Replicarea este continu pe catena leading i este
semidiscontinu pe catena lagging
Enzima catalizeaz sinteza unor fragmente de 150-200
nucleotide, numite fragmente Okazaki, n direcia 5 3;
sinteza fiecrui fragment Okazaki necesit un ARN primer
In vivo replicarea se desfoar cu viteze egale pentru
ambele catene; complexul enzimatic necesar replicrii este
ataat membranei nucleare iar molecula de ADN l strbate;
Formarea unei bucle de ctre catena matri cu direcia 5
3 precum i structura dimeric a ADN polimerazei III,
permite catenei lagging s fie sintetizat n acelai
timp i n aceeai direcie cu catena leading

Replicarea la eucariote
Se desfoar dup un mecanism asemntor
Are loc n faza S a ciclului celular; ADN nuclear
este replicat o singur dat i n intregime per ciclu
celular
Este semiconservativ, ncepe n mai multe
origini de replicare i se produce bidirecional
din fiecare origine
ARN primer are 8-10 nucleotide
Sunt 5 ADN polimeraze-ADN dependente; viteza
reaciei este mai mic dect la procariote (500-5000
nucleotide pe minut); procesivitatea este relativ
mic

ADN polimeraze-ADN
dependente
ADNPOLIMERAZA

FUNCIE
Excluderea ARN primeri i completarea cu ADN,

sinteza catenei lagging

Repararea ADN

Sinteza ADN mitocondrial

Sinteza catenei leading

Aciune corectoare, reparare ADN

Replicarea la eucariote
Cromozomii eucariotelor conin la ambele capete,
structuri speciale numite telomere secvene de
cca.100 nucleotide bogate n G, sintetizate i
meninute de o telomeraz
Cromozomii fr telomere sunt instabili, fie
fuzioneaz cu ali cromozomi, fie sunt degradai
Telomeraza are rolul de a lungi catena lagging,
care prin eliminarea primerului de la captul 5 i
degradarea ADN monocatenar se scurteaz la
fiecare rund de replicare; n felul acesta
cromozomul va rmne aprox. cu aceeai lungime

Replicarea la eucariote
Telomeraza exist numai n anumite celule
(seminale, limfocite, canceroase)
Absena telomerazei permite scurtarea gradual
a cromozomilor la fiecare rund de replicare;
astfel, exist un numr limitat de diviziuni, dup
care, celula nu se mai divide (intr n procesul de
moarte programat sau apoptoz); lipsa
telomerazei contribuie la senescena normal a
celulelor
Creterea activitii telomerazei poate permite
replicarea i creterea celular necontrolat,
proces care se produce n cancer

Replicarea la eucariote
Medicamente care afecteaz replicarea
Antimetaboliti 5-fluorouracil,
metotrexat, 6-mercaptopurine - reduc sau
inhib producerea de dNTP pentru replicare
Substrate analoage azidotimidina,
citozin arabinozidul - pot fi ncorporate de
ADN polimeraze n structura ADN inhibnd
viitoarea replicare
Inhibitori ai ADN girazei acid nalidixic,
fluorochinolone

Reverstranscrierea
n virusurile oncogene (conin material genetic ARN) exist o
reverstranscriptaz = ADN polimeraz ARN dependent care
se activez numai la ptrunderea virusului n celul
Primerul folosit de enzim este un ARNt, nglobat n particula viral
Dup ce se sintetizeaz o caten de ADN pe matri de ARN, ARN
viral este degradat (prin activitatea sa ribonucleazic)
Catena ADN rmas se autoreplic formnd un duplex ADN ce
conine informaia prezent n ARN viral
ADN format se inser n genomul gazdei, putndu-se n anumite
condiii, exprima n proteine, care pot duce la malignizarea celulei
Reverstranscriptaza nu are activitate exonucleazic 3 5 putnd
face greeli la replicare, ceea ce explic numrul mare de tulpini
virale
Reverstranscriptaza poate utiliza orice ARN ca matri, aceast
posibilitate fiind utilizat la obinerea unor gene sintetice

Reverstranscrierea

Mutaii
Sunt modificri permanente ale secvenei de
ADN
Pot afecta o singur pereche de baze (mutaii
punctiforme) sau mai multe perechi de baze
Mutaiile punctiforme:
Tranziia o purin este nlocuit cu alt
purin sau o pirimidin cu alt pirimidin;
aceasta poate fi determinat de prezena unei
baze azotate n timpul mperecherii ntr-o form
tautomer rar ( de ex. forma tautomer imino
a A poate forma o pereche cu C, rezultnd un
ADN n care perechea AT este nlocuit cu GC)

Mutaii
Mutaiile punctiforme:
Transversia o purin este nlocuit cu o
pirimidin sau invers
Deleia va determina citirea incorect a ntregii
secvene ce succede deleia (deleii se produc la
variaii de pH sau temperatur)
Inseria - va determina citirea incorect a ntregii
secvene ce succede inseria; acridina (colorant)
se poate intercala ntre 2 baze azotate (pt. c are
molecul plan), urmnd ca la replicare,
corespunztor acridinei, pe catena
complementar s se insereze o baz
complementar nou care se leag covalent

Mutaii
Cauzele care determin apariia mutaiilor:
Erori n procesul de replicare adugarea unei baze
care nu este complementar celei din matri sau
mperecherea greit a bazelor, necorectat de ADN
polimeraza III sau de sistemele de corectare post-replicare
Substane chimice
ageni nealchilani formaldehida (reacioneaz cu gruprile
amino), hidroxilamina (reacioneaz specific cu citozina),
acidul azotos (dezamineaz oxidativ A, G, C transformndu-le n
cetone, ceea ce va determina mperecherea lor greit)
Ageni alchilani etilmetansulfonat (adaug o grupare metil
la N unei purine, ceea ce va determina labilizarea legturii Nglicozidice prin a crei hidroliz apare un loc depurinat),
nitrozoguanidina (determin mutaii prin tranziie i
transversie)

Mutaii
Cauzele care determin apariia mutaiilor:
Analogi structurali ai bazelor azotate 5bromouracilul, 2-amino purina
Radiaiile UV (determin formarea de dimeri de
T), X i (determin deschiderea nucleului purinic,
depurinarea i ruperea legturilor fosfat diesterice)
Repararea ADN se face prin excizia dimerilor de
timin sau a bazelor obinute prin dezaminri ( prin
dezaminarea C U, a A hipoxantin i a G xantin)
sau prin fotoreactivare (clivarea legturii covalente
din dimerii de T de ctre o ADN fotoliaz, activat de
radiaiile din domeniul vizibil)

Dimeri de timin