Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Procedura specifica
Notă:
Procedurile SMC sunt proprietatea SC SANYS MEDICAL SRL şi sunt protejate prin drepturile de
copyright. Orice copiere a acestei proceduri sau reproducere parţială este permisă numai cu acordul
scris al Directorului.
Procedura specifica
SC SANYS MEDICAL SRL
ELECTROFOREZA Ed./Rev.: 1/0
BUCURESTI
PROTEINELOR SERICE Pagina nr. 2 /11
Str. Intrarea Binelui nr.1A. S 4
PS-SMC-08
FG-01.02
FG-01.03
DIFUZARE /RETRAGERE
FG-01.04
01.SCOP
Documentul are ca scop descrierea procedurii aplicata in SC SANYS MEDICAL pentru efectuarea
electroforezei proteinelor serice, utilizind poba de ser analizata in vitro printr-un sistem semiautomat.
2. DOMENIU
3. DOCUMENTE DE REFERINŢĂ
ά2 – alfa 2 globuline
ß 1 - beta 1 globuline
ß 2 - beta 2 globuline
γ - gama globuline
1. Echipament, materiale:
Sistemul PHORESIS
Sistemul permite efectuarea electroforetica de: PROTEINE,
- Sistemul realizeaza operatiile de migrare si interpretare a migrarilor electroforetice de
proteine serica
- In analiza sunt utilizate geluri de agaroza, sistemul fiind deschis, adica citeste toate
formatele de geluri agaroza;
- Aparatul confera precizie si siguranta prin calibrarea proprie a metodei si prin softul
performant din dotare ( comunicare usoara cu utilizatorul).
- Pornirea aparatului se face in urmatoarea ordine: interconectarea corecta a
componentelor, pornirea propriu zisa, care se face in urmatoarea ordine: cititor,
imprimanta, unitate centrala.
- Selectarea tipului de anliza: proteine,
- Operatii executate pentru obtinera analizelor: developare gel de analiza, pornirea
procesului de migrare, citirea gelului de analiza, trasare histograma, pozitionare
fractii, completare date pacient, salvare analiza, operatii cu baza de date.
- Gestionarea pacientilor si rezultatelor se face in baza soft- ului, care permite :
evidenta pacientilor dupa varsta si sex, evidenta rezultatelor analizelor in functie de pacient si
data efectuarii acestora ;
-
Imprimanata compatibila
Reactivi de lucru :
- Tampon veronal concentrat
- Colorant concentrat (amido black)
- Solutie concentrata de decolorare
- Benzi de plastic cu fante pentru aplicarea serului
- Benzi de hartie de filtru
Pipete semiautomate de 5 -100ml
- calibrare
Aparatul este calibrat de catre producator. Reprezentantul firmei realizeaza calibararea aparatului
atunci cand se doreste modificarea factorului de calibrare.
Controlul de calitate:
Procedura specifica
SC SANYS MEDICAL SRL
ELECTROFOREZA Ed./Rev.: 1/0
BUCURESTI
PROTEINELOR SERICE Pagina nr. 7 /11
Str. Intrarea Binelui nr.1A. S 4
PS-SMC-08
Se foloseste ser de control cu nivel normal si patologic al valorilor, iar rezultatele obtinute
trebuie sa se incadreze intre limitele din prospectul lotului folosit.
Serul de control se prepara conform instructiunilor:
- se aduce mai intai la temperatura camerei
- se dizolva cu apa demineralizata
- dupa dizolvare se lasa aproximativ 30 de minute la temperatura camerei si se agita din cand in
cand.
- dupa dizolvarea completa se portioneaza in criotuburi si se introduce in congelator fiind valabil 30
de zile.
Serul de control se migreaza odata cu probele care trebuie testate si se scaneaza ca si o proba
de pacient.
La fiecare 12 probe lucrate se recomanada includerea unui ser de control pentru fiecare nivel,
normal si patologic;
Dupa efectuarea mai multor seruri de control (minim 6) vom obtine curbelele Levey- Jennings
pentru fiecare fractiune proteica, plus deviatie standard si coeficient de variabilitate.
Calitatea rezultatelor determinate se asigura conform PGS-SMC-11 Asigurarea calitatii
rezultatelor.
- atentionari (precautii)
Unii reactivi pot conţine azidă de sodiu. Azidele de sodiu pot reacţiona cu tubulatura din plumb
sau cupru a instalaţiilor sanitare, formând azidele metalice care sunt foarte explozive. Pentru
evitarea formării acestor amestecuri explozive, reactivi trebuie diluaţi cu foarte multă apă după
efectuarea testărilor.
Se vor citi cu atenţie informaţiile referitoare la reactivii toxici sau cu risc biologic specificate în
prospectul de lucru al reactivului
In contact cu proba se utilizeaza materiale de unica folosinta.
Nu se folosesc reactivii dupa expirarea termenului indicat pe eticheta.
Probele pot fi pastrate la 2-8 0C pana la 7 zile si la –200C pentru mai mult timp. Nu se vor
ingheta de 2 ori.
Pregatirea reactivilor
-
a) Gelul de agaroza este gata de utilizare;
b) Tamponul– fiecare flacon de tampon concentrat se va dilua pana la un litru cu apa
demineralizata;
c) Colorantul - flaconul de solutie concentrata se dilueaza la 300 ml cu apa demineralizata;
d) Decolorantul – flaconul cu decolorant se va dilua 1/1000 cu apa demineralizata;
e) Solutia de fixare-se amesteca 135 ml de etanol,30 ml acid acetic glacial si 135 ml dee apa
distilata.Solutia de fixare trebuie preparata cu cel putin 15 minute inainte de folosire.Are o stabilitate
de 3 luni la temperatura camerei in recipient bine inchis.
Procedura specifica
SC SANYS MEDICAL SRL
ELECTROFOREZA Ed./Rev.: 1/0
BUCURESTI
PROTEINELOR SERICE Pagina nr. 8 /11
Str. Intrarea Binelui nr.1A. S 4
PS-SMC-08
Migrarea
-se scoate gelul din ambalaj si se aseaza pe o foaie de hartie sau o hartie de filtru;
-se elimina rapid excesul de lichid de pe suprafata gelului cu hartie de filtru.Indepartati hartia
de filtru imediat ce s-a umezit
-plasati sablonul pentru probe pe gel(astfel incat cele doua puncte de pe gel sa corespunda
fantelor);
-presati usor cu degetul in lungul sablonului pentru a adera la gel ,fara a face bule de aer intre
gel di sablon.
-aplicati 5 uL de ser diluat pe fiecare fanta si lasati serul sa difuzeze complet(cam 5 minute
dupa pipetarea ultimei probe)
-indepartati excesul de ser cu hartie de filtru.
-scoateti sablonul pentru
-curbati placuta de agaroza si plasati-o in cuva de migrare,cu fata in jos,cu probele la capatul
catodic(-)
- inchideti cutia de migrare cu capacul.se
-porniti electroforeza la 100V timp de 20 minute(Cormay S-20)
-dupa migrare se deconecteaza baia si se scoate gelul.
Fixarea
Fixarea se face imediat dupa migrare prin cufundareabplacutelor in solutia de fixare timp de 15
minute,in pozitie verticala.Apoi se usuca gelul cu jet de aer cald la 80 de grade sau la etuva pana la
uscarea completa.
Colorarea
Se introduce gelul perfect uscat si adus la temperatura camerei in solutia de colorare timp de 10
minute.
Decolorarea
Procedura specifica
SC SANYS MEDICAL SRL
ELECTROFOREZA Ed./Rev.: 1/0
BUCURESTI
PROTEINELOR SERICE Pagina nr. 9 /11
Str. Intrarea Binelui nr.1A. S 4
PS-SMC-08
Se decoloreaza in 3 bai succesive pana se obtine fondul gelului perfect clar.Se usuca gelul la jet de aer
cald timp de 10 minute. Se lasa apoi gelul sa se raceasca la temperatura camerei 10-15 minute.
Citirea
Citirea se efectueaza cu ajutorul unui densitometru/scanner cu filtru galben la 570nm;
Se vizualizeaza curbele pentru fiecare proba;
Se printeaza si se arhiveaza rezultatele partiale tiparite de imprimanta analizorului.
Rezultatele sunt efectuate automat de catre densitomertu . Rezultatele sunt exprimate sub forma de
concentraţii procentuale, considerând că suma tuturor concentraţiilor fracţiilor proteice depistate
trebuie să fie egală cu 100% si sub forma de valori absolute.
Valorile de referinţă sunt valorile normale corespunzătoare pacienţilor sănătoşi. Sunt luate în
considerare următoarele valori de referinţă
b) Alfa -1-globulina :
c) Alfa-2- globulina :
Creşterea fracţiei ά2-globulinei apare în glomerulonefrită acută şi cronică, sindrom nefrotic,
tumori maligne, reumatism articular acut, poliartrită reumatoidă, hepatită acută, infarct
miocardic, lupus eritematos;
d) β-globulinele :
e) Gamma-globulina:
Procedura specifica
SC SANYS MEDICAL SRL
ELECTROFOREZA Ed./Rev.: 1/0
BUCURESTI
PROTEINELOR SERICE Pagina nr. 11 /11
Str. Intrarea Binelui nr.1A. S 4
PS-SMC-08
Creşterea fracţiei γ-globulinei apare în procese inflamatorii cronice (infecţioase şi imune), hepatită
acută şi cronică, ciroză, glomerulonefrită, poliartrită reumatoidă, boli cronice (TBC, SIDA),
parazitoze, tumori maligne, colagenoze, sarcoidoză.
Operator receptie
- inregistreaza probele in Sistemul Informatizat al Laboratorului ;
Asistent medical
- recolteaza proba, o inscriptioneaza, o pregateste pentru lucru ;
- asigura eliminarea deseurilor
Biochimist
- efectueaza calibrarile şi controalele pe care le interpretează si arhiveaza;
- efectuează determinările parametrilor solicitaţi pentru fiecare pacient, conform listei de lucru;
- verifică calitatea probelor şi face specificaţii în legătură cu acestea (probe hemolizate, lipemice,
icterice sau incorect recoltate);
- determina incertitudinea de masurare;
- inregistreaza rezultatele in softul de laborator;
- efectuează operaţiunile de întreţinere pentru analizoare conform fisei de mentenanta;
- anunţă eventualele defecţiuni ce necesită intervenţia service-ului specializat;
- arhiveaza rezultatele partiale tiparite de imprimanta analizorului;
- valideaza tehnic rezultatele;
- tine evidenta materialelor ;
Sef laborator
- verifică prin sondaj corectitudinea executării analizei, controalelor şi calibrărilor;
- verifică incertitudinea de măsurare;
- verifică prin sondaj monitorizarea condiţiilor de lucru;
- supravegheaza si controleaza intretinerea analizorului si anunta firma de service in caz de nevoie;
- valideaza rezultatele din punct de vedere biologic.