Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
DE FLUX
CE ESTE CITOMETRIA
DE FLUX?
Metodă de măsurare a caracteristicilor fizice
şi/sau biochimice ale particulelor (celule,
nuclei, organite celulare):
Mărimea
Granularitatea
Cantitatea de ADN
Antigene de suprafaţă
2. Marcarea celulelor
3. Achiziţia datelor
4. Stocarea datelor
5. Interpretarea datelor
PRODUCEREA ANTICORPILOR
MONOCLONALI
Antigen
Fuzionarea
celulelor
HIBRIDOM Mielom
Plasmocite
producatoare de Ac Testarea clonelor
Cultivarea
hibridoamelor
FITC
Numar de evenimente
TC
FITC
FI
FI
FITC
T C
FITC
C
FITC
T
FI
FIT
FITC
C
101 102 103 104
Intensitatea fluorescenţei
COMPONENTELE
CITOMETRULUI DE FLUX
Sistem fluidic
Sistem optic
Sistem electronic
SISTEMUL FLUIDIC
Celule aflate în suspensie:
Sânge
Lichid sinovial
LCR
Ganglioni limfatici
Tumori solide
Lichid de “înveliş”
Curent intern unicelular – “şir indian”
Intersectare cu un fascicul de lumină
SISTEMUL FLUIDIC
Ac de injecţie
Lichid de
Cameră de “înveliş”
scurgere
Flux
laminar
SISTEMUL OPTIC DE
EXCITAŢIE
Sursa laser (Ar λ=488 nm)
Fascicul luminos dispersie şi stimularea
fluorocromilor
Dispersia luminii:
α=0 Forward Scatter (FS) dimensiunea
α=90° Side Scatter (SS) granularitatea
Emisia luminii fluorescente:
~ cantitatea de fluorocromi info calitative şi
cantitative
Elemente optice de focalizare (lentile)
FS ŞI SS
Forward Scatter
LASER
LASER
Side Scatter
SISTEMUL OPTIC DE
COLECTARE
Conversie semnal optic semnal electronic
Detectori pentru:
Lumina dispersată: în faţă, lateral
Emisia de fluorescenţă
Filtre optice
CITOMETRUL DE FLUX
SISTEMUL ELECTRONIC
Recepţionarea impulsurilor detectorilor
Prelucrarea semnalului
Prezentarea rezultatelor:
Histograme – 1 parametru
Grafice – 2 parametri: 1 punct = 1 particulă (dot-
plot)
ELEMENTE FIGURATE
GRAFIC DOT-PLOT PENTRU
FITC ŞI PE
PE FL
FITC- / PE-
FITC FL FITC+
FITC / PE
SORTAREA CELULELOR
Separarea unei (sub)populaţii celulare dintr-
un amestec:
Mărime
Granularitate
Antigene de suprafaţă
SORTAREA CELULELOR -
ETAPE
1. Identificarea criteriului
2. Marcarea cu AcM+fluorocromi
3. Identificarea celulei – e de interes?
4. Încărcare cu sarcini pozitive/negative/fără
5. Câmp magnetic – deflectare spre tuburi
colectoare
6. Centrifugare
SORTAREA CELULELOR
Detector de
fluorescenţă
Plăci încărcate - -
+
magnetic + -
Tuburi de colectare
APLICAŢII
Analiza subpopulaţiilor limfocitare
Diagnosticul hemopatiilor maligne
Biologie celulară
Identificarea unor molecule HLA
Determinarea unor autoanticorpi
Studiul ciclului şi al funcţiilor celulare
Diagnosticul, evoluţia, prognosticul tumorilor
maligne solide
Microbiologie
ANALIZA ADN
M G0
G2
G1
E
v
G0G1
s e
n
i
m
e
n
t
e
s G2 M
0 200 400 600 800 1000
2N 4N
Cantitatea de ADN
ANALIZA ADN
300
E
225
v
e
n
i
150
m
e
n
75
t
e
0
2N 4N
Fluorescenţă PE
ANALIZA ADN
300
v
e
n
Peak aneuploid
150
i
m
e
n
75
t
e
0
Fluorescenţă PE