GHID DE STUDIU PENTRU STUDENII ANULUI I BIOLOGIE CELULAR I MOLECULAR I. CURS. 1. Introducere n Biologia Celular i Molecular. 1.1.

Definiii i caracteristici generale. Studiul complex al structurii i funciei celulei: - morfologia structura la microscopul optic; - ultrastructura structura la microscopul electronic; - biologia molecular: relaia dintre structur i funcie. 1.2. Evoluia cunotinelor despre celule. - Citologia - Microscopul optic: Secolul al XVIIlea: - descoperirea celulelor de ctre R. Hooke i a celulelor vii de A. Van Leeuwenhoek. Secolul al XIX lea: - descoperirea nucleului, a nucleolului, a citoplasmei i a protoplasmei; - teoria celular Schleiden Schwann; - diviziunea celular, cromosomii i organitele celulare (centrosomul, mitocondriile, aparatul Golgi). Secolul al XX lea: - culturile celulare i microchirurgia; - 1960: biologia celular: microscopia electronic, centrifugarea diferenial; - 1970: biologia celular i molecular: tehnicile fizice i tehnicile de biologie molecular, biotehnologia (anticorpii monoclonali i tehnologia ADN-ului recombinant). 1.3. Contribuii romneti n dezvoltarea biologiei celulare i moleculare: - Victor Babe, Ion Cantacuzino, Gheorghe Marinescu; - George Emil Palade (Premiul Nobel pentru Medicin i Fiziologie 1974). 2. Noiuni generale despre celule. 2.1. Clasificare: celule procariote, celule eucariote i alte forme de via. Celulele procariote: - dimensiuni; - n citoplasm: nucleul este reprezentat de o molecul de ADN circular i de ribosomi 70S; - diviziunea celular: direct; - membrana celular este inconjurat de un perete celular. Celulele eucariote: - nucleul este nconjurat de un nveli care nconjoar cromatina i nucleolii; - diviziunea celular: mitoza i meioza; - organitele celulare: roluri i funcii; - membrana citoplasmatic. Alte forme de via: virusurile i prionii. 2.2. Numrul, forma i dimensiunile celulelor eucariote. 3. Bazele moleculare ale organizrii chimice a celulei. 3.1. Elementele chimice din celul: - elementele majore, macroelementele; - elementele mai putin abundente, microelementele; - oligoelementele. 3.2. Substanele chimice din celule. 3.2.1. Substanele chimice anorganice: a) Apa i viaa

Apa este o molecul polar, care disociaz ntr-un ion pozitiv de H3O+ i un ion negativ de HOi prezint legturi de hidrogen. Se clasific n: - ap liber (95%) i ap legat (5%); - ap intracelular (55%) i extracelular (45%). b) Srurile minerale: Ioni: - cationi : Na+, K+, Ca2+, Mg2+; - anioni: PO4-3, SO4-2, CO3-2, HCO3-, NO3-. Combinaii ntre anioni i cationi cu proteinele etc. 3.2.2. Substanele chimice organice: a) Hidraii de carbon (glucidele): Funcii: plastic i energetic. Monozaharidele: D-glucoza, riboza, dezoxiriboza. Polizaharidele: glicogenul. Glicozaminoglicanii (mucopolizaharidele). b) Lipidele: Funcii: energetic, plastic i reglator. Lipidele simple: acizii grai liberi. Lipidele complexe: fosfolipidele, glicolipidele. Trigliceridele. c) Proteinele: Policondensarea aminoacizilor ntre care se formeaz legturi peptidice. Funcii: reglator, transportor i de depozitare a unor substane, motilitate, aprare imun etc. d) Acizi nucleici: Funcii: depozitarea i transmiterea informaiei genetice. Localizarea: - n nucleu, mitocondrii i cloroplaste n cazul ADN; - n nucleol i citoplasm (ribozomi) n cazul ARN. 3.3. Unitatea organizrii biochimice a celulei. 4. Matricea citoplasmatic (citosolul). 4.1. Definiie i funcii. 4.2. Diferenierile celulare. 4.2.1. Filamentele de miozin: - molecula de miozin (tip I, II, V); - filamentele de miozin n celulele nemusculare; - filamentele de miozin n celulele musculare. 4.2.2. Filamentele de actin: - molecula de actin; polimerizarea i implicatiile medicale; - n celulele nemusculare (microfilamente); - n celulele musculare filamente subtiri. 4.2.3. Filamentele intermediare (de 10 nm): Tipuri de filamente intermediare: - filamentele de cheratin; - filamentele de desmin; - filamentele de vimentin; - neurofilamentele; - filamentele gliale; - filamentele nucleare. Implicaiile medicale. 4.2.4. Microtubulii: - polimerizarea tubulinei; - implicaiile medicale (colchicina i citostaticele); - localizarea microtubulilor n celule i rolul lor. 2

4.3. Componentele citoscheletului: filamentele de actin, microtubulii, filamentele intermediare i proteinele asociate. 5. Mecanismele moleculare ale motilitii celulare. 5.1. Mecanismul molecular actin miozin: miozina este proteina motor celular. 5.1.1. Micrile amoeboidale: - leucocite, fibroblaste; - mecanism de deplasare i orientare; - implicaii medicale. 5.1.2. Microvilii: - structura i compoziia molecular; - roluri. 5.1.3. Cureni citoplasmatici: - mecanism; - rol. 5.2. Micrile celulare bazate pe motoare celulare ce interacioneaz cu microtubulii. 5.2.1. Transportul axoplasmic: kinesina, dineina. 5.2.2. Micrile cililor i flagelilor: - axonema; - dineina ca molecul motor; - implicaii medicale. 5.3. Centriolii i corpii bazali ai cililor i flagelilor. 6. Structura molecular a membranelor celulare. 6.1. Definiie: membranele celulare sunt ansambluri moleculare dinamice i funcionale formate din lipide i proteine 6.1.1. Clasificarea membranlor biologice: - membranele citoplasmatice sau plasmalema; - membranele organitelor celulare. 6.1.2. Funciile membranelor: - barier prin permeabilitate selectiv; - transport transmembranar i semnalizare; - identitate celular; - rol n metabolismul celular. 6.1.3. Compoziia biochimic: - lipide dublu strat fosfolipidic; - proteine: - extrinseci sau periferice; - intrinseci sau integrale; - intermediare. - glucide ataate de proteine i de lipide; - colesterol. 6.2. Modele de membrane celulare: - Gorter i Grendel: dublu strat lipidic; - Danielli, Davson completat de Robertson: dublu strat lipidic i proteic; - Zinger: mozaic fluid de lipide i de proteine. 6.3. Suprafaa celular i glicocalixul sau glicolema: - definiia; - componentele suprafeei celulare: - glicocalixul; - membrana celular; - citoplasma de sub membran (2 nm). - roluri. 6.4. Jonciunile celulare: - jonciunile de adezivitate; - jonciunile impermeabile; - jonciunile de comunicare. 6.5. Membranele celulare i receptorii: - definiie; - categorii de liganzi; 3

- categorii de receptori; - efectele celulare produse de interaciunile dintre liganzi i receptori: - redistribuia receptorilor; - modificarea permeabilitii membranelor; - mesagerii de ordinul II. 6.6. Transportul transmembranar: Clasificare: - pasiv: - difuziunea simpl; - difuziunea mediat de ionofori; implicaii medicale; - difuziunea facilitat; - difuziunea mediat de proteine canal: transportul apei prin proteine canal (aquaporine), canalele cu poart; - activ: pompele de calciu; Na+-K+ ATP-aza; CFTR, proteina P170 implicaii medicale, transportul activ cuplat cu gradiente ionice (transportul glucozei, aminoacizilor); - transportul prin vezicule: - endocitoza (fagocitoza, pinocitoza); - exocitoza; - transcitoza. 7. Nucleul. 7.1. Nucleul n interfaz. 7.1.1. Poziie, numr, dimensiuni, form. 7.1.2. Nucleul n celula vie. 7.1.3. Morfologia i ultrastructura dup fixare. 7.1.3.1. nveliul nuclear: - lamina nuclear; - porul nuclear; - transportul prin por. 7.1.3.2. Cromatina. Compoziia chimic. Clasificarea cromatinei i implicaii medicale: a) heterocromatina: colorat foarte intens; b) eucromatina: colorat palid; c) corpusculul Barr (cromosom X inactiv); d) corpusculul F (cromosomul Y). 7.1.3.3. Nucleolul: - ultrastructura: regiunea fibrilar, granular i amorf; - biogeneza ribosomilor; - raportul dintre nucleu i nucleol; implicaii medicale. 7.1.3.4. Carioplasma: definiie, rol. 8. Cromosomii n celulele eucariote. 8.1. Roluri. 8.2. Morfologia cromosomilor: - centromerul (constricia primar) clasific cromosomii n: - cromosomi telocentrici; - cromosomi acrocentrici; - cromosomi submetacentrici; - cromosomi metacentrici; - constricia secundar; - satelitul. 8.3. Cariotipul: reprezint numrul i morfologia cromosomilor n metafaz. Cariotipul uman: - determinarea cariotipului din limfocitele din sngele periferic; 4

- anomaliile cromosomiale: - numerice ale cromosomilor de sex i somatici; - structurale. 8.4. Compoziia chimic i ultrastructura cromatinei: - ADN, ARN, proteine histonice (H1, H2a, H2b, H3, H4); - ultrastructura; - organizarea molecular a cromatinei: - nucleosomul; - filamentul subire de cromatin cu diametrul de 11 nm; - fibra groas de cromatin cu diametrul de 30 nm; - bucla (domeniul) de cromatin; - benzile cromosomilor; - cromosomii n ntregime. 9. Reproducerea celular. 9.1. Ciclul celular: - definiie i faze (G1, S, G2, M); - mecanisme de control ale ciclului celular. 9.2. Diviziunea celular. 9.2.1. Diviziunea celular direct. 9.2.2. Diviziunea celular indirect. 9.2.2.1. Mitoza: - definiie; - etape: profaza, prometafaza, metafaza, anafaza i telofaza; - evenimentele moleculare din cursul mitozei: - dublarea centrilor celulari; - asamblarea aparatului mitotic (fusul de diviziune, centrii celulari i asterii); - migraia cromosomilor; - dezasamblarea nveliului nuclear; - dispariia i reapariia nucleolilor; - citodiereza; - creterea numrului de prelungiri ale plasmalemei (microvililor). 9.2.2.2. Meioza: - definiie i importana biologic; - meioza I i II; - evenimentele moleculare n profaza I: - condensarea cromatinei; - cromosomii meiotici; - sinapsa; - crossing-over. 10. Biologia molecular. 10.1. Materialul genetic: - eucariote: ADN liniar n nucleu i circular n mitocondrii i cloroplaste; - procariote: ADN circular n cromosom i n plasmide. 10.2. Dogma central a biologiei molecular. 10.3. Replicarea ADN i particularitile acesteia la eucariote: Mutaiile: - definiie; - tipuri de mutaii; - ageni mutageni chimici i fizici. Implicaii medicale: substane care blochez biosinteza ADN (acidul nalidixic). 10.4. Transcrierea: - transcrierea ARN la eucariote i la procariote; - maturarea ARN la eucariote; - substanele care blocheaz transcrierea ADN (rifamicina i rifampicina). 5

10.5. Traducerea: - codul genetic; - ribosomii 70S i 80S; - efectul antibioticelor asupra biosintezei proteinelor (tetraciclina, cloramfenicolul, eritromicina). 10.6. Materialul genetic la virusuri: - virusuri cu ADN; - virusuri cu ARN, transcriptaza invers. 10.7. Amendamente la dogma central a biologiei moleculare. 11. Reticulul endoplasmic. 11.1. Morfologia, ultrastructura i compoziia chimic. 11.2. Funciile caracteristice ale reticulului endoplasmic rugos: - sinteza de proteine; - aparatul de transfer vectorial; - glicozilarea proteinelor. 11.3. Funciile caracteristice ale reticulului endoplasmic neted: - sinteza lipidelor; - degradarea glicogenului; - detoxificarea celulei. 11.4. Funciile comune ale reticulului endoplasmic rugos i neted: - sistem circulator intracelular; - schimbul de substane dintre citosol i lumenul reticulului endoplasmic; - rezervor pentru calciul intracelular; - sinteza de fosfolipide; - biogeneza membranelor celulare. 11.5. Implicaiile medicale din studiul reticulului endoplasmic. 12. Aparatul Golgi. 12.1. Morfologia i ultrastructura. 12.2. Funciile aparatului Golgi: - n secreia celular: concentrarea produilor de secreie, prelucrarea biochimic a produilor de secreie (glicozilarea terminal a proteinelor i lipidelor, sulfatarea proteinelor i lipidelor), sortarea produilor de secreie; - biogeneza lisosomilor; - reciclarea componentelor membranelor celulare; - biogeneza membranelor celulare. 13. Secreia celular: calea comun a secreiei celulare, secreia de insulin. 14. Lisosomii. 14.1. Descoperirea, compoziia chimic i caracterele generale. Enzimele lisosomale (pentru ~50 substrate diferite). Membranele lisosomale: - ageni care stabilizeaz membranele lisosomilor; - ageni care labilizeaz membranele lisosomilor. 14.2. Biogeneza lisosomilor. 14.3. Funciile i ultrastructura lisosomilor. Digestia lisosomilor: - heterofagia; - autofagia; - crinofagia. Categorii de lisosomi: - lisosomii primari; - lisosomii secundari; 6

- lisosomii teriari. 14.4. Implicaiile medicale ale lisosomilor. 15. Peroxisomii. 15.1. Descoperirea, ultrastructura, morfologia i compoziia chimic. 15.2. Categorii de peroxisomi. 15.3. Funciile peroxisomilor. 15.4. Biogeneza peroxisomilor. 15.5. Bolile peroxisomale: - sindromul Zellweger; - adrenoleucodistrofiile i boala Refsum; - acatalazemia; - alte procese patologice. 16. Mitocondriile. 16.1. Morfologia, ultrastructura i numrul. 16.2. Compoziia chimic: - a membranei externe; - a membranei interne; - a spaiului intermembranar; - a matricii mitocondriale. 16.3. Lanul respirator. 16.4. Fosforilarea oxidativ. 16.5. Teoria lui Mitchell. 16.6. Concentrarea substanelor n mitocondrii: - depozit de fier, calciu; - depozit de lipide; - proteine. 16.7. Transportul ionilor prin membrana intern mitocondrial. 16.8. Biogeneza i originea evoluionar a mitocondriilor. 16.9. Implicaiile mitocondriilor n patologie. 17. Matricea extracelular. - definiia i funciile; - compoziia chimic i implicaiile medicale; - adeziunea celular i implicaiile medicale; - membrana bazal i implicaiile medicale; - recunoaterea celular i implicaiile medicale. 18. Moartea celular. - definiia morii celulare i caracterele morfologice ale celulelor moarte; - explicaia la nivel molecular pentru ciclul limitat de viaa a unei culturi de fibroblaste; - necroza; - apoptoza moartea celular programat. 19. Celula malign. - caracterele morfologice ale celulei maligne; - oncogenele virale i celulare; - mecanismele moleculare ale formrii cancerului; - cauze ale cancerului. Bibliografie: 1. Note de curs; 2. Gheorghe Benga, Introducere n Biologie Celular i Molecular, Ed. Medical Universitar, ClujNapoca, 2005; 3. Alberts, B., Bray, D., Hopkin, K., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. and Walter, P., Essential Cell Biology, second edition, Garland Publishing, Inc., New York, 2005. 7

II. LUCRRI PRACTICE. Prezena la lucrrile practice de Biologie Celular i Molecular este obligatorie, iar absenele se recupereaz conform regulamentului stabilit de Biroul de Senat al U.M.F. Iuliu Haieganu ClujNapoca. La lucrrile practice fiecare student trebuie s se prezinte n halat alb, cu un caiet n care s fie conspectat, din ndrumtorul pentru lucrrile practice de biologie celular i molecular, lucrarea practic care se va prezenta, iar cunotinele aferente nsuite. LUCRAREA 1: Microscopul optic. Observarea micrilor celulare. LUCRAREA 2: Tehnici speciale de microscopie optic: examinarea n imersie, microscopia pe fond ntunecat. LUCRAREA 3: Tehnici speciale de microscopie optic: microscopia n contrast de faz, microscopia de fluorescen. LUCRAREA 4: Evidenierea unor componente celulare prin coloraii specifice (histochimice) i observarea incluziunilor pigmentare. LUCRAREA 5: Studiul diviziunii celulare. LUCRAREA 6: Studiul organitelor celulare la microscopul optic. LUCRAREA 7: Obinerea celulelor izolate. LUCRAREA 8: Fracionarea celulei prin centrifugare diferenial. LUCRAREA 9: Studiul lisosomilor: latena enzimelor lisosomale. LUCRAREA 10: Studiul mitocondriilor: determinarea consumului de oxigen i a fosforilrii oxidative. LUCRAREA 11: Extracia lipidelor din membrane i separarea fraciunilor prin cromatografie n strat subire. LUCRAREA 12: Studiul ADN-ului: izolarea, spectrofotometria n ultraviolet (UV) i dozarea. LUCRAREA 13: Microscopia electronic de transmisie aplicat n studiul celulei. LUCRAREA 14: Microscopie electronic de baleiaj. Imagini de microscopie electronic. Bibliografie: Gheorghe Benga (sub redacia), ndrumtor pentru lucrrile practice de biologie celular i molecular, Editura Carpatica, Cluj-Napoca, 1997. III. METODE DIDACTICE FOLOSITE. Curs: expunere interactiv a materialului conform programei analitice folosind mijloace multimedia. Lucrri practice: aplicaii practice demonstrative i studiu individual. IV. EVALUAREA CUNOTINELOR. Forma de activitate Examen Examen Lucrri practice Evaluare Teoretic Practic Aplicaie practic Scris (ntrebri cu rspunsuri multiple) Oral Oral i scris Procent din nota final 75% 12,5% 12,5%