HEMATOPOIEZA

Citologie sange periferic

Sangele:
Plasma
apa
proteine
lipide
electroliti
Elemente figurate:
eritrocite
leucocite
granulocite
neutrofile
eozinofile
bazofile
limfocite
monocite
trombocite

coloratie May-Grnwald-Giemsa

Procesul de hematopoieza:
Productia hematiilor, leucocitelor si
trombocitelor (plachete sanguine)
175 miliarde hematii/zi 4-5 milioane/l
70 miliarde leucocite/zi (neutrofile, eozinofile,
bazofile, monocite, limfocite) 4-10,000/ l
175 miliarde trombocite/zi 150-400,000/ l
Capacitate de crestere a productiei, in caz de nevoie
(hemoragii masive, infectii bacteriene) - de 5-10 ori

 Anatomia hematopoiezei
Localizare
Primul trimestru sacul embrionar
Al doilea trimestru ficat si splina
Al treilea trimestru scheletul axial si periferic
Adult scheletul axial

Corpurile vertebrale
Sternul
Coastele
Pelvisul

Hematopoieza se poate re-extinde la sediile fetale (ex.

ficat, splina), in conditii de extrema necesitate (ex.
talasemia)

Maduva osoasa
Densitate celulara mai mare

decat in sangele periferic

Se observa precusorii
elementelor figurate mieloide
din sangele periferic
precursorii eritrocitelor
precursorii
granulocitelor
precursorii monocitelor
precursorii
trombocitelor
Alte celule:
limfocite
plasmocite
Celulele
micromediului
Osteoblasti
Celule endoteliale
Fibroblasti

Citologie maduva osoasa

coloratie May-Grunwald- Giemsa

Histologia maduvei
hematoformatoare
Tesut adipos: 30-70% -

procent mai mare la

varstnici
Trabecule osoase
Insule hematopoietice 3070% din celularitate

Histologie medulara normala coloratie HE

Hematopoieza umana
Celula stem
multipotenta
mieloida
IL3, IL11,TPO

Celula stem pluripotenta

SCF
IL3, GM-CSF

IL3, EPO

Celula stem
multipotenta
limfoida

IL3

IL3, GM-CSF

IL3, IL7

SCF
Proeritroblast

Megacarioblast
IL11,
TPO

Mieloblast

EPO

IL3, GM-CSF

Limfoblast

IL3, GM-CSF

IL3, GM-CSF

IL3, IL7
B. promielocit
N. promielocit
GM-CSF, IL4
GM-CSF,
G-CSF

Eritroblast bazofil
Promegacarioblast

EPO

E. promielocit
GM-CSF,
IL5

Monoblast
GM-CSF,
M-CSF

IL6,
TPO
Eritroblast policromatofil

B. mielocit
IL4

N. mielocit
G-CSF

Prolimfocit

E. mielocit
Promonocit

IL5

IL2,
IL7

Eritroblast oxifil

B. metamielocit

N. metamielocit

E. metamielocit

M-CSF

Megacariocit

IL6,
TPO

Reticulocite

B. nesegmentat

N. nesegmentat

Limfocit mic
IL2,
IL4,
IL7

E. nesegmentat

Celula NK

Limfocit B

Limfocit T

IL6
Trombocite

Eritrocite

Basofil

Neutrofil

Eozinofil

Monocit
LTh

Mastocit
Macrofag

Celula dendritica
mieloida

LTc

Plasmocit

Celula dendritica
limfoida

 Celulele stem pluripotente celulele matca

Capabile de autoreinnoire nelimitata
Capabile de diferentiere nelimitata pot da nastere oricarui tip de celula
efectoare
Auto-reinnoirea - diviziune fara diferentiere
Diferentierea da nastere celulelor progenitoare

Localizare in maduva in asa-numitele nie ale celulelor stem protejate

de celulele micromediului
Prezente in maduva in numar mic: rata mitotica redusa
Cate CSHP exista in total???

in jur de 10-20000
doar 20-400 sunt active
o singura CSHP poate repopula o maduva iradiata letal

Rezistenta crescuta la chimioterapie

Sediu principal in maduva foarte putine circula in sange
Antigen de suprafata CD34+
Aspect asemanator limfocitelor mici
Disfunctia lor duce la aparitia anemiei aplastice sau a unor tipuri de
leucemie

Modul de proliferare al celulelor stem autorennoire + diferentiere

Celula stem
Autorennoire

Diviziune

Diferentiere

Celula angajata pe o cale de diferentiere

 Nia celulei stem

Celulele stem sunt
localizate in general in
apropierea trabelulelor
osoase (nia
osteoblastica) si a
vaselor sinusoide (nia
vasculara)
Protejate de catre
celulele micromediului

 Celulele stem multipotente celulele stem

limfoide, mieloide

Deriva din celulele stem pluripotente

Capabile de autoreinnoire prelungita
Exprima antigenul CD34
Capabile de diferentiere larga:
Celulele stem limfoide dau nastere limfocitelor B, T
Celulele stem mieloide dau nastere hematiilor,
granulocitelor, monocitelor si trombocitelor

Anomaliile celulelor stem limfoide pot determina

limfoproliferari maligne ex. leucemia acuta
limfoblastica (LAL)
Anomaliile celulelor stem mieloide pot determina
mieloproliferari maligne - ex. leucemia acuta mieloida
(LAM)

 Celule progenitoare unitati formatoare de

colonii: CFU's (Colony Forming Unit)
Deriva din celule stem multipotente
Capabile de auto-reinnoire limitata
Capabile de diferentiere limitata
CFU-GEMM - progenitorii granulocitelor, eritrocitelor,
monocitelor/macrofagelor, megacariocitelor
Progenitori mai diferentiati
CFU-E - cu diferentiere catre eritrocite
CFU-GM cu diferentiere catre granulocite-monocite
CFU-G cu diferentiere catre granulocite

Exprima antigene de diferentiere proteine de

suprafata specifice fiecarei linii celulare

 Celulele precursoare blastii

Primele celule identificabile morfologic

Eritroblasti precursorii eritrocitelor

Mieloblasti precursorii granulocitelor
Monoblasti precursorii monocitelor
Megacarioblasti precursorii trombocitelor
Limfoblasti precursorii limfocitelor

Capacitate de auto-reinnoire minima/absenta: celulele

rezultate din diviziunea blastilor sunt celule mai
diferentiate (mai mature)

 Celulele efectoare mature

1. Eritrocitele (hematiile) transporta oxigen, dioxid de
carbon; durata de viata 120 zile
Eritropoieza:

Proeritroblast
Eritroblast bazofil
Eritroblast policromatofil
Eritroblast oxifil
Reticulocit
Eritrocit

Cinetica productiei celulelor rosii 5 zile de la

eritroblast la reticulocit

Eritrocite

Eritrocitele:
Celule anucleate
Diametru 7-8
Forma de disc biconcav
aceasta forma asigura o
deformabilitate mare, necesara
pentru mobilitatea in spatii
stramte

Volum de 80-95fl
Constituenti:
Membrana:
Antigeni:
ABO
Rh (C,D,E)
glicoforina A (CD235)
Schelet celular:
spectrina
ankirina
Citoplasma:
Hemoglobina
Echipamentul enzimatic glicoliza

Ankirina

Spectrina

Moleculele de spectrina formeaza o retea tip

plasa ancorata de membrana prin
moleculele de ankirina
Aceasta retea este esentiala in pastrarea
formei hematiei

Glicoliza: enzimele cheie

sunt G-6-PD si PK

Hemoglobina: 2 perechi de lanturi globinice + 4 molecule de hem

Hgb A1 - 2 + 2
Hgb A2 - 2 + 2
Hgb F - 2 + 2

>95%
1,5-3,5%
<1%

O2

O2

Hemoglobina A1

O2

O2

Hemoglobina A1 oxigenata

Reticulocitele:
eritrocite tinere
diametru mai mare 10-12
in citoplasma, la coloratii
supravitale se identifica
structuri reticulate - resturi de
ARN ribozomal
reticulocitele petrec 1-2 zile ca
atare, apoi se transforma in
eritrocite mature

Reticulocite

Valori normale:
0.5-2% din eritrocite = 25.000 - 100.000/l
Valorile se ajusteaza in functie de hematocrit:
index reticulocitar = ret% x Hct observat/Hct normal
Reticulocitele cresc in situatii asociate cu regenerare exagerata:
posthemoragii
hemoliza

Eritroblastii:
Se observa diversele
etape de maturare:
proeritroblastii
(sageata verde)
eritroblastii bazofili
(sageata albastra)
eritroblastii
policromatofili
(sageata rosie)
eritroblastii oxifili
(sageata portocalie)

2. Granulocitele celule specializate in fagocitoza,

distructie bacteriana
Granulocitele sunt de mai multe feluri:

Neutrofile
Eozinofile

Bazofile

Granulocitele neutrofile
Citoplasma cu granule
neutre din punct de vedere al
coloratiei (nici rosii nici
albastre)
Nucleu multilobat, segmentat.
Cinetica productiei: 14 zile de
la mieloblast la neutrofil
Durata de viata cateva ore
Markeri: mieloperoxidaza,
CD13, CD33
Valori normale:
50-75% din leucocite
ANC>1500/l
In infectii, inflamatii,
leucocitele cresc in mod reactiv,
stimulat spre deosebire din
leucemii unde cresterea este
autonoma, nestimulata
In aceasta imagine se observa de asemenea un
monocit (a doua celula din stanga). Monocitele
se caracterizeaza prin citoplasma hipogranulara
si nucleu de forma neregulata.

Granulocitele
eozinofile
Eozinofilele se

caracterizeaza prin
nucleu bilobat si
prezenta in citoplasma a
unor granule rosieticeportocalii.
Valori normale:
1-6% din
leucocite
Eozinofilia:
caracteristica pentru
alergii, parazitoze si
unele malignitati

Eozinofil

Granulocitele bazofile
Bazofilul se caracterizeaza
printr-o citoplasma bogata in
granule de culoare albastru
inchis si un nucleu bilobat.
Valori normale: <0.5% din
leucocite
Bazofilia - caracteristica
pentru bolile
mieloproliferative cronice
(LMC, PV, TE, MMM)

Bazofil

Granulopoieza
precursorii granulocitari
Procesul de maturare de la mieloblast
la neutrofil segmentat 14 zile
Stadiile de maturare ale liniei
granulocitare:
mieloblast (sageata roz)
promielocit (sageata verde).
mielocit (sageata albastra)
metamielocit (sageata rosie)
neutrofil nesegmentat (sageata
portocalie)
In mod normal, aceste forme celulare se
intalnesc doar in maduva osoasa. In caz
de productie accelerata, ca de exemplu in
starile septice sau in leucemiile mieloide,
aceste celule se pot revarsa si in sangele
periferic deviere la stanga

3. Monocitele celule specializate

in fagocitoza, distructie celulara,
prezentare de antigene
Deriva dintr-un progenitor

comun cu granulocitele
neutrofile
Celule de talie mare
Citoplasma hipogranulara,
nucleu de forma neregulata
Markeri: CD14, CD68
Valori normale 4-10%

Monocit

4. Placutele sanguine (trombocitele)

Elemente figurate implicate in
hemostaza primara
Nu sunt celule propriu-zise , ci
fragmente din citoplasma
megacariocitului
diametru 1-3
markeri: vWF, GP IIbIIIa
(CD61)
valori normale: 150.000 450.000/l
durata de viata: aprox 7 zile

Megacario-trombopoieza

Megacariocit

5. Limfocitele: efectorii imunitatii specifice:

identifica celulele ca self sau non-self
Limfocite sunt de 2 tipuri: T si B
Limfopoieza:
Faza antigen-independenta
Limfopoieza primitiva are loc in maduva
Maturatia si instruirea se petrece la nivelul timusului (T) si
ganglionilor limfatici (B)

Faza antigen-dependenta
Al doilea ciclu de proliferare si diferentiere ca raspuns la
contactul cu antigenii
Implica secretia de anticorpi (B) si interleukine (T)

Faza de memorie
Urmeaza expunerii la antigen
Persista ani de zile

Markeri ai limfocitelor B: CD19, CD20, CD22

Markeri ai limfocitelor T: CD3, CD4, CD8

Vas limfatic
aferent

Folicul limfatic secundar:

centrul germinativ
limfocite B, limfoblasti

Cortex in special
limfocite B

Paracortex in
special limfocite T

Medulara
(macrofage si plasmocite)

Vas limfatic
eferent

Folicul limfatic primar

limfocite B mici

Structura ganglionului limfatic

Centrul germinativ (CG)

CG ganglion limfatic

CG splina

 Limfocitele mature, observate in

mod normal pe frotiul periferic
sunt celule mici, rotunde, cu
nucleu unic, rotund si citoplasma
putina, bazofila.
Valori normale: 20-40% din
leucocite
Morfologic, limfocitele normale
nu se pot distinge de limfocitele
neoplazice din leucemia limfatica
cronica.
Precursorii limfocitelor,
limfoblastii, sunt in general celule
mari, cu cromatina fina,
nucleolate. Nu apar in mod
normal in sangele periferic sau
maduva osoasa cand apar este
probabil o leucemie acuta
limfoblastica

Limfocite
LAL

Limfoblasti leucemie
limfoblastica acuta

Rolul limfocitelor B efectorii imunitatii umorale imunoglobulin-dependenta

Imunoglobulina
IgS (BCR)
Macrofag - fagocitoza

Antigen

Plasmocit
Limfocit B

Activare a complementului (C1)

Rolul limfocitului T citotoxic (CD8+) efector al imunitatii celulare

specifice
TCR

Limfocit T
citotoxic

Celula infectata exprimand

antigen microbian

Distrugerea celulei infectate

Rolul limfocitului T helper (CD4+)

TCR

Limfocit T
helper

Citokine

Activarea
macrofagelor

Inflamatie
Celula
prezentatoare de
antigen

Activarea limfocitelor T si B

Factorii de crestere hematopoietici

1. Eritropoietina (Epo)

Sintetizata la nivelul rinichiului

Induce proliferarea CFU-E
Sinteza creste cand scade numarul hematiilor
Exista ca preparat comercial (Epo-alfa, Epo-beta,
darbopoetina) - se utilizeaza pe scara larga in anemii,
mai ales in cele de etiologie renala si in cele
paraneoplazice

2. Factor stimulator al coloniilor granulo-monocitare (GM-CSF)

Secretat de limfocite, celule endoteliale, celulele stromale din maduva
Stimuleaza productia de granulocite, monocite
Exista ca preparat comercial

3. Factor stimulator al coloniilor granulocitare (G-CSF)

Secretat in principal la nivelul celulelor stromale medulare

Stimuleaza productia si functia granulocitelor
Sinteza creste ca raspuns la infectii
Exista ca preparat comercial (filgrastim, lenograstim) se utilizeaza pe
scara larga in neutropeniile de diverse etiologii

4. Trombopoietina (TPO)
Produsa in principal in ficat
si rinichi, dar si la nivelul
celulelor stromale ale
maduvei osoase
Sinteza este stimulata de IL6
Regleaza cresterea si
diferentierea
megacariocitelor actionand
asupra receptorului specific
pt TPO (c-MPL)
Nu exista ca preparat
comercial
Agonistii sintetici ai
receptorului pentru TPO
(eltrombopag si romiplostin)
se utilizeaza in prezent ca
tratament in trombocitopenii

Intrebari de autocontrol
1.

Care sunt caracteristicile celulei stem hematopoietice multipotente?

A. Citologic are un aspect asemanator limfocitului
B. Este foarte sensibila la chimioterapie
C. Are capacitate de autoreinnoire nelimitata
D. Exprima antigenul CD68
E. Exprima antigenul CD34

2. Printre markerii imunofenotipici de celula T sunt:

A. CD-7
B. CD-13
C. CD-8
D. CD-19
E. CD-20
3. Urmatoarele afirmatii NU sunt corecte in ceea ce priveste tesutul hematopoietic:
A. In timpul celui de-al treilaea trimestru al sarcinii, splina este principalul organ hematopoietic
B. In mod normal tesutul hematopoietic ocupa 30-70% din celularitatea medulara
C. Zilnic se produc aproximativ 175 milioane de hematii
D. In conditii de suprasolicitare indelungata hematopoieza adultului poate reapare la nivelul splinei si
ficatului
E. Dupa nastere, hematopoieza are loc in special in maduva osoasa din oasele scheletului periferic

4.

Printre markerii imunofenotipici de celula B sunt:

A. CD7
B. CD19
C. CD8
D. CD5
E. CD20

5.

Urmatoarele afirmatii sunt corecte in ceea ce priveste trombopoietina (TPO):

A. Este produsa in ficat si riinichi
B. Sinteza ei este stimulata de IL6
C. Se foloseste in practica curenta existand ca preparat comercial
D. Are efect incrucisat cu GM-CSF
E. Este un mediator al inflamatiei

6.

Urmatoarele afirmatii sunt corecte in ceea ce priveste limfopoieza:

A. In faza antigen dependemta instruirea limfocitelor T are loc in timus
B. In faza antigen independenta limfopoieza primitiva are loc in maduva osoasa
C. Faza antigen-dependenta implica secretia de imunoglobuline si interleukine
D. Faza de memorie persista luni de zile
E. Instruirea limfocitelor B are loc in ganglionii limfatici

7. Urmatoarele afirmatii sunt adevarate in ceea ce priveste eritrocitele:

A. Au forma amoeboidala
B. Volumul normal variaza intre 80-95fl
C.
Sunt necesare aproximativ 5 zile pentru procesul de maturare de la eritroblast la reticulocit
D. Prima celula identificabila a seriei eritrocitare este eritroblastul oxifil
E. Printe markerii de membrana ai eritrocitului se numara: CD45, CD20, CD3
8. Celulele stem pluripotente:
A.
Sunt capabile de autoreinnoire nelimitata
B.
Au pe suprafata antigenul CD33
C.
Sunt neidentificabile morfologic
D.
In total, exista cateva zeci de mii de asemenea celule
E.
Disfuctia lor poate duce la anemie aplastica
9. Urmatoarele afirmatii sunt adevarate in ceea ce priveste structura maduvei osoase normale:
A.
Aproximativ 10% este reprezentata de tesut adipos
B.
Tesutul hematopoietic reprezinta 30-70% din celularitatea medulara
C.
Densitatea celulara este asemanatoare sangelui periferic
D.
Celulele stromale au rol de sustinere pentru celulele hematopoietice
E.
Maduva hematoformatoare se localizeaza predominant la nivelul oaselor lungi