Lanul respirator & fosforilarea

oxidativ

Lanul respirator mitocondrial

Este calea final, comun mai multor
procese oxidative, prezent n celulele
aerobe, prin care echivalenii reductori
(protoni sau electroni) provenii din
diverse substraturi reduse sunt
transferai pe oxigenul molecular.

Hidrati de
carbon
Proteine

digestie si absorbtie

Grsimi

Acizi grasi
+
Glicerol
Glucoz
Aminoacizi

-oxidare

Acetil-CoA

ATP
Ciclul
Krebs

Mitocondrie

2H

O2

H2 O
Lantul respirator
ADP

Surse extramitocondriale
de echivalenti reductori

 Oxidarea celor mai muli compui

biochimici, const n dehidrogenri
enzimatice, catalizate de dehidrogenaze
specifice, prin care echivalenii reductori
din substrate reduse sunt transferai pe
acceptori potrivii (coenzime oxidate
solubile NAD+ i FAD). In coenzimele
reduse NADH, FADH2 (sau FMNH2) este
nmagazinat o cantitate mare de energie
chimic.

 In mitocondrii, NADH i FADH2 pot dona direct

echivalenii reductori preluai dintr-un substrat
unui grup specializat de transportori de
hidrogen sau de electroni, localizai n
membrana intern mitocondrial. Prin
parcurgerea acestui lan de componeni
succesivi, electronii ajung final pe oxigenul
molecular, pe care-l reduc (reducere
tetravalent) cu formare de ap, conform
reaciei:
O 2 4 e - 4 H 2 H 2O

 Nevoia de oxigen, ca acceptor final al

electronilor eliberai din diverse oxidri,
explic cea mai mare parte a consumului
de oxigen al unui organism aerob i
confer lanului transportor de electroni
mitocondrial denumirea adiional de lan
respirator.

Mitocondria
Spatiu intermembranar
Membrana extern
Membrana
intern
Criste

Matrix
Proteine componente ale sistemului
transportorilor de electroni

 Membrana extern, liber permeabil pentru moleculele

cu masa mai mic de 10 kDa, nu reprezint o barier
de permeabilitate, ntre citosol i spaiul
intermembranar, pentru muli compui organici, ioni,
nucleotide cu rol n metabolismul energetic.
Proteinele cu activitate enzimatic existente n
membrana extern sunt:
enzime implicate n metabolismul lipidic (fosfolipaza A2,
acil-CoA sintetaza, glicerol fosfat acil transferaza);
fosfonucleozidkinaze;
pe suprafaa extern a membranei, la nivelul tesutului
nervos, sunt localizate enzime cu rol n eliberarea
neurotransmitorilor.

 n spaiul intermembranar sunt localizate

cteva enzime implicate n transferul
energiei nmagazinate n legturile
macroergice ale ATP: adenilat kinaza,
creatin kinaza i nucleozid difosfat
kinaza

 Membrana intern este extrem de pliat. Pliurile

numite criste mresc suprafaa acestei
membrane.
Este practic impermeabil liber pentru:

K
,
Na
,
Ca
,
H
,
HO
, Pa
ioni anorganici:

ADP
,
ATP,
NAD
, NADH, CoA - SH, etc.
nucleotide:
compui organici ionizai sau neionizai: malat,
oxaloacetat, glutamat, aspartat, piruvat, acilCoA, etc.
Este liber permeabil pentru gaze i pentru
molecule mici, neionizate (ap, acid acetic,
acid acetoacetic, acid 3-hidroxibutiric).

Proteinele cu activitate enzimatic existente n

membrana intern sunt:
succinat-dehidrogenaza, enzim component a
ciclului Krebs:
majoritatea componenilor lanului
transportorilor de electroni;
o parte a sistemului de sintez a ATP prin
fosforilare oxidativ (F1F0ATP sintaza);
permeaze sau translocaze, sisteme proteice care
permit transportul selectiv mpotriva gradientului
de concentraie, al unor perechi de compui din
mitosol n spaiul intermembranar i invers ;

 Matrixul conine enzime cu rol n diferite

procese metabolice:
enzimele ciclului Krebs (excepie succinatdehidrogenaza, localizat n membrana intern);
sistemul multienzimatic al piruvat
dehidrogenazei
enzimele -oxidrii;
o parte din enzimele ureogenezei;
enzime ale cetogenezei;
GOT (glutamat-oxaloacetat transaminaza);
coenzime oxidate sau reduse (NAD+, NADP+,
FAD, NADH, CoA-SH, etc.)

Elementele componente ale lanului

respirator
Toi componenii lanului respirator, cu excepia
ubichinonei, sunt proteine, de care sunt legate
grupri prostetice, capabile s participe la procese
redox (s accepte i s doneze atomi de hidrogen sau
electroni).
Proteinele componente ale lanului respirator, cu
excepia citocromului c care este solubil, sunt
hidrofobe, integral membranare (strbat total sau
parial membrana intern)

Flavoproteine (FP)
Proteine cu fier i sulf
Coenzima Q (ubiquinona)
Citocromi

Flavoproteinele
Flavoproteinele sunt dehidrogenaze flavinice cu
grupri prostetice FMN sau FAD:
dehidrogenaza FMN - dependent, notat FPN ,
se numete NADH-dehidrogenaz i are rolul
de a oxida NADH-ul care a preluat, n matrix,
echivaleni reductori de la diverse substrate
dehidrogenaza FAD-dependent, notat FPS, se
numete succinat dehidrogenaz i preia
echivalenii reductori de la succinat
alte flavoproteine, au FAD drept coenzim

Proteine cu fier i sulf

(Cys)-S
(Cys)-S

S
Fe

S
Fe

S-(Cys)

S-(Cys)
Fe

Fe

Fe
(Cys)-S

S-(Cys)

Centru binuclear Fe2S2Cys4

(Cys)-S

S
Fe
S-(Cys)

Centru tetranuclear Fe4S4Cys4

Coenzima Q
Este singurul component neproteic al
lanului respirator, are structur i
funcii asemntoare cu vitaminele K.
Este component lipofil, solubil n
membran, poriunea poliizoprenic a
moleculei (la om, n=10), asigurndu-i
retenia i deplasarea n mediul lipidic al
membranei.

O
H3CO

O
CH3

H3CO

+H ; e

-H+ ; e-

O
Ubichinon
(forma oxidat)
R=

H3CO

CH3

H3CO

OH
Semichinon
(forma radicalic)

CH3
CH2 CH

OH

CH2

+H ; e

-H+ ; e-

H3CO

CH3

H3CO

R
OH
Ubichinol
(forma redus)

Citocromii
e-

citocrom (Fe3+)

e+

citocrom (Fe2+)

Citocromii b (bK i bT)

Citocromii c i c1
Citocromul a-a3

Citocromul a3 este singurul citocrom ce leag

direct O2, reducndu-l; acest citocrom este o
enzim, o oxidaz (citocrom c-oxidaza)

Citocromul c
Met 80
CH 3
H 3C

H 3C

HC

O OC

CH 2

CH

N
N

CH 2

CH 2

HC

Fe2+

CH 2

CH 2

CH 3

CH 2
O OC

CH
CH 3

Hys 18

CH 2
CH 3

CH 2

Organizarea componenilor lanului

transportorilor de electroni
- 0,32 V

NADH

+ 0,04 V

FPN

+ 0,25 V

CoQ

cit. b

cit. c1

cit. c

+ 0,82 V

cit. a-a3

O2

FPS
Succinat

Succinat

Complex II
FPS (FAD)
(Succinat - CoQ reductaz)
Fe-S

NADH
+ H+

FPN (FMN)
Fe - S
Complex I
(NADH - CoQ reductaz)

CoQ

cit.bK, bT, c1
Fe - S
Complex III
CoQH2 - cit. c reductaz

cit. c

cit. a-a3
Cu
Complex IV
Citocrom c oxidaz

O2

Complexul I (NADH-CoQ
reductaza)
NADH+H
NAD+

FPN(FMN)
FPN(FMNH2)

1e- FeS 1e
1
2H+

FeS2

1e-

FeS3

1e-

FeS4

2e2H+

CoQ
CoQH2

n timp ce o molecul NADH se oxideaz i 2 electroni sunt

transferai la CoQ prin complexul I, are loc de asemenea pomparea
a 4 protoni de-a lungul membranei mitocondriale, din matrix in
spatiul intermembranar.
o`
Cderii de potenial de 0,42 V, care G
reprezint
19,diferena
4 kcal/mol ntre a
NADH i a CoQ, i corespunde o
, suficient
pentru sinteza a doi moli de ATP; n procesul fosforilrii oxidative
se va sintetiza ns un singur mol, restul de energie disipnduse n mediu.

Complexul II (succinat-CoQ
reductaza)
Succinat

FPs(FAD)

Fumarat

FPs(FADH2)

CoQH2

CoQ

Cantitatea mic de energie eliberat n timpul oxidrii

succinatului i transportul electronilor la CoQ este
insuficient pentru pomparea protonilor de-a lungul
membranei mitocondriale.
Variaia de potenial la transferul electronilor de la succinat
la CoQ
este de 0,07 V corespunznd unei valori a
0`
G ;3,2deci
kcal / la
molnivelul acestui complex nu se
elibereaz suficient energie pentru ca prin cuplare cu
fosforilarea oxidativ s se sintetizeze ATP.

Complexul III (CoQH2-citocrom c

reductaza)
CoQH 2 2 cit. c (Fe3 )

CoQ 2 cit. c (Fe 2 ) 2H

CoQ-citocrom c reductaz

n timp ce o molecul CoQH2 se oxideaz i 2 electroni

sunt transferai la citocromul c prin complexul III, are loc
de asemenea pomparea a 4 protoni de-a lungul
membranei mitocondriale, din matrix spre spatiul
intermembranar.
Variaia de potenial la acest transfer este de 0,18 V,
0`
creia i corespunde G 7,75 kcal / mol ceea ce
asigur ca prin cuplarea cu fosforilarea oxidativ s
se sintetizeze un mol de ATP.

Complexul IV (citocrom c oxidaza)

-

O2 + 4 e + 4 H

Citocromoxidaz
ADP + Pa

2 H 2O

ATP

Pe lng cei 4 protoni utilizai pentru reducerea oxigenului,

ali 4 protoni sunt translocai din mitocondrie n
spaiul intermembranar (pentru fiecare 2 electroni care
traverseaz complexul IV sunt translocai 2 protoni).
Cderea de potenial la trecerea electronilor mediat de
complexul IV este de 0,54 V creia i corespunde o
valoare
deci energie suficient
pentru sinteza
moli
G 0` a
24trei
,8 kcal
/ molde ATP; nu se sintetizeaz
ns dect un singur mol.

nH+

Spatiu
intermembranar
Membrana
intern
mitocondrial

nH+

Fe-S

+
+
CoQ Fe-S
2e-

NADH (2e-)

FADH2

Fumarat

Oxaloacetat

+
Cit.c
Cit.a-a3
(Cu)

Cit.c1

Succinat
NAD+

Cit. b

Fe-S

FMN

nH+

- -

ADP + Pi

Malat
Matrix mitocondrial

+
+
+
+
+

1/2O2
H2 O ATP
H+
sintaza

ATP
ATP

ATP-ADP
antiport

ADP

Fosforilarea oxidativ
Este procesul ce permite sinteza ATP din ADP
i Pa de ctre ATP sintaz (complexul V)
folosind o parte din energia degajat n
lanul transportorilor de electroni.
Fosforilarea oxidativ este sursa principal
de energie n celulele aerobe.
Fosforilarea oxidativ se desfoar numai n
esuturile ale cror celule posed
mitocondrii. Numrul de mitocondrii din
celulele unui esut reflect activitatea
metabolic aerob a esutului respectiv.

Teoria chemiosmotic (Peter

Mitchell)
Energia derivat din transferul electronilor
prin lanul transportorilor de electroni este
utilizat pentru pomparea protonilor de-a
lungul membranei interne mitocondriale
din matrix n spaiul intermembranar
Complexele I, III i IV ale lanului
respirator sunt pompe de protoni din
matrix n spaiul intermembranar.

 Gradientul de pH aprut este parial convertit

ntr-un potenial de membran, prin schimbul de
H+ cu cationi i de HO- cu anioni, prin
membrana intern.
Dublul gradient, de pH i de sarcin, care apare
prin funcionarea lanului respirator determin
apariia aa-numitei forei proton-motrice (cu
valoare maxim de ~230 mV) care reprezint
energia disponibil pentru sinteza ATP prin
fosforilare oxidativ i pentru alte procese
endergonice mitocondriale.

 Protonii acumulai n spaiul

intermembranar vor fi translocai napoi n
matrix prin ATP sintaz. Aceast
translocare se realizeaz ns n josul
gradientului de pH i de sarcin, deci
cu eliberare de energie;
Energia eliberat va servi la sinteza de
ATP

ATP sintaza (complexul V, F1F0ATP-aza)

ADP
+
Pi

ATP

ATP

H+

Interior
Membrana intern
mitocondrial
Exterior

 Poriunea F0, liposolubil, parte integrant a membranei

interne;
F0 conine 4 subuniti proteice, avnd rol de translocaz
de protoni (restul membranei fiind impermeabil pentru
acetia) prin membrana intern, spre matrix.
Trunchiul care intervine n ataarea F 1 la F0 conine cteva
proteine, una dintre ele, conferind ATP-sintazei
sensibilitate la inhibiia prin oligomicin.
Poriunea F1, hidrosolubil, ancorat pe F0 i care
proemin n matrix, sub form de particule sferice.
F1, implicat n activitatea catalitic a complexului,
conine centrul de legare pentru ATP i ADP i este format
din 9 subuniti avnd structura 33:
i leag nucleotidele ADP i ATP, subunitatea
coninnd centrul catalitic
este o poart de protoni
este implicat n ataarea subunitii F1 la membran
este o subunitate reglatoare

 La intrarea echivalenilor de reducere n lanul respirator

prin complexul I se asigur formarea a trei moli de
ATP / atom gram de oxigen redus, pe cnd la intrarea
prin complexul II se asigur formarea a numai doi
moli de ATP / atom gram de oxigen redus.
Raportul ntre numrul de moli de ATP produi i
oxigenul (n atomi gram) consumat este numit ct de
fosforilare. El se simbolizeaz P/O i este 3/1 pentru
reoxidarea NADH+H+ i 2/1 pentru reoxidarea FADH2.
Intruct la oxidarea NADH se sintetizeaz trei moli de
ATP pentru care se consum
3 x 7,3 pentru
21,9 kcal/mol,
randamentul utilizrii energiei libere
sinteza de
ATP este: 21,9 x 100/52,6 = 42%.

 https://www.youtube.com/watch?v=6W7FG9KlpA

Inhibitori ai lanului respirator

Sunt compui care se leag de anumii componeni ai
lanului, prevenind curgerea electronilor i translocarea
protonilor. Aceti compui inhib att consumul de
oxigen ct i fosforilarea oxidativ. Exemple de compui
din aceast clas sunt:
rotenone (insecticide de origine vegetal),amitalul
(compus din clasa barbituricelor),pericidina (antibiotic),
pentru complexul I
tenoiltrifluoracetona, pentru complexul II
antimicina A, mixotiazolul, pentru complexul III
CN-, CO, azida (N3-), pentru complexul IV.

Inhibitori ai fosforilrii oxidative

oligomicina, care inhib ATP-sintaza
atractilozidul, care blocheaz
translocarea nucleotidelor cu adenin.
Efectul inhibitor al acestor compui asupra
lanului respirator este nlturat prin
decuplani.

Decuplani ai fosforilrii oxidative

Decuplanii sunt acizi slabi, lipofili, care acioneaz ca

transportori de protoni prin membrana intern. Aceti
compui sunt solubili n membran att n form ionizat
ct i neionizat.
n prezena decuplanilor lanul respirator funcioneaz
cu vitez maxim, indiferent de valoarea raportului
ATP/ADP, iar energia lanului respirator este disipat sub
form de cldur. 2,4-dinitrofenolul, dicumarolul i ali
compui aromatici cu caracter acid acioneaz ca
decuplani.
Proteina de decuplare UCP-1 din mitocondriile esutului
adipos brun

Frigul sensibilizeaz hipotalamusul

Creier

Celul din tesutul

adipos brun

Nervul simpatic
Receptor
adrenergic

Norepinefrin

UCP-1

H+

H+

AMPc

Protein kinaza A

H+

NADH FADH
2

Acizi grasi
Trigliceride

1/2O2+2H+
ATP Sintaza

H+
H2O

Controlul respirator
Fosforilarea oxidativ cuplat cu lanul respirator,
constituind etapa final a degradrii glucidelor,
lipidelor i proteinelor, controlul respirator se poate
exercita prin:
intermediari ai degradrii celor trei clase de compui;
compui i factori implicai direct n lanul respirator i
fosforilarea oxidativ (complexe enzimatice, coenzime
reduse, ATP, ADP, O2, Pa, etc.).
S-a constatat c, dintre acetia, rolul principal l are ADPul. Deoarece ADP-ul se cupleaz cu Pa pentru a forma
ATP, controlul respirator se mai numete i control
prin acceptor de fosfat.

 Viteza de funcionare a lanului respirator

depinde de concentraia acceptorului de fosfat,
adic de concentraia ADP-ului, rol justificat de
urmtoarele fapte:
ADP este modulator alosteric pentru multe
enzime cu rol reglator care controleaz diversele
etape ale degradrii glucidelor, lipidelor i
proteinelor;
intensitatea fluxului de protoni prin componenta
F0 a ATP sintazei este determinat de nivelul
ADP;

 n concluzie, consumul celular de ATP

controleaz activitatea lanului
respirator. Scderea vitezei F.O. va
micora viteza L.R. i invers. Viteza L.R.
va afecta raportul de concentraii
NADH/NAD+ sau FADH2/FAD, care vor
influena vitezele ciclului Krebs, -oxidrii
acizilor grai sau altor procese
mitocondriale.

Bilanul arderii glucozei